转染MIP-1α和B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤效应的初步研究

【摘要】 目的 观察转染趋化因子MIP-1α和共刺激分子B7-1基因增强小鼠抗淋巴瘤的效应。方法 将MIP-1α和B7-1基因慢病毒重组载体转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞,应用RT-PCR检测MIP-1α和B7-1基因mRNA表达,Western blot法检测MIP-1α和B7-1蛋白表达;转基因EL-4细胞注入小鼠右腋皮下,观察成瘤情况;灭活的转基因EL-4细胞注入成瘤小鼠体内,观察其增强小鼠抗淋巴瘤效应。结果RT-PCR检测发现EL-4/MIP-1α+B7-1细胞内有MIP-1α及B7-1mRNA表达,Western blot显示MIP-1α及B7-1蛋白表达;MIP-1α组、B7-1组较对照组成瘤时间延长,成瘤率降低,肿瘤平均体积较小,而联合组成瘤性消失;MIP-1α和B7-1治疗组的肿瘤平均体积、重量及肿瘤器官转移率明显小于对照组（P＜0.05）,而联合组的肿瘤平均体积及重量明显小于MIP-1α和B7-1组（P＜0.05）,而且联合组小鼠平均生存期,均较单基因组、对照组明显延长（P＜0.05）。结论 转染MIP-1α和B7-1基因能够明显增强小鼠机体抗淋巴瘤效应,明显延长荷瘤小鼠的平均生存期,为淋巴瘤的基因治疗提供了新的思路。     

小鼠肝癌细胞系Hepa1-6 B7.1瘤苗抗肿瘤免疫的实验研究

目的：研究小鼠肝癌细胞系Hepal-6转染B7.1基因后在体内外抗肿瘤免疫的作用。方法：采用脂质体介导的方法用pLXSNB7.1转染PA317包装细胞，经G418筛选出高滴度阳性的细胞克隆，以流式细胞仪检测B7.1分子的表达情况；用所获病毒上清进一步感染Hepal-6细胞，观察转染B7.1基因后Hepal-6细胞作为肿瘤疫苗在体内外诱发抗肿瘤免疫的情况。结果：Hepal-6/B7.1高表达B7.1分子，其致瘤性明显降低。接种小鼠后成瘤率为20%，而亲代Hepal-6细胞成瘤率为100%，转B7.1基因肿瘤细胞疫苗可抑制肿瘤生长速度，延长荷瘤小鼠生存期；且转B7.1基因肿瘤细胞疫苗具有保护性免疫反应。结论：转B7.1基因的肿瘤细胞作为肿瘤疫苗可有效地激发机体的抗肿瘤免疫反应。     

B7—1基因转染小鼠EL—4淋巴瘤协同IL—2作为瘤苗诱导的免疫治疗试验

目的　观察B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤协同IL 2作为瘤苗诱导的免疫治疗作用。方法　首先以 2×10 5 EL 4Wt接种C5 7BL 6小鼠左前肢腋下 ,然后进行免疫治疗。结果　用B7 1 的EL 4淋巴瘤细胞免疫组小鼠的成瘤时间推迟 ,荷瘤鼠存活期也能延长 ,但经EL 4B 7 1 IL 2免疫治疗的小鼠 ,其瘤结节出现的时间和存活的时间明显延长 (P <0 .0 1) ,且瘤结节大小也有明显差别。结论　B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤细胞具有免疫治疗作用 ,B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤协同IL 2作为瘤苗诱导的免疫治疗作用更显著。     

小鼠IL-33基因cDNA克隆与真核质粒的构建与表达

目的克隆小鼠IL-33基因（mIL-33）cDNA构建其真核表达质粒,并转染EL-4细胞检测其表达。方法提取小鼠脑与肺组织总RNA,经逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）扩增小鼠IL-33基因cDNA,酶切后插入pcDNA-3.1构建其真核表达载体pcDNA-mIL-33,重组质粒转染EL-4细胞,RT-PCR与ELISA法检测目的基因表达。结果 pcDNA-mIL-33中插入的DNA序列测定结果与mIL-33 cDNA序列一致,重组质粒转染EL-4细胞后检测到相应基因表达。结论成功克隆小鼠IL-33基因cDNA,并构建其真核表达质粒。     

编码hsp60和IL-2的幽门螺杆菌减毒沙门菌核酸疫苗

目的:构建含幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H. pylori)hsp60基因和细胞因子IL-2的核酸疫苗,体外转染COS-7细胞,并鉴定其表达蛋白的免疫原性,体内检测其免疫保护作用.方法:以H. pylori菌株基因组DNA为模板,PCR扩增hsp60基因,从pCIneo-IL-2扩增小鼠IL-2基因,检测hsp60及IL-2的核苷酸序列;通过酶切、连接反应把hsp60和IL-2同时克隆入pIRES;通过脂质体法将pIRES-hsp60-IL-2转染COS-7细胞,SDS-PAGE及Western 印迹法检测表达蛋白的免疫性.重组载体转化入LB5000,抽提质粒,再转化入SL7207,反复传代,鉴定重组核酸疫苗菌的稳定性.以该疫苗菌接种小鼠,4周后H. pylori攻击,再4周后鉴定感染状况.结果:成功扩增出长约1 640 bp的hsp60基因和510 bp的IL-2,测序结果表明扩增出的hsp60基因与H. pylori hsp60序列一致,IL-2序列和小鼠的IL-2序列一致.PCR和酶切鉴定结果证实hsp60和IL-2基因克隆入载体pIRES,成功构建了含hsp60基因和IL-2基因的幽门螺杆菌核酸疫苗pIRES-hsp60-IL-2,并且Western 印迹法检测到相对分子质量为60 000 hsp60蛋白和14 000的IL-2蛋白条带.体内实验显示pIRES-hsp60-IL-2及pIRES-hsp60疫苗接种组分别有79.9%、62.5%小鼠获免疫保护.结论:成功构建了编码hsp60和IL-2基因幽门螺杆菌减毒沙门核酸疫苗,体外实验验证了其免疫原性,体内实验证实其具有免疫保护性.     

共刺激分子B7.1和葡萄球菌肠毒素A膜表面共修饰瘤苗抗肿瘤作用的研究

目的 观察跨膜型葡萄球菌肠毒素A(SEA-TM)和糖基化磷脂酰肌醇锚定型mB7．1(mB7．1-GPI)二种免疫分子膜表面修饰瘤苗的抗肿瘤作用是否优于单种免疫分子膜表面修饰的瘤苗。方法构建pcDNA3．1( )／mB7．1-GPI真核表达载体,转染中国仓鼠卵巢上皮细胞(CHO)中,表达和纯化mB7．1-GPI。通过蛋白转染法将SEA-TM、mB7．1-GPI单独或共同锚定到EL-4肿瘤细胞膜上,制成瘤苗,观察这些瘤苗刺激小鼠脾细胞的增殖和分泌白细胞介素(IL)-2和γ干扰素(IFN)-γ的量及抗肿瘤作用。结果mB7．1-GPI。和SEA-TM能单独或共同锚定在肿瘤细胞膜上,具有相当的稳定性;在体外有刺激小鼠脾细胞增殖和分泌IL-2、IFN-γ的功能。mB7．1-GPI、SEA-TM、mB7,1-GPI SEA-TM锚定肿瘤细胞,制成的瘤苗,能抑制荷瘤小鼠的肿瘤生长和延长荷瘤小鼠的存活时间。mB7．1-GPI和SEA-TM双锚定瘤苗,显示出比单一蛋白锚定瘤苗更强的抗肿瘤作用。结论用蛋白转染法将SEA和mB7.1二种免疫分子同时锚定到肿瘤细胞膜上所制成的瘤苗,其抗肿瘤作用优于单种免疫分子锚定的瘤苗。     

转导白细胞介素2基因的B16细胞对机体免疫反应的影响

应用XM6逆转录病毒载体将人IL-2cDNA转入小鼠B16黑色素瘤细胞。丝裂霉素C处理的转染前后B16细胞作为瘤苗对小鼠进行免疫接种。结果显示，接种B16-IL-2细胞可明显排斥再移植黑色素瘤的生长。对脾淋巴细胞检测的结果表明，MLTR引起的淋巴细胞增殖与特异性CTL杀伤活性，以及NK、LAK活性与诱生的IL-2水平几项指标，B16-IL-2细胞免疫组均明显高于B16免疫组及对照组。提示转基因肿瘤细胞在体内分泌IL-2增强了机体的特异性与非特异性免疫功能。     

pEGFP-IL-24对B16F0细胞抑制效应的实验研究

目的:构建IL-24真核表达质粒,研究其体内外表达对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:用重组DNA技术构建IL-24真核表达质粒pEGFP-IL-24。用脂质体法将重组质粒及空载体体外转染B16F0细胞后,经激光扫描共聚焦显微镜观察其表达,用MTT法检测B16F0细胞的体外增殖能力。用小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤生长的抑制。结果:pEGFP-IL-24转染B16F0细胞后,LSM可观察到其表达。IL-24基因转染的B16F0细胞体外增殖能力明显受到抑制。转染IL-24的B16F0细胞体内致瘤率降低。结论:IL-24基因转染的肿瘤细胞体外生长受抑。IL-24基因转染的肿瘤细胞体内生长能力显著降低。     

CH50多肽对IFN-γ基因转染癌细胞体内生长及免疫刺激作用的影响

探讨重组FN多肽CH50对IFN-γ基因转染癌细胞体内生长及免疫刺激作用的影响。将小鼠IFN-γ基因转染黑色素瘤B16/Fl细胞,测定其表达产物与CH50协同刺激巨噬细胞产生NO的作用、转染细胞接种小鼠并注射CH50时对脾细胞的免疫刺激作用及瘤细胞的体内生长特性。结果表明,转染细胞表达产物可与CH50协同作用刺激巨噬细胞产生NO。转染细胞表达IFN-γ水平较低,仍可在体内形成肿瘤,注射CH50能够抑制其形成肿瘤。基因转染细胞和CH50能够促进脾细胞对肿瘤细胞的杀伤能力。研究表明,CH50不仅可以提高肿瘤疫苗的安全性,也可以提高肿瘤疫苗刺激机体免疫系统的作用。并提示,表达CH50和IFN-γ双因子的肿瘤疫苗可为提高肿瘤疫苗治疗肿瘤的效果开辟新的途径。     

IL-18基因转导乳腺癌细胞肿瘤原性的改变及抗瘤作用的研究

目的：建立转人白细胞介素-18（IL-18）基因的乳腺癌细胞株Bcap37细胞,并探讨IL-18基因转导后Bcap37细胞肿瘤原性的改变和抗瘤作用。方法：将携带人IL-18的质粒pcDNA3.1-IL-18转导入人乳腺癌细胞系Bcap37细胞中,通过药物G418进行筛选,采用RT-PCR和ELISA法对IL-18基因的表达进行检测;裸鼠致瘤实验观察肿瘤原性的改变;观察灭活后Bcap37-IL-18细胞的抗瘤作用。结果：IL-18基因成功转导入Bcap37细胞中并能顺利表达;RT-PCR 电泳结果显示IL-18基因在mRNA水平有表达;ELISA结果显示,106个转导细胞在24h内分泌IL-18的含量是(126.3±4.5)pg; 空载体转染的细胞未检测到IL-18;裸鼠致瘤实验表明,接种Bcap37-IL-18细胞的裸鼠肿瘤的生长速度明显低于Bcap37组和Bcap37-pCDNA3.1组;抗瘤实验结果显示,放射灭活的Bcap37-pcDNA3.1细胞和Bcap37-IL-18细胞免疫接种裸鼠后,再接种Bcap37细胞于裸鼠左侧背部皮下。肿瘤长出的时间Bcap37-IL-18细胞免疫接种组比Bcap37 pCDNA3.1细胞免疫接种组明显延长,且肿瘤的体积Bcap37-IL-18细胞免疫接种组比Bcap37-pCDNA3.1细胞免疫接种组小。结论: IL-18基因能成功的整合到Bcap37细胞基因组中,且在转导的肿瘤细胞中持续表达;IL-18基因转染降低了Bcap37细胞的肿瘤原性;IL-18基因修饰的Bcap37细胞具有明显的抗肿瘤作用。     

HSA基因转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞以提高其免疫原性的研究

目的探讨ＨＳＡ提供的协同刺激信号能否增强肿瘤细胞的免疫原性。方法将ＨＳＡｃＤＮＡ导入小鼠淋巴瘤细胞ＥＬ－４中,通过含Ｇ４１８的ＲＰＭＩ１６４０培养基将表达ＨＳＡ分子的ＥＬ－４细胞（ＨＳＡ＋ＥＬ－４）筛选出来。用混合淋巴细胞肿瘤细胞培养（ＭＬＴＣ）的方法观察ＨＳＡ＋ＥＬ－４细胞免疫小鼠脾细胞的增殖应答反应和ＣＴＬ杀伤活性。Ｃ５７ＢＬ／６小鼠接种野生型ＥＬ－４细胞后７ｄ,给予灭活的ＨＳＡ＋ＥＬ－４细胞瘤苗或联合低剂量ＩＬ－２治疗,观察荷瘤小鼠皮下肿瘤生长及存活期情况。结果ＨＳＡ＋ＥＬ－４细胞免疫小鼠的细胞对ＨＳＡ＋ＥＬ－４或ＥＬ－４瘤细胞刺激增殖反应及对亲本瘤细胞ＥＬ－４的杀瘤活性明显高于ＥＬ－４ｖ细胞（空载体转染的ＥＬ－４细胞）免疫小鼠脾细胞的。ＨＳＡ＋ＥＬ－４细胞作为瘤苗,早期治疗荷瘤小鼠,可延缓肿瘤的生长,延长荷瘤小鼠的存活期,尤其与低剂量ＩＬ－２联合应用时治疗效果更好。结论协同刺激分子ＨＳＡ在肿瘤细胞上的表达可增强瘤细胞的免疫原性;表达ＨＳＡ分子的肿瘤细胞可在小鼠体内诱导出有效的抗肿瘤免疫应答反应。     

用射线照射的B7-1转基因细胞进行肿瘤疫苗的研究

目的探讨用放射的B71转基因细胞进行肿瘤疫苗疗法的效果。方法将重组人B7-1基因真核表达载体导入CAK-1肾细胞瘤细胞,利用转基因细胞治疗观察其抗肿瘤效果。结果转基因细胞的肿瘤原性较CAK-1／Wt、CAK-1／pCDNA3组明显降低（P〈0．001）。同时免疫原性明显增强,以^60Co照射的CAK-1／B7-1细胞免疫后,小鼠体内诱发了抗CAK-1／Wt的系统性、保护性免疫。用^60Co灭活的转基因细胞作为瘤苗进行实验性治疗,能够延长小鼠的生存时间,减慢肿瘤的生长速度,CAK-1／H7-1的应用提高了肿瘤治疗效果（P〈0．01）。结论放射的转基因细胞及其表达的H7细胞因子可以有效地激发机体的抗肿瘤免疫应答,B71表达肿瘤细胞应用可以成为一种很有前景的肿瘤疫苗。     

B7-1基因转染小鼠EL-4淋巴瘤细胞体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素-2

目的　研究B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤体外诱导免疫小鼠脾细胞产生的白细胞介素 2。方法　以CTLL 2细胞检测EL 4B7 1 免疫小鼠的脾细胞与瘤细胞共育的MLTC培养上清中的IL 2活性。结果　EL 4B7 1 免疫小鼠的SPL经瘤细胞在体外刺激可诱生出明显的IL 2活性 ,而EL 4免疫小鼠的SPL则无此作用 ,两者具有较明显的差异 (P <0 0 1)。结论　B7 1基因转染小鼠EL 4淋巴瘤可在体外诱导免疫小鼠脾细胞产生较高水平的白细胞介素 2。     

Therapeutic antitumor response to cervical cancer in mice immunized with U14 v accines transfected with costimulatory B7 gene

Objective To investigate the effect of U14 vaccine transfected with the B7 gene in inducin g antitumor immune response to murine cervical carcinoma in Chinese 615-strain mice.Methods A recombinant retroviral plasmid vector expressing mouse B7-1 gene (pLNSX-mB7) was transfected into 615-strain mouse cervical carcinoma cell line No. 14 (U1 4) by electroporation to set up a highly-expressed mB7-1 U14 cell clonal strai n (B7(+)U14). In vivo experiments: (1) B7(+)U14 vaccine was primed to protect t he 615-strain mice against U14 re-challenge. (2) B7(+)U14 vaccine was injecte d into tumor-bearing mice with different tumor sizes. Lifetimes and tumor s izes were recorded. In vitro cytotoxicity assay: Mice were immunized with B 7(+)U14 or U14 vaccine and 2 weeks later, spleen cells of those mice were cultur ed for 2 days. The cytotoxicity of these cells against U14 was detected by 5-d iphenyl tetrazolium bromide assay.Results We obtained several B7-1 high expression clonal U14 lines. In vivo experiment, we did not find tumor growing in 3 of the 6 mice primed by B7(+)U14 vaccine during their entire life after re-challenge with U14. The other 3 mice develo ped tumors and their average survival time was longer than that of the control g roup (P&lt;0.01). All 6 mice grew tumors in the control group. When the transplanted tumors became palpable, the mice were randomly divided into 3 group s to be injected with B7(+)U14 vaccine. It was effective for tumor-bearing mic e only when the tumor diameters were &lt;3 mm. When the diameters were ≥3 mm, it was not efficacious to inject B7(+)U14 vaccine (P&lt;0.05). In vitro cytotoxicity assay, cytotoxic T lymphocytes induced by B7(+)U14 vaccine h ad a high er cytotoxicity against U14 than that induced by U14 vaccine (F=310.8, P &lt;0.001).Conclusions Vaccines of cervical cancer cells transfected with the costimulatory molecule B7 gene can induce antitumor immune protection in host mice against U14 re-challe nge. This treatment may cure part of the tumor-bearing mice but be restricted by tumor size. The results suggest that transfecting the B7 gene into cervical cancer as a cell vaccine may be an efficient supplementary method to treat cervi cal cancer after operation.     

双表达B7-1、B7-2基因肿瘤疫苗治疗小鼠肝癌优于单表达疫苗的研究

目的:研究B7-1、B7-2基因对肿瘤的免疫治疗作用。方法:应用转染有B7-1、B7-2基因的肝癌细胞株H22/B7-1、H22/B7-2,建立小鼠肝癌模型,观察小鼠成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节大小。结果:各实验组动物都发生肿瘤,接种H22/B7-1 H22/B7-2组成瘤率低,对照组动物肿瘤呈进行性生长;组间成瘤潜伏期不同,与对照组相比,凡接种有H22/B7-2的小鼠肿瘤形成有迟发性;接种转B7基因细胞的小鼠肿瘤生长都较对照组慢;同时接种H22/B7-1和H22/B7-的小鼠能负载大于107的肿瘤细胞。转基因细胞在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显增强。结论:B7-1、B7-2都能增强肝癌细胞的免疫原性。B7-2在抗肿瘤早期发挥作用,B7-1随后起放大和调节作用。B7-1与B7-2联用效果优于单一应用。     

异种血管内皮细胞生长因子重组蛋白质疫苗联合阿霉素治疗淋巴瘤的研究

目的探讨重组非洲爪蟾血管内皮细胞生长因子(Xenopuslaevisvascularendothelialgrowthfactor,xVEGF)肿瘤疫苗免疫治疗,联合阿霉素抗小鼠淋巴瘤的作用。方法采用C57BL/6小鼠建立EL4淋巴瘤模型。实验小鼠随机分成4组xVEGF联合阿霉素组(简称联合用药组)、阿霉素组、xVEGF组、生理盐水对照组。观察肿瘤生长、小鼠生存率和毒副反应,并检测分泌抗自身VEGF抗体的B细胞、肿瘤微血管密度(microvesseldensity,MVD)和肿瘤细胞凋亡等。结果联合用药组肿瘤明显小于其他3组(P<0.05),其中有3只小鼠肿瘤完全消退;接种肿瘤后48d,联合用药组小鼠生存率为100%,明显高于生理盐水对照组(0%)(P<0.01)。ELISPOT检测发现,异种蛋白质疫苗免疫的小鼠(联合或单用)产生了分泌抗自身VEGF抗体的B细胞,其数量与阿霉素组或生理盐水对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。联合用药组肿瘤MVD明显低于其他3组(P<0.05),肿瘤细胞凋亡指数明显高于其他3组(P<0.05)。结论采用异种同源蛋白质疫苗xVEGF免疫治疗,与阿霉素化疗联合有协同增强的抗小鼠淋巴瘤的作用。     

Preliminary Study on the Cooperation of IL-6 and mB7-1 in the Induction of Effective Antitumor Immunity In Vitro

Ｉｎｒｅｃｅｎｔｙｅａｒｓ，ｔｈｅｒｏｌｅｏｆＢ７ｍｏｌｅｃｕｌｅｉｎｃｏｓｔｉｍｕｌａｔｏｒｙｓｉｇｎａｌｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｎｇａｎｄｉｎａｎｔｉｔｕｍｏｒｉｍｍｕｎｅｒｅｓｐｏｎｓｅｈａｓｂｅｃｏｍｅｏｎｅｏｆｔｈｅｈｏｔｓｐｏｔｓ．Ａｔｔｈｅ...     

共刺激分子B7-2对小鼠肝癌治疗作用的实验研究

目的 :应用转染有小鼠B7- 2基因片段的肝癌细胞 ,建立小鼠肝癌模型 ,观察小鼠肿瘤生长和消退情况 ,研究共刺激分子B7- 2对肿瘤的免疫治疗作用。方法 :建立BALB/c小鼠转B7- 2基因肝癌细胞株H2 2 /B7- 2 ,细胞计数法测定肿瘤细胞体外增殖能力 ;BALB/c鼠皮下接种H2 2 /B7- 2及野生型H2 2细胞H2 2 /Wt,以空载体转染细胞H2 2 /neo为对照 ,建立小鼠肝癌模型 ,观察小鼠成瘤期、荷瘤小鼠存活期及肿瘤结节大小 ;同源淋巴细胞肿瘤细胞混合培养 (MTLCs)后测定淋巴细胞增殖指数和CTLs活性 ,同时测定培养上清IL -2、IFNγ ,研究B7- 2分子的抗肿瘤免疫效果。结果 :细胞在体外增殖能力一致 (P =0 .782 ) ;当接种不同肿瘤细胞后 ,三组动物都发生肿瘤 ,接种H2 2 /B7- 2组肿瘤形成有迟发性 ,并在接种 18d后肿瘤都开始缩小 ,但最终不会完全消失 ;接种H2 2 /Wt和H2 2 /neo组动物肿瘤呈进行性生长。H2 2 /B7- 2在体外刺激淋巴细胞增殖和诱导CTLs的能力明显强于对照细胞 (P <0 .0 5 )。结论 :共刺激分子B7- 2能增强肝癌细胞的免疫原性 ,它在抗肿瘤早期发挥作用。用其治疗肝癌是有效的 ,但不能介导完全和长期的抗肿瘤效应。     

小鼠B7-1和B7-2基因转染EL4细胞瘤苗抗肿瘤免疫作用的比较研究

目的：研究冠状动脉分流（CABG）术后冠状动脉竞争血流对左乳房内动脉（LIMA）桥血流中内皮素（ET）、一氧化氮（NO）含量的影响，探讨动脉桥血管早期衰坏的分子机制。方法：建立猪CABG术后桥血管竞争血流动物模型，利用血流闭塞器造成冠状动脉不同程度狭窄，测量桥血管血流量及方向变化，并采用放射免疫分析法及硝酸还原酶法分别检测LIMA桥血流中ET、NO含量并进行对比分析。结果：冠状动脉左前降支（LAD）近端狭窄程度越轻，LIMA桥血流量越少；LAD近端未完全闭塞时，LIMA桥均出现双向血流。CABG术后LIMA桥血流ET含量明显高于移植前(P＜0.05)，NO含量明显低于移植前(P＜0.05)。LAD近端冠脉竞争血流越大，LIMA桥血流NO含量越低。LIMA桥血流NO含量与LIMA桥血流量呈正相关（r=0.957,P＜0.05）。LAD近端30％狭窄时，NO含量明显低于LAD近端90％狭窄及全部闭塞时(P＜0.05)，LAD近端50％狭窄时，NO含量明显低于LAD近端全部闭塞时(P＜0.05)。LIMA桥血流ET含量有随LAD近端冠脉竞争血流增加而升高的趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论：来自未完全闭塞冠状动脉的竞争血流可引起LIMA桥血流量下降，产生双向血流，并导致桥血流中NO含量显著下降。     

血管内皮抑素协同肿瘤特异性DC-T细胞的抗肿瘤效应

目的 探讨血管内皮抑素联合肿瘤特异性DC-T细胞对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤效应。方法 建立Lewis肺癌C57BL/6鼠移植瘤模型, 培养小鼠来源肿瘤特异性DC-T细胞, 随机分为A组(PBS对照组)、B组(DC-T组)及C组(DC-T+血管内皮抑素组)。测量小鼠的体质量及肿瘤组织质量和体积, Western blotting检测各组肿瘤组织内血管内皮生长因子(VEGF)和乏氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白的表达, 流式细胞术检测肿瘤组织细胞悬液内髓源抑制性细胞(MDSC)、肿瘤相关巨噬细胞(TAM, M1/M2)、成熟的树突状细胞(mDC)和CD8⁺T细胞的比例。结果 与A组比较,B组(P<0.05)、C组(P<0.01)肿瘤生长明显受到抑制;相较于A组, B组VEGF表达下降, 且HIF-1α表达增加(P<0.05), C组VEGF表达明显下降, 且HIF-1α表达明显增加(P<0.01);与A组比较, B组(P<0.05)、C组(P<0.01)的MDSC和M2型TAM比例下降, M1型TAM升高, 肿瘤组织内mDC和CD8⁺T细胞比例增加。结论 血管内皮抑素联合肿瘤特异性DC-T细胞治疗明显减缓肿瘤生长, 有效逆转了肿瘤微环境的免疫抑制, 从而发挥了协同抗肿瘤效应。