乳酸菌素诱导心肌保护作用的研究

目的　 探讨口服乳酸菌素能否上调心肌细胞HSP70 的表达和增强心肌保护作用。 方法　 紫绀型先天性心脏病人 2 6例 ,随机分为安慰剂组 (A组 )和乳酸菌素片组 (B组 )。于阻断主动脉前、缺血 2 0min、再灌注 2 0min ,取右房心肌标本分别行免疫组化法检测HSP70 的含量及化学比色法检测SOD活性、MDA的含量。 结果　A组心肌细胞中HSP70 的含量均明显低于B组 (p <0 .0 5 )。缺血、再灌注时段SOD活性B组高于A组、MDA含量A组高于B组 (p <0 .0 5 )。 结论　 口服乳酸菌素片能上调HSP70 的表达并增强抗缺血 /再灌注损伤的心肌保护作用。     

细胞凋亡的线粒体信号通路在大鼠缺血延迟预适应抗心肌细胞凋亡机制中的作用

目的：以细胞凋亡的线粒体途径为切入点,探讨心肌缺血延迟预适应抑制心缺血再灌注（MI/R）后细胞凋亡的可能机制.方法：SD大鼠分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组、延迟缺血预处理组.缺血再灌注组采用经典大鼠冠脉结扎,缺血1h,再灌1h.延迟缺血预处理组采用缺血5min,再灌5min,反复循环3次,24h后缺血1h,再灌1h.流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,进行细胞色素C（CytC）和凋亡诱导因子（AIF）的Western blotting分析及Caspase-3活性测定,并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌HSP70的表达.结果：与缺血再灌注组相比较,心肌缺血预处理24h后可以减少MI/R后心肌细胞凋亡率,抑制CytC和AIF自线粒体向胞浆的释放及caspase-3的活化,上调HSP70蛋白表达.结论：心肌缺血延迟预适应可以减少MI/R造成的细胞凋亡,机制与其诱导HSP70的生成,抑制细胞凋亡的线粒体信号转导途径有关.     

托吡酯促进高血压鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70表达的研究

目的观察托吡酯对高血压大鼠急性脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白70(HSP70)表达的影响,探讨其神经保护作用机制。方法Wistar大鼠行双肾动脉狭窄术制成高血压模型,喂养2个月后随机分为3组:托吡酯干预组、缺血再灌注组和假手术对照组。线栓法制做大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,缺血2h,再灌注1d。取脑组织切片经免疫组化染色后,用病理图象分析仪计数HSP70阳性和阴性细胞数并计算阳性细胞比。结果托吡酯干预组大鼠HSP70的表达高于缺血再灌注组(P<0.05),假手术对照组未见HSP70表达。结论托吡酯能促进HSP70的表达,对缺血再灌注损伤的脑组织有保护作用。     

口服乳酸菌素对发绀型先天性心脏病心肌细胞中HSP70表达的影响

【目的】探讨口服乳酸菌素能否上调心肌细胞HSP70的表达和增强心肌保护作用。【方法】发绀型先天性心脏病人 2 6例 ,随机分为安慰剂组 (A组 )和乳酸菌素片组 (B组 )。于阻断主动脉前、缺血 2 0min、再灌注2 0min取右房心肌标本分别行免疫组化法检测HSP70的含量及化学比色法检测SOD活力、MDA的含量。【结果】A组心肌细胞中HSP70的含量均明显低于B组 (P <0 .0 5 )。缺血、再灌注时段SOD活力B组高于A组、MDA含量A组高于B组 (P <0 .0 5 )。【结论】口服乳酸菌素片能上调心肌细胞中HSP70的表达并增强抗缺血/再灌注损伤的心肌保护作用     

HSP70在无创性肢体缺血预适应中对心肌的保护作用

目的探讨无创性肢体缺血预适应对心肌梗死后心肌细胞凋亡及HSP70表达的影响。方法将健康成年雄性Wistar大鼠48只,随机平均分成4组:对照组(C),缺血再灌注组(I/R),经典缺血预适应组(IP),远程缺血预适应组(NDLIP)。各组分别在心肌梗死,再灌注过程中记录心电,再于实验末测定血清肌酸激酶(CK),肌酸激酶同工酶(CKMB),最后取心脏以免疫组化法检测热休克蛋白70(HSP70),以TUNEL法检测心肌细胞凋亡率,行心脏缺血范围(AAR)和梗死范围测定(IA),并计算梗死范围与缺血范围(IA/AAR)的比值。结果 (1)CK和CKMB:远程预适应组同经典预适应组的血清CK和CKMB值与缺血再灌注组相比明显下降(P<0.05);(2)心肌梗死面积(坏死区占缺血范围心肌重量的百分比):远程预适应组同经典预适应组的心肌梗死面积与缺血再灌注组相比明显下降(P<0.05);(3)凋亡率:远程预适应组同经典预适应组的凋亡率与缺血再灌注组相比明显下降(P<0.05);(4)HSP70:远程预适应组同经典预适应组的HSP70表达与缺血再灌注组相比表达增强(P<0.05)。结论远程缺血预适应同经典缺血预适应一样对大鼠心肌具有保护作用,其保护机制可能部分通过上调热休克蛋白以降低心肌细胞凋亡实现。     

缺血延迟预适应对心肌缺血再灌注所致细胞凋亡的保护

目的:分析心肌缺血延迟预适应能否抑制心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的发生及其发生的可能原因。方法:①实验于2003-08/2004-12在中山大学中西医研究所完成。选用出生两三个月的SD大鼠32只熏雌雄不拘。②随机将大鼠分为4组:正常对照组(不做任何处理),假手术组(只穿线,不结扎),缺血再灌注组(采用经典大鼠冠状动脉结扎,缺血1h,再灌注1h),延迟缺血预处理组(采用经典大鼠冠状动脉结扎,缺血5min再灌注5min,重复3个缺血预处理,24h后,缺血1h,再灌注1h。③采用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率,反转录聚合酶链法检测Bcl-xlmRNA/Bcl-xsmRNA的表达情况,进行Bcl-xl的蛋白免疫印迹分析并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌核因子κB亚单位P65蛋白的表达。结果:大鼠32只均进入结果分析。①大鼠心肌细胞凋亡率:心肌缺血再灌注组明显升高(P<0.01),延迟缺血预处理组明显低于缺血再灌注组(P<0.01)。②大鼠心肌Bcl-xlmRNA与Bcl-xsmRNA表达的比值:缺血再灌注组明显低于正常对照组(P<0.01),延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组(P<0.01)。③大鼠心肌Bcl-xl蛋白表达:缺血再灌注组明显减少(P<0.01),延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组(P<0.01)。④大鼠心肌核因子κBP65蛋白表达:延迟缺血预处理组核因子κBP65发生核转位且明显高于与缺血再灌注组(P<0.01)。结论:心肌缺血延迟预适应可以减少心肌缺血再灌注造成的细胞凋亡,此种作用发生可能与核因子κB活化后促进Bcl-xl的表达,保护线粒体功能有关。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与热休克蛋白72的保护作用

目的：观察热休克反应(heat shock response，HSR)后0、24、48、96、192h热休克蛋白72(heat shock protein 72，HSP72)表达水平的变化及再灌注后心肌组织超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)含量、心肌收缩功能变化，探讨HSP72对缺血再灌注心肌保护的可能机制。方法：Wistar大鼠48只．体质量250—300g，雌雄不均，随机分为6组，每组8只。全身高温42℃维持15min制作热休克模型。各组心脏离体逆行灌注．常温下(37℃)缺血25min，再灌注40min。测定缺血前、再灌注后心肌组织SOD含量，心肌收缩功能，观察各组心肌HSP72表达。结果：实验组再灌注后24h和48h心肌组织SOD活性分别为(22．37&;#177;4．75)、(23．39&;#177;4．86)Nu／mg，明显高于对照组。对照组和热预处理后0 h几乎无HSP72表达(面密度)，其表达高峰在热预处理后24，48h。分别为137．89&;#177;25．25，146．09&;#177;28．34，随后逐渐降低，于192h返回基线水平。HSP72表达与再灌注后心肌组织SOD(r=0．9234)，心功能恢复率LVSP(r=0．9012)呈显著正相关(P&;lt;0．05)．结论：热休克蛋白能提高抗氧化酶活性，减轻心肌缺血再灌注损伤。     

腺苷对兔缺血再灌注心肌和ET-1作用的研究

目的评价腺苷对缺血再灌注心肌的作用和对ET-1的影响,探讨腺苷预处理对缺血再灌注心肌保护作用的可能机制。方法家兔24只,随机分成对照组、腺苷预处理组、腺苷治疗组,每组8只。冠状动脉结扎40min,再灌注3h制备缺血再灌注模型。测定缺血前和再灌注3h后血CK的变化和心肌梗死区重量的大小,比较各组再灌注3h后SOD和MDA的变化。采用放免法测定结扎冠脉前,再灌注时,再灌注后30、60、120min血浆ET-1的变化。结果与对照组和腺苷治疗组相比,腺苷预处理组在再灌注3h后血清中CK、SOD、MDA的水平降低(P<0.01),心肌梗死面积明显减少(P<0.01);与对照组和腺苷治疗组相比,腺苷预处理组除结扎冠脉前,其余时间点ET-1的水平明显降低(P<0.01)。结论腺苷预处理可减轻再灌注损伤,对缺血再灌注心肌具有明显的保护作用,腺苷可能通过保护内皮细胞减少血浆ET-1的水平,减轻缺血再灌注损伤。     

大鼠心肌缺血再灌注损伤与热休克蛋白72的保护作用

目的:观察热休克反应(heatshockresponse,HSR)后0、24、48、96、192h热休克蛋白72(heatshockprotein72,HSP72)表达水平的变化及再灌注后心肌组织超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,SOD)含量、心肌收缩功能变化,探讨HSP72对缺血再灌注心肌保护的可能机制。方法:Wistar大鼠48只,体质量250～300g,雌雄不均,随机分为6组,每组8只。全身高温42℃维持15min制作热休克模型。各组心脏离体逆行灌注,常温下(37℃)缺血25min,再灌注40min。测定缺血前、再灌注后心肌组织SOD含量,心肌收缩功能,观察各组心肌HSP72表达。结果:实验组再灌注后24h和48h心肌组织SOD活性分别为(22.37±4.75)、(23.39±4.86)Nu/mg,明显高于对照组。对照组和热预处理后0h几乎无HSP72表达(面密度),其表达高峰在热预处理后24,48h,分别为137.89±25.25,146.09±28.34,随后逐渐降低,于192h返回基线水平。HSP72表达与再灌注后心肌组织SOD(r=0.9234),心功能恢复率LVSP(r=0.9012)呈显著正相关(P<0.05).结论:热休克蛋白能提高抗氧化酶活性,减轻心肌缺血再灌注损伤。     

缺血延迟预适应对心肌缺血再灌注所致细胞凋亡的保护

目的：分析心肌缺血延迟预适应能否抑制心肌缺血再灌注后心肌细胞凋亡的发生及其发生的可能原因。 方法：①实验于2003-08／2004-12在中山大学中西医研究所完成。选用出生两三个月的SD大鼠32只，雌雄不拘。②随机将大鼠分为4组：正常对照组（不做任何处理），假手术组（只穿线，不结扎），缺血再灌注组（采用经典大鼠冠状动脉结扎，缺血1h，再灌注1h），延迟缺血预处理组（采用经典大鼠冠状动脉结扎，缺血5min再灌注5min，重复3个缺血预处理，24h后，缺血1h，再灌注1h。③采用流式细胞仪测定心肌细胞凋亡率，反转录聚合酶链法检测Bcl-xl mRNA/Bcl-xs mRNA的表达情况，进行Bcl-xl的蛋白免疫印迹分析并利用免疫组织化学染色法检测大鼠心肌核因子KB亚单位P65蛋白的表达。 结果：大鼠32只均进入结果分析。①大鼠心肌细胞凋亡率：心肌缺血再灌注组明显升高（P〈0.01），延迟缺血预处理组明显低于缺血再灌注组（P〈0．01）。②大鼠心肌Bcl-xl mRNA与Bcl-xs mRNA表达的比值：缺血再灌注组明显低于正常对照组（P〈0．01），延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组（P〈0．01）。③大鼠心肌Bcl-xl蛋白表达：缺血再灌注组明显减少（P〈0．01），延迟缺血预处理组明显高于缺血再灌注组（P〈0．01）。④大鼠心肌核因子κB P65蛋白表达：延迟缺血预处理组核因子κB P65发生核转位且明显高于与缺血再灌注组（P〈0．01）。 结论：心肌缺血延迟预适应可以减少心肌缺血再灌注造成的细胞凋亡，此种作用发生可能与核因子KB括化后促进Bcl-xl的表达，保护线粒体功能有关。     

Protection against myocardial dysfunction after a brief ischemic period in transgenic mice expressing inducible heat shock protein 70.

Brief ischemic periods lead to myocardial dysfunction without myocardial infarction. It has been shown that expression of inducible HSP70 in hearts of transgenic mice leads to decreased infarct size, but it remains unclear if HSP70 can also protect against myocardial dysfunction after brief ischemia. To investigate this question, we developed a mouse model in which regional myocardial function can be measured before and after a temporary ischemic event in vivo. In addition, myocardial function was determined after brief episodes of global ischemia in an isolated Langendorff heart. HSP70-positive mice and transgene negative littermates underwent 8 min of regional myocardial ischemia created by occlusion of the left descending coronary artery, followed by 60 min of reperfusion. This procedure did not result in a myocardial infarction. Regional epicardial strain was used as a sensitive indicator for changes in myocardial function after cardiac ischemia. Maximum principal strain was significantly greater in HSP70-positive mice with 88+/-6% of preischemic values vs. 58+/-6% in transgene-negative mice (P < 0.05). Similarly, in isolated Langendorff perfused hearts of HSP70-positive and transgene-negative littermates exposed to 10 min of global ischemia and 90 min of reperfusion, HSP70 transgenic hearts showed a better-preserved ventricular peak systolic pressure. Thus, we conclude that expression of HSP70 protects against postischemic myocardial dysfunction as shown by better preserved myocardial function.     

葛根素对家兔心肌缺血-再灌注损伤的保护作用

目的:探讨葛根素抗心肌缺血-再灌注损伤的机制.方法:采用结扎冠状动脉左室支方法制备兔心肌缺血-再灌注损伤模型,用四道生理记录仪测定动物的血流动力学及左室功能变化.将40只家兔随机分组.10只作为空白对照组;10只作为假手术对照组;余20只制模,其中10只为模型组,另10只则在结扎左室支前20 min o40 min20 min(LPO)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPx)活性;实验完毕后取缺血-再灌注损伤区心肌组织0.5 g,分别测定组织匀浆中LPO含量、SOD活性及GSH-Px/LPO.结果:与模型组比较,葛根素保护组动物左室内压峰值(LVSP)、左室内压上升最大速率(LV dp/dt max)和左室内压下降最大速率(LV-dp/at max)均显著升高(P<0.05或P<0.01);血清中LPO含量明显降低(P<0.05),而GSH-Px/LPO升高非常明显(P<0.01);缺血一再灌注损伤区心肌组织中LPO含量显著降低,SOD活性和GSH-Px/LPO<0.05).结论:葛根素可通过提高对自由基的清除及拮抗脂质过氧化反应而起到保护缺血-再灌注损伤心肌的作用.     

超速起搏预适应对缺血-再灌注心肌抗氧化酶活性的影响

目的：观察超速起搏预适应早期及延迟保护相对心肌缺血-再灌注损害过程中血中一氧化氮(NO)的影响。方法：48只兔随机分为对照组(C组)、缺血-再灌注组(IR组)、超速起搏预适应组(PP组)和延迟保护作用组(DP组)。观察超速起搏(500min^-1)后缺血-再灌注期冠状窦血一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)的动态变化。结果：PP组和DP组较IR组冠状窦血NO含量在缺血-再灌注期间明显增高，而SOD和MDA含量明显减低。结论：PP和DP能减轻急性缺血-再灌注期自由基对心肌的损害，NO参与了PP与DP的心肌保护作用，在DP的发生中占重要位置。     

黄芪注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤心功能的改善作用

目的　观察黄芪注射液对家兔心肌缺血再灌注损伤的保护作用。方法　结扎冠状动脉前降支 60分钟后再灌注 60分钟 ,造成心肌缺血再灌注损伤模型 ,动态观察黄芪注射液对ECG及心功能的影响。结果　与对照组比较 ,黄芪组家兔心肌缺血再灌注后 ,ECG胸前导联上抬ΣST明显降低 (P <0 .0 5、0 .0 1) ,左室内压力变化最大速率 (±dp/dtmax)、左室内压为 40mmHg时的压力微分 (dp/dt DP4 0 )和左室压力峰值 (LVSP)显著升高 ,左室舒张末期压 (LVEDP)和等容舒张期压力下降时间常数 (T)值明显降低 ,左室射血时间 (ET)明显缩短 (P <0 .0 5、<0 .0 1)。结论　黄芪注射液能显著缩小心肌缺血范围 ,改善左室舒张收缩功能 ,对心肌缺血再灌注损伤有良好的保护作用。     

Experimental myocardial infarction: VIII. Chronotropic augmentation of cardiac function in left ventricular failure of acute and healing stages in intact conscious dogs

The hemodynamic effects of tachycardia induced by atrial pacing were investigated in left ventricular failure of acute and healing experimental myocardial infarction in 20 intact, conscious dogs. Myocardial infarction was produced by gradual inflation of a balloon cuff device implanted around the left anterior descending coronary artery 10-15 days prior to the study. 1 hr after acute myocardial infarction, atrial pacing at a rate of 180 beats/min decreased left ventricular end-diastolic pressure from 19 to 8 mm Hg and left atrial pressure from 17 to 12 mm Hg, without change in cardiac output. In the healing phase of myocardial infarction 1 wk later, atrial pacing decreased left ventricular end-diastolic pressure from 17 to 9 mm Hg and increased the cardiac output by 37%. This was accompanied by evidence of peripheral vasodilation. In two dogs with healing anterior wall myocardial infarction, left ventricular failure was enhanced by partial occlusion of the circumflex coronary artery. Both the dogs developed pulmonary edema. Pacing improved left ventricular performance and relieved pulmonary edema in both animals. In six animals propranolol was given after acute infarction, and left ventricular function deteriorated further. However the pacing-induced augmentation of cardiac function was unaltered and, hence, is not mediated by sympathetics.The results show that the spontaneous heart rate in left ventricular failure of experimental canine myocardial infarction may be less than optimal and that maximal cardiac function may be achieved at higher heart rates.     

急性缺血再灌注左室局部功能与心肌细胞凋亡的相关性研究

目的探讨应变率成像评价急性缺血再灌注后左心室功能与肌细胞凋亡的相关性及其应用价值。 方法健康杂种犬30只，分对照组（10只），缺血组（10只），再灌注组（10只）。缺血组于第一对角支1cm以下套扎左冠状动脉前降支30min，再灌注组套扎30min后再灌注120min，对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图左室收缩期应变率测量左室局部收缩功能，Simpson’s法测左室射血分数，原位末端脱氧核苷酸转移酶标记技术（TUNEL）法检测缺血区心肌细胞凋亡数。 结果收缩期应变率与射血分数及心肌细胞凋亡数相关性良好。峰值收缩期应变率在三组之间均有显著性差异（P值均＜0.05），射血分数在三组之间无显著性差异（P＞0．05），心肌阳性凋亡细胞数仅在再灌注组与对照组之间有显著性差异（P＜0．05）。 结论应变率成像为临床提供了一个敏感、简便的评价早期心肌局部收缩功能的指标，局部心功能与心肌细胞凋亡相关。     

电针对心肌缺血再灌注损伤家兔心肌细胞凋亡的影响

目的:研究电针对心肌缺血再灌注损伤家兔心肌细胞凋亡的影响.方法:将结扎左冠状动脉前降支30 min,再灌注60 min,成功制作为心肌缺血再灌注损伤模型的家兔24只,随机分为模型组、电针1及2组各8只.另仅开胸未结扎冠状动脉的8只为假手术组作为正常对照.电针1、2组术后30 min分别采用电针针刺内关穴与列缺穴60 min,仅1次,应用原位末端标记法观察4组家兔心肌细胞凋亡情况.结果:心肌凋亡细胞数量,模型组显著高于假手术组(P＜0.01),电针1组与电针2组、模型组比较显著降低(P＜0.05,P＜0.01),但仍高于假手术组(P＜0.01).结论:细胞凋亡参与心肌缺血再灌注损伤的病理过程,电针内关穴可以减少缺血再灌注损伤心肌细胞凋亡的数量,从而达到抗缺血再灌注损伤的作用.     

Hypercholesterolemia abrogates sevoflurane-induced delayed preconditioning against myocardial infarct in rats by alteration of nitric oxide synthase signaling

The aim of the current study was to determine whether hypercholesterolemia affects the delayed sevoflurane preconditioning against myocardial ischemia-reperfusion (IR) injury and, if so, the underlying mechanism. Male Sprague-Dawley rats fed 2% cholesterol-enriched chow for 8 weeks were subjected to sevoflurane preconditioning (2.4% vol/vol, 1 h) 24 h before myocardial ischemia was induced by occluding the left anterior descending coronary artery for 30 min followed by reperfusion for 120 min. The hemodynamic parameters left ventricular developed pressure, left ventricular end-diastolic pressure, and maximal rise/fall rate of left ventricular pressure were continuously monitored, and myocardial infarct size was determined at the end of reperfusion. The protein expression of myocardial nitric oxide synthase (NOS), Bcl-2, and Bad was assessed before ischemia. We found that the left ventricular hemodynamic parameters during the whole IR procedure and the myocardial infarct size did not significantly differ between the normocholesterolemic and hypercholesterolemic control groups. The hemodynamic parameters were all markedly improved during the reperfusion period, and the myocardial infarct size was significantly reduced by delayed sevoflurane preconditioning in normocholesterolemic rats, but all of these improvements were reversed by N-(3-(aminomethyl)benzyl) acetamidine (1400W, 1 mg/kg; i.v., 10 min before ischemia), a selective inducible NOS (iNOS) inhibitor, and 5-hydroxy decanoate sodium (5 mg/kg, i.v., 10 min before ischemia), a mitochondrial ATP-dependent K? channel blocker. Such cardiac improvement induced by delayed sevoflurane preconditioning did not occur in hypercholesterolemic rats and was not exacerbated by 1400W or 5-hydroxy decanoate sodium. The expression of myocardial iNOS was markedly enhanced by delayed sevoflurane preconditioning in normocholesterolemic, but not in hypercholesterolemic rats. The expression of endothelial NOS and Bad did not differ among all groups. The expression of myocardial phosphorylated endothelial NOS, Bcl-2, and phosphorylated Bad in normocholesterolemic rats was not affected by delayed sevoflurane preconditioning but was decreased in the hypercholesterolemic control group, and this was not reversed by sevoflurane, compared with the normocholesterolemic control group. Taken together, these results indicate that sevoflurane preconditioning exerts delayed cardioprotection against IR injury in normocholesterolemic rats, which is blocked by hypercholesterolemia potentially via interference with the iNOS/mitochondrial ATP-dependent K? channel pathway.