马拉色菌对角质形成细胞表达TLR-2和分泌sICAM-1、IL-8的影响

[摘要] 目的 探讨马拉色菌在直接免疫应答中诱导角质形成细胞表达TLR-2的作用及对sICAM-1和IL-8分泌和表达的影响。方法 马拉色菌和角质形成细胞体外共培养,通过免疫细胞化学方法检测角质形成细胞TLR-2蛋白的表达状况,并运用ELISA方法检测马拉色菌对角质形成细胞sICAM-1和IL-8表达和分泌的调节作用。结果 体外实验发现,在二者共同培养时,马拉色菌能增强角质形成细胞TLR-2的表达,且角质形成细胞的sICAM-1的和IL-8表达和分泌也增加。结论 马拉色菌可诱导TLR-2的增强表达,并能促进sICAM-1和IL-8的表达和分泌,这一机制可能在痤疮等相关的炎症反应中起重要作用。     

Toll样受体-2对角质形成细胞分泌IL-8的影响

目的:观察白念珠菌刺激人角质形成细胞后IL-8的变化以及Toll样受体2(Toll-like receptor2,TLR-2)对IL-8分泌的影响,探讨角质形成细胞在皮肤免疫系统中的作用。方法:白念珠菌分别与抗TLR-2抗体预处理前后的角质形成细胞孵育,ELISA方法检测不同时间培养上清液IL-8的水平。结果:白念珠菌可引起IL-8明显升高(P<0.01),3h开始,至24h达到高峰;中和TLR-2受体后,虽然引起IL-8升高,但无统计学意义(P>0.05)。结论:白念珠菌可以刺激角质形成细胞分泌IL-8,TLR-2在角质形成细胞IL-8表达中的作用尚难确定。     

马拉色菌对角质形成细胞分泌黑素合成相关细胞因子的影响

目的探讨引起花斑癣不同临床色素表现的马拉色菌与角质形成细胞共培养,导致与黑素合成相关的细胞因子的变化。方法MTT法筛选不同比例的马拉色菌对角质形成细胞增殖率的影响;用色沉和色减区分离的马拉色菌与角质形成细胞共培养,在不同时间段收集上清液,ELISA法测定碱性成纤维细胞因子（b-FGF）、内皮素-1（ET-1）、神经生长因子-β（NGF-β）、白介素-1α（IL-1α）、白介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和干细胞因子（SCF）的动态变化。结果角质形成细胞与马拉色菌在1∶10比例以下,角质形成细胞的生长状况不受马拉色菌的影响（P〉0.05）。当比例提高至1∶20以上时,角质形成细胞的生长受到显著抑制（P〈0.01）。马拉色菌刺激角质形成细胞分泌IL-1α、IL-6、TNF-α、ET-1增加（P〈0.01）。未检测到b-FGF、NGF-β和SCF的产生（P〉0.05）。色沉区马拉色菌刺激产生的ET-1显著高于色减区（P〈0.01）。结论马拉色菌刺激角质形成细胞分泌黑素合成相关因子的能力不同。ET-1在花斑癣色素沉着中可能起了一定作用。     

痤疮丙酸杆菌激活的toll样受体

背景:痤疮丙酸杆菌参与引起并维持痤疮的炎症阶段。近来研究发现,角质形成细胞表达toll样受体(TLRs),参与直接免疫应答。至今尚无关于角质形成细胞中痤疮丙酸杆菌对TLR激活作用的研究。目的:集中研究痤疮的炎症反应阶段,阐明痤疮丙酸杆菌在直接免疫应答中诱导角质形成细胞表达TLR-2和TLR-4的作用。还研究了痤疮丙酸杆菌是如何诱导间质金属蛋白酶(M M P)-9的分泌和表达的。方法:在两个水平上开展研究工作:在活体,利用痤疮皮损活检研究TLR-2和TLR-4蛋白的表达;体外培养单层角质形成细胞,研究痤疮丙酸杆菌对TLR-2和TLR-4表达及对M …     

红色毛癣菌对人角质形成细胞模式识别受体TLR-2,TLR-4,Dectin-1表达及细胞因子分泌的影响

目的研究红色毛癣菌对人角质形成细胞模式识别受体TLR-2,TLR-4,Dectin-1表达及细胞因子分泌的影响,探讨角质形成细胞对红色毛癣菌的免疫应答及其机制。方法红色毛癣菌孢子与人永生化表皮细胞株HaCaT细胞共培养,采用Real time PCR检测共培养后HaCaT细胞TLR-2,TLR-4,Dectin-1mRNA的表达情况;采用流式细胞技术检测共培养后不同时间段HaCaT细胞TLR-2,TLR-4及Dectin-1平均荧光强度;采用蛋白芯片抗体阵列检测共培养上清液中36种不同的细胞因子,趋化因子和急性时相蛋白的表达情况。结果共培养6 h后,TLR-2,TLR-4,Dectin-1mRNA表达上调;共培养量明24显h增后加TL。R结-2,论T L人R角-4,质D形ec成tin细-1胞平对均红荧色光毛强癣度菌增的高免,细疫胞识因别子和I应L-答8,,I在-30一9,定IF程N-度γ,上IL可-6通,IL过-1上3调在红Ha色Ca毛T癣细菌胞刺中激模后式分识泌别受体TLR-2,TLR-4及Dectin-1后分泌多种细胞因子来实现。     

人类角质形成细胞中调节细胞内信号传导的TOU样受体（TLR2）对糠秕马拉色菌的反应

TOU样受体（TLRs）在对抗微生物侵入的先天性免疫反应中起重要作用。具有亲脂性的糠秕马拉色菌与银屑病头皮损害的发生有关。本研究旨在评估TLRs在抵抗糠秕马拉色菌感染中的作用。分析了骨髓分化因子88（MyD88）基因的表达，后者与许多TLRs的信号传递途径有关。另外，检测了β-防卫素家族的抗微生物肽与TLRs间可能存在的联系。对于感染了糠秕马拉色孢子菌的人类角质细胞和多种马拉色菌阳性银屑病皮肤活检标本，采用RT-PCR检测其TLRs、MyD88、人类β防卫素2（HBD-2）、HBD-3及白细胞介素-8（IL-8）的mRNA表达。     

黄芩甙对角质形成细胞产生IL-8和增殖活性的影响

目的 研究黄芩甙对角质形成细胞产生IL-8和增殖活性的影响，探讨黄芩甙治疗银屑病机制。方法 采用四甲基偶氮盐比色法（MTT）观察黄芩甙对角质形成细胞株HaCaT细胞增殖的影响，实时定量RT—PCR方法检测黄芩甙对HaCaT角质形成细胞表达IL-8 mRNA的影响；用酶联免疫吸附方法（ELISA）检测HaCaT细胞分泌至培养液中IL-8的量。结果 100μg／mL黄芩甙可抑制HacaT细胞增殖；10—100μg／mL黄芩甙均可抑制HaCaT角质形成细胞表达IL-8mRNA和分泌IL-8。结论 黄芩甙可抑制体外培养的HaCaT细胞增殖和表达IL-8mRNA和蛋白，发挥抗炎和治疗银屑病的作用。     

卡泊三醇对白癜风患者角质形成细胞中IL-8及其受体CXCR2分泌的影响

目的：探讨卡泊三醇对白癜风患者皮损处角质形成细胞IL-8及其受体CXCR2分泌的影响。方法：外用卡泊三醇前及使用3个月和6个月后，分别取材培养白癜风患者皮损处角质形成细胞，通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测上清液中IL-8的表达，通过流式细胞仪分析趋化因子受体CXCR-的表达。结果：外用卡泊三醇后，白癜风患者角质形成细胞IL-8及其受体CXCR-2的分泌明显降低。结论：卡泊三醇能有效抑制白癜风患者角质形成细胞中IL-8及其受体CXCR2的分泌，这可能是卡泊三醇治疗白癜风的作用机制之一。     

黄芪注射液对TNF-α诱导人脐静脉内皮细胞炎症因子的影响及其分子机制

目的 观察黄芪注射液对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的体外培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)核因子-κβ(NF-κβ)激活与白介素-6(IL-6)、可溶性细胞间黏附分子-1(sICAM-1)分泌的影响,探讨其分子机制.方法 体外培养的第2代HUVECs用于实验,免疫组织化学分析检测细胞NF-κβ亚单位p65的表达程度,Western blot检测核内NF-κβ含量变化,ELISA法检测培养液中IL-6、ICAM-1浓度.结果 TNF-α有效激活NF-κβ并诱导HUVECs分泌IL-6、sICAM-1增加;黄芪注射液预先孵育2 h能抑制NF-κβ表达并减轻TNF-α诱导的上述反应.结论 TNF-α可能通过激活NF-κβ使IL-6、sICAM-1增加,从而损伤血管内皮功能;黄芪注射液对上述反应有拮抗作用,推测是通过抑制NF-κβ途径实现血管内皮保护功能.     

来氟米特对脂多糖诱导下 HaCaT细胞分泌 IL-8和 ICAM-1的影响

目的：观察来氟米特活性代谢产物A771726对脂多糖诱导下人永生化角质细胞（ HaCaT ）分泌白介素-8（IL-8）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的影响。方法用脂多糖诱导HaCaT细胞增殖,ELISA法检测细胞上清液中IL-8、ICAM-1的含量。结果1μg/ml的脂多糖可以诱导HaCaT细胞高分泌IL-8和ICAM-1,加入A771726（浓度范围为30～270μg/ml）后能够抑制其分泌,抑制作用随浓度的增大而增强。结论来氟米特可以抑制脂多糖诱导下HaCaT细胞分泌IL-8、ICAM-1。     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0~10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0~48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化。结果TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应。2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰。MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰。2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰。结论TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌。因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一。     

桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞Toll-MyD88信号通路炎性信号表达的影响

目的:基于Toll-My D88信号通路观察桂枝芍药知母汤对尿酸钠诱导的大鼠巨噬细胞炎性信号表达的影响,以期分析其抗炎的药效作用机制。方法:以尿酸钠混悬液诱导大鼠巨噬细胞制备痛风性关节炎巨噬细胞模型,以桂枝芍药知母汤含药血清进行干预,ELISA法检测白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、钙结合蛋白S100A8的表达,DNA-蛋白质互作ELISA(DPI-ELISA)方法检测核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)活性;Western-Blot法检测髓性分化因子-88(myeloid differentiation factor 88,My D88)信号衔接蛋白、核因子κB酶抑制剂-β(inhibitor kappa B kinaseβ,IKK-β)、核因子κB抑制蛋白α亚基(NF-kappa-B inhibitor alpha,IKB-α)表达水平;逆转录PCR检测Toll样受体-2(toll-like receptor-2,TLR-2)、TLR-4mRNA的表达。结果:尿酸钠混悬液诱导巨噬细胞造模2 h后,模型细胞对照组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、S100A8含量,NF-κB活性,My D88、IKK-β蛋白表达及TLR-2、TLR-4 mRNA表达较正常细胞对照组显著增高(P0.05),IKB-α表达较正常细胞对照组显著降低(P0.05);与模型细胞对照组比较,桂枝芍药知母汤各剂量组细胞表达TLR-2、TLR-4 mRNA水平显著降低(P0.05);在不加受体抑制剂的实验中,桂枝芍药知母汤各剂量组IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量,My D88、IKK-β蛋白表达水平显著降低(P0.05),高剂量组NF-κB活性显著降低(P0.05),高剂量组S100A8、IKB-α表达水平显著升高(P0.05)。结论:桂枝芍药知母汤抗炎作用机制与降低TLR-2、TLR-4 mRNA表达,抑制My D88、IKK-β蛋白表达,增加S100A8、IKB-α蛋白表达水平,抑制NF-κB激活,进而降低Toll-My D88信号通路相关炎性因子表达密切有关。     

TGF-β1对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响

目的 观察转化生长因子β1(TGF-β1)对肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾间质炎症进展中的作用.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞系(HK-2),用不同浓度(0～10 ng/mL)TGF-β1刺激24 h或用5 ng/mL TGF-β1刺激不同时间(0～48 h),荧光定量PCR技术和ELISA方法分别检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、白介素-8(IL-8)、正常T细胞活化后表达和分泌调节蛋白(RANTES)的mRNA和蛋白表达的变化.结果 TGF-β1能诱导HK-2细胞MCP-1、IL-8、RANTES的表达上调,且呈剂量和时间依赖效应.2 ng/mL TGF-β1作用24 h即可诱导MCP-1和IL-8 mRNA明显升高,5 ng/mLTGF-β1作用时达高峰.MCP-1和IL-8蛋白分泌分别于刺激后36 h和24 h达高峰.2 ng/mL和5 ng/mL TGF-β1均可诱导RANTES mRNA明显升高,2 h时RANTES mRNA表达开始升高,24 h达高峰;RANTES蛋白基础分泌水平极低,TGF-β1作用24 h时RANTES蛋白分泌开始升高,36 h达高峰.结论 TGF-β1诱导能明显上调趋化因子MCP-1、IL-8和RANTES的mRNA表达和蛋白分泌.因此,有效干预TGF-β1诱导的趋化因子的表达可能成为减轻肾间质炎症的途径之一.     

组织因子（TF）和蛋白酶激活受体（PARs）在肿瘤细胞的表达及其作用

目的探讨组织因子（tissue factor,TF）和蛋白酶激活受体（protease-activated receptors,PARs）在肿瘤细胞的表达及其作用。方法采用双抗夹心酶联免疫吸附试验、发色底物法、免疫细胞化学染色法、逆转录PCR等检测SW620、SW480、95 D、LTEP-α-2 BGC803、SGC7901、MGC803等肿瘤细胞株的TF、PAR1和PAR2表达;利用相关的激动剂、拮抗剂及单克隆抗体重点处理SW620细胞,观察TF、PAR1及PAR2对细胞增殖、迁移能力及白细胞介素8（IL-8）分泌的影响作用。结果不同肿瘤细胞株均表达TF,但表达程度有所不同;PAR1和PAR2在肿瘤细胞的表达呈现基因和蛋白水平的不一致;凝血因子Ⅶa、PAR1和PAR2的激动剂均可促进SW 620细胞的增殖、迁移和IL-8的分泌;抗TF抗体、抗PAR2抗体和PAR2拮抗剂均可明显抑制相应刺激物诱导的细胞增殖、迁移及IL-8的分泌。结论TF及PARs（主要为PAR2）在结肠癌细胞株SW620表面大量表达,增强细胞的增殖、迁移能力及IL-8的分泌。TF部分通过细胞表面PAR2影响肿瘤细胞的生物学特性。     

瑞香素对TNF-α刺激的HaCaT角质形成细胞炎症因子表达的影响

目的观察瑞香素对TNF-α刺激的HaCaT角质形成细胞炎症因子表达的影响,并初步探讨其机制。方法细胞活力检测采用CCK-8检测试剂盒。实时荧光定量PCR检测炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α、IL-8和MCP-1 mRNA的水平。Western blotting检测p65和p-p65的蛋白水平变化。结果 20μM以下瑞香素处理HaCaT角质形成细胞24小时未表现出明显的细胞毒性。TNF-α刺激能显著促进HaCaT角质形成细胞IL-1β(P0.05)、IL-6(P0.001)、TNF-α(P0.05)、IL-8(P0.05)和MCP-1(P0.05)的表达;而瑞香素(20μM)联合处理能减弱TNF-α刺激所引起的炎症因子表达升高。TNF-α处理能够诱导p65磷酸化,而瑞香素(20μM)联合处理能够抑制p65的磷酸化。结论瑞香素对TNF-α诱导的HaCaT角质形成细胞炎症反应具有抑制作用,而这种抑制作用与NF-κB信号通路的抑制相关。     

肺炎嗜衣原体包涵体膜蛋白Cpn0147诱导单核细胞分泌TNF-α和IL-8

目的　探讨肺炎嗜衣原体（Cpn）包涵体膜蛋白Cpn0147诱导人单核细胞分泌炎症因子的分子机制。方法　用去除内毒素活性的不同浓度Cpn0147重组蛋白（1.0、10.0、30.0和50.0　μg/mL）刺激THP-1细胞0～48　h,ELISA检测肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和白介素-8（IL-8）的分泌水平;实时定量PCR检测TNF-α和IL-8　mRNA的表达;用Toll样受体2（TLR2）和TLR4中和抗体处理THP-1细胞,或采用TLR2和TLR4　siRNA沉默其表达,ELISA检测THP-1处理前后TNF-α和IL-8分泌的变化。结果　Cpn0147可诱导THP-1细胞表达TNF-α和IL-8的mRNA和蛋白;同时,不同时间点Cpn0147对TNF-α和IL-8的诱导水平有所不同,Cpn0147作用2～6　h后即可诱导TNF-α和IL-8分泌,12　h时达到峰值,随后逐渐下降。采用TLR2和TLR4中和抗体封闭THP-1细胞后,TNF-α和IL-8分泌水平明显减少,采用TLR2和TLR4　siRNA干扰其表达后,TNF-α和IL-8的分泌也得到了类似的结果。结论　Cpn0147　可能通过TLR2和TLR4介导TNF-α和IL-8分泌。     

SOCS1 受抑的新型肝癌树突状细胞疫苗制备及功效的初步研究

目的探讨抑制SOCS1表达对LIGHT激活的肝癌树突状细胞疫苗效应的作用。方法用重组小鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGM-CSF)、重组小鼠白细胞介素4(rmIL-4)体外诱导培养小鼠骨髓单核细胞产生骨髓来源树突状细胞(BMDC),体外负载肝癌细胞HepA可溶性抗原,并用LIGHT和SOCS1反义寡核苷酸(AS1)处理DC,制备负载肝癌抗原DC疫苗;流式细胞仪检测疫苗细胞CD40及CD86表达和ELISA测定其IL-12、IL-1分泌水平以确定DC疫苗细胞的成熟度;通过体外细胞毒T淋巴细胞(CTL)活性、淋巴细胞增殖反应和IL-6、TNF-β分泌水平测定分析疫苗细胞的抗肿瘤免疫应答。结果负载肝癌抗原DC疫苗在LIGHT和AS1的双重作用下,疫苗细胞的成熟标志CD40、CD86、IL-1和IL-12增高(P<0.01),能增强诱导CTL活性、刺激淋巴细胞增殖和分泌IL-6、TNF-β能力(P<0.01)。结论抑制SOCS1能提高肝癌DC疫苗的成熟度,并增强疫苗细胞诱导抗肿瘤免疫应答。     

诱导11β-HSD1表达对GC保护血管内皮炎性损伤作用的影响

目的探讨诱导11β-HSD1的表达在GC保护血管内皮炎性损伤中的影响。方法用甘草次酸(GA)诱导人脐静脉内皮细胞11β-HSD1的表达,观察GA作用后体外培养的人脐静脉内皮细胞在LPS和(或)Dex刺激下IL-6等炎性细胞因子的分泌及发生凋亡的变化,同时观察不同浓度的GA对人脐静脉内皮细胞11β-HSD1的表达的诱导情况。结果 GA单独作用于人脐静脉内皮细胞时,能够上调11β-HSD1mRNA的表达。GA与GC(Dex)合用也可促进11β-HSD1mRNA的表达。GA能显著抑制LPS诱导的HUVEC分泌IL-6和sICAM-1,同时显著降低LPS诱导的HUVEC的细胞凋亡率。结论 GA通过诱导11β-HSD1表达,可增强GC抑制IL-6等前炎症细胞因子的产生,加强对血管内皮细胞炎性损伤的保护。     

白念珠菌磷脂甘露聚糖对单核细胞产生白介素-6、白介素-8的影响

目的 研究白念珠菌磷脂甘露聚糖( PLM)诱导人急性单核细胞白血病细胞系细胞(THP-1)产生的炎症反应是否依赖Toll样受体(TLR)2.方法 实时荧光定量逆转录PCR分析PLM体外刺激THP-1细胞TLR2、TLR4、前炎症因子[白介素(IL)-6]和趋化因子(IL-8)的mRNA表达水平.酶联免疫吸附法检测IL-6、IL-8分泌含量.免疫印迹法分析TLR2的蛋白表达.结果 PLM可升高THP-1细胞的IL-6和IL-8 mRNA表达和分泌水平(均P＝0.0000).PLM上调THP-1细胞的TLR2 mRNA和蛋白表达水平(P＝0.0000),但对TLR4 mRNA表达无影响.PLM经β-D-甘露糖苷水解酶处理后,不能诱导上述受体及因子的表达.TLR2中和抗体能抑制PLM诱导的IL-6和IL-8产生(P ＝0.0003,P＝0.0010).结论 白念珠菌胞壁PLM依赖TLP2介导激活人THP-1细胞产生炎症反应.     

丹参和枸杞对中波紫外线损伤角质形成细胞的保护作用

目的:观察丹参和枸杞对中波紫外线(UVB)损伤角质形成细胞的保护作用及作用机制。方法:用丹参和枸杞对HaCaT细胞进行预处理24小时,采用20、40、60mJ/cm2剂量的UVB照射细胞,以MTT法检测细胞生存率,以酶联免疫吸附实验检测细胞上清液中TNF-α及IL-1β的分泌量。结果:角质形成细胞损伤程度与UVB照射剂量有关,丹参和枸杞均可提高UVB照射后角质形成细胞的生存率,丹参可抑制角质形成细胞释放TNF-α和IL-1β;枸杞只抑制TNF-α的释放,而对IL-1β无明显抑制作用。结论:UVB对角质形成细胞有损伤作用,且与剂量相关;丹参、枸杞可以通过降低UVB引起的炎症因子TNF-α和(或)IL-1β的分泌从而减轻紫外线辐射引起的皮肤损伤。