蛇足石杉内生真菌产石杉碱甲含量检测及真菌的鉴定

目的：从野生蛇足石杉中筛选高产石杉碱甲（HA）内生真菌。方法以野生蛇足石杉中分离获得的内生真菌为研究起点,采用TLC及HPLC法测定和分析并利用形态学及rDNA-ITS序列分析对高产HA菌株进行鉴定。结果初步形态鉴定内生真菌NSG-1为1株尖镰孢（镰刀菌）属真菌,经rDNA-ITS序列分析鉴定为尖镰孢NSG-1株。该菌株发酵液产HA为11.1 mg/L,其产HA能力较以往研究菌株产量高。结论野生蛇足石杉中可获得高产HA内生真菌,其代谢产物中HA含量有待通过菌种诱变和改造来适应工业化生产。     

HPLC测定九龙山国家自然保护区石杉科4种植物石杉碱甲的含量

目的：采用HPLC法测定九龙山国家自然保护区石杉科4种植物中石杉碱甲的含量。方泼：以2％酒石酸溶液提取总碱,用高效液相法测定4种植物全草和不同器官石杉碱甲的含量。结果：石杉碱甲在采集的4种植物及其不同器官中均有分布,其中柳杉叶马尾杉的石杉碱甲含量很高,达到1981．27μg/g,远远大于其他植物,石杉碱甲在不同器官中含量不同,总体表现为：叶〉茎〉根。结论：九龙山自然保护区4种石杉植物石杉碱甲含量较高;植物不同器官中石杉碱甲含量存在差异。     

HPLC法测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量

目的 测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法 用2％酒石酸溶液提取总碱，HPLC法测定，外标法定量。结果 石杉碱甲在所测定的5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中均有较高分布，分别达到0．0481％，0．0579％，0．0706％，0．0345％，0．1961％，在闽浙马尾杉中含量较少，仅为0．0061％。结论 方法简便、准确，可用于石杉碱甲资源的寻找。     

石杉碱甲药源植物研究进展

石杉碱甲（Huperzine A）从石杉科（Huperziaceae）石杉属（Huperzia）植物蛇足石杉（Huperzia serrfta（Thunb．ex Murray）Trev．）中分离得到,其临床治疗阿尔茨海默症（Alzheimer’s disease,AD）疗效显著。由于石杉碱甲的化学合成在短时间内难以克服合成步骤繁琐、成本高、活性低等特点,自然资源的挖掘和开发成为解决石杉碱甲短缺的有效途径之一。故对近年来石杉碱甲药源植物研究所取的成果和难点进行总结,以期为今后的研究提供一定参考。     

产石杉碱甲新资源研究方法探索

从老年痴呆症药物需求研究到药物生产开发全方位视角对近期治疗老年痴呆症一线药物-石杉碱甲来源及生产的发展与动态进行综述,并对今后产石杉碱甲菌株研发方法进行了展望。源于天然植物的药物开发历史悠久且富有生命力,植物提取获得石杉碱甲为最简便方式,但植物提取获得石杉碱甲已面临植物资源匮乏瓶颈;化学合成生产石杉碱甲仍是研发重要途径之一,但合成步骤繁琐、代价昂贵,很难获得纯光学活性的合成物;利用从野生蛇足石杉内分离获得的内生真菌及其发酵液中提取石杉碱甲正在取得成效;依托生物技术改造菌株获得石杉碱甲将会是工业化生产开发的一个重要方向。     

HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量

蛇足石杉Huperzia serrata(Thumb.)Trey.及闽浙马尾杉P.minchegensis Ching同属于石杉科植物,其含有的石杉碱甲(Huperzine A),在临床上用于治疗记忆障碍及老年性痴呆[1-2]。我们采用HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量,为石杉碱甲药物资源的开发利用提供实验依据。     

石杉碱甲固体脂质纳米粒包封率的测定方法研究

目的建立石杉碱甲固体脂质纳米粒（Hup A-SLN）包封率的测定方法。方法分别采用透析法、超滤法分离固体脂质纳米粒和游离药物,以高效液相色谱法测定石杉碱甲的含量。结果超滤法能有效地将石杉碱甲固体脂质纳米粒与游离石杉碱甲分离,回收率为98.09%,测得3批样品的平均包封率为57.63%。结论超滤法方便快捷,结果准确,适用于石杉碱甲固体脂质纳米粒的包封率测定。     

石杉碱甲的研究进展

综述石杉碱甲的研究进展,分别从作用机制、药理作用、合成以及结构修饰等方面对石杉碱甲的研究进行总结,并简述其发展方向：ZT-1作为石杉碱甲的替代物,已经在欧洲完成Ⅱ期临床,有望成为我国具有自主知识产权,又有希望打入国际市场的创新药物。     

皱边石杉内生真菌资源遗传多样性的ISSR分析

目的 采用ISSR标记技术从分子水平探讨皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性,建立皱边石杉内生真菌资源遗传分化指纹图谱,为筛选可产石杉碱甲的目标菌株提供快捷的判别依据。方法 以从皱边石杉中分离的100株内生真菌为材料,建立其ISSR优化反应体系并分析其遗传多样性;TLC、HPLC检测发酵产物。结果 优化筛选的10条ISSR引物对皱边石杉内生真菌进行遗传多样性分析,共扩增出3 975条清晰条带,多态性条带占100%。遗传相似系数为0.59～0.96,在0.64水平,皱边石杉内生真菌可分为11类;在0.67水平,第I类又可分为5个亚类。采用引物UBC868对13号菌株及皱边石杉基因组DNA扩增,在500、200 bp均具有清晰的扩增条带,发酵产物经TLC和HPLC检测,发现13号菌株与宿主植物皱边石杉同样可产生石杉碱甲。结论 皱边石杉内生真菌资源遗传多样性高,遗传距离较远,遗传基础较宽,与13号菌株同属一类的内生真菌可作为石杉碱甲生产的潜力菌株进行重点筛选和诱变。     

石杉碱甲的研究进展

石杉碱甲(huperzine A,HupA)是来源于蕨类植物蛇足石杉的一种倍半萜生物碱,为高效、高选择性、可逆性的乙酰胆碱酯酶(AChE)抑制剂。HupA在治疗阿尔茨海默病(Alzheimersdisease,AD)方面的显著疗效,近年研究还证明HupA有神经保护和预防化学武器的潜力,引起世界各国药学工作者广泛关注和研究。现系统的综述石杉碱甲在药学研究各领域中的研究进展。     

兰科药用植物的5种内生真菌产生的植物激素

目的　研究促进兰科药用植物生长发育的5种内生真菌产生的植物激素,从物质角度探讨内生真菌促进其生长发育的机制。方法　从真菌发酵液和菌丝体中分别提取植物激素,用高效液相色谱进行梯度洗脱,分析鉴定其中赤霉素(GA3),吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、玉米素(Z)、玉米素核苷(ZR)5种植物激素并测定其含量。结果　5种内生真菌均能不同程度地产生一种或几种上述激素。结论　以上结果为阐明内生真菌促进兰科药用植物生长发育的作用机制提供实验依据。     

小连翘内生真菌种群分布及其抗菌性研究

目的 分析小连翘(Hyperioums sampsonii Hance)内生真菌的分布特征和抗菌活性.方法 采用内生菌分离法分离菌株,双培养法对峙试验测定其抗菌性.结果 从小连翘的根、茎、叶等不同的器官中分离得到81株内生真菌,经形态学分类鉴定分属于4个目,5个科,26个属,其中头孢霉属(Cephalosporium sp.)和丝核菌属(Rhizoctonia sp.)为优势菌群.不同部位内生真菌的类型、数量和分布存在差异,根部有31株,分属于12属;茎部有12株,分属于10属;叶部有38株,分属于13属.通过平板对峙实验发现,从小连翘所分离的内生真菌中54.32%对某些植物病原真菌有拮抗活性.结论 小连翘内生真菌及其代谢产物中具有潜在活性物质,值得深入研究.     

明党参内生真菌种群的生态分布及其诱导子活性研究

目的 研究不同产区、不同生长期明党参内生真菌的种群结构与生态分布,以及内生真菌诱导子对明党参细胞生长与多糖积累的影响。方法 采用微生物分离、培养与鉴定等生物学方法、植物细胞悬浮培养方法以及统计分析方法。结果 从4个产地明党参植株中共分离到8属116株内生真菌,其中镰孢属(Fusarium LK. ex FR.)、地霉属(Geotrichum LK.)和链格孢属(Alternaria Nees)为优势种群。随着明党参生长期的不同,内生真菌种群结构出现明显的动态变化。在苗期和孕蕾期,内生真菌种群丰富,数量较多,尤其是在孕蕾期3种优势种群的分离率和分离频率分别达到30%和19%以上。部分内生真菌种群还具有明显的区域专一性和组织专一性。此外,内生真菌Fusarium sp. 3诱导子处理组,明党参细胞生长量和多糖量分别比对照提高了31.86%和38.01%。结论 明党参内生真菌具有丰富的生物多样性,种群结构及分布与其生态环境具有密切的相关性,且部分明党参内生真菌诱导子对其细胞生长和多糖积累均具有显著的促进作用。     

山豆根内生真菌的分离与鉴定

目的从山豆根中分离鉴定内生真菌。方法利用PDA培养基对山豆根进行内生真菌的分离,采用分子生物学手段进行鉴定,通过16S rRNA基因序列分析,比对结果。结果从山豆根中分离得到35株内生真菌,共9属13种,镰刀菌属、间座壳属、刺盘孢属和青霉属均为优势菌属。结论山豆根中含有丰富的内生真菌资源,进一步开发利用山豆根中内生真菌资源具有重要意义。     

金叶女贞内生真菌分离及抑菌活性

［摘要］目的　探讨金叶女贞内生真菌的多样性及其次生代谢产物抑制细菌活性．方法　采用植物组织块培养分离法从金叶女贞茎和叶中分离内生真菌,分别进行YPD液体培养,将培养物过滤后用丙酮萃取次生代谢产物,以大肠杆菌（Escherichia coli）、绿脓杆菌（Pseudomonas aeruginosa）、金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）为试验指示菌株,用滤纸片法分别测定次生代谢产物对3种供试菌的抑菌活性．结果　从金叶女贞茎和叶中共分离得到29株内生真菌,有25株内生真菌对试验菌株有一定的抑制作用,占总分离菌株的86.2%．不具抗菌活性的菌株为4株,占总分离菌株的13.8%．结论　金叶女贞茎、叶中均存在丰富的内生真菌资源,其次生代谢产物具有良好的抑菌活性．     

不同产地阳春砂内生真菌的分子鉴定研究

[目的]观察广东阳春砂与云南阳春砂内生真菌的种类,比较两地阳春砂内生真菌组成的差异.[方法]采用PDA培养基分离培养广东阳春砂与云南阳春砂茎叶内生真菌,分析两地阳春砂内生真菌的定殖率、相对分离频率.对所获菌株,通过形态特征鉴定归类后,提取菌株的DNA并测序,鉴定菌株的分类地位.[结果]广东阳春砂内生真菌定殖率:茎26....     

不同生长时期凤丹内生真菌的分离鉴定及多样性研究

目的 对不同生长时期凤丹根皮内生真菌进行分离鉴定。方法 运用组织分离法进行分离,采用形态学与分子生物学相结合的手段进行鉴定。结果 共得到内生真菌45株,分属于9属13种,其中枯萎期4属4种,分别为Fusarium Keratoplasticum、Myrotheeium prestonii、Septoriella phragmitis、Cosmospora cymosa,相对分离频率为40%。花期6属9种,分别为Fusarium acutatum、Fusarium circinatum、Fusarium fujikuroi、Alternaria alternata、Alternaria arborescens、Climacocystis montana、Pyrenochaeta lycopersici、Penicillium crustosum、Rhexocercosporidium panacis,相对分离频率为60%。结论 凤丹根皮中内生真菌组成丰富,且在不同生长时期其种类组成具有多样性。     

道地药材单叶蔓荆内生真菌生态分布

文章研究不同产地单叶蔓荆内生真菌生态分布,结果显示,从不同产地单叶蔓荆植株中分离获得内生真菌257株,分别属于4纲5目6科26属。研究发现不同产地单叶蔓荆内生真菌的种类与分布均存在差异,以江西都昌多宝产单叶蔓荆内生真菌的生物多样性最为丰富,共67株,而广东汕头产单叶蔓荆植株中分离获得内生真菌最少;不同地理条件和生长环境的单叶蔓荆内生真菌种类和分布存在差异,从湖滨沙滩荒洲产单叶蔓荆分得内生真菌菌株数最多,湖中沙滩荒洲产单叶蔓荆分得内生真菌菌株最少。该研究为揭示单叶蔓荆内生真菌对其药用品质的形成,探讨内生真菌与单叶蔓荆道地药材相关性提供依据。