HPLC法测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量

目的 测定6种石杉科植物中石杉碱甲的含量。方法 用2％酒石酸溶液提取总碱，HPLC法测定，外标法定量。结果 石杉碱甲在所测定的5种石杉科植物蛇足石杉、皱边石杉、四川石杉、金丝条马尾杉、柳杉叶马尾杉中均有较高分布，分别达到0．0481％，0．0579％，0．0706％，0．0345％，0．1961％，在闽浙马尾杉中含量较少，仅为0．0061％。结论 方法简便、准确，可用于石杉碱甲资源的寻找。     

HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量

蛇足石杉Huperzia serrata(Thumb.)Trey.及闽浙马尾杉P.minchegensis Ching同属于石杉科植物,其含有的石杉碱甲(Huperzine A),在临床上用于治疗记忆障碍及老年性痴呆[1-2]。我们采用HPLC法测定蛇足石杉及闽浙马尾杉不同部位的石杉碱甲含量,为石杉碱甲药物资源的开发利用提供实验依据。     

蛇足石杉内生真菌产石杉碱甲含量检测及真菌的鉴定

目的：从野生蛇足石杉中筛选高产石杉碱甲（HA）内生真菌。方法以野生蛇足石杉中分离获得的内生真菌为研究起点,采用TLC及HPLC法测定和分析并利用形态学及rDNA-ITS序列分析对高产HA菌株进行鉴定。结果初步形态鉴定内生真菌NSG-1为1株尖镰孢（镰刀菌）属真菌,经rDNA-ITS序列分析鉴定为尖镰孢NSG-1株。该菌株发酵液产HA为11.1 mg/L,其产HA能力较以往研究菌株产量高。结论野生蛇足石杉中可获得高产HA内生真菌,其代谢产物中HA含量有待通过菌种诱变和改造来适应工业化生产。     

HPLC法测定石杉碱甲缓释片中石杉碱甲的含量

目的测定石杉碱甲亲水凝胶骨架缓释片中石杉碱甲的含量。方法采用高效液相色谱法,Kromasil C18柱,甲醇-0.02%三乙醇胺溶液（体积比60∶40）为流动相,检测波长为309 nm,流速为1.0mL·min^-1,柱温为30℃,进样量20μL。结果石杉碱甲在1.041-52.05μg·mL^-1范围内有良好的线性关系,r=0.999 6。平均回收率为99.37%,RSD=0.40%。结论本方法简便、准确、专属性强,可用于该制剂的质量控制。     

HPLC测定九龙山国家自然保护区石杉科4种植物石杉碱甲的含量

目的：采用HPLC法测定九龙山国家自然保护区石杉科4种植物中石杉碱甲的含量。方泼：以2％酒石酸溶液提取总碱,用高效液相法测定4种植物全草和不同器官石杉碱甲的含量。结果：石杉碱甲在采集的4种植物及其不同器官中均有分布,其中柳杉叶马尾杉的石杉碱甲含量很高,达到1981．27μg/g,远远大于其他植物,石杉碱甲在不同器官中含量不同,总体表现为：叶〉茎〉根。结论：九龙山自然保护区4种石杉植物石杉碱甲含量较高;植物不同器官中石杉碱甲含量存在差异。     

HPLC法测定蛇足石杉中石杉碱甲含量

目的 考察蛇足石杉不同产地、不同部位中石杉碱甲（Hup A）和总碱含量；比较不同提取方法对石杉碱甲含量的影响。方法 采用RP－HPLC法测定Hup A的含量。结果 Hup A在根、茎、叶中的含量煤戏、叶＞根；贵州、广东和安徽产地的Hup A含量分别为0.018%,0.021%,0.020%，提取方法之间差异不显著。结论 Hup A含量在蛇足石杉中的分布为地上部分大于地下部分。不同产地Hup A含量有一定差异。     

高效液相色谱法测定石杉碱甲片的含量及有关物质

目的:采用HPLC方法测定石杉碱甲及其制剂的含量.方法:采用C18(25 cm×4.6 mm)色谱柱,0.02%三乙胺的甲醇-水(50∶50)溶液为流动相,柱温40 ℃,流速1 ml/min,检测波长310 nm.结果:在1.0～51.0 μg·ml-1范围内,色谱峰面积与对照品浓度呈现有良好的线性关系,r=1.000;平均回收率为99.9%(RSD为0.6%,n=9).结论:该方法简便准确,重现性好,在本色谱条件下,石杉碱甲与其降解产物能很好的分离,可以准确测定石杉碱甲的含量,也可以用于原料及其制剂有关物质的限度检查.     

皱边石杉内生真菌资源遗传多样性的ISSR分析

目的 采用ISSR标记技术从分子水平探讨皱边石杉内生真菌资源的遗传多样性,建立皱边石杉内生真菌资源遗传分化指纹图谱,为筛选可产石杉碱甲的目标菌株提供快捷的判别依据。方法 以从皱边石杉中分离的100株内生真菌为材料,建立其ISSR优化反应体系并分析其遗传多样性;TLC、HPLC检测发酵产物。结果 优化筛选的10条ISSR引物对皱边石杉内生真菌进行遗传多样性分析,共扩增出3 975条清晰条带,多态性条带占100%。遗传相似系数为0.59～0.96,在0.64水平,皱边石杉内生真菌可分为11类;在0.67水平,第I类又可分为5个亚类。采用引物UBC868对13号菌株及皱边石杉基因组DNA扩增,在500、200 bp均具有清晰的扩增条带,发酵产物经TLC和HPLC检测,发现13号菌株与宿主植物皱边石杉同样可产生石杉碱甲。结论 皱边石杉内生真菌资源遗传多样性高,遗传距离较远,遗传基础较宽,与13号菌株同属一类的内生真菌可作为石杉碱甲生产的潜力菌株进行重点筛选和诱变。     

一种能产生紫杉醇类化合物内生真菌的分离

目的 从东北红豆杉Taxus Cuspidata Sieb et Zucc树皮中分离能产生紫杉醇类化合物的内生真菌。方法 采用无菌技术分离东北红豆杉树皮中的内生真菌,并采用高效液相色谱（HPLC）等方法对该真菌培养物进行分析。结果 从东北红豆杉树皮中分离得到一种内生真菌。化学分析证明该真菌培养物内含有紫杉醇类化合物。结论 东北红豆杉树皮中含有能产生紫杉醇类化合物的内生真菌。     

杜仲内生真菌的分离鉴定及其对异甜菊醇的生物转化研究

目的:从植物杜仲的根、茎、叶中分离内生真菌并进行初步鉴定,并研究获得的杜仲内生真菌对异甜菊醇的生物转化活性。方法:采用形态学方法对分离菌株进行鉴定,并对其进行异甜菊醇生物转化活性筛选实验。结果:从健康杜仲的根、茎、叶中分离获得52株内生真菌,属于2纲,2目,4科,10属。其中有4株内生真菌对异甜菊醇具有生物转化活性,分别为交链孢霉Alternaria sp.EL3、瘤座霉Tubercularia sp.ER3、镰孢霉Fusarium sp.EL7及青霉Penicillium sp.ES2。结论:杜仲内生真菌多样性丰富,部分内生真菌对异甜菊醇具有生物转化活性,具有很好的研究和应用价值。     

兰科药用植物的5种内生真菌产生的植物激素

目的　研究促进兰科药用植物生长发育的5种内生真菌产生的植物激素,从物质角度探讨内生真菌促进其生长发育的机制。方法　从真菌发酵液和菌丝体中分别提取植物激素,用高效液相色谱进行梯度洗脱,分析鉴定其中赤霉素(GA3),吲哚乙酸(IAA)、脱落酸(ABA)、玉米素(Z)、玉米素核苷(ZR)5种植物激素并测定其含量。结果　5种内生真菌均能不同程度地产生一种或几种上述激素。结论　以上结果为阐明内生真菌促进兰科药用植物生长发育的作用机制提供实验依据。     

人参内生真菌的分离及其体外抗真菌、抗肿瘤活性

目的:分离人参内生真菌,并探讨其代谢产物粗提物的体外抗真菌、抗肿瘤活性。方法：首次对5年生园参和15年生移山参内生真菌进行了分离,以稻瘟霉（Pyricularia oryzae P-2b）为筛选模型,采用微量稀释法筛选人参内生真菌体外抗病原真菌活性,MTT法检测其体外抗肿瘤活性。结果：从人参中共计分离得到内生真菌48株,其中16株（33.3%）能完全抑制稻瘟霉活性。16株具有活性的内生真菌中11株（22.9%,11/48）抗白念珠菌（Candida albicans）、新生隐球菌（Cryptococcus neoformans）、红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）、薰烟曲霉菌（Aspergillus fumigatus）活性较好;5株（10.4%,5/48）抗胃癌细胞（MKN45）、肠癌细胞（LOVO）、肝癌细胞（HepG2）、白血病细胞（HL-60）活性较好。其中,以园参-25（Yuan-25）抗真菌活性最佳,其抗红色毛癣菌的MIC80为4 mg/L,与阳性对照氟康唑的抗菌活性相当;园参-27（Yuan-27）抗肿瘤活性最优,其抗肿瘤细胞的IC50均与阳性对照阿霉素较接近。结论：分离得到的人参内生真菌具有潜在的抗肿瘤、抗真菌活性,值得进一步研究和开发。     

山豆根内生真菌的分离与鉴定

目的从山豆根中分离鉴定内生真菌。方法利用PDA培养基对山豆根进行内生真菌的分离,采用分子生物学手段进行鉴定,通过16S rRNA基因序列分析,比对结果。结果从山豆根中分离得到35株内生真菌,共9属13种,镰刀菌属、间座壳属、刺盘孢属和青霉属均为优势菌属。结论山豆根中含有丰富的内生真菌资源,进一步开发利用山豆根中内生真菌资源具有重要意义。     

华南毛蕨内生真菌抑菌活性筛选及活性菌株Pestalotiopsis sp.CYC38代谢产物的研究

目的 筛选具有抑菌活性的华南毛蕨内生真菌及分析其中1株活性较强的菌株的代谢产物.方法 以敏感型金黄色葡萄球菌、耐药型金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌为供试指示菌,采用琼脂块法对43株内生真菌进行抑菌活性筛选,以Pestalotiopsis sp.CYC38作为目标菌株,对其次级代谢产物进行分离,并采用波谱学分析手段鉴定化合物结构.结果 43株内生真菌中有19株菌株至少对1种指示菌有抑菌作用,占分离菌株总数的44%;从高活性菌株CYC38的发酵产物中分离到2个化合物,分别鉴定为啤酒甾醇和1-(4-羟基苯基)-2氨基乙醇.结论 华南毛蕨内生真菌具有较好的抗菌活性,且对耐药型金黄色葡萄球菌也表现出良好的抑制作用,该结果为开发新型的抗耐药菌药物提供基础.     

泰山黄精内生真菌的分离鉴定及抑菌活性研究

目的 研究泰山黄精内生真菌的分布及其多样性,并筛选具有抑菌活性的内生真菌。方法 采用平板分离法分离黄精内生真菌,采用滤纸片扩散法测试黄精内生真菌培养物抗耐药菌活性,同时采用分子生物学方法对筛选出的活性菌株进行鉴定。结果 从泰山野生黄精的根、茎、叶和果实中共分离出32株内生真菌,分属于7个属,分布最广的类群是镰刀菌属Fusarium sp.,占总菌株的31.3%,其次是不产孢真菌Sterile mycelia（28.1%）和链格孢属Alternaria sp.（21.9%）。各组织中内生真菌的分布存在一定的组织差异性,根中内生真菌的分离率最高,茎和叶中次之,果实中最少。共有来自5个属的14株内生真菌至少对1种供试菌株有抗菌活性,其中8株具有广谱抗耐药菌活性。对活性最强、抑菌谱最广的不产孢菌株HJG-10进行分子生物学鉴定,将其确定为裂褶菌Schizophyllum commune。结论 泰山黄精中蕴含着大量具有抑菌活性的内生真菌,为寻找和开发新型抑菌生物制剂开辟了一条新途径。