肠内生态营养对创伤后大鼠肠屏障功能的影响

目的:研究肠内生态营养对创伤后大鼠肠道屏障功能的影响.方法:将30只Wistar大鼠随机分为3组,即对照组、普通肠内营养组和肠内生态营养组.胃造瘘术后分别给予普通饲料、肠内营养剂和肠内生态营养剂7 d,检测小肠黏膜形态学参数和黏膜IgA ,CD3 ,CD4 和CD8 细胞数量.结果:肠内生态营养组的小肠绒毛高度(205.4 μmvs 177.7 μm,P＜0.05)、肠腺隐窝深度(99.4 μmvs 77.7 μm,P＜0.05)、黏膜厚度(299.9μm vs 267.0 μm,P＜0.05)以及绒毛表面积(10 321.5μm2 vs 8927.6 μm2,P＜0.05)均高于对照组,肠内生态营养组和普通肠内营养组比较差异无显著性(P＞0.05).肠内生态营养组大鼠小肠黏膜中IgA 细胞(21.2 vs 17.5,19.4,P＜0.05)和CD3 (24.2 vs 20.2,22.1,P＜0.05),CD4 (13.4vs 8.9,11.0,P＜0.05)、CD8 (18.7 vs 12.6,15.4,P＜0.05)细胞数均高于对照组和普通肠内营养组.结论:肠内生态营养能较好的改善创伤后大鼠的小肠机械屏障功能,促进小肠黏膜屏障功能的恢复,增强其肠道免疫功能.     

参葛方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肠道黏膜屏障损伤和紧密连接蛋白Occludin表达的影响

目的:研究参葛方对非酒精性脂肪性肝炎大鼠肠道黏膜屏障损伤和紧密连接蛋白Occludin表达的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分成正常组、模型组和中药组,采用四氯化碳联合高脂低蛋白饮食复制非酒精性脂肪性肝炎模型,中药组大鼠以参葛方灌胃。实验结束,取大鼠肝脏和小肠组织,进行肝和小肠组织学观察,并进行小肠组织黏膜蛋白Occludin免疫组织化学染色,采用病理图像分析仪检测光密度值并进行分析。结果:肝组织HE染色显示中药组大鼠肝组织脂肪变性程度明显减轻,脂滴数量减少,炎性细胞浸润减少;小肠组织HE染色显示黏膜绒毛排列较为整齐,缺失断裂较少。免疫组化染色显示中药组阳性染色面积明显增多,小肠黏膜细胞膜的顶端的线状分布比较均匀。Occludin光密度值的结果显示参葛方干预能够显著上调Occludin的表达(P0.05)。结论:参葛方具有较好的防治非酒精性脂肪性肝炎作用,可能与减轻肠道黏膜屏障损伤和上调紧密连接蛋白Occludin表达从而改善肠道屏障功能有关。     

瑞巴派特对阿司匹林损伤大鼠小肠黏膜通透性的保护作用

目的探讨瑞巴派特对阿司匹林致大鼠小肠黏膜损伤的保护作用及其可能的机制。方法将30只Wistar大鼠随机平均分为空白对照组、阿司匹林损伤组和低、中、高剂量瑞巴派特保护组。采用阿司匹林150 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,连续14 d,瑞巴派特组在每次造模前30 min给予保护。观察小肠黏膜组织病理和超微结构改变,检测黏膜髓过氧化物酶(MPO)、黏蛋白2(MUC2)水平,采用免疫组织化学方法检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin表达,检测血清D-乳酸水平。结果阿司匹林组小肠黏膜损伤,黏膜MPO、血清D-乳酸增加(P0.05),MUC2、ZO-1和Occludin表达量减少(P0.05),瑞巴派特可不同程度缓解以上改变。结论瑞巴派特对阿司匹林损伤小肠黏膜通透性具有保护作用,其机制可能包括减轻炎症、增加MUC2的分泌、保护细胞紧密连接蛋白ZO-1和Occludin。     

早期肠内谷氨酰胺补给对烫伤大鼠肠黏膜细胞紧密连接的影响

目的:了解早期肠内谷氨酰胺补给对烫伤后肠黏膜屏障功能的保护作用, 并探讨其可能的作用机制.方法:选取健康SD大鼠随机分为标准肠内营养组(EN组)和谷氨酰胺补给组(EN+Gln组), 每组32只, 制成烫伤动物模型(30% TBSA Ⅲ度烫伤), 伤后早期分别给予标准肠内营养制剂(能全力)和标准肠内营养制剂+谷氨酰胺, 于第1、4、7、10天观察血清D-乳酸, Western blot半定量分析紧密连接结构蛋白Occludin和RTPCR分析ZO-1 mRNA表达的变化.结果:烫伤后血清D-乳酸水平升高, EN组在观察时间内血清D-乳酸水平没有恢复至伤前水平, EN+Gln组在伤后4 d恢复(4.5±0.8 mg/Lvs 3.8±0.6 mg/L); Western blot半定量分析显示EN+Gln组伤后Occludin表达先下降后上升,在4、7 d时明显高于EN组(1.18±0.14 vs 0.79±0.09, 1.59±0.16 vs 1.12±0.13, 均P<0.05);烧伤后1 d时, 2组ZO-1 mRNA表达与伤前比较均明显下降(0.71±0.19, 0.76±0.17 vs 1.00, 均P<0.05), 4 d时EN+Gln组与EN组比较差异有显著的统计学意义(1.17±0.16 vs 0.76±0.15,P<0.05), 其余时间点各组间差异均无统计学意义.结论:早期肠内谷氨酰胺补给支持能快速逆转烧伤后TJ结构蛋白Occludin、ZO-1表达的下降, 从而改善肠黏膜的屏障功能.     

PAF对肠上皮细胞紧密连接的影响及ITF的保护作用

目的:探讨血小板活化因子(PAF)是否会引起肠黏膜屏障的破坏以及这种破坏机制是否与紧密连接相关,并观察肠三叶因子(ITF)的保护作用.方法:培养人结肠腺癌细胞株caco-2,分别设正常对照组:不加刺激物及干预因素;实验组:加入PAF,终浓度分别为50 ng/L、100 ng/L和200 ng/L;ITF预防组:先加入ITF0.3 g/L,30 min后加入PAF 100 ng/L;ITF治疗组:先加入PAF 100 ng/L,30 min后加入ITF0.3 g/L,24 h后进行实验.MTT比色法检测细胞活力;测定跨上皮电阻TER和荧光黄的透过量反映肠上皮细胞单层通透性:RT-PCR法检测紧密连接蛋白ZO-1和Occludin mRNA表达的变化;免疫荧光染色观察紧密连接蛋白ZO-1和Occludin的形态学.结果:PAF未影响到细胞的增殖和细胞活力.各浓度PAF作用24 h后,细胞单层通透性增加,跨上皮电阻(TER)下降,荧光黄透过增加.ITF治疗组及预防组TER下降值较模型组明显降低(122.2±14.7,100.3±10.9 vs 210.3±26.4,P＜0.05),荧光黄透过量减少(10226.1±556.2,9711.2±364.9 vs 11601.2±693.5,P＜0.05),预防组作用更明显.PAJF作用后,ZO-1和Occludin mRNA表达均有下降,以100 ng/L组改变最为明显.ITF预防组较之表达增加(1.28±0.06 vs 1.07±0.05,1.13±0.07 vs 0.81±0.06,P＜0.05),ITF治疗组改变不明显.免疫荧光染色发现ZO-1和Occludin主要分布在细胞内近胞膜处.PAF作用后,ZO-1及Occludin形态学改变,预防性给予ITF后,可明显减轻这种改变.结论:PAF可引起肠黏膜屏障破坏,其机制可能和紧密连接蛋白的破坏相关;ITF可以通过改变紧密连接蛋白的表达而部分恢复肠黏膜正常通透性,起到保护作用.     

替普瑞酮对急性胰腺炎大鼠肠黏膜屏障保护作用的实验研究

背景:肠黏膜屏障功能损害是急性胰腺炎(AP)发生、发展的关键环节,与疾病预后密切相关。目的:探讨黏膜保护剂替普瑞酮对AP大鼠模型肠黏膜屏障的保护作用及其可能机制。方法:45只成年雄性Sprague-Dawley大鼠随机分为正常对照组(n=5)、AP模型组(n=20)和替普瑞酮治疗组(n=20)。造模大鼠腹部皮下注射雨蛙素,治疗组造模前后予替普瑞酮灌胃。以ELISA法检测血清白细胞介素-1(IL-1)、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和淀粉酶水平,分别以光学显微镜和透射电子显微镜观察小肠黏膜组织病理学和超微结构变化,蛋白质印迹法检测紧密连接蛋白occludin、ZO-1表达。结果:AP模型组血清IL-1、IL-6、TNF-α和淀粉酶水平较正常对照组显著升高(P0.05),小肠黏膜绒毛坏死脱落,上皮细胞间紧密连接明显增宽,occludin、ZO-1蛋白表达下调;替普瑞酮治疗组血清促炎细胞因子和淀粉酶水平较AP模型组显著降低(P0.05),小肠绒毛仍较完整,紧密连接致密,occludin、ZO-1蛋白表达增强。结论:在AP大鼠模型中,替普瑞酮可能通过上调紧密连接蛋白表达对肠黏膜屏障发挥保护作用。     

早期百普力肠内营养支持对重症急性胰腺炎的影响

目的探讨早期百普力肠内营养支持对重症急性胰腺炎患者术后营养、免疫功能及肠黏膜屏障功能的影响.方法选取台州市中心医院2012-10/2015-10诊治的重症急性胰腺炎患者112例,采用数字随机法分为两组,对照组56例实施肠外营养支持,观察组56例实施早期百普力肠内营养支持,比较两组术后营养状况、免疫功能改变、肠黏膜屏障功能改变、胃肠功能恢复、并发症.结果营养支持后,观察组总蛋白、白蛋白、前白蛋白、转铁蛋白、CD4+、CD4+/CD8+、IgM、IgG高于对照组(P0.05).观察组降钙素原、D-乳酸、血淀粉酶、血脂肪酶、并发症发生率低于对照组(P0.05).观察组肠鸣音恢复时间、肛门排气时间、排便时间、进食时间早于对照组(P0.05).观察组住院时间少于对照组(P0.05).结论早期百普力肠内营养支持有助于改善重症急性胰腺炎患者术后营养状况,并提高免疫功能及肠黏膜屏障功能,可缩短胃肠功能恢复时间,具有较高安全性,值得临床推广使用.     

复合乳酸菌对不同营养治疗途径的重症急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响

目的:观察复合乳酸菌对早期肠内营养(EEN)和肠外营养(PN)治疗的重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肠屏障功能的影响.方法:♂ SD大鼠胰腺被膜下均匀注射38 g/L牛磺胆酸钠制作SAP模型,96只大鼠随机分为假手术早期肠内营养治疗组(Sham-EEN)、早期肠内营养治疗组(EEN)、早期肠内营养联合复合乳酸菌治疗组(EEN Lac);假手术肠外营养治疗组(Sham-PN)、肠外营养治疗组(PN)、肠外营养联合复合乳酸菌组(PN Lac),每组16只,分别于第4和7天随机取8只大鼠,预处理后取材,检测肝和肠系膜淋巴结(MLN)肠道菌群易位(BT)、血浆内毒素(ET)、肠转运指数,TUNEL法检测肠上皮细胞凋亡、BCA法测定小肠黏膜蛋白含量、ELISA法测定小肠黏液SIgA含量.结果:PN组大鼠的BT率高于EEN组和PN Lac组(14/16 vs 9/16,10/16,均P＜0.05);4 d EEN组高于EEN Lac组(12/16 vs 9/16,P=0.026).PN组血浆ET高于EEN组(276.83±30.81 EU/Lvs 138.52±22.56 EU/L,P＜0.05);不加用Lac组高于加用Lac组(均P＜0.05).PN Lac组肠转运系数高于PN组(0.70±0.08 vs 0.59±0.05,P＜0.01).PN组小肠上皮细胞AI高于EEN组和PN Lac组(22.67%±4.97% vs 15.31%±4.18%,18.40%±2.01%,P＜0.01).加用Lac组空肠黏膜蛋白含量高于不加用Lac组(均P＜0.05);EEN Lac组高于PN Lac组(56.91±3.73 mg/gvs 44.69±2.99 mg/g,P＜0.01).EEN Lac组小肠黏液SIgA含量高于EEN组和PN Lac组(82.17±6.02 μg/g vs 69.26±5.66 μg/g,59.87±5.54μg/g,P＜0.05及P＜0.01).结论:加用复合乳酸菌可改善EEN和PN治疗的SAP大鼠肠屏障功能,其中EEN Lac的作用最为显著,EEN在维护SAP大鼠肠屏障方面的作用优于PN.     

模拟微重力环境下腹腔感染大鼠肠黏膜屏障损害及抗感染疗效

目的:研究模拟失重环境对腹腔感染大鼠肠黏膜屏障的损害作用及抗感染治疗效果.方法:健康♂成年Wi s t a r大鼠60只,随机分为6组(n=10),分别为模拟失重并腹腔感染组(microgravity+abdominal-infection,M A I)、模拟失重并腹腔感染治疗组(microgravity+abdominal-infection+moxifloxacin,MAIM)、模拟失重并腹腔假手术组(microgravity+sham-operation,MSO)、正常重力腹腔感染组(normal-gravity+abdominalinfection,NGAI)、正常重力腹腔感染治疗组(normal-gravity+abdominal-infection+moxifloxacin,NGAIM)和正常重力腹腔假手术组(normal-gravity+sham-operation,NGSO).采用尾悬吊法建立模拟失重动物模型,盲肠结扎穿孔术(cecal ligation and puncture,CLP)建立腹腔感染模型.根据分组要求,尾悬吊模拟失重48 h时,建立腹腔感染动物模型.MAIM组和NGAIM组动物分别于CLP后0、24及48 h经尾静脉注射盐酸莫西沙星氯化钠注射液(30 mg/kg),其余组注射等量体积的生理盐水.CLP后60 h取材,采用放免法测定血清二胺氧化酶(diamine oxidase,DAO)、D-乳酸(D-lactate,D-LA),动态浊度法鲎试验检测门静脉血内毒素含量,免疫组织化学和Western blot法测定肠黏膜紧密连接蛋白Occludin和ZO-1表达,Realtime PCR检测肠黏膜Fas、Fasl和Bax mRNA表达水平,并光镜下观察回肠黏膜组织病理变化.结果:MAI和NGAI组大鼠回肠黏膜和黏膜下层出现明显的间质水肿和血管充血,黏膜层炎性细胞浸润,肠绒毛排列紊乱,黏膜上皮脱落,部分黏膜固有层腺体局灶性坏死.MAIM和NGAIM组大鼠回肠黏膜病变较MAI和NGAI组减轻.大鼠血清DAO活性和D-LA及门静脉内毒素含量结果显示感染组最高、治疗组下降、假手术组最低(P0.05).并且,MAI、MAIM、MSO组血清DAO活性和门静脉内毒素含量均高于相对应的正常重力组(P0.05).免疫组织化学结果显示,Occludin和ZO-1蛋白染色为为棕色颗粒,位于回肠黏膜细胞膜上和细胞质中,沿肠黏膜上皮连续分布.在MAI和NGAI组回肠黏膜表达稀少,MAIM和NGAIM组染色加深,MSO和NGSO组最深.Western blot测定结果显示,MAI和NGAI组大鼠回肠黏膜Occludin和ZO-1蛋白表达量最低,MAIM和NGAIM组表达量上升,MSO和NGSO组表达量最高,各组间差异显著(P0.05).模拟失重各组的Occludin和ZO-1蛋白表达较相对应的正常重力各组的表达明显下降(P0.05).RT-PCR检测发现,MAI和NGAI组回肠黏膜Fas、Fasl和Bax mRNA表达量最高,MAIM和NGAIM组表达量下降,MSO和NGSO组表达量最低,各组间差异显著(P0.05).除MSO和NGSO组的Fasl,模拟失重各组的Fas、Fasl和Bax mRNA表达较相对应的正常重力各组的表达明显上调(P0.05).结论:模拟失重环境导致CLP所致腹腔感染大鼠肠黏膜屏障损害进一步加剧,静脉用盐酸莫西沙星对其有确定治疗效果.     

谷氨酰胺对急性胰腺炎大鼠肠黏膜胰岛素样生长因子表达及肠黏膜屏障的影响

目的 观察急性坏死性胰腺炎（ANP）时肠黏膜屏障的损伤情况,以及谷氨酰胺（Gln）和胰岛素样生长因子（IGF）对肠黏膜屏障的保护作用.方法 成功诱导ANP模型雄性Wistar大鼠48只,随机分为ANP组和Gln组各24只,另取假手术组24只作为对照.Gln组每日以Gln灌胃2次,剂量为1.5g/（kg·d）;ANP组和假手术组以同等量的生理盐水灌胃.分别在模型制作术后3、6、24、48 h时间点杀死大鼠,取胰头和末端回肠3～5 cm放入液氮中保存.观察胰腺和肠黏膜组织形态学改变,测定肠黏膜中IGF-1的表达、血清中二氨氧化酶（DAO）活性和内毒素浓度.结果 ANP组大鼠肠黏膜屏障功能严重破坏,肠道通透性明显增加,肠黏膜损伤评分明显增加;血清内毒素浓度、DAO活性明显升高（P均＜0.01）.与ANP组比较,Gln组动物肠黏膜损伤减轻,损伤评分有所下降,血清内毒素水平、DAO活性下降（P均＜0.05）.ANP组IGF-1表达水平明显下降（P ＜0.05）;Gln组明显升高（P＜0.05）,同时肠黏膜屏障功能得到一定的改善.结论 ANP时肠黏膜屏障结构和功能存在严重破坏;Gln能一定程度上减轻肠黏膜屏障损伤并能维护其功能;IGF-1参与Gln对ANP肠黏膜屏障损伤的修复和维持.     

单核细胞趋化蛋白-1与急性胰腺炎肠屏障功能呈负相关

背景:急性胰腺炎(AP)时可发生全身性炎症反应综合征,肠屏障功能障碍是导致重症急性胰腺炎(SAP)并发多器官功能衰竭的重要因素之一。目的:检测大鼠AP模型单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)表达和肠屏障功能指标的变化,探讨MCP-1在AP肠屏障功能障碍中的作用。方法:分别以0.5%和5%牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射制备大鼠急性水肿性胰腺炎(AEP)和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型,行胰腺组织病理学评分,电子显微镜观察回肠组织超微结构,免疫组化染色、RT-PCR和蛋白质印迹法检测回肠组织中紧密连接蛋白occludin和MCP-1的表达。结果:与假手术(SO)组相比,AP模型大鼠尤其是ANP组大鼠胰腺组织病理学评分显著升高,回肠绒毛高度和柱状细胞指数降低,occludin表达下调(P0.05)。SO组和AEP组回肠组织中无MCP-1表达,ANP组MCP-1表达随时间延长而上调(P0.05)。回肠组织MCP-1表达与胰腺组织病理学评分呈正相关,与肠屏障功能指标(绒毛高度、柱状细胞指数和occludin表达)呈负相关。结论:ANP大鼠回肠组织中MCP-1表达上调,MCP-1在AP肠屏障功能障碍中发挥重要作用。     

谷氨酰胺对NAFLD大鼠肠道紧密连接蛋白表达与定位的影响

目的：探讨谷氨酰胺对非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肠黏膜上皮细胞紧密连接蛋白的调控,及其对大鼠肠黏膜屏障的保护作用。方法建立NAFLD大鼠模型。实验分为正常组、模型组和谷氨酰胺组各12只,以第8周和第12周为时间点,观察肝脏病理学改变、记录肝指数,鲎试剂终点比色法检测内毒素水平,ELISA法测定TNF-α,westernblot法检测肠道occludin蛋白量,免疫组化染色明确蛋白定位及分布。结果病理证实高脂饮食诱导NAFLD鼠模成功。在第8周模型组和谷氨酰胺组肝指数、内毒素及TNF-α含量均高于正常组（3．14±0．76,3．07±0．65比2．84±0．55;0．213±0．019,0．194±0．010比0．120±0．014;25．76±3．54,23．65±2．78比7．84±1．55）;模型组和谷氨酰胺组差异无统计学意义（P＞0．05）。第12周时,与正常组比较,模型组和谷氨酰胺组上述指标升高明显（3．75±0．56,3．47±0．73比2．75±0．91;0．279±0．033,0．203±0．012比0．114±0．021;29．73±5．34,28．77±3．61比6．84±1．87,均P＜0．05）;谷氨酰胺治疗后血清内毒素水平的下降与模型组相比,差异有统计学意义（P＜0．05）。NAFLD大鼠存在肠道occludin蛋白量减少,谷氨酰胺具有上调其表达的作用。3组中occludin蛋白定位无明显区别,但其棕褐色染色强度及范围在正常组及谷氨酰胺组更强。结论谷氨酰胺能修复NAFLD大鼠肠黏膜屏障,其机制与降低TNF-α含量、上调肠上皮细胞紧密连接蛋白occludin的表达,进而改善内毒素血症等有关。     

非酒精性脂肪肝大鼠小肠黏膜机械屏障的变化

目的 探讨在非酒精性脂肪肝(NAFLD)的进展过程中小肠黏膜机械屏障的变化.方法 雄性SD大鼠90只均分为3组,即为正常饮食组、高糖饮食组和高脂饮食组,建立NAFLD动物模型,并于4、8、12周各组分别处死10只.另取SD大鼠20只,随机均分为四氯化碳(CCl4)组和对照组,CCl4组予以CCl4建立肝损伤模型,4周时处死两组大鼠.肝脏石蜡切片HE染色观察脂肪变性程度.鲎试验终点显色法检测门静脉血中脂多糖(LPS)水平.免疫荧光法检测小肠黏膜紧密连接蛋白occludin,并对荧光强度进行评分.电镜下观察小肠黏膜紧密连接形态的变化.结果 肝脏组织病理表现提示NAFLD和肝损伤模型成功建立.高糖组LPS含量在各个时间点与正常饮食组差异均无统计学意义(P值均＞0.05).高脂组4周及12周时LPS含量与正常饮食组差异均无统计学意义(P值均＞0.05),而8周时显著高于正常饮食组(P＜0.05).CCl4组与对照组LPS含量差异无统计学意义(P＞0.05).在8周时正常饮食组、高糖组和高脂组occludin蛋白表量分别为1.80±0.42、1.50±0.53和1.30±0.67,高糖组和高脂组较正常饮食组略有减弱,差异均有统计学意义(P值均＜0.05);而12周时高糖组和高脂组较正常饮食组明显减弱(P值均＜0.05).CCl4组occludin的表达明显较对照组减弱(0.60±0.16比1.80±0.42,P＜0.05).高糖组、高脂组及CCl4组在各个时间点紧密连接形态均无明显变化.结论 NAFLD进程中紧密连接蛋白occludin的表达随肝脏脂肪变的进展逐渐减弱.因此在NAFLD的治疗中除改善胰岛素抵抗、保肝治疗外,尽早保护肠黏膜屏障可能有助于减慢肝损伤的进程.     

益生元对急性胰腺炎大鼠肠屏障功能的影响

目的 研究肠道补充益生元对急性胰腺炎肠上皮细胞紧密连接和屏障功能的影响.方法 Wistar大鼠腹腔注射左精氨酸建立AP模型,按随机数字法分组法分成对照组、AP组、益生元组.益生元组于造模前7 d开始给予益生元4 g·kg-1·d-1.建模后12 h处死大鼠,心脏取血检测血浆二胺氧化酶(DAO)活性,观察空肠病理变化、采用免疫组化方法检测紧密结合蛋白Occludin的含量.结果 AP组的血浆DAO活性为(7.29±0.68)U/L,显著高于对照组的(2.01±0.34)U/L(P＜0.01)和益生元组的(3.44±0.59)U/L(P＜0.05).AP组肠上皮occludin蛋白表达的灰度值为95.1±9.2,明显高于对照组的44.7±8.2和益生元组的59.7±7.8(P＜0.01).益生元组occludin表达也显著高于对照组(P＜0.05).结论 AP大鼠补充益生菌可增加肠上皮occludin蛋白表达,维持肠上皮紧密连接,维持正常的肠道通透性,从而达到保护肠黏膜屏障的效果.     

肠内营养对溃疡性结肠炎的临床疗效观察

目的探讨肠内营养对活动期溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的临床疗效及肠黏膜的作用。方法将符合UC标准的45例患者随机分为两组,对照组采用传统抗炎治疗,治疗组采用传统抗炎治疗和肠内营养支持治疗,观察两组患者临床疗效及内镜下肠黏膜的变化。结果治疗组临床疗效总有效率明显优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗组中、重度UC患者临床疗效优于对照组中、重度UC患者临床疗效,差异有统计学意义(P0.05);治疗组轻、中度UC患者临床疗效与对照组轻、中度UC患者临床疗效比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论肠内营养作为对活动期UC患者的辅助治疗,其疗效显著,值得临床推广。     

氯吡格雷对大鼠急性胃黏膜损伤愈合的影响及机制

目的:研究氯吡格雷对大鼠急性胃黏膜损伤愈合的影响作用及其机制.方法:40只健康♂SD大鼠随机分为4组,每组10只:阴性对照组、单纯损伤组、10mg/kg氯吡格雷处理组、30mg/kg氯吡格雷处理组;以大剂量阿司匹林灌胃制造大鼠急性胃黏膜损伤模型后,对氯吡格雷处理组的大鼠以相应剂量的氯吡格雷进行灌胃处理,给药3d,每天1次.分别测定各组大鼠的胃黏膜损伤指数(lesionindex,LI);观察大鼠胃黏膜组织学变化;免疫组织化学法检测各组紧密连接蛋白Occludin的表达情况;免疫蛋白印迹法(Westernblot)检测紧密连接蛋白Occludin、ZO-1以及MAPK信号通路中磷酸化P38、磷酸化ERK及磷酸化JNK蛋白的表达量.结果:与损伤组相比,氯吡格雷处理组大鼠胃黏膜损伤加重,且30mg/kg组损伤重于10mg/kg组(39.8±5.05vs35.3±3.86,P<0.05);在阴性对照组、单纯损伤组、10mg/kg氯吡格雷处理组、30mg/kg氯吡格雷处理组中,大鼠胃黏膜中的紧密连接蛋白Occludin、ZO-1蛋白的表达逐渐下降,呈递减趋势(P=0.000),而磷酸化P38、磷酸化ERK蛋白表达则逐渐上升,呈递增趋势(P=0.000).结论:氯吡格雷能够抑制大鼠急性胃黏膜损伤的愈合,其可能是通过激活MAPK中的p38和ERK信号通路,下调胃黏膜上皮细胞间紧密连接蛋白Occludin和ZO-1的表达,破坏大鼠胃黏膜的屏障.     

黄连解毒汤对糖耐量减低大鼠的糖尿病延缓作用

目的 观察黄连解毒汤对糖耐量减低(IGT) Zucker糖尿病肥胖(ZDF,fa/fa)大鼠糖尿病发病的延缓作用并探讨相关机制.方法 以高脂饲料诱导20只ZDF大鼠至IGT期后,将大鼠按随机数字表法分为模型组及黄连解毒汤干预组(黄连组),每组10只,并以Zucker Lean(fa/+)大鼠作为正常对照组,其中,黄连组以黄连解毒汤0.075 g/d灌胃干预,模型组及正常对照组以同体积双蒸水对照,以干预3周后,模型组全部发展至糖尿病为实验终点.行口服葡萄糖耐量试验(OGTF)观察黄连组糖尿病发病率.以酶联免疫吸附法(ELISA)测定血浆脂多糖、胰高血糖素样肽-l(GLP-1)、胰岛素及胰高血糖素(GC)水平,并以稳态模型评估-胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)评价胰岛素抵抗;以免疫组化方法观察不同组间回肠occludin、zonula occludens (ZO)-1、核因子-κB和肿瘤坏死因子(TNF)-α的表达.结果 药物干预3周后,模型组全部发展为糖尿病,而黄连组仅50％发展为糖尿病,且与模型组相比,黄连组空腹血糖水平(F=13.940,P＜0.01)显著下降.随着糖尿病病程进展,模型组大鼠空腹血浆GC(F=51.045,P＜0.01)、HOMA-IR(F=19.260,P＜O.01)、脂多糖(F=10.661,P＜0.05)、GLP-1(F=7.077,P＜0.01)水平逐渐升高,而胰岛素(F=13.445,P＜0.01)水平逐渐下降;干预3周后,与模型组相比,黄连组胰岛素(F=1.020,P＞0.05)、HOMA-IR(F=13.227,P＜0.01)、GC(F=23.440,P＜0.05)、脂多糖(F=22.636,P＜0.01)水平均有不同程度下降,GLP-1水平升高(F=4.954,P＜0.05).在回肠,与正常对照组相比,模型组核因子-κB (F=91.951,P＜0.01)和TNF-α(F=83.633,P＜0.01)的表达增加,而occludin(F=105.653,P＜0.01)及ZO-1 (F=71.753,P＜0.01)表达明显减少.黄连组上述指标均有明显改善(P均＜0.01).结论 黄连解毒汤可能通过改善GLP-1的分泌、减轻肠道炎性反应并维持肠道屏障功能,对IGT期ZDF大鼠有延缓T2DM发病的作用.     

氯吡格雷对人胃黏膜上皮细胞紧密连结蛋白ZO-1表达的影响

目的 探讨氯吡格雷（Clopidogrel）对人胃黏膜上皮细胞（GES-1）的损伤机制.方法 建立GES-1单层细胞模型,将细胞分为阴性对照组、U0126干预组、氯吡格雷干预组、U0126预处理后氯吡格雷干预组（联合组）,采用MTT比色法和流式细胞术检测各组细胞增殖、凋亡情况;免疫细胞化学检测各组p-ERK1/2的表达情况;采用Western blotting检测各细胞组p-ERK1/2和紧密连接蛋白ZO-1的表达量.结果 与阴性对照组比较,U0126干预组、氯吡格雷干预组、U0126预处理后氯吡格雷干预组的细胞增殖明显受到抑制（P＜0.05）;Western blotting结果显示：与阴性对照组比较,后3组的p-ERK1/2表达下降,与免疫细胞化学的趋势一致;ZO-1表达趋势亦与p-ERK1/2表达一致.结论 在GES-1细胞模型中,氯吡格雷可能通过抑制p-ERK1/2的表达来降低ZO-1的表达,从而损伤GES-1细胞.     

Influences of enteral nutrition combined with probiotics on gut microflora and barrier function of rats with abdominal infection

AIM: To investigate the influences of enteral, parenteral nutrition and probiotics delivered by gut on intestinal microecology, epithelial tight junctions, immune and barrier function of rats with abdominal infection. METHODS: Rat abdominal infection models established with cecal ligation and perforation method, were divided into three groups: parenteral nutrition (PN group, n = 7), PN enteral nutrition (EN group, n = 7) and PN EN probiotics (probiotics group, n = 7) via the needle jejunostomy and neck vein for five days. The total nutritional supplement of the three groups was isonitrogenic and isocaloric. Probiotics was delivered by jejunostomy 10 mL/d (1×108 cfu/mL). The rats were killed on the sixth day. The feces in the cecum were cultured for anaerobic bacterial growth and analyzed with bacterial group DNA fingerprint profile with random amplified polymorphic DNA. The transmembrane binding proteins (occludin) and IgA level in plasma cells of intestine epithelium in colon and terminal ileum were measured by an immunohistochemistry method. The ultrastructure of intestinal epithelial tight junctions in colon and small intestine was observed by electron-microscopy. Vena cava blood and the homogenated tissue of liver, lung and mesenteric lymph nodes were cultured to determine the bacterial translocations, and endotoxin in the blood from portal vein was detected. RESULTS: (1) The amount of bacteria of gut species in EN group and probiotic group was higher than that in PN group. The DIMA-profiles in EN group and probiotic group were similar to that of normal rats. The number of DNA-profiles in probiotics group was much more than that in PN group and EN group. Moreover, there were strange stripes in PN group. (2) The expression of occludin and IgA in the small and large intestine in EN group (2.309±0.336, 15.440±2.383) and probiotic group (2.938±0.515, 16.230±3.183) was improved as compared with PN group (1.207±0.587, P < 0.05, 11.189±2.108, P < 0.01). The expression of occludin in probiotic group (intestine: 2.93±0.515; cecum: 3.40±0.617) was higher than that in EN group (intestine: 2.309±0.336; cecum: 2.076±0.670; P < 0.05). The expression of IgA, especially in EN group (intestine: 15.440±2.383) and probiotic EN group (large intestine: 12.516±1.542) significantly increased as compared with PN group (intestine: 11.189±2.108; cecum: 10.160±1.643; P < 0.01). The intestinal epithelial tight junctions and microvilli of the probiotic group were more intact than those in the PN group. (3) The bacterial translocations in blood, liver, lung and mesenteric lymph nodes, and the levels of endotoxin were significantly reduced in probiotic (0.082±0.029) and EN (0.125±0.040) groups as compared with PN group (0.403±0.181, P < 0.05). CONCLUSION: Application of EN combined with probiotics could improve the expression of transmembrane binding proteins (occludin) and IgA, correct the intestinal flora disturbance, maintain gut barrier functions and tight junctions, and reduce the occurrence of gut bacterial translocation.