胎盘11β-HSD表达调节与糖皮质激素治疗

糖皮质激素（GC）可对胎儿生长发育产生复杂的效应。胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶（11β-HSD）作为糖皮质激素代谢限速酶调节母胎间经胎盘转运糖皮质激素量,其分为11β-HSD1和11β-HSD2两种亚型。11β-HSD在不同物种胎盘之间表达具有种属差异,同一物种的胎盘不同部位表达也不完全一样。胎盘部位11β-HSD表达还随孕龄发生改变。胎盘部位11β-HSD表达调节机制复杂,尚未完全明确。雌激素、孕激素、某些金属离子、缺氧和细胞因子等参与11β-HSD表达调节。产前不同物种给予糖皮质激素后,胎盘11β-HSD表达具有差异,主要表现为灵长类动物胎盘11β-HSD2表达上调,而绵羊等动物11β-HSD2表达下调。胎盘11β-HSD与糖皮质激素的关系研究,将有助于阐明11β-HSD在糖皮质激素治疗中所起的作用以及指导临床用药。     

胎盘11β-HSD表达调节与糖皮质激素治疗

糖皮质激索(GC)可对胎儿生长发育产生复杂的效应.胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)作为糖皮质激素代谢限速酶调节母胎间经胎盘转运糖皮质激素量,其分为11β-HSD1和11β-HSD2两种亚型.11β-HSD在不同物种胎盘之间表达具有种属差异,同一物种的胎盘不同部位表达也不完全一样.胎盘部位11β-HSD表达还随孕龄发生改变.胎盘部位11β-HSD表达调节机制复杂,尚未完全明确.雌激素、孕激素、某些金属离子、缺氧和细胞因子等参与11β-HSD表达调节.产前不同物种给予糖皮质激素后,胎盘11β-HSD表达具有差异,主要表现为灵长类动物胎盘11β-HSD2表达上调,而绵羊等动物11β-HSD2表达下调.胎盘11β-HSD与糖皮质激素的关系研究,将有助于阐明11β-HSD在糖皮质激素治疗中所起的作用以及指导临床用药.     

胎盘11β-HSD2在子代成年后高血压病发生中的作用

胎盘是介导母体与胎儿血氧、营养物质及代谢物传递的一个重要器官。根据DOHaD理论,胎儿宫内生长环境的变化会影响胎儿的发育,导致子代成年后罹患高血压病等风险增加。大量研究显示,胎盘11β-羟类固醇脱氢酶(11β-HSD2)能有效地将母体糖皮质激素在通往胎儿的过程中灭活,使胎儿免受糖皮质暴露。因此,胎盘11β-HSD2水平降低会引起胎儿宫内糖皮质激素过度暴露,导致子代成年后发生高血压病的风险显著增高。本文拟阐述胎盘11β-HSD2在胎盘中的结构和功能及其在子代成年后高血压病发生机制中的作用。深入了解胎盘11β-HSD2的变化与子代高血压病之间的关系对研究胎盘功能及代谢、产前诊断、胎源性成人疾病防治等具有重要意义。     

胎盘11β-羟基类固醇脱氢酶和促肾上腺皮质激素释放激素与胎儿发育和分娩发动的关系

胎盘是妊娠期间重要的内分泌器官,胎盘除合成一些经典的类固醇激素和蛋白质类激素外,还分泌下丘脑激素,如促肾上腺皮质激素释放激素(corticotropin-releasing hormone, CRH)和存在大量的糖皮质激素的代谢酶--11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-hydroxysteroid dehydrogenase,11β-HSD).近来的研究提示,胎盘分泌的CRH可能起分娩发动的生物钟作用,它决定着分娩何时发动[1,2];胎盘表达的11β-HSD调节着糖皮质激素对胎盘和胎膜的作用;胎盘的11β-HSD还是妊娠期母体和胎儿之间的糖皮质激素的屏障,防止过多的糖皮质激素导致胎儿生长受限和编码一些与疾病相关的基因[3,4].本文将近年来胎盘CRH和11β-HSD与胎儿发育和分娩发动的关系的研究进展综述如下.     

脂氧素受体激动剂5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的保护作用及可能机制

目的 探讨5(S),6(R),7-三羟基庚酸甲酯[5(S),6(R),7-trihydroxyheptanoic acid methyl ester,BML-111]对地塞米松所致小鼠胎儿生长受限的影响及可能机制. 方法 60只清洁级ICR雌性小鼠受孕后随机分为对照组、地塞米松组和BML-111组.地塞米松组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松(5 mg/kg),2h后皮下注射生理盐水(1 mg/kg) ;BML-111组孕鼠妊娠第9天开始皮下注射地塞米松,2h后腹腔注射BML-111(1 mg/kg);对照组孕鼠相应时间皮下注射生理盐水(1 mg/kg).均为每天1次,连续6d.妊娠第18天眼球取血后处死孕鼠,取胎盘和子宫组织,免疫组织化学方法检测胎盘组织11β-羟基类固醇脱氢酶2(11β-hydroxysteroid dehydrogenase 2,11β-HSD2)蛋白表达;逆转录聚合酶链反应技术检测胎盘组织11β-HSD2、白细胞介素- 1β(in terleukin-1β,IL-1β)及子宫组织脂氧素A4受体——甲酸基肽受体3(formyl peptide receptor 3,FPR3) mRNA的表达;酶联免疫吸附试验检测孕鼠血清脂氧素A4水平.组间差异比较采用单因素方差分析及两两检验.结果 地塞米松组胎鼠平均体重为(0.823±0.054)g,低于对照组[(1.103±0.218)g]及BML-111组[(0.992±0.207)g],差异均有统计学意义(t分别为-4.108和-2.890,P均＜0.05).免疫组织化学方法检测显示,11β-HSD2表达于绒毛部位合体滋养层细胞胞质内,地塞米松组11β-HSD2蛋白表达强度较对照组及BML-111组低(0.030±0.019与0.058±0.015和0.049±0.025),差异均有统计学意义(t分别为-3.107和-2.211,P均＜0.05).地塞米松组11β-HSD2 mRNA也较对照组及BML-111组低,分别为0.457±0.062、0.943±0.057和0.698±0.071,差异有统计学意义(t分别为-9.418和-4.617,P均＜0.05).地塞米松组IL-1β mRNA(0.543±0.103)介于对照组(0.710±0.085)及BML-111组(0.229±0.031)之间,差异有统计学意义(t分别为-3.736和7.025,P均＜0.05).地塞米松组FPR3 mRNA(0.323±0.019)较对照组(0.857±0.057)及BML-111组(0.499±0.050)低,差异有统计学意义(t分别为-14.630和-4.822,P均＜0.05).地塞米松组孕鼠血清脂氧素A4浓度[(64.463±22.144)pg/ml]低于对照组[(101.610±24.916)pg/ml],差异有统计学意义(t=3.152,P＜0.05). 结论 孕鼠过早过多接触地塞米松可导致胎儿生长受限.BML-111可能通过调节11β-HSD2的表达,从而改善糖皮质激素在孕鼠体内的代谢而对地塞米松所致胎儿生长受限起保护作用.     

TNF-α和IL-6对绒毛膜11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型和前列腺素合成酶Ⅱ型的调节

目的：研究肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-6(Ⅱ-6)对胎膜糖皮质激素代谢酶11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型(11β-HSD1)和前列腺素合成酶Ⅱ型(PGHS-2)的影响，以探讨细胞因子导致分娩启动的机制。方法：利用薄层层析法(TLC)和Western blot杂交法分别从酶活性、蛋白表达水平，研究Ⅱ-6、TNF-α对原代培养的人类绒毛膜细胞11β-HSD1及PGHS-2水平的影响。结果:TNF-α和IL-6对绒毛膜滋养层细胞11β-HSD1还原酶活性有促进作用，对绒毛膜细胞11β-HSD1和PGHS-2的蛋白表达均有上调作用。结论：IL-6、TNF-α对胎膜11β-HSD1及PGHS-2的诱导作用可能是其导致分娩启动的机制之一。     

人绒毛及绒毛外滋养细胞内皮一氧化氮合成酶的免疫组化定位及其在体外合体化过程中的表达

一氧化氮自由基(nitric oxide radical,NO)具有强烈的母体及胎儿胎盘血液动力学调节作用。合体滋养细胞(SC)由细胞滋养细胞(CC)合体化而形成。作者采用免疫组化法检测了早孕期绒毛内滋养细胞及足月妊娠羊膜胎盘基底板之绒毛外滋养细胞的内皮一氧化氮合成酶(e NOS)的表达,并作滋养细胞体外培养,观察CC合体化过程中的e NOS表达。 方法:收集孕8周自然宫内胚胎死亡清宫物的绒毛组织及足月妊娠分娩后的绒毛,羊膜、绒毛膜、蜕膜组织,于液氮-70℃保存备用。按Bax法提取足     

地塞米松对羊水过少胎盘和胎膜水通道蛋白8的干预效应

目的:研究水通道蛋白8(AQP8)在正常妊娠和羊水过少孕妇胎膜和胎盘中的表达,和地塞米松对羊水过少胎盘、胎膜中AQP8的干预效应。方法:选择2009年10月至2010年10月在遵义医学院附属医院产科住院的足月孕妇30例,其中羊水过少组15例,正常对照组15例。采用RT-PCR技术和免疫组织化学法检测两组在羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞和绒毛膜滋养细胞中AQP8 mRNA和蛋白的表达,及分别加入不同剂量的地塞米松(0μg/ml、1μg/ml、5μg/ml、10μg/ml、50μg/ml)孵育24小时后,检测两组产妇胎膜和胎盘组织中AQP8 mRNA的表达水平。结果:两组绒毛膜滋养细胞中AQP8 mRNA和蛋白的表达比较,差异均无统计学意义(P0.05),而羊水过少组中AQP8 mRNA和蛋白在羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞的表达低于正常对照组(P0.05)。两组羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞AQP8 mRNA的表达随着地塞米松浓度的增加有增加趋势。两组羊膜上皮细胞和胎盘合体滋养细胞在地塞米松(50μg/ml)作用24小时后,AQP8 mRNA的表达明显增加,与地塞米松0μg/ml浓度比较,差异有统计学意义(P0.05),而绒毛膜滋养细胞在不同浓度中的表达比较无差异(P0.05)。结论:羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞与羊水量有一定的关系;地塞米松对AQP8 mRNA表达水平有促进作用,地塞米松可能通过上调羊膜上皮细胞、胎盘合体滋养细胞中AQP8的表达而对羊水量的稳态产生一定的影响。     

胎盘合体滋细胞的免疫抑制活性

选用正常妊娠的新鲜胎盘，经酶化法合并机构分离法胎盘合体滋养细胞，所获得的合体滋养细胞的纯度达90－95％以上，细胞活力大于90％，经培养4小时的合体滋养细胞的上清液，对母亲与胎儿的淋巴细胞转化试验和单向混合淋巴细胞培养均有明显的抑制，提示可能通过局部抑制母体免疫反应在保护胎儿逃避排斥中起着重要的作用。     

早孕期绒毛和蜕膜的组织化学观察

111例正常早孕人工流产的胎盘组织作绒毛蜕膜组织化学观察。蜕膜细胞,富于糖元,碱性磷酸酶多呈阳性或弱阳性,酸性磷酸酶多数阴性或弱阳性,少数阳性。3β-HSD弱阳性,蜕膜腺体弯曲呈锯齿状,腺体壁呈扇形,有时细胞向内突出如鞋钉状,腔内充满分泌物,糖元强阳性,对维持早期妊娠是一个重要营养条件。早期妊娠绒毛具有完整两层滋养层,即合体滋养层及细胞滋养层,60天后则细胞滋养层逐步消失,绒毛大小不等,胎儿血管扩大并移向绒毛表面,从而使胎儿-母体胎盘屏障变薄,有利于胎儿-母体的物质交换,是适应胚胎发育的一个重要条件。早孕期绒毛组织化学检查显示绒毛两层细胞糖元和碱性磷酸酶活性都很强,反映代谢机能活跃,细胞滋养层胞浆酸性磷酸酶活性60—90天逐渐加强,这应与此时期细胞滋养层退化有关。3β-HSD 在甾体生物合成过程中起重要作用,绒毛滋养层细胞3β-HSD皆为阳性,表明具有甾体生物合成机能。着床、早孕过程中,绒毛、蜕膜是母体-胚胎直接接触和相互联系的两种组织,从计划生育角度,在发展抗着床、抗早孕药物研究工作中,对于蜕膜、绒毛形态和机能的研究应当受到重视。     

重度子痫前期孕妇脂氧素A4及11β羟基类固醇脱氢酶2的表达及意义

目的:检测重度子痫前期孕妇外周血中脂氧素A4(LXA4)水平以及胎盘组织中11β羟基类固醇脱氢酶2(11β-HSD2)表达,探讨LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期发生的机制。方法:选择在本院产前检查并分娩的妊娠妇女共45例,其中正常妊娠组20例,重度子痫前期组25例。ELISA法测定孕妇外周血血浆中LXA4水平;酶化学发光分析法检测孕妇血清中游离皮质醇浓度;免疫组织化学染色法检测胎盘组织11β-HSD2蛋白表达;实时荧光定量RT-PCR法测定胎盘组织11β-HSD2 mRNA的表达;分析LXA4与11β-HSD2蛋白或mRNA、皮质醇与平均动脉压之间的相关性。结果:重度子痫前期组与正常妊娠组相比,LXA4水平明显降低(P<0.05),皮质醇浓度虽有升高,但无显著性差异(P>0.05);胎盘组织中11β-HSD2蛋白及mRNA表达均显著低于正常妊娠组(P<0.05);两组孕妇的LXA4水平与11β-HSD2蛋白表达量、LXA4水平与11β-HSD2 mRNA表达量、皮质醇与平均动脉压均无相关性(P均>0.05)。结论:LXA4和11β-HSD2参与重度子痫前期的发生。     

补肾益气方对流产大鼠胎盘孕酮生成通路的影响

目的:探讨补肾益气方对流产大鼠胎盘孕酮生成通路中相关重要上游因素低密度脂蛋白受体(LDLR)、细胞色素P450链裂解酶(P450scc)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的影响及其与孕酮(P)分泌的关系。方法:溴隐亭皮内注射法建立流产大鼠模型,分别于孕1-8 d、1-11 d灌服补肾益气方药,黄体酮肌注作为阳性对照组,采用放免法测定大鼠血清P水平;RT-PCR技术检测LDLR、P450scc、3β-HSD在不同组动物胎盘中的mRNA表达。结果:模型组LDLR、P450scc、3β-HSD mRNA表达较正常对照组明显降低;中药组及黄体酮组不同程度提高模型大鼠胎盘LDLR、P450scc、3β-HSD mRNA表达,表达强度随孕天和给药时间逐渐升高,与血P有显著相关性。结论:补肾益气方清热益气、固肾安胎,能调控胎盘滋养细胞LDLR、P450scc、3β-HSD基因表达,促进孕激素合成分泌增加,从而达到保胎维持妊娠的目的。     

妊娠期母体/胎儿皮质醇的代谢及调节

皮质醇是妊娠期母体代谢与胎儿发育代谢不可缺少的物质.母体内与胎体内的皮质醇浓度梯度提示,胎盘是阻止母体皮质醇到达胎儿的屏障,11β-羟基类固醇脱氢酶(11β-HSD)在这个屏障中起主导作用.在妊娠不同阶段,皮质醇代谢与调节存在差异.母体的皮质醇能在妊娠中晚期通过胎盘.多种因素会影响11β-HSD的活性,进而影响皮质醇在母体与胎儿间的代谢调节.     

胎盘组织中尿皮素和促肾上腺皮质激素释放激素2β受体表达变化与先兆子痫发病的关系

目的探讨先兆子痫患者胎盘组织中尿皮素(UCN)和促肾上腺皮质激素释放激素2β受体(CRH R2β)表达与先兆子痫发病的关系。方法应用半定量RT PCR技术测定20例先兆子痫患者(先兆子痫组)和20例正常妊娠妇女(对照组)胎盘组织中UCNmRNA和CRH R2βmRNA的水平;采用免疫组化方法对UCN进行蛋白定位和半定量分析。结果(1)先兆子痫组胎盘组织中UCNmRNA的表达水平为1 14±0 26,高于对照组的0 78±0 46,两组比较,差异有统计学意义(P<0 05)。(2)先兆子痫组胎盘组织中CRH R2βmRNA的表达水平为0 89±0 33,与对照组的0 93±0 50比较,差异无统计学意义(P>0 05)。(3)免疫组化定位结果显示,两组产妇的UCN蛋白表达主要位于合体滋养细胞,少量表达于细胞滋养细胞和血管内皮细胞。蛋白半定量结果显示,UCN在先兆子痫组胎盘合体滋养细胞中的表达强度高于对照组,两组比较,差异有统计学意义(P<0 05 )。结论先兆子痫患者胎盘组织中UCN表达水平升高,而CRH R2β水平则无明显变化,因此UCN的作用加强。这可能是胎盘组织对母体和胎儿应激状态的一种继发性代偿反应,并参与先兆子痫的病理生理过程。     

RNA干扰抑制ABCG2表达对子痫前期滋养细胞分泌hCG的影响

目的:应用RNA干扰技术,使胎盘滋养细胞ATP结合匣式转运子G2(ABCG2)基因表达沉默,检测干扰前后ABCG2的表达及人绒毛膜促性腺激素β亚单位(β-hCG)水平变化,研究ABCG2的表达对子痫前期滋养细胞分泌β-hCG功能的影响。方法:通过小干扰RNA(siRNA)预测工具确定3个ABCG2基因的siRNA靶位点,合成3对互补的短发夹RNA(shRNA)序列转化质粒,选取干扰有效的质粒包装慢病毒后感染原代培养正常及子痫前期胎盘滋养细胞,应用实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)及蛋白质印迹(Western blotting)检测干扰前、后滋养细胞ABCG2 mRNA及蛋白的表达水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测干扰前、后不同分化状态细胞上清液中的β-hCG水平。结果:有效的RNA干扰后滋养细胞ABCG2 mRNA及蛋白的表达明显降低,无论干扰前、后子痫前期滋养细胞hCG分泌都高于正常,干扰后滋养细胞分泌hCG水平降低。结论:siRNA可有效干扰滋养细胞ABCG2基因的表达,ABCG2基因表达沉默后胎盘滋养细胞hCG分泌下降,推测子痫前期ABCG2表达升高可通过促进滋养细胞分泌hCG抑制子痫前期的发展。     

胎盘合体滋养细胞中硫化氢对激活素A影响的研究

目的:探讨胎盘合体滋养层细胞中硫化氢(H2S)对激活素A(Activin A)的调控作用。方法:利用改良的Klim法原代培养正常胎盘合体滋养层细胞,并给予不同浓度的H2S供体NaHS、前体L-半胱氨酸,H2S合成酶[胱硫醚-β-合成酶(CBS)和胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)]抑制剂(AOAA、PAG)和D-半胱氨酸处理细胞,同时利用RNA干扰技术,将CBS和CSE的表达干扰后,再给予L-半胱氨酸处理细胞。ELISA方法检测细胞上清中Activin A的浓度。结果:给予胎盘合体滋养细胞NaSH、L-半胱氨酸处理后,随NaSH、L-半胱氨酸浓度的增加Activin A浓度明显减少(P0.01),且这种作用被H2S合成酶抑制剂AOAA所阻断(P0.01)。转染干扰CBS表达的小干扰RNA片段-siCBS后,可逆转L-半胱氨酸对Activin A的下调作用(P0.01);而加入D-半胱氨酸后,Activin A表达变化无明显差异(P0.05)。结论:在人胎盘合体滋养细胞中,H2S可能主要在H2S合成酶之一CBS的作用下产生,并发挥对Activin A的下调作用,进而可能在预防妊娠期高血压疾病的发生中发挥作用。     

血红素氧化酶-1、2及内皮素-1在妊娠高血压综合征患者胎盘组织中的表达及作用

目的:通过观察妊娠高血压综合征(简称妊高征,PIH)患者胎盘组织血红素氧化酶-1、2(HO-1、2)及内皮素-1(ET-1)的表达,探讨PIH发病机制。方法:采用免疫组化SABC法,检测20例PIH患者及正常孕妇的胎盘绒毛组织中的HO-1、2及ET-1,利用免疫组化图象分析软件测量胎盘大绒毛、微绒毛合体滋养细胞及血管的平均吸光度。结果:妊高征组大绒毛、微绒毛合体滋养细胞及血管部位的HO-2表达显著低于正常孕妇组(P<0.001),HO-1在胎盘合体滋养细胞的表达显著低于正常孕妇组(P<0.001),而妊高征组大绒毛、微绒毛合体滋养细胞及血管部位的ET-1表达显著高于正常孕妇组(P<0.001);且H0-1、2在胎盘大绒毛、微绒毛合体滋养细胞的表达与平均动脉压呈负相关,而ET-1在胎盘大绒毛、微绒毛合体滋养细胞的表达与平均动脉压呈正相关。结论:妊高征患者胎盘组织血红素氧化酶的表达减少可能在妊高征的发生、发展过程中起着重要的作用。     

妊娠滋养细胞超微结构的研究

利用电子显微镜,对早期胎盘和足月胎盘的正常滋养细胞做超微结构研究是从五十年代开始的。六十年代以后,国外又开展了对肿瘤性滋养细胞超微结构的研究。目前,这项工作还在继续,并结合胎儿-胎盘单位功能的研究而向深入发展。据了解,国内不少单位也已经或正在对生理或病理情况下的胎盘滋养细胞进行超微结构的研究。为此,现对国外有关文献进行综述,供国内同道参考。一、正常滋养细胞的超微结构滋养细胞分为细胞滋养细胞、合体滋养细胞及介于两者之间的中间型即过渡型滋养     

妊娠高血压综合征合并胎儿宫内发育迟缓胎盘病理改变

目的 :通过对妊娠高血压综合征 (妊高征 )合并胎儿宫内发育迟缓的胎盘光镜和电镜观察 ,了解妊高征合并IUGR的胎盘病理改变 ,从而探讨妊高征引起 IU GR的原因。方法 :选取妊高征合并 IU GR患者、正常妊娠妇女胎盘各 30例 ,常规 HE染色及 PAS染色 ,观察胎盘形态学变化。另取妊高征合并 IUGR及正常胎盘各 5例 ,5 0 0 H型透射电镜观察。结果 :观察组绒毛间质纤维化及纤维素样坏死 >3%、绒毛间质白细胞浸润、合体滋养细胞结节 >30 %、绒毛血管减少瘀血、细胞滋养细胞增生 >2 0 %、滋养细胞基底膜增厚 >3%的数量均明显高于对照组 ,电镜发现合体滋养细胞超微结构改变明显 ,蜕膜螺旋动脉内皮损伤 ,管腔狭窄 ,部分动脉末端闭塞。结论 :妊高征引起 IUGR的病理改变主要有三方面 :绒毛毛细血管减少、瘀血 ;血管合体膜增厚 ;蜕膜螺旋动脉狭窄、闭塞。这也是妊高征造成 IU GR的病理学原因     

激活素A与子痫前期的研究进展

激活素A(activin A)为二聚体糖蛋白,属于转化生长因子-β(TGF-β)超家族。妊娠期间,主要来源于胎儿-胎盘单位,对胎盘滋养细胞的分化和浸润功能有明显的调节作用。近年发现,激活素A可能在子痫前期发病中起重要作用,现就其研究进展作一综述。