新生小鼠与成年小鼠心肌环状RNA差异表达分析

目的 探讨新生小鼠（乳鼠）与成年小鼠（成鼠）心肌环状RNA(circRNA)的差异表达情况并阐明其可能的调控机制。方法 选取新生24 h内的雄性C57BL/6J乳鼠和8周龄C57BL/6J雄性成鼠各3只为研究对象。应用RNA提取和转录组芯片杂交的方法检测小鼠左心室组织circRNA的差异表达情况。应用GO和KEGG富集分析获得差异circRNA宿主基因的相关调控网络。分析差异表达circRNA的宿主基因和相互作用的miRNA调控分子。结果 芯片检测获得39个差异表达的circRNA,其中在乳鼠心脏组织中上调表达38个,下调表达1个。GO富集分析显示,上调表达的circRNA主要与蛋白激酶和RNA相关蛋白的反向激活调控有关,而这些宿主基因最主要的信号转导调控通路与有丝分裂调控、流体力学调控和硫基代谢调控有关（P均<0.001）。根据芯片分析结果,获取差异表达倍数>5的circRNA共有5个,分别是上调表达的mmu-circRNA-0001016、mmu-circRNA-0000126、mmu-circRNA-0000663、mmu-circRNA-0000914和下调表达的m...     

寻找差异表达基因的新方法:mRNA差异显示

研究不同类型、不同功能状态的细胞的差异表达基因对阐明生命本质的分子基础具有重要意义，本文就新近出现的一种分离和克隆差异表达基因的方法——差异显示做一综述。     

寻找差异表达基因的新方法：mRNA差异显示

研究不同类型，不同功能状态的细胞的差异表达基因对阐明生命本质的分子基础具有重要意义，本文就新近出现的一种分离和克隆差异表达基因的方法－－差异显示做一综述。     

高压氧对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠细胞凋亡及Caspase-3 mRNA表达的影响

目的　探讨高压氧 (HBO)对缺氧缺血性脑损伤 (HIBD)新生大鼠细胞凋亡及半胱天冬酶 -3m RNA(Caspase- 3m RNA)表达的影响 ,并探讨其可能的机制。方法　健康新生 7d龄 SD大鼠随机分为正常对照组 (CON组 ,n=8) ,左颈总动脉结扎 HIBD组 (n=8)及 HIBD+HBO治疗组 (简称 HBO组 ,n=8)。用免疫组化及原位杂交方法检测各组细胞凋亡及 Caspase- 3m RNA的表达情况。结果　TU NEL 免疫组化结果显示 :CON组的左脑及 HIBD组的右脑未见或偶见阳性细胞 ,HIBD组大鼠左脑组织各个部位均可见到阳性凋亡细胞 ,经 HBO治疗者左脑阳性细胞比未治疗者减少 [(2 5 2 .96± 6 8.5 9)vs(342 .2 4± 74 .16 ) ],差异有显著性意义 (P<0 .0 5 )。Caspase- 3m RNA原位杂交检测结果显示 :CON组无或仅少量阳性细胞出现 ,HIBD组和 HBO组脑皮质、纹状体及海马均可见 Caspase- 3m RNA阳性细胞表达 ,但 HBO组信号明显减少。结论　与 CON组比较 ,HIBD组病变侧脑组织阳性凋亡细胞数增多及Caspase- 3m RNA的表达增强 ;经 HBO治疗后 ,与不经 HBO治疗的 HIBD组比较 ,病变侧脑组织阳性凋亡细胞明显减少 ,Caspase- 3m RNA的表达明显减弱 ,提示 HBO可能通过抑制 Caspase- 3m RNA的表达 ,起到减少细胞凋亡、保护神经元的作用。     

用mRNA差异显示法进行小鼠肠上皮细胞辐射损伤相关基因的克隆

目的 探讨肠型放射病分子层次发生机理,寻找肠上皮细胞辐射损伤相关基因。方法 用ｍＲＮＡ差异显示技术比较１２Ｇｙγ射线辐射损伤前后小鼠小肠上皮细胞间基因表达的异同,分离并克隆差异表达基因片段,斑点杂交验证其表达特异性,对有意义的片段进行测序和同源性分析。结果 成功地克隆到一条辐射损伤特异表达基因片段,其与大鼠粘蛋白有部分同源（ＥＭＢＬ,５７．４５６％）。结论ｍＲＮＡ差异显示技术能充分展示辐射损伤前后     

电离辐射对小鼠组织金属硫蛋白-1mRNA表达的影响

目的 探讨X射线全身照射对小鼠肝、脑、胸腺及脾脏金属硫蛋白(MT)-1 mRNA表达的影响及其剂量效应关系。方法 采用Northem杂交方法检测了X射线全身照射后小鼠肝、脑、胸腺及脾脏MT-1 mRNA水平变化。结果 4GyX射线照射后肝脏及胸腺MT-1mRNA水平逐渐升高，照射后4h达峰值，分别为假射组的1．82及1．72倍，24h基本恢复至正常水平；0．5～6Gv照射后4h，肝脏及胸腺MT-1mRNA水平均呈剂量依赖性增加，6Gy照射后MT-1mRNA水平分别为假照组的2．13和1．62倍。但X射线全身照射后小鼠脑及脾脏MT-1mRNA水平未见明显变化。结论 X射线全身照射可提高小鼠肝脏和胸腺MT-1 mRNA水平，但对小鼠脑及脾脏MT-1mRNA表达无影响.     

正常人前列腺组织PSP mRNA的表达

用ＲＴ－ＰＣＲ和ｃＤＮＡ序列测定法分析５名正常中国人前列腺组织中前列腺分泌蛋白（ＰＳＰ）ｍＲＮＡ的表达。结果表明,在这５名正常前列腺组织中均同是存在ＰＳＰ９４和ＰＳＰ５７ｃＤＮＡ,且基因序列与文献报道的从前列腺癌和增生前列腺组织中获得的完全一致。这可能对ＰＳＰ进一步的基础研究和应用有一定的意义     

烧伤早期大鼠主要脏器内皮素受体mRNA的表达与定位

烧伤早期大鼠主要脏器内皮素受体ｍＲＮＡ的表达与定位６３００３８重庆第三军医大学西南医院王旭高建川吴雄飞杨宗城黎鳌关键词灼伤；内皮素；原位杂交中国图书资料分类号Ｒ６４４内皮素（ＥＴ）是目前所知体内作用最强的缩血管因子，是血管内皮细胞参与血管舒缩功能调节...     

基于TCGA数据集分析mRNA在子宫内膜癌中差异表达及对预后影响

目的基于TCGA数据集分析mRNA在子宫内膜癌中的差异表达,建立mRNA差异表达与子宫内膜癌预后的关联。方法提取TCGA数据库中子宫内膜癌样本的mRNA表达量及临床数据资料,采用edgeR算法比较正常组织与子宫内膜癌组织的mRNA表达量,通过mRNA差异表达和临床存活时间作生存分析,寻找对子宫内膜癌预后产生影响的mRNA。结果正常组织与子宫内膜癌组织之间共发现4 429个差异表达mRNA,从中选取前1 000个差异表达mRNA进行GO富集分析、KEGG富集分析及蛋白互作网络分析,筛选出20例hub基因。通过生存分析发现,7个差异表达mRNA(ASPM、AURKA、BUB1、CDCA8、KIF2C、TOP2A、UBE2C)与子宫内膜癌患者存活时间相关(P <0. 05)。结论正常组织和子宫内膜癌组织之间的ASPM、AURKA、BUB1、CDCA8、KIF2C、TOP2A、UBE2C 7个差异表达mRNA与子宫内膜癌患者预后相关,对mRNA在子宫内膜癌领域的研究具有参考价值。     

中药复方对辐射损伤小鼠脾细胞凋亡及mRNA表达的影响

目的探讨中药复方地甘口服液(DGOL)对辐射损伤小鼠脾细胞凋亡及凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA表达的作用.方法建立辐射损伤模型(一次性7.0Gy的X射线照射),喂饲100%地甘口服液每次0.2 ml/10 g小鼠,每日2次.第10天用原位末端标记的TUNEL技术检测脾组织细胞凋亡和原位杂交法检测凋亡相关基因bcl-2和bax mRNA的表达.结果地甘口服液组与对照组比脾脏的细胞凋亡率和bax mRNA表达显著减少(P＜0.01),bcl-2 mRNA的表达显著增强(P＜0.01).结论中药复方地甘口服液可能通过促进bcl-2和降低bax mRNA的表达,促进造血细胞的增生,提高机体免疫力.     

生长抑素受体家族mRNA在肺癌中分布与表达的研究

探讨生长抑素受体５种亚型在肺癌中的分布与表达特性。方法以」α－＾３５Ｓ「ｄＡＴＰＳ标记ＳＳＴＲ５种亚型的寡核苷酸为探针,运用原位杂交技术,检测２１例不同病理类型肺癌组织中ＳＳＴＲ１－５ｍＲＮＡ的分布模式,并用Ｌｅｉｃａ图像分析仪对其表达密度作半定量分析。结果ＶＳＲＷＹＱ ＣＦ ＡＤＷ ＧＥ ＤＰ ＰＮＴＭＹＡ ＷＴ ＵＦ ＰＧ ＪＧ ＷＶＳＲ。     

胃癌组织survivin mRNA的表达及其与预后的关系

目的探讨生存素(Survivin)mRNA在胃癌组织中的表达与临床病理及其预后的关系。方法应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测41例胃癌患者与9例良性胃疾病患者手术标本中的Survivin mRNA表达并随访3年,将其表达及表达强度与临床病理特征进行相关分析。结果胃癌组织中Surviving mRNA的阳性率(70.7%)均高于癌旁正常组织(17.1%)和良性胃疾病患者组织Survivin mRNA表达的阳性率(1/9)(P<0.005)癌旁正常组织与良性胃疾病组织Survivin mRNA表达的阳性率差异无显著性(P>0.05);Survivin mRNA在胃癌组织的表达及表达强度与年龄、性别、病理分型、分期、解剖部位及淋巴结和(或)远处转移均无明显关系(P>0.05),但与预后有明显关系(P=0.001 8)。结论胃癌组织检测Survivin mRNA表达可以作为胃癌诊断的特异性分子标志物之一,且可独立作为预测肿瘤的预后。     

辐射诱发WI-38细胞遗传不稳定性中的mRNA差异显示分析

目的利用ｍＲＮＡ差异显示技术分析在遗传不稳定性产生和传递过程中,是否有一些特异的基因表达的变化,并在此基础上了解哪些基因在此过程中起关键作用。方法人胚胎成纤维细胞ＷＩ３８经γ射线０５、１０、３０、５０、７０Ｇｙ照射后８小时及３Ｇｙ照射后４、８、２４、４８、１２０小时,提取细胞ＲＮＡ,进行ｍＲＮＡＤＤＰＣＲ,并将差异表达片段进行再扩增。结果ＰＣＲ扩增产物经电泳后,有１４条表达差异的带型出现,所有差异表达片段均获得了再扩增。结论结果说明,某些特异的基因变化参与到了这一过程中,根据我们以前的实验推测,很可能是修复基因的改变。目前正在对这些未知片段进行克隆和序列分析。     

用银染mRNA差异显示筛选与肿瘤和辐射相关的基因

用银染ｍＲＮＡ差异显示筛选与肿瘤和辐射相关的基因王尧河夏贞彪＊王宏＊＊罗庆良＊毛秉智＊李春海＊＊河南医科大学郑州４５００５２＊北京放射医学研究所北京１００８５０＊＊北京基础医学研究所北京１００８５０王尧河，男，１９６５年３月生，博士，副教授差异显示技...     

mRNA差异显示技术及其在辐射研究中的应用

mRNA差异显示技术是建立在AP-PCR(锚定引物聚合酶链式反应)和RT-PCR(逆转录聚合酶链式反应)技术基础上的一种筛选别差异表达基因的有效方法。该自建立以来,一直在不断地完善少发展,已成为一项重要的分子生物学技术手段。目前,mRNA差异显示技术已在辐射研究领域得到初步应用,但还未充分发挥其巨大的潜能。应用该技术研究辐射损伤和损伤后修复的相关基因,有利于阐明辐射损伤和损伤后修复病理过程的分子机制,从而对辐射防治实践具有重要指导意义。     

转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义

目的探讨转录因子KLF4在内皮祖细胞分化过程中的表达及意义。方法以Ficoll密度梯度离心法从SD大鼠骨髓分离单个核细胞,用含20%胎牛血清的DMEM/F12培养基培养,以DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色和FITC标记的CD133、CD34进行鉴定。细胞免疫化学法检测原代培养7d内皮祖细胞KLF4的表达,RT-PCR法检测原代培养5、10、15d后细胞内KLF4及一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达。结果经DiI-ac-LDL、FITC-UEA-I双荧光染色鉴定证实获得的细胞为内皮祖细胞。细胞免疫化学检测发现KLF4表达于细胞核内;RT-PCR检测结果显示,5、10、15d大鼠内皮祖细胞的KLF4mRNA表达(分别为0.830±0.017,0.980±0.014,1.090±0.014)逐渐增强(P<0.01),eNOSmRNA表达(分别为0.310±0.008,0.500±0.011,0.650±0.010)也逐渐增强(P<0.01)。结论在内皮祖细胞分化为内皮细胞的过程中,KLF4的表达逐渐增强,并与成熟内皮功能相关。     

不同深度的Ⅱ度烧伤创面中单核巨噬细胞生长因子的mRNA表达

目的了解不同深度的Ⅱ度烧伤创面内源性生长因子的表达调控特点，以及这些特点与创面愈合过程的关系。方法分别观察大鼠浅Ⅱ度和深Ⅱ度烫伤模型创面渗液单核巨噬细胞生长因子ｍＲＮＡ表达的变化，并比较分析了两者间的差异。这些生长因子有ＴＧＦα、ＴＧＦβ和ＰＤＧＦ。结果对照组、浅Ⅱ度和深Ⅱ度组实验动物的创面单核巨噬细胞ｍＲＮＡ表达明显不同。未烫伤的对照组（单纯植海绵收集创面渗液）伤后１天均达峰值以后呈持续下降；浅Ⅱ度组伤后１周呈更高而持续的表达，伤后２周时回落接近对照组；深Ⅱ度组伤后早期呈低水平表达，于伤后１周时呈较高水平表达，其中ＴＧＦβ迟至伤后２周呈较高水平表达。结论提示创面单核巨噬细胞生长因子表达的启动，达到高峰和回落与损伤类型和创面愈合的状况密切有关，深Ⅱ度创面早期单核巨噬细胞生长因子的低水平表达与这类创面愈合时间较长的关系值得深入探讨。     

创伤后IL—2表达受抑与核转录因子NFAT变化的关系

为探讨创伤后脾细胞核转录因子（nuclear factor of activated T-cells,NFAT）的DNA结合活性变化和IL－2表达受抑间的关系,采用小鼠双后肢闭合性砸伤＋骨折模型,于创伤后12h及1、4、7、10、14天处死动物,分离脾细胞,经ConA刺激细胞后收集培养上清以测定IL－2活性;提取脾细胞RNA以测定IL－2mRNA;提取脾细胞核蛋白,用电泳迁移改变试验（electrophoretic mobility shift assay,EMSA）检测NFAT的DNA结合活性。结果显示,创伤后脾细胞NFAT的DNA结合活性逐渐下降,至伤后4天时下降最明显,仅为正常对照组的41％。这与创伤后IL－2活性和IL－2mRNA的降低相一致。结果表明,创伤后IL－2表达受抑至少部分是由于NFAT的DNA结合活性降低所致。这对于阐明创伤后IL－2受抑的机制具有重要意义。