乳鼠窦房结细胞原代培养方法的优化

目的：对乳鼠窦房结细胞原代培养方法进行改进,并观察超极化激活环核苷酸门控阳离子通道（HCN4）在心脏细胞上的表达特点. 方法：取新生SD乳鼠的窦房结组织,在传统乳鼠窦房结细胞原代培养方法的基础上进行优化改进,选用0.1％胰蛋白酶与0.1％Ⅱ型胶原酶按照1∶1制成的混合消化酶,以减少窦房结自律细胞的损伤,混合酶消化后采用差速贴壁法及5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Brdu）纯化处理.通过免疫荧光实验观察HCN4在乳鼠心脏细胞上的表达情况. 结果：（1）本方法培养的心脏细胞存活率为95.8％.（2）经差逮贴壁、5-Brdu处理,窦房结细胞所占比例明显提高.（3）培养3～5 d,视野中绝大多数为搏动的心脏细胞,成纤维细胞无明显增殖,可观察到梭形、三角形和不规则形3种细胞.其中梭形细胞所占比例最高,其细胞器不发达,糖原颗粒不丰富,肌原纤维较少,搏动频率最快,表达HCN4;三角形细胞微量表达HCN4. 结论：（1）混合消化酶结合差速贴壁及5-Brdu处理,可以显著提高细胞成活率及窦房结梭形细胞的比例,是可靠的窦房结细胞的分离纯化方法.（2）搏动频率快、细胞器不发达、糖原颗粒少、HCN4表达阳性的梭形细胞可能就是窦房结的起搏细胞.     

乳鼠窦房结细胞的原代培养与鉴定

目的 :建立一套可靠的窦房结细胞培养与鉴定技术。方法 :取Wistar乳鼠的窦房结组织 ,用差速贴壁技术及BrdU处理法进行原代细胞培养 ;对培养细胞进行形态学观察 ,用电生理技术记录细胞的动作电位。结果 :在培养的窦房结细胞中观察到有 3种不同形态的细胞 ,即梭形细胞、三角形细胞与不规则形细胞 ,其中梭形细胞最多 ,且形态结构与电生理特征符合窦房结起搏细胞的特点。三角形细胞与心房肌三角形细胞特征相似。结论 :①用差速贴壁技术及BrdU处理法进行乳鼠的窦房结细胞培养 ,是一种可靠的窦房结细胞培养技术。②培养乳鼠窦房结细胞中的梭形细胞即为窦房结的起搏细胞     

乳鼠窦房结细胞的原代培养和形态学特征

目的比较差速贴壁技术和常规培养方法在体外获取窦房结自律细胞的密度,并观察其形态学特征。旨在建立可靠的窦房结自律细胞体外取材分离、纯化培养及形态学鉴定。方法取24 h内新生Wistar乳鼠1 20只,随机分为实验组(差速贴壁技术培养方法)和对照组(常规培养方法),每组60只。每次随机各取5只乳鼠行窦房结取材,分别用2种方法进行原代细胞纯化培养。通过光、电镜观察比较2种方法体外窦房结自律细胞的密度比及形态学特征。结果体外培养窦房结细胞有3种不同形态,梭形细胞、三角形细胞和不规则形细胞,其中梭形细胞最多,搏动频率最快;三角形细胞与心房肌三角形细胞特征相似;实验组窦房结梭形细胞比例明显高于对照组[(65±4)%vs(45±3)%,P<0.01]。结论采用差速贴壁技术纯化培养方法较常规培养可更明显提高窦房结梭形细胞的比例,是一种可靠的窦房结自律细胞培养、纯化技术。在培养的乳鼠窦房结细胞中,细胞体积小、搏动频率快的梭形细胞即是窦房结的起搏细胞。     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞损伤的保护作用

目的 探讨软脉胶囊对PC12细胞损伤的保护作用。方法 采用血清药理学方法体外培养PC12细胞，研究软脉胶囊对缺氧、GLU、NO引起的PC12细胞损伤的影响。结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧、GLU、NO引起的PC12细胞形态改变，降低胞外LDH活性，增加细胞存活率。结论 软脉胶囊含药血清对PC12细胞损伤具有保护作用。     

乳鼠窦房结细胞取材与纯化培养方法的探讨

本研究旨在建立一套可靠的窦房结细胞取材分离、纯化培养技术。取Wistar乳鼠的窦房结组织进行原代细胞培养 ,随机分两组 :常规方法组与差速贴壁结合 5 溴脱氧尿核苷 (BrdU)处理组。结果 :①在培养的窦房结细胞中观察到三种不同形态的细胞 ,即梭形细胞、三角形细胞与不规则形细胞。其中梭形细胞最多 ,且形态结构与电生理特征符合窦房结起搏细胞的特点。三角形细胞与心房肌三角形细胞特征相似。②常规方法培养中窦房结梭形细胞所占比例为 45 % ,而差速贴壁技术结合BrdU处理的纯化培养中梭形细胞达 6 8%左右 (P <0 .0 1)。结论 :用差速贴壁结合BrdU处理的纯化培养可明显提高窦房结梭形细胞的比例 ,是一种可靠的窦房结细胞培养技术     

氟与砷对离体兔心窦房结细胞动作电位的影响

NaF依浓度降低离体兔窦房结细胞动作电位SP_4,增加SP_0和APA,延长SCL,但对APD_(90)无显著影响。提示NaF可能抑制I_k的衰减,对Isi的作用可能是4期时抑制、0期时促进。As_2O_3依浓度降低SP_4、SP_0和APA,延长SCL和APD_(90),并在高浓度(300μM)时兴奋潜在自律细胞或出现停搏。提示As_2O_3能较强地抑制Isi,减少G_k。对I_k的衰减可能也有一定的抑制作用。NaF加As_2O_3对动作电位的影响与As_2O_3类似,但程度上较As_2O_3小,在对SCL和APD_(90)的影响上呈拮抗作用。     

左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的HepG2细胞脂肪变性的影响

目的探讨左归降糖清肝方含药血清对脂肪酸孵育的人肝细胞株(Hep G2)细胞内甘油三酯(TG)含量的影响。方法用混合脂肪酸孵育的Hep G 2细胞建立细胞脂肪变性模型;将实验分为正常组,模型组,5%、10%、15%含药血清组,油红O染色法检测细胞内脂质沉积,同时定量检测细胞内TG含量。结果 0.5 mmol/L混合脂肪酸孵育Hep G2细胞24 h,可诱导细胞内TG大量沉积,而10%、15%左归降糖清肝方含药血清可抑制脂肪酸这一效应,使细胞内TG含量明显下降(P0.01)。结论左归降糖清肝方含药血清可改善脂肪酸诱导的Hep G2细胞脂肪变性。     

乳鼠窦房结细胞与心房肌细胞缝隙连接蛋白的表达研究

目的探讨原代培养乳鼠窦房结细胞与心房肌细胞中缝隙连接蛋白（connexin,Cx）的表达及差异。方法取培养48h的乳鼠窦房结细胞,随机分为Cx45组、Cx43组、Cx40组;取培养48 h的乳鼠心房肌细胞,随机分为Cx45组、Cx43组、Cx40为对照组,通过激光共聚焦显微镜检测荧光分布及强度变化。结果乳鼠窦房结细胞中Cx45表达明显,Cx43表达次之,而Cx40表达较弱;乳鼠心房肌细胞中Cx40表达明显,Cx45及Cx43表达较弱,乳鼠窦房结细胞Cx45免疫信号比心房肌细胞中高7.8倍（P〈0.01）,而Cx40的免疫信号则较心房肌细胞低4.0倍（P〈0.01）。结论原代培养乳鼠窦房结细胞以Cx45表达为主,而心房肌细胞主要是Cx40表达。     

生脉注射液对乳鼠心肌细胞缺氧复氧损伤的保护作用

目的探讨生脉注射液对纯化培养的乳鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的保护作用。方法采用纯化培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型,随机分为正常对照组、缺氧复氧损伤组、缺氧复氧损伤＋维拉帕米组、缺氧复氧损伤＋生脉注射液组,分别测定其乳酸脱氢酶（LDH）活性、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）及ATP水平。结果生脉注射液可明显提高LDH、SOD活性,降低MDA、提高ATP水平。结论生脉注射液具有明显的抗缺氧复氧损伤、保护心肌的作用。     

原代培养乳鼠窦房结细胞肿胀激活氯电流的研究

目的 记录并研究乳鼠窦房结细胞肿胀激活氯电流的电生理学特征.方法 取培养乳鼠窦房结细胞,在不同干预条件下用全细胞膜片钳记录肿胀激活氯电流.结果 等渗溶液中细胞背景电流较小且稳定,低渗溶液诱导激活肿胀激活氯电流,该电流呈现较明显的外向整流特点,具有容积敏感性,可被细胞外高渗溶液刺激所抑制.氯通道阻断剂tamoxifen显著抑制肿胀激活氯电流.结论 培养乳鼠窦房结细胞存在肿胀激活氯电流.     

细胞骨架结构--微丝对模拟缺血预适应乳鼠窦房结细胞活性的影响

目的观察微丝及线粒体KATP通道在窦房结细胞模拟预适应中的作用及相互关系,并探讨其相关机制.     

软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的 通过软脉胶囊含药血清对PC12细胞缺氧损伤细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响,探讨软脉胶囊治疗血管性痴呆（VD）的机制.方法 采用TUNEL法和流式细胞仪检测PC12细胞的凋亡率及Bcl-2和Bax蛋白的表达率.结果 软脉胶囊含药血清可明显对抗缺氧引起的PC12细胞的凋亡率,使Bcl-2蛋白的表达率明显增加,同时使Bax蛋白表达率明显降低.结论 软脉胶囊对VD具有治疗作用.     

丹参酮Ⅱ对乳鼠窦房结细胞快激活延迟整流钾电流的作用

目的 研究丹参酮Ⅱ对乳鼠窦房结细胞快激活延迟整流钾电流（IKr）的作用。方法 选择新生24h内Wistar大鼠乳鼠,分离、培养乳鼠窦房结细胞,运用全细胞膜片钳技术记录IKr,采用细胞外灌流的方法应用丹参酮Ⅱ,观察其对IKr电流的影响。结果 30μmol/L丹参酮Ⅱ可以使乳鼠窦房结细胞搏动频率显著加快,从（157.2±10.3）次/min增加至（268.1±12.6）次/min。30μmol/L丹参酮Ⅱ使IKr的尾电流（IKr,tail）电流密度从（54.6±4.7）pA/pF增加至（86.3±8.3）pA/pF（P＜0.01）。在1～100μmol/L范围内,此作用呈浓度依赖性特征,半数有效浓度（EC50）为（29.3±1.02）μmol/L,Hill系数为1.05。门控机制研究发现,该效应与药物增加乳鼠窦房结细胞IKr的激活和失活后恢复有关,而与通道失活关系不大。结论 丹参酮Ⅱ可以增加乳鼠窦房结细胞IKr的电流密度,从而缩短复极时间,增加搏动频率。     

清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导SMMC-7721细胞Raf-MEK-ERK信号传导的影响

目的:观察清肝化瘀方含药血清对TGFα诱导人肝癌细胞,对Raf-MEK-ERK信号传导的影响.方法:采用血清药理学方法,以病理鼠血清作对照,用Western免疫印迹方法检测清肝化瘀方含药血清对Raf、MEK、ERK蛋白表达影响,RT-PCR方法检测清肝化,瘀方含药血清对MEK 1mRNA表达影响.结果:清肝化瘀方含药血清能抑制Raf、MEK、ERK蛋白的表达,但以抑制MEK蛋白为主(P＜0.05),能抑制MEK1 mRNA的表达(P＜0.05).结论:清肝化瘀方含药血清能够抑制TGFa诱导的人肝癌细胞增生,阻断TGFa在细胞内的信号传导.     

左归丸含药血清对阿尔茨海默病细胞模型雌激素受体表达的影响

目的 左归丸含药血清对阿尔茨海默病(AD)细胞模型对雌激素受体表达的影响.方法 体外培养PC12细胞,以Aβ1～42诱导细胞产生蛋白聚集制作AD细胞模型.MTT法检测不同状态下的细胞的存活情况.Western印迹检测细胞Caspase3、ER1表达情况.结果 与模型组对比,3个干预组均可改善AD细胞模型细胞的损伤;左归...