猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞，在PEG1000作用下，与小鼠骨髓瘤细胞Sp2／0-Ag 14融合，共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体，并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个片稳定传代，冻存于液氮中．复苏后其分泌抗体的水平末见下降。     

抗人IgG-抗HRP双特异性单克隆抗体细胞株的建立与鉴定

目的 制备人ＩｇＧ检测用双特异性单克隆抗体诊断试制。方法 用人ＩｇＧ免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠脾细胞与抗ＨＲＰＭｃＡｂ杂交瘤细胞ＨＡＴ敏感株进行第２次融合。结果 获得５株能稳定分泌抗人Ｉｇ－抗ＨＲＰ的双特异性单克隆抗体的杂交－杂交瘤细胞,分泌的抗体亚类其中１株为ＩｇＧ２ａ／ＩｇＧ１,余为ＩｇＧ１／ＩｇＧ１。培养上清与腹水效价分别为２＾７、１０＾０４以上,经ＨＲＰ亲和层析有２个蛋白吸ＢｓＭｃＡｂ存在于第２     

猪鼻支原体单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

作者用提纯的猪鼻支原体抗原免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞,在PEG1000作用下,与小鼠骨髓瘤细胞Sp2/0-Ag14融合,共获得5株稳定分泌抗猪鼻支原体单克隆抗体的杂交瘤细胞株。制备了小鼠腹水抗体,并对杂交瘤细胞株行进了鉴定。上述细胞株经3～6个月稳定传代,冻存于液氮中,复苏后其分泌抗体的水平未见下降。     

抗鸡免疫球蛋白(IgM、IgG)单克隆抗体的制备与鉴定

本文报道将SRBC免疫鸡的血清经33％硫酸铵沉淀,再经Sephadex G-200凝胶柱两次层析,收集第Ⅰ,Ⅱ蛋白峰作为免疫原免疫BALB/c小鼠。建立了2株(3A7、1C4)分泌抗鸡IgG和4株(6AS、5E2、6C7、6B1)抗鸡IgM特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系;琼脂扩散试验表明6株细胞系分泌的单克隆抗体均为IgG1亚类。所制腹水的ELISA滴度达10~5～10~6。用免疫印迹技术(IB,Immunobllotting)对其中2株(3A7和6A5)的特异性作了进一步鉴定。     

抗单链DNA单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及鉴定

凋亡细胞内由于组蛋白 ＤＮＡ的稳定性受到破坏或染色质受到修饰 ,使得凋亡细胞的ＤＮＡ对热变性敏感。在适宜条件下 ,凋亡细胞的ＤＮＡ能被热变性为具有足够长度、形成一定构像的单链ＤＮＡ(ｓｉｎｇｌｅ ｓｔｒａｎｄｅｄＤＮＡ ,ｓｓＤＮＡ) ,从而被ｓｓＤＮＡ特异的单克隆抗体 (ｍＡｂ)染色 ;而非凋亡细胞的ＤＮＡ则不被热变性 ,或变性的ＤＮＡ部分不足以形成与抗ｓｓＤＮＡｍＡｂ结合的单链构象决定簇。因此 ,用抗ｓｓＤ ＮＡｍＡｂ能敏感、特异地检测到凋亡细胞[1 ,2 ] 。目前 ,国外此项研究已取得较大成果 ,并有产品的试剂盒销售 ,…     

两种分泌抗PrP单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其初步鉴定

目的 制备具有广谱种属反应性的PrP单克隆抗体(McAb)，用于可传播性海绵样脑病(TSE)的诊断及致病机制研究。方法 分别将对应于牛PrP29-48(BoP1)、PrP89-108(BoP2)的两种多肽与匙孔碱血蓝蛋白(KLH)偶联，免疫BALB／c小鼠，经细胞融合后获得分泌针对上述两种多肽的杂交瘤细胞株，用Western-blot方法检测这些细胞株分泌的McAb与牛(Bo)、人(Hu)和仓鼠(Ha)PrP蛋白的反应性。结果 通过细胞融合和2-3轮克隆化，用ELISA筛选出分泌抗BoPl和BoP2抗体的杂交瘤细胞株D11和D8。Western blot显示，获得的McAb均能分别与重组BoPrP(25-242)、重组HuPrP(23-231)和HaPrP(23-231)反应。结论 获得了可与牛、人和仓鼠PrP反应的两种McAb，可用于哺乳类PrP检测及TSE致病机制研究。     

抗碱性磷酸酶单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及其APAAP的制备与初步鉴定

本文报道用碱性磷酸酶Sigma Ⅰ型粗酶免疫Balb/c小鼠,采用酶联免疫吸附反应筛选细胞融合后杂交瘤培养上清,最后获7株稳定分泌抗碱性磷酸酶单抗的杂交瘤细胞株,对其中6株进行了特性鉴定。取其中1株AAP1/323腹水制成APAAP试剂盒,应用于ELISA和免疫组化染色表明:该试剂盒灵敏度高,本底低,无内源性酶干扰现象,对比好,背景清晰,结果容易判断,能满足临床检测的要求。     

抗人IgG单克隆抗体的研究——Ⅰ.分泌抗人IgG单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

本文报道用人IgG免疫BALB/c 小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞系SP2/O融合,获得 3株分泌抗人 IgG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,命名为 SIBPH1、SIBPH2和 SIBPH3。现重点报道SIBPH1株。用琼脂双扩散和免疫电泳等方法,证实该株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体,对IgG具有良好的专一性,注入同系小鼠腹腔可诱生含较高效价抗IgG的腹水(双扩散1:256～512),单克隆抗体属小鼠IgG_1亚类,该杂交瘤细胞株经组织培养传代逾半年,冻存12个月,复苏良好,分泌抗IgG性能稳定。本文还对杂交瘤细胞建株的若干问题进行了讨论。     

持久稳定分泌抗人甲状腺球蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株的建立

杂交瘤技术创立以来,在生物、医学各领域已广泛应用,各地陆续报导建立了分泌抗白细胞抗原、肿瘤抗原和微生物抗原的单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株。但在内分泌免疫病方面,有关报导还不多。内分泌免疫病是免疫介导性疾病中尤为复杂的一组疾病,单克隆抗体技术为诊断和深入细致研究其发病机制提供了有力工具。我们选择了     

杂交瘤细胞系产生单克隆抗体稳定性研究

大文对10株乙肝表面抗原(HBsAg)的McAbs细胞系在BALB/c小鼠体内连续传代和体外连续传代产生HBsAg单克隆抗体(McA-HBs)的稳定性进行了研究。表明10株杂交瘤细胞在体外连续传代12周各株细胞分泌McAb的稳定性是有明显差别的,而在BALB/c小鼠体内连续传3代其产生McA-HBs的能力均较稳定。 Sr-6和Sr-19在37℃和33℃两种不同培养温度下,以及在液氮中长期冻存复苏后对杂交瘤细胞产生McA-HBs的能力也无明显影响。     

抗人胎盘层粘连蛋白P1单克隆抗体的制备与初步应用

在纯化人胎盘层粘连蛋白Ｐ１段（简称Ｐ１）的基础上，应用杂交瘤技术获得两株抗Ｐ１的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）３Ａ１５和１Ｂ５。两株ＭｃＡｂ均属ＩｇＧ１，同人纤维连接蛋白和Ⅳ型胶原无交叉反应。纯化的腹水ＭｃＡｂ效价分别为６．４×１０－７（３Ａ１５）和２×１０－８（１Ｂ５），分别识别Ｐ１分子上的不同表位。利用ＭｃＡｈ３Ａ１５和１Ｂ５建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ，用于检测Ｐ１的下限为１０ｎｇ／ｍｌ，标准曲线在１０～５００ｎｇ／ｍｌ之间呈直线关系。对１００例健康献血员、１８例慢性肝炎患者和１２例肝硬化患者血清Ｐ１的检查结果分别为３３．８±１１．６、６７．３±３１．７和１０７．５±５８．４ｎｇ／ｍｌ。     

地高辛单克隆抗体的研究 Ⅰ、分泌地高辛特异性单克隆抗体杂交瘤细胞系的建立及抗体特性分析

地高辛(Digoxin)是目前应用最广泛韵强心甙类药物,在心血管疾病临床治疗中占有十分重要的地位。强心甙治疗的安全范围较小,一般治疗量已接近中毒量的60%,并且有较大的个体差异,使得临床应用时中     

小鼠抗兔IgG单克隆抗体的制备与应用

制备小鼠抗兔IgG的mAb,经标记HRP和FITC后,应用于ELISA、Western blot、免疫组织化学染色试验以及FCM.以正常兔IgG为抗原,免疫BALB/c小鼠,通过常规B淋巴细胞融合技术,获得两株分泌抗兔IgG mAb的杂交瘤细胞株,间接ELISA腹水效价均达1 ×10-7,且亚类均为IgG1(κ).抗体经鉴定、纯化后,以改良的过碘酸钠法标记HRP,本室常规方法标记FITC.FITC标记的2A1 mAb的F/P值为4.1,2F11的F/P值为2.7.HRP标记抗体的效价和工作浓度分别:2A1为1:25600和1:3200,2F11为1:102400和1:25600.在相同工作浓度条件下,ELISA、Western blot的实验结果,HRP标记的2F11 mAb明显优于商品化抗兔pAb,而且,2A1和2F11mAb经标记后还可用于免疫组化和FCM,显示出很好的应用前景.     

分泌高效价抗催产素单抗杂交瘤细胞系的建立

为进一步研究催产素分子的生理功能及空间结构 ,制备识别其特有表位的单抗。用改良的碳二亚胺二步法交联催产素和牛甲状腺球蛋白 ,用常规方法制备针对催产素分子的单抗 ,测定了抗体的亚类、亚型和相对亲和力 ,并采用竞争ELISA法 ,检测各株细胞分泌的单抗和几种催产素的拟似物的交叉反应程度。结果制备出了 3株分泌高效价抗体的杂交瘤细胞 4G11、 2B11和 3F1,其亚类均为IgG1,亚型均为κ型 ,相对亲和力均较高。 3株中 4G11和 2B11可以特异性地和催产素反应 ,而 3F1与AVP、VAS及ASU有较强的交叉反应。催产素单抗可用于阻断催产素的生物学功能等研究     

分泌抗人角蛋白单抗杂交瘤细胞株的建立及其抗体的初步鉴定

角蛋白(Keratin)作为一组分子量为40,000～70,000的不溶于水的细胞结构蛋白,广泛存在于哺乳类动物的上皮细胞内。而各种非上皮细胞中该蛋白成份缺如,因而角蛋白被认为是上皮来源细胞的一种标志物,引起了细胞生物学及病理学工作者的兴趣,尤其在肿瘤病理诊断方面,如通过角蛋白特异性抗体对肿瘤细胞进行角蛋白的     

分泌抗金黄色葡萄球菌C1型肠毒素杂交瘤细胞系的建立及初步应用

应用常规方法建立了３株稳定分泌抗金黄色葡萄球菌Ｃ１型肠毒素（ＳＥＣ１）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）的小鼠杂交瘤细胞系Ｂ３、Ｃ４和Ｇ８。其中Ｂ３和Ｃ４均为ＩｇＧ１（ｋ），Ｇ８为ＩｇＧ２ａ（ｋ）。Ｂ３和Ｇ８与ＳＥＡ、ＳＥＢ及ＳＥＤ均无交叉反应；Ｃ４虽与ＳＥＡ和ＳＥＤ无交叉反应，但与ＳＥＢ有交叉反应。间接ＥＬＩＳＡ测定小鼠腹水效价为１０－５～１０－８。应用识别不同表位的ＭｃＡｂ建立了双ＭｃＡｂ夹心ＥＬＩＳＡ法检测ＳＥＣ１，敏感性可达１ｎｇ／ｍｌ。     

抗人IgM单克隆抗体在免疫单扩散中的应用

本文应用杂交瘤技术筛选出一株抗人(IgM)单克隆抗体(McAb)Z172A4。在免疫单扩散试验中可形成乳白色沉淀环。对46份未经稀释的人血清样品检测结果证明抗人IgM McAb与多克隆抗体(PcAbs)测得的总IgM值基本一致,两者相关性好(r=0.9205P<0.001)。证明Z172A4McAb完全可以代替PcAbs在免疫单扩散试验中应用。     

抗人结肠癌杂交瘤细胞系的建立及单克隆抗体特性研究

本研究利用手术中取得的新鲜结肠癌组织免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制得５株能持续、稳定分泌抗体的杂交瘤细胞系。其中ＨＣ６株杂交瘤细胞经过１８０ｄ连续培养，单克隆抗体ＭＣ６分泌稳定、选择性强、效价高。免疫组化检测发现，ＭＣ６相应抗原在结肠癌组织及结肠癌细胞系呈高度表达（９０～１００％），显著高于其它癌组织、癌旁组织、正常粘膜及癌细胞系（０～４４．４％）；中度以上染色者占阳性总数的８０％以上；主要分布于细胞膜上。除癌细胞膜和胞浆呈阳性反应外，腺腔内粘液亦可见不同程度的着色，表明ＭＣ６相应抗原是一种在结肠癌细胞膜上占优势的抗原，并可脱落至腺腔。此单克隆抗体的成功研制为发现新的结肠癌生化标志，结肠癌的早期诊断及术后病情的监测提供了可能性。