转化生长因子β1诱导的系膜细胞纤维蛋白溶酶系统变化及其机制

目的研究转化生长因子(TGF)-β1对大鼠系膜细胞纤维蛋白溶酶(纤溶酶)系统的影响,并探讨反应性氧基(ROS)的作用。方法以体外培养的大鼠系膜细胞为对象,采用TGF-β1刺激12h,部分实验中培养的细胞在刺激前应用DL-buthionine-(S,R)-sulfoximine(BSO)预处理24h,或应用抗氧化剂N-acetylcysteine(NAC)预处理1h。应用荧光素法测定细胞ROS含量。系膜细胞tPA、uPA和PAI-1mRNA的表达采用RT-PCR测定。PAI-1蛋白表达应用ELISA检测。应用合成的荧光素酶底物及荧光扫描法分别测定纤溶酶、uPA、tPA活性。结果TGF-β1可显著增加细胞ROS含量。2ng/mlTGF-β1可显著上调PAI-1mRNA和蛋白的表达,分别为1.9倍(P<0.01)和1.5倍(P<0.05)。tPAmRNA的表达不受影响但uPAmRNA的表达较对照组下调52%(P<0.01)。TGF-β1可抑制纤溶酶和uPA活性,分别为30%(P<0.01)和23%(P<0.05),但对tPA的活性无显著影响。在BSO预处理组,TGF-β1对uPA、PAI-1mRNA表达和蛋白释放的影响得到显著增强;而NAC预处理可明显逆转由TGF-β1诱导的uPA、PAI-1mRNA表达的上调和蛋白表达增加以及活性的改变。结论TGF-β1可促使细胞ROS产生增加。ROS介导了由TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1mRNA和蛋白表达的上调以及uPAmRNA表达的下调和uPA、纤溶酶活性的下降。TGF-β1对系膜细     

多囊卵巢综合征患者血纤溶能力的研究

目的了解多囊卵巢综合征(PCOS)患者的血纤溶能力及服用二甲双胍后血纤溶能力的变化。方法(1)对照组20例、PCOS患者30例,分别取血检测组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)的活性;(2)PCOS高胰岛素血症者10例,分别给予二甲双胍750~1 500 mg/d治疗,比较治疗前、后t-PA、PAI-1活性。结果PCOS组的血胰岛素(INS)、游离睾酮(F-T)t、-PA、PAI-1分别为(24.42±12.30)mU/L(、2.70±1.50)ng/L、(0.17±0.06)KU/L(、0.88±0.05)AU/ml,对照组分别为(10.04±6.12)mU/L(、1.70±1.00)ng/L(、0.28±0.04)KU/L、(0.70±0.09)AU/ml。10例PCOS患者经二甲双胍治疗后INS、F-Tt、-PA、PAI-1分别为(12.20±7.78)mU/L、(1.70±1.00)ng/L、(0.26±0.08)KU/L、(0.70±0.35)AU/ml。结论PCOS患者的血纤溶能力低于正常者,而服用二甲双胍后血纤溶能力明显改善。     

马兜铃酸对人脐静脉内皮细胞的作用

目的探讨马兜铃酸对人脐静脉内皮细胞（HUVEC）的作用。方法用马兜铃酸钠盐（AA-Na）干预体外培养原代HUVEC。用四唑盐比色法及乳酸脱氢酶释放法分别检测细胞增殖反应及细胞毒性作用。RT-PCR及酶联免疫吸附法分别检测转化生长因子β1 （TGF-β1）、纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）及血小板反应蛋白1（TSP-1）的mRNA表达及上清液含量。结果10、20、40及80 mg/L浓度的AA-Na能显著抑制HUVEC增殖及有明显细胞毒效应（P〈0.01）。与对照组相比,5 mg/L的AA-Na显著上调了HUVEC的TGF-β1、PAI-1及TSP-1 mRNA和蛋白表达（P〈0.05）。结论AA-Na可上调HUVEC的TGF-β1、PAI-1及TSP-1表达,此作用可能在慢性马兜铃酸肾病小动脉管壁病变的发病中起一定作用。     

转化生长因子β1对系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1表达的影响

目的观察转化生长因子(TGF)β1对肾小球系膜细胞(GMC)纤溶酶原激活物抑制物(PAI)-1表达的影响,并探讨反应性氧基(ROS)在TGF-β1诱导的PAI-1表达中的作用。方法体外培养大鼠GMC,分别用TGF-β1(2ng/ml)和葡萄糖氧化酶(GO)(10mU/ml)刺激,并用BSO和抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)进行干预处理。采用Western印迹检测PAI-1蛋白表达;RT-PCR和Northern杂交检测PAI-1mRNA表达;合成的荧光素纤溶酶底物测定纤溶酶活性。结果外源性TGF-β1和GO可显著上调大鼠系膜细胞PAI-1蛋白和mRNA的表达并降低纤溶酶活性。BSO可显著增强TGF-β1和GO诱导的系膜细胞PAI-1mRNA的表达;而NAC可显著地逆转由TGF-β1和GO诱导的PAI-1mRNA表达的上调作用。结论TGF-β1可显著上调系膜细胞PAI-1的表达并抑制纤溶酶活性。ROS在TGF-β1诱导的系膜细胞PAI-1表达上调的信号传递途径中可能起了信号传递分子的作用。     

人精子tPA和PAI-1的测定及精子上tPA的定位研究

目的 :人精子上组织型纤溶酶原原激活因子 (tPA)的分布及精子中tPA、纤溶酶激活物抑制因子 (PAI 1)活性研究。　方法 :应用底物显色法测定 6 1例人精子中tPA及其PAI 1的活性 ,其中正常对照组 2 0例 (已婚生育男子 ,经 2次精液分析正常者 ) ,少弱畸精症组 41例 ;用免疫组化法进行精子表面膜上tPA定位分析。　结果 :正常对照组精子中tPA和PAI 1的活性分别为 (0 2 4± 0 0 4)IU/ 10 6精子和 (0 2 3± 0 0 3)AU/ 10 6精子 ,少弱畸精症组的tPA和PAI 1活性分别为 (0 12± 0 0 3)IU/ 10 6精子和 (0 35± 0 0 9)AU/ 10 6精子 ,经分析二者之间有极显著差异 (P <0 0 1) ;tPA主要分布在精子的顶体膜、赤道板、颈部和尾部。　结论 :正常健康人精子中的tPA和PAI 1活性有别于弱精症者 ,提示精子上的tPA和PAI 1活性可能与精子活力、精子形态以及精子数有关 ;精子的顶体膜、赤道板、颈部及尾部存在着tPA ,推测其与精子运行、获能等有关。     

活性氧和转化生长因子β1在醛固酮上调纤溶酶原激活物抑制剂1中的作用

目的 探讨活性氧(ROS)、转化生长因子β1 (TGF-β1)在醛固酮促进系膜细胞生成纤溶酶原激活物抑制剂1(PAI-1)途径中的作用。 方法 用醛固酮刺激大鼠肾脏系膜细胞。采用激光共聚焦检测系膜细胞内ROS水平。以貂肺上皮细胞(Mvllu)生长抑制MTT法检测上清中TGF-β1活性。然后用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)与抗TGF-β1中和抗体阻断醛固酮刺激肾脏系膜细胞所产生ROS和TGF-β1。用RT-PCR观察系膜细胞PAI-1 mRNA的变化。用Western印迹法测定系膜细胞培养上清液中的PAI-1。 结果 醛固酮刺激大鼠肾脏系膜细胞24 h后，细胞内ROS水平上升到对照组的5倍(P < 0.01)；细胞上清中活性TGF-β1浓度明显升高(P < 0.01)；PAI-1 mRNA与蛋白表达分别上升到对照组的1.8倍(P < 0.01)和1.7倍(P < 0.01)。而采用NAC抑制ROS水平的升高、采用抗TGF-β1中和抗体阻断TGF-β1的作用后，PAI-1 mRNA表达分别下降了32%和30%(P < 0.01)；PAI-1蛋白表达分别下降了21%与11%(P < 0.05)，但仍未下降到正常水平。 结论 ROS、TGF-β1在醛固酮上调系膜细胞的PAI-1表达方面起了重要作用，但醛固酮并非完全依赖ROS、TGF-β1促使PAI-1的表达上调。     

携tPA和VEGF165基因共表达质粒生物学功能研究

目的　观察组织纤溶酶原激活物(tPA)和血管内皮生长因子16 5 (VEGF16 5 )基因在血管内皮细胞(VEC)中的表达产物对VEC增殖和纤溶的影响。方法　将含有tPA和VEGF16 5的共表达质粒pBudCE4 1/tPA VEGF16 5导入VEC中,RT PCR法和Westernblot法分别从mRNA水平和蛋白质水平检测被转染VEC中的tPA和VEGF16 5表达;纤溶蛋白板法检测转基因VEC培养液的纤溶活性;用3 H胸腺嘧啶核苷掺入法( 3 H TdR)和流式细胞技术观察转基因VEC培养液对VEC和VSMC增殖的影响。结果　pBudCE4 1/tPA VEGF16 5转染VEC后,tPA和VEGF16 5分别在mRNA和蛋白质水平均有表达;转基因培养液有纤溶活性,并对VEC增殖有显著作用,而对VSMC增殖无作用。结论　pBudCE4 1/tPA VEGF16 5能在VEC表达出有生物学活性的tPA和VEGF16 5。     

肾病综合征患者血浆中t-PA/PAI-1的变化及糖皮质激素治疗的影响

目的:探讨肾病综合征患者糖皮质激素治疗前后不同阶段组织型纤溶酶原激活物(t-PA)与纤溶酶原激活物抑制物-1(PA1-1)的变化.方法:分为健康对照组、肾病综合征组,采用酶联免疫吸附(ELISA)方法检测血浆中t-PA和PAI-1水平的变化.结果:t-PA的血浆水平在各组之间无统计学差异(P>0.05);PAI-1的水平在肾病综合征组较正常明显升高(P<0.05),激素治疗1周后进一步升高(P<0.05),治疗4周后比1周组有显著下降(P<0.05),但较正常仍高(P<0.05).结论:t-PA/PAI-1平衡的紊乱,可能参与了肾病综合征的损伤机制,经糖皮质激素治疗后高凝状态短期内无明显改善.     

切应力对高糖培养大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物及其抑制物表达的影响及其意义

目的：观察切应力对高糖培养的肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物（tPA）和其抑制物（PAI-1）mRNA表达及对细胞骨架肌动蛋白表达的影响,探讨糖尿病肾病（DN）早期高滤过致肾近端小管切应力作用增加对小管间质细胞外基质（ECM）重塑的作用。方法：将细胞分为：正常对照组、甘露醇组、高糖组,以5dyn/cm^2、10dyn/cm^2的切应力作用于各组细胞,分别作用1h,3h,6h。RT-PCR法检测tPA及PAI-1mRNA的表达,免疫荧光标记检测细胞骨架肌动蛋白的表达。结果：正常对照组和甘露醇组tPA/PAI-1mRNA及细胞骨架肌动蛋白均有表达,高糖组tPA和细胞骨架肌动蛋白表达明显减弱,PAI-1表达明显增加;切应力呈大小和时间依赖性地下调tPAmRNA及细胞骨架肌动蛋白的表达,上调PAI-1mR-NA表达。结论：在DN早期,除高糖因素外,高滤过引起的切应力增加可诱导肾近端小管上皮细胞tPA/PAI-1mRNA表达失衡,可能是通过调节细胞骨架肌动蛋白的表达来实现的,导致ECM的降解减少,参与ECM的重塑。     

利拉鲁肽对肿瘤坏死因子α刺激下大鼠肾小球系膜细胞纤溶酶原激活物抑制物1和胞间黏附分子1表达的影响

目的 探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)对大鼠肾小球系膜细胞(RGMC)中纤溶酶原激活物抑制物1 (PAI-1)和胞间黏附分子1(ICAM-1)表达的影响以及利拉鲁肽(Liraglutide,Li)的干预作用.方法 将培养的RGMC株分为6组,分别为正常对照组、TNF-α组、Li低浓度( 10 nmol/L)组、中浓度(100 nmol/L)组、高浓度(1000 nmol/L)组,以及吡咯烷二硫代氨基甲酸盐( PDTC)组.用ELISA法测定各组RGMC的PAI-1以及ICAM-1蛋白表达.用RT-PCR法测定各组RGMC的PAI-1以及ICAM-1基因表达. 结果 TNF-α可上调RGMC中PAI-1、ICAM-1蛋白及基因表达(均P＜0.05),利拉鲁肽可抑制TNF-α诱导的RGMC中PAI-1、1CAM-1蛋白及基因的高表达(均P＜ 0.05).与TNF-α组比较,PDTC组PAI-1、ICAM-1表达量显著减少(均P＜ 0.05).结论 利拉鲁肽可减轻体外培养RGMC中TNF-α诱导的PAI-1和ICAM-1表达.     

ERK1/2信号通路在甲状旁腺激素致人近曲小管上皮细胞分泌纤溶酶原激活物抑制剂1中的作用

目的 从体外观察ERK信号通路在甲状旁腺激素（PTH）致人近曲小管上皮细胞（HK-2）合成纤溶酶原激活物抑制物1（PAI-1）中的作用。 方法 以HK-2细胞株为研究对象,用不同浓度PTH（10-8、10-9、10-10、10-11、10-12 mol/L）作用细胞48 h,以及10-10 mol/L PTH作用细胞不同时间（12、24、36、48、72 h）,分别用RT-PCR法检测PAI-1 mRNA表达,Western印迹法检测PAI-1蛋白表达。以10-10 mol/L PTH作用细胞48 h,分别观察细胞ERK1/2抑制剂预处理前后磷酸化（p）ERK1/2、PAI-1mRNA及蛋白的变化情况。 结果 10-12 mol/L PTH可促进细胞在基因及蛋白水平合成PAI-1,随着PTH浓度逐渐上升,PAI-1mRNA及蛋白浓度均相应增加,以10-10 mol/L PTH组刺激作用最显著,分别为对照组的4.01倍和3.81倍（均P < 0.01）。但随着PTH浓度进一步增加,PAI-1mRNA及蛋白浓度却随之下降。10-10 mol/L PTH作用细胞,12 h时有少量PAI-1表达,72 h时达峰值,并呈时间依赖性,分别为0 h组的4.06倍和4.03倍（均P < 0.01）。10-10 mol/L PTH作用细胞48 h,有大量的p-ERK1/2合成（P < 0.01）,经ERK1/2抑制剂预处理后,PAI-1及ERK均显著下降（均P < 0.01）,但仍高于对照组（均P < 0.05）。 结论 ERK信号通路部分参与PTH致HK-2细胞合成PAI-1的作用。     

睾酮诱导人脐带静脉内皮细胞ERK1/2磷酸化的研究

目的:观察生理浓度睾酮(3×10-8mol/L)对人脐带静脉内皮细胞(HUVEC)细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化水平的影响。方法:将体外培养的HUVEC分为5个时间段睾酮组(睾酮作用后0、5、15、30、60min)和雄激素受体拮抗剂氟他胺预处理组,Western印迹测定睾酮作用于HUVEC后ERK1/2的活化程度。结果:睾酮可激活HUVEC ERK1/2,30min后达到高峰,而雄激素受体拮抗剂氟他胺可抑制睾酮对ERK1/2的激活。结论:生理浓度睾酮可通过雄激素受体促进细胞外信号调节激酶ERK1/2磷酸化,且在作用30min后达到最大效应。     

Low dose and short-term therapy of tibolone reduces the cardiovascular disease risk in postmenopausal women

<正>Objective:To investigate the effects of low dose tibolone short-term therapy on clinic, endocrine and markers of cardiovascular disease in healthy postmenopausal women. Methods: A prospective study involved a total of 42 eligible postmenopausal women. 22 cases as group A and 20 cases as group B. Complete baseline work-up including Kupperman score, body mass index (BMI), gonadotropin (FSH, LH) , estrogen (E2), testosterone (T) , sex hormone binding globulin (SHBG), plasminogen activator inhibitor type 1 (PAI-1), tissue plas-minogen activator (tPA), high-sensitivity C-response protein (hs-CRP), nitrogen oxide (NO) and fasting lipid, glucose(FPG) , insulin(FINS) were performed in all subjects. Postmenopausal women in group A were treated with 1. 25 mg tibolone daily. Women in group B were treated with 0. 625 mg tibolone daily. Women both in group A and group B were given calcium 600 mg with vitamin D 125IU per day. At the end of the 12-weeks therapy, subjects were re-evaluated and above parameters were measured. Results: No significant differences between group A and group B were found at baseline. Twenty-eight cases (fourteen cases in each group) completed the study. Kupperman score decreased from (22. 1±8. 0) and (25. 4±7. 5) to (7. 7±4. 5) and (5. 2±4. 5) and plasminogen activator inhibitor type 1 decreased from (95. 8±32. 4)μg/L and (102. 9±42. 6)μg/L to (72. 2±39. 6)μg/L and (79. 9±30. 1)μg/L significantly in group A and group B respectively after treatment. In group A, Blood pressure decreased significantly from (120±10)/(83±6) mmHg to (110±14)/(77±9) mmHg (P<0. 05), testosterone increased significantly from (0. 6±0. 4) nmol/L to (1. 3±1. 1) nmol/L (P<0. 05), free testosterone increased from (0. 001±0. 002) nmol/L to (0. 003±0.003) nmol/L significantly (P<0. 01), SHBG decreased from (7. 6±4. 9) nmol/L to (4. 3±2. 9) nmol/L significantly (P<0. 05) , total cholesterol decreased from (5. 4±0. 8) mmol/L to (5. 0±0. 8) mmol/L significantly (P<0. 01) , ApoA decreased from (1. 8±0. 3) mg/dl to (1. 7±0. 3) mg/dl significantly (P<0. 05) , fasting glucose decreased from (5. 6±0. 8) mmol/L to (3. 9±1. 1) mmol/L significantly (P<0. 01) and no significant differences in BMI, FSH, LH, E2, tPA, hs-CRP, NO, TG, HDL-C, LDL-C, apoB were found after treatment. In group B, there were no significant differences in other parameters found after treatment except Kupperman score and PAI-1. Conclusions: 1. 25 mg/d tibolone short-term therapy was associated with improved fibrinolyt-ic factors and decreased Kupperman score, blood pressure, total cholesterol and fasting blood glucose level. 0. 625 mg/d tibolone therapy resulted in decrease Kupperman score and improvement of fibrinolytic factors. These changes relieve climacteric symptoms and may have some benefits on preventing the development of cardiovascular disease. An increased testosterone and free testosterone levels in 1. 25 mg dose of tibolone therapy may increase energy level, general well-being and sexual desire in postmenopausal women. Low dose tibolone replacement therapy is a convenient effective HRT for postmenopausal women     

Initiation of a fibrinolytic system in hepatic resection: The roles of tissue-type plasminogen activator and plasminogen activator inhibitor-1

The factors related to the initiation of fibrinolysis, especially with regard to the tissue-type plasminogen activator (tPA) and the plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1), were investigated in 15 patients who underwent hepatic resection, and the findings were compared between those with normal livers and those with diseased livers. It was found that tPA increased before hepatic division, whereas PAI-1 increased after hepatic division and reached a peak immediately following the operation. Plasminogen decreased during hepatectomy, reaching its lowest point on postoperative day 1, and increasing later. Decreased levels of both plasminogen and the ₂-plasmin inhibitor were considered to be partly due to plasmin formation in the blood. Patients with a diseased liver tended to have higher intraoperative values of euglobulin lysis activity and higher postoperative values of plasminogen activator, but significantly lower postoperative values of ₂-plasmin inhibitor than those with a normal liver. The results of this study suggest that activation of the fibrinolytic system occurs both during hepatectomy and in the early postoperative period, and that patients with a diseased liver are prone to develop hyperfibrinolysis during hepatectomy. Moreover, the increased levels of both tPA and PAI-1 can serve as one of the most sensitive markers for the vital reaction against surgical stress.     

PPARγ配体对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞结缔组织生长因子和纤溶酶原激活抑制因子1表达的影响

目的 研究过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）天然配体15d-PGJ2及人工合成配体吡格列酮（pioglitazone）对高糖诱导大鼠腹膜间皮细胞（RPMC）表达结缔组织生长因子（CTGF）和纤溶酶原激活抑制因子1（PAI-1）的影响。 方法 胰蛋白酶消化法分离培养RPMC,经鉴定分组：（1）0.1%、1.5%、2.5%、4.25%葡萄糖作用24 h组;（2）2.5%葡萄糖作用0、6、12、24、36、48、72 h组 ;（3）0.1%、1.5%、2.5%、4.25%甘露醇作用24 h组;（4）15d-PGJ2（5、15 μmol/L）及吡格列酮（5、15 μmol/L）分别预孵育2 h,加2.5%葡萄糖再作用24 h。RT-PCR检测CTGF和PAI-1 mRNA表达;Western印迹检测PPARγ、CTGF及PAI-1 蛋白表达。 结果 正常RPMC有PPARγ表达。1.5%葡萄糖使RPMC的PPARγ蛋白表达减少（P < 0.05）,而4.25%葡萄糖作用最大（P < 0.01）;2.5%葡萄糖作用6 h,RPMC的PPARγ蛋白表达减少（P < 0.05）,而72 h达高峰（P < 0.01）。各种浓度的甘露醇作用24 h,RPMC的PPARγ蛋白表达均无明显变化（P > 0.05）。2.5%葡萄糖作用后RPMC的CTGF和PAI-1 mRNA和蛋白表达均显著增加（P < 0.01）。5 μmol/L的吡格列酮显著降低CTGF和PAI-1 mRNA和蛋白表达（均P < 0.05）,而15 μmol/L作用更强（P < 0.01）。5 μmol/L的15d-PGJ2显著降低RPMC的CTGF mRNA和蛋白表达以及PAI-1 mRNA的表达（均P < 0.05）,但不影响PAI-1蛋白表达（P > 0.05）,15 μmol/L的15d-PGJ2对CTGF和PAI-1 mRNA和蛋白表达均有抑制作用（P < 0.05或P < 0.01）。 结论 葡萄糖以时间和剂量依赖方式调节RPMC PPARγ的表达,其作用与高渗透浓度无关。PPARγ配体可显著抑制高糖诱导的CTGF和PAI-1 的表达,提示激活PPARγ可能成为防治腹膜透析相关腹膜纤维化的新途径之一。     

PAI－1、t-PA、u—PA、u—PAR在支气管哮喘患者诱导痰中的表达及意义

目的探讨纤维蛋白溶解酶原激活物抑制剂（PAI）－1、组织型纤维蛋白溶解酶原激活物（t—PA）、尿激酶型纤维蛋白溶解酶原激活物（u－PA）及其受体（u－PAR）在支气管哮喘（简称哮喘）患者诱导痰中的表达及意义。方法用ELISA法分别检测29例哮喘急性发作者（发作组）、26例缓解者（缓解组）及15例健康对照者（对照组）诱导痰中PAI－1、t-PA、u—PA和u－PAR的含量,同期测定肺功能（第1秒用力呼气容积占预计值百分比,FEV,％pred）,并进行比较。结果发作组和缓解组诱导痰PAI－1、u—PAR含量[分别为（23．32±2t．64）、（0．766±0．272）μg／L和（17．23±9．40）、（0．700±0．271）μg／L]较对照组[（5．99±5．04）、（O．516±0．197）μg／L3均明显升高（P〈0．05）。而三组诱导痰u—PA、t-PA含量[分别为（O．287±0．235）、（7．68±3．46）μg／L,（0．251±0．276）、（9．88±4．68）μg／L,（0．239±0．322）、（10．35±7．47）μg／L]比较差异均无统计学意义（P〉0．05）。缓解组诱导痰PAI-1与FEV1 % pred呈负相关（r=-0．756,P〈0．01）。缓解组诱导痰PAI-1与病程呈正相关（r=0．454,P〈0．05）。结论PAI-1、u-PAR参与了哮喘气道慢性炎性反应的病理生理过程。