罗伯逊易位携带者胚胎植入前遗传学诊断

目的:了解罗伯逊易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断(PGD)的价值.方法:应用荧光原位杂交方法(FISH),采用位点特异探针(LSI)和端粒探针(Tel)对3例罗伯逊易位患者的卵裂球进行PGD分析,并选择正常或平衡胚胎移植人子宫.结果:共进行5个PGD周期,获卵145个,正常受精率81.1%,卵裂率92.5%,优质胚胎率88.9%.5个周期共移植11个胚胎,1例获得妊娠.获妊娠者孕20周后经羊水细胞核型分析,证实为正常/平衡,现已分娩健康婴儿.结论:PGD是罗伯逊易位携带者获得正常后代的有效途径.     

应用单核苷酸多态性微阵列技术进行胚胎植入前遗传学诊断的价值

胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)克服了常规产前诊断技术因终止异常妊娠带给患者身心痛苦的缺陷,在辅助生殖技术中越来越受到重视。目前,PCR和荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)是PGD中广泛应用的方法,但单细胞FISH和PCR存在污染、     

先天性异常与优生学

042 1 75　植入前遗传学诊断 /王仁礼∥生殖与避孕 — 2 0 0 4 ,2 4 ( 3) —Ⅰ～Ⅴ植入前遗传学诊断 (PGD)主要是指在显微操作下从体外受精 (IVF)发育至 6～ 8个细胞期的胚胎中 ,活检 1～ 2个卵裂球细胞或直接获取受精前后的极体 ,通过聚合酶链式反应 (PCR)或荧光原位杂交 (FISH) ,进行快速遗传学诊断 ,选择正常胚胎植入宫内 ,从而获得健康胎儿。该文在PGD取材方面介绍了 :( 1 )极体活检 ;( 2 )卵裂球活检 ;( 3)囊胚活检。在PGD诊断方面介绍了 :( 1 )染色体异常 ;( 2 )单基因病 ;( 3)诊断技术 ;( 4 )存在问题与解决办法。还介绍了…     

针对染色体易位携带者的微阵列比较基因组杂交-植入前遗传学诊断技术的建立与应用

目的:应用微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)对染色体平衡易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断,探讨其临床应用价值。方法:应用荧光原位杂交技术(FISH)对染色体易位携带者D3胚胎进行检测,对结果为异常且发育到囊胚的15枚胚胎应用array-CGH再次检测,建立array-CGH技术平台,再将array-CGH技术应用于染色体平衡易位携带者胚胎植入前遗传学诊断。结果:对经过FISH检测为异常且发育到囊胚的15枚胚胎进行全基因组扩增(WGA)后采用array-CGH技术进行检测,发现array-CGH技术不仅能够检测到FISH结果对应的数目异常和结构异常,还可以发现除FISH诊断的染色体异常外其他染色体异常。其对于相互易位病例不平衡易位断裂点检测的结果与对易位携带者的核型分析结果一致。应用array-CGH技术对5对染色体易位携带者夫妇的31枚胚胎进行胚胎植入前遗传学诊断,30枚获得检测结果 ,1对夫妇移植1枚整倍体胚胎后获得妊娠,羊水染色体分析提示胎儿染色体核型正常。结论:通过全基因组扩增以及array-CGH技术,对染色体平衡易位携带者胚胎进行植入前遗传学诊断,能够全面评估胚胎染色体的情况,具有良好的临床应用前景。     

植入前遗传学诊断中的胚胎活检技术应用进展

植入前遗传学诊断(PGD)主要是对体外受精(IVF)后发育到6～8细胞的胚胎，在显微操作系统下活检其中的1～2个卵裂球或对囊胚期胚胎活检其滋养外胚层细胞，应用聚合酶链反应(PCR)或荧光原位杂交(FISH)技术进行快速的遗传学诊断后．选择正常健康的胚胎植入子宫内，从而获得健康的胎儿。PGD是辅助生育技术与分子生物学相结合     

对曾育21三体综合征患儿者行胚胎种植前遗传学诊断获妊娠1例

目的 在体外受精－胚胎移植过程中，对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生。方法 常规激素替代治疗，对患者夫妇行胞母细胞质内精子注射（ICSI），正常受精培养到第3天，对6－10细胞期胚胎活检1个细胞，利用荧光原位杂交技术（FISH）进行胚胎种植遗传学诊断（PGD），挑选染色体数目正常的胚胎移植入患者子宫。结果 共对8个胚胎进行PGD，7个有诊断结果者中7个为正常胚胎、1个为21三体胚胎。挑选3个胚胎移植，获得妊娠并产下一健康男婴。结论 应用FISH对染色体数目的遗传疾病，如21三体综合征，进行胚胎种植前遗传学诊断是切实可行的。     

对曾育21三体综合征患儿者行胚胎种植前遗传学诊断获妊娠1例

目的在体外受精-胚胎移植过程中,对高危夫妇进行胚胎种植前遗传学诊断以避免21三体综合征患儿的出生。方法常规激素替代治疗,对患者夫妇行胞母细胞质内单精子注射(ICSI),正常受精培养到第3天,对6~10细胞期胚胎活检1个细胞,利用荧光原位杂交技术(FISH)进行胚胎种植前遗传学诊断(PGD),挑选染色体数目正常的胚胎移植入患者子宫。结果共对8个胚胎进行PGD,7个有诊断结果者中6个为正常胚胎、1个为21三体胚胎。挑选3个胚胎移植,获得妊娠并产下一健康男婴。结论应用FISH对染色体数目异常的遗传疾病,如21三体综合征,进行胚胎种植前遗传学诊断是切实可行的。     

胚胎植入前遗传学诊断的进展

植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis，PGD)是指利用聚合酶链式反应技术(Ploymerase Chain Reaction．PCR)和荧光原位杂交技术(Fluorescence in situ hybridization，FISH)对植入前胚胎进行遗传物质的分析。诊断该胚胎是否携带致病基因，并将健康的胚胎移入母体继续发育。广义上说,PGD还包括对配子的诊断和选择。     

罗式易位携带者胚胎植入前遗传学诊断的研究

【目的】应用荧光原位杂交(FISH)技术对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断。【方法】分别用化学打洞法及机械打洞法对3例罗式易位t（13q14q）患者的体外受精的胚胎活检,用VysisLSI13q14,TelVysion14q探针对卵裂球进行FISH分析,选取正常或平衡的胚胎移植入子宫腔。【结果】3个周期共获卵23个,受精率79%。活检14个胚胎,其中化学打洞法活检9个胚胎,活检后胚胎继续分裂率67%;机械打洞法活检5个胚胎,活检后胚胎继续分裂率为40%。2个周期分别有1个胚胎显示正常或平衡,进行移植,其中1例获得妊娠,妊娠20周时经羊水细胞核型分析证实为正常。【结论】对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断,可以解决患者的生育障碍。     

罗式易位携带者胚胎植入前遗传学诊断的研究

[目的]应用荧光原位杂交（FISH）技术对罗式易位携带者进行胚胎植入前遗传学诊断。[方法]分别用化学打洞法及机械打洞法对3例罗式易位t(13q14q）患者的体外受精的胚胎活检,用Vysis LSI13q14,Tel Vysion14q探针对卵裂球进行FISH分析,选取正常或平衡的胚胎移植入子宫腔。[结果]3个周期共获卵23个,受精率79％。活检14个胚胎,其中化学打洞法活检9个胚胎,活检后胚胎继续分裂率67％;机械打洞法活检5个胚胎,活检后胚胎继续分裂率为40％。2个周期分别有1个胚胎显示正常或平衡,进行移植,其中1例获得妊娠,妊娠20周时经羊水细胞核型分析证实为正常。[结论]对罗式易位携带者者胚胎植入前遗传学诊断,可以解决患者的生育障碍。     

Preimplantation genetic diagnosis of chromosomal abnormalities by multicolour fluorescence in situ hybridisation

Preimplantation genetic diagnosis (PGD) is an early diagnosis of genetic disorders, prior to the onset of pregnancy. PGD incorporates the latest techniques in assisted reproduction and molecular genetics. Embryos or oocytes are biopsied during culture in vitro and genetic analysis is carried out on the blastomeres or polar bodies. Embryos shown to be free of the genetic disease under investigation are transferred to the uterus. Multicolour fluorescence in situ hybridisation (FISH) is used to diagnose numerical and certain structural abnormalities of chromosomes in the embryo. The common probes used are for chromosomes 13, 18, 21, X and Y. FISH can also be used for PGD of translocations, when one of the parents is a carrier. PGD was carried out recently in 4 cases using multicolour FISH. In one of the embryos, trisomy 18 was detected. Tetraploidy was seen in another embryo. Only chromosomally normal embryos were transferred back to the uterus. Care has to be taken while interpreting FISH signals as the signal may be split, diffused, superimposed or in a different focus.     

应用荧光聚合酶链反应对α地中海贫血进行植入前遗传学诊断

目的探讨应用跨越断裂点荧光聚合酶链反应（PCR）技术在α地中海贫血（简称α地贫）植入前遗传学诊断（PGD）中的应用。方法获取Ot地贫东南亚缺失型携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞跨越断裂点荧光PCR检测技术,并对4对夫妇双方均为α地贫——SEA缺失型杂合子应用荧光PCR进行了α地贫的PGD。结果单个淋巴细胞平均扩增效率为90．0％（72／80）,平均等位基因脱扣（ADO）率为8．3％（6／72）。对4对夫妇进行4个周期PGO,共检测38个胚胎,获得38个卵裂球,其中34个卵裂球扩增成功,扩增效率为89．5％（34／38）,ADO率为5．9％（2／34）。经PCR分析,共获得11个正常胚胎,8个杂合子胚胎,15个重型地贫胚胎。移植了11个胚胎,获得2例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,分别证实为完全正常胚胎和杂合子胚胎,现已出生两名健康男婴。结论应用单细胞荧光PCR技术可对α地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生的目的。     

种植前遗传学诊断/筛查周期的临床资料分析

目的 通过回顾性分析种植前遗传学诊断/筛查(PGD/PGS)治疗周期的资料,旨在总结PGD/PGS治疗过程中的特点及规律,为临床提供参考.方法 收集行PGD/ PGS助孕的283对夫妇的309个治疗周期信息,分析病因构成、治疗过程、妊娠结局及新生儿情况.结果 283对夫妇中,因染色体异常行PGD治疗的比例最高,共223例,占 78. 8％;比较应用荧光原位杂交(FISH)、微阵列比较基因组杂交技术(array-CGH)和二代测序技术(NGS)这3种方法的临床资料,结果显示array-CGH组的胚胎活检成功率高于另外两组,差异有统计学意义(P<0. 05);FISH组的正常胚胎率高于array-CGH和NGS组,但胚胎种植率低于这两组,差异均有统计学意义(P<0.05);FISH组临床妊娠率低于NGS组,差异有统计学意义(P<0. 05);不同病因行PGD/PGS临床妊娠率比较,差异均无统计学意义;通过PGD/PGS技术出生子代无出生缺陷,且FISH与array-CGH诊断方法比较,新生儿情况均差异无统计学意义.结论 PGD/PGS技术是治疗遗传病高危患者生育问题的有效措施;FISH、array-CGH和 NGS这3种诊断法均是有效的胚胎诊断方法,但array-CGH法和NGS法的诊断效率较FISH高.     

TaqMan-MGB探针实时荧光PCR在β地中海贫血植入前诊断中的应用研究

目的建立单细胞MGB探针荧光PCR检测β地贫的方法以及在β地贫PGD中的应用研究。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立稳定的单细胞MGB探针荧光PCR检测技术,并对2例双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用MGB探针荧光PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞MGB探针荧光PCR检测了β地贫基因携带者的200个单个淋巴细胞的基因型,平均扩增效率为94%,平均等位基因脱扣(ADO)率为2.5%。对两对夫妇进行4个周期PGD,共活检16个胚胎,获得16个卵裂球,其中15个卵裂球扩增成功,扩增效率为93.8%,ADO率为6.2%。14个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了4个胚胎,获得1例临床妊娠。孕11周时经腹吸取绒毛,证实为完全正常胚胎,最终分娩了一正常女婴。结论应用单细胞MGB探针荧光PCR技术可对β地贫以及其它单基因遗传病进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

男性罗氏易位的临床特点及其胚胎着床前遗传学诊断

目的：分析男性罗氏易位的生育期临床特点,探讨胚胎着床前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis, PGD）技术在男性罗氏易位携带者中的临床应用。方法：2005年1月至2011年10月,共对80例男性罗氏易位携带者进行了96个PGD周期,选择正常或罗氏易位核型的胚胎移植。分析男性罗氏易位携带者的临床特点及其PGD周期的临床特点。结果：80对男性罗氏易位者夫妇中,62对夫妇因男方严重少、弱精症而致原发不孕,占77.50%（62/80）;8对夫妇因男方继发少、弱精症而出现继发不孕,占10%（8/80）;10对夫妇因反复自然流产就诊,占12.50%（10/80）。80例男性罗氏易位携带者中,（13;14）易位有50例,占62.50%（50/80）;（14;21）易位有15例,占18.75%（15/80）。96个PGD周期中,17个周期无胚胎可以移植,79个周期进行了胚胎移植,25个PGD周期获得临床妊娠,妊娠率31.65%（25/79）。至目前,共有18对夫妇分娩了21个健康子代,3对夫妇持续妊娠中。结论：少、弱精症是男性罗氏易位携带者不育的主要原因,辅助生育技术可以解决其不育问题。PGD技术可以为男性罗氏易位携带者获得健康的子代提供帮助,减少了女方流产及分娩畸形儿的发生率。     

对β-地中海贫血携带者进行胚胎植入前遗传学诊断

目的 探讨对β-地中海贫血进行胚胎植入前遗传学诊断的方法。方法 对4例β-地中海贫血携带者进行超排卵和体外受精-胚胎移植治疗,胚胎活检后应用全基因组扩增技术,巢式-PCR及反向点杂交进行胚胎植入前遗传学诊断,根据诊断结果选择健康的胚胎移植入子宫。结果 4例患者共获卵97个,受精率为83%,可供活检的胚胎47个,总扩增效率为84.8%。平均等位基因脱扣发生率为14.9%。共移植10个健康胚胎,获得1例三胎妊娠（其中1个为空囊）,现已分娩健康双胎。结论 对β-地中海贫血进行植入前遗传学诊断可使β-地中海贫血患者实现生育健康后代的愿望,达到优生的目的。     

多重巢式聚合酶链反应在β地中海贫血植入前遗传学诊断中的应用

目的探讨应用多重巢式聚合酶链反应(PCR)技术在β地中海贫血(简称β地贫)植入前遗传学诊断(PGD)中的应用。方法获取β地贫基因携带者单个淋巴细胞,建立了稳定的单细胞多重巢式PCR检测技术,可同时检测β珠蛋白基因及与β珠蛋白基因紧密连锁的HumTH01基因,并对4例已出生的重型β地贫患儿及双方均为β地贫基因携带者的夫妇应用多重巢式PCR进行了β地贫的PGD。结果利用单细胞多重巢式PCR,可以同时检测中国人常见的16种β地贫突变类型,单个淋巴细胞平均扩增效率为91．3％,平均等位基因脱扣(ADO)率为17．0％。对4对夫妇进行4个周期PGD,共活检33个胚胎,获得33个卵裂球,其中30个卵裂球扩增成功,扩增效率为90．9％,ADO率为13．3％。26个胚胎经PCR分析后获得明确诊断,移植了8个胚胎,获得1例临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,证实为完全正常胚胎,现已出生1名正常女婴。结论应用单细胞多重巢式PCR技术可对β地贫进行植入前遗传学诊断,达到优生目的。     

两种助孕方式下D5、D6囊胚行冻融移植后妊娠结局的比较

目的 比较体外受精-胚胎移植(IVF-ET)与胚胎植入前遗传学诊断或胚胎植入前遗传学筛查(PGD/PGS)周期中D5、D6囊胚形成情况及妊娠结局,同时探究D5、D6囊胚的发育潜能及两种助孕方式的优劣.方法 回顾性分析行IVF-ET助孕的138个周期及PGD/PGS筛查助孕的148个周期,按移植胚胎的发育天数分为IVF-D5组、IVF-D6组、PGD/PGS-D5组和PGD/PGS-D6组,分析比较各组的一般情况、囊胚形成情况及冻融移植后的种植率、临床妊娠率、流产率等.结果 IVF-D5组与IVF-D6组相比、PGD/PGS-D5组与PGD/PGS-D6组相比,D5组囊胚形成率、优质胚胎率、种植率、临床妊娠率均高于D6组(P＜0.05);PGD/PGS周期中D5组整倍体囊胚检出率高于D6组(p＜0.05);IVF-D5组与PGD/PGS-D5组相比、IVF-D6组与PGD/PGS-D6组相比,两组间的囊胚形成率、优质胚胎率、种植率及临床妊娠率均差异无统计学意义.结论 两种助孕方式下冻融移植D5囊胚比D6囊胚可获得较好的临床妊娠结局;与IVF相比,PGD/PGS并未明显改善患者的妊娠结局.