星形胶质细胞诱导神经干细胞定向分化试验研究

目的 研究新生SD大鼠星形胶质细胞培养上清液对神经干细胞(neural stem cells，NSCS)体外定向分化的影响，探讨神经干细胞分化条件。方法 收集新生和成年SD大鼠星形胶质细胞培养的上清液，以1：3比例同DMEM／F12培基混合，分别对胎鼠来源的神经干细胞进行诱导分化，倒置相差显微境下观察细胞的生长情况。并采用免疫荧光检测方法对分化细胞鉴定和计数。结果 新生鼠星形胶质细胞培养上清液与DMEM／F12的混合培基诱导神经干细胞分化为神经元的比例明显提高。结论 新生鼠星形神经胶质细胞能促使神经干细胞向神经元方向分化。     

针灸对SAMP8小鼠嗅球神经干细胞向胶质细胞分化的影响

以SAMP8快速老化小鼠作为研究对象,采用BrdU/ S-100 β、BrdU/GALC免疫荧光双标探讨针刺、艾灸治疗对嗅球神经干细胞向星形胶质细胞和少突胶质细胞分化的影响.研究结果表明,艾灸可能抑制SAMP8小鼠嗅球NSCs向星形胶质细胞和少突胶质细胞分化,但针刺刺激主要是抑制SAMP8小鼠嗅球NSCs向星形胶质细胞分化,而对向少突胶质细胞分化抑制作用不明显.     

胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的体外培养

目的探讨胚胎大鼠纹状体区神经干细胞的培养、分化和鉴定技术。方法从胚胎大鼠纹状体区分离神经干细胞,用无血清培养技术进行体外原代培养、传代,加血清进行诱导分化。荧光免疫染色技术进行鉴定。结果从胚胎大鼠纹状体区分离出神经干细胞,并可分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。结论采用该体外培养技术分离的纹状体区神经干细胞可在体外大量增殖,并有多向分化潜能。     

Nbn 基因对小鼠海马星形胶质细胞发育的影响

目的 观察Nbn 基因神经特异性敲除(Nbn-CNS-del)小鼠海马星形胶质细胞发育的形态学变化,探讨Nbn 基因在小鼠海马星形胶质细胞发育中的作用。方法 采用星形胶质细胞标记物GFAP,应用免疫组织化学技术和体视学方法对生后（P）7、14、21 d 的Nbn-CNS-del小鼠海马进行系统观察和定量分析,以非基因敲除(Nbn-CNS-ctr)的同窝仔鼠为对照组。结果 P7～21 d,与对照组相比,Nbn-CNS-del小鼠海马CA区及齿状回各层GFAP阳性细胞失去正常星形结构,面数密度减小（P＜0.05）。结论 Nbn 基因神经特异性敲除小鼠海马星形胶质细胞发育障碍,Nbn 基因可能在海马神经胶质细胞发育中起重要作用。     

丙泊酚对新生小鼠海马星形胶质细胞和小胶质细胞的影响

目的：观察丙泊酚麻醉对新生小鼠海马星形胶质细胞（AST）和小胶质细胞的影响。方法将健康同窝日龄7d（P7）C57小鼠15只,随机分为丙泊酚高剂量组、低剂量组和10％脂肪乳对照组,每组5只,所有小鼠从P7开始接受药物处理。高、低剂量组分别腹腔注射丙泊酚60、30mg／kg;对照组腹腔注射同等体积的10％脂肪乳。药物处理24h后取材,采用免疫组化方法检测AST标记物胶质纤维酸性蛋白（GFAP）与小胶质细胞标记物离子钙接头分子（Iba1）在海马内的表达。结果丙泊酚高剂量组小鼠海马齿状回分子层中GFAP标记的AST数量较对照组明显减少（P＜0．01）,低剂量丙泊酚对新生鼠海马中AST数量无显著影响;高剂量和低剂量丙泊酚均显著性降低海马小胶质细胞数量（P＜0．01）。结论丙泊酚抑制新生小鼠海马AST和小胶质细胞的发育,且存在剂量依赖关系。     

丙戊酸钠对APP/PS1双转基因小鼠脑内星形胶质细胞和神经营养因子的影响

目的：观察丙戊酸钠（valproic acid sodium salt,VPA）对阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease,AD）模型小鼠脑内星形胶质细胞、脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）和胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line-derived neu－rotrophic factor,GDNF）的影响。方法：取3月龄的APP/PS1双转基因小鼠AD模型小鼠24只,按随机数字表法平均分为治疗组和对照组。VPA治疗组小鼠腹腔注射VPA 30 mg/（kg·d）,对照组小鼠腹腔注射等量生理盐水,采用免疫组化学法观察2组小鼠皮质和海马区星形胶质细胞数量的变化,Western blot检测2组小鼠皮质和海马BDNF 和GDNF的表达水平。结果：与对照组比较,VPA治疗组小鼠皮质和海马区星形胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）的阳性细胞数量均明显减少（t=5.476、8.793,P均＝0.00０）,BDNF 和GDNF 表达水平均明显升高（t=4.303,P=0.001;t=2.376,P=0.032）。结论：VPA可抑制星形胶质细胞增生,提高神经营养因子的表达水平。     

大鼠胚胎神经干细胞的分离培养和分化

探索大鼠胚胎神经干细胞的分离、培养和传代等方法,并用血清促使分化为神经元细胞、星形胶质细胞和少枝胶质细胞。方法从胚胎大鼠脑组织中分离得到神经干细胞;在无血清条件下,对神经干细胞进行培养、传代;用神经上皮干细胞蛋白（Nestin）对神经干细胞进行箍定;用免疫荧光方法对分化后神经干细胞进行神经纤维丝蛋白（NF68）、神经胶质酸性蛋白（GFAP）和半乳糖脑苷脂（Gale）染色。结果成功得到神经干细胞,并且进行多次传代培养。血清能促使其分化成为神经元细胞、星形胶质细胞和少枝胶质细胞。结论大鼠胚胎神经干细胞能够在体外适宜的条件下能大量增生,并且具有多向分化潜能。     

提高BrdU标记成年大鼠在体脑神经干细胞增殖和分化效率的研究

目的探讨合理利用BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）单标成年在体脑神经干细胞增殖以及双标成年在体脑神经干细胞分化的策略。方法在BrdU通过腹腔注射6h后或在BrdU腹腔注射后14～21d将大鼠灌注固定,继之用邻片进行H—E染色以作定位,分别对脑组织切片进行BrdU单标或BrdU＋NT（神经丝,成熟神经元的标志物）、BrdU＋GFAP（胶质原纤维酸性蛋白,成熟星形胶质细胞的标记物）以及BrdU＋GC（半乳糖脑苷脂,成熟少突胶质细胞的标记物）的双标免疫组织化学反应,光镜下观察和计数单标或双标的阳性细胞。结果BrdU单标阳性细胞多见于侧脑室的SVZ（室管膜下区）和SGZ（齿状回颗粒下区）,而BrdU＋NT阳性细胞多位于嗅球和齿状回的颗粒细胞层,BrdU＋GFAP阳性细胞多见于SVZ或SGZ;BrdU＋GC阳性细胞数最少,散在分布于以上四个部位内。结论在进行BrdU标记脑神经干细胞前应该制定优化组合方案,以获得最佳的单标和双标的识别效果。     

成年小鼠脑室下区神经干细胞培养与鉴定体系的建立

目的 建立系统的成年小鼠脑室下区神经干细胞分离、培养及鉴定体系.方法 用无血清方法分离培养成年小鼠脑室下区来源的神经干细胞;用克隆培养、BrdU整合的方法检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学方法检测Brdu、神经干细胞标记物nestin和SOX2,分化的细胞标记物Tuj1、GFAP、NG2.用Western boltting和RT-PCR方法进一步检测神经干细胞标记物nestin和SOX2的表达.结果 从成年小鼠脑室下区分离培养出具有自我更新、增殖的神经球,构成神经球的细胞nestin和SOX2呈阳性,它们分化后产生Tujl阳性的神经元、GFAP阳性的星型胶质细胞、NG2阳性的少突胶质细胞.结论 建立了简单、稳定的培养成年小鼠脑室下区神经干细胞方法.     

电针干预对放射性脑损伤小鼠神经干细胞分化的影响

目的:分析电针对放射线照射小鼠内源性神经干细胞分化的影响及机制。方法:放射线照射小鼠制备脑损伤小鼠模型,分别电针针刺百会、风府和双侧肾俞穴位1周(电针1组)、2周(电针2组)和3周(电针3组)进行治疗。免疫荧光方法检测海马的5-溴脱氧尿嘧啶(5-Bromo-2-deoxy uridine,BrdU)、星形胶质细胞标记蛋白(S100 calcium-binding protein B,S100β)、小胶质细胞特异性蛋白(ionized calcium binding adaptor molecule 1,Iba1)、胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)及DNA结合蛋白(sex determining region Y-box 2,Sox2)阳性细胞数,观察电针针刺穴位对放射性脑损伤小鼠海马神经干细胞分化的影响。结果:与空白组比较,模型组小鼠海马BrdU/S100β、BrdU/Iba1、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目均显著减少(P0.05,P0.001,P0.05)。与模型组比较,电针针刺穴位1周后,小鼠海马BrdU/S100β、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目均显著增加(P0.01,P0.01),而BrdU/Iba1双标阳性细胞数目无明显变化;电针针刺穴位2周后,小鼠海马BrdU/S100β双标阳性细胞数目明显增加(P0.01),而BrdU/Iba1、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目无明显变化;电针针刺穴位3周后,小鼠海马BrdU/S100β、BrdU/Iba1、Sox2/GFAP双标阳性细胞数目均显著增加(P0.001,P0.05,P0.01)。结论:放射线照射可影响海马区神经元分化,电针干预可激活放射线照射小鼠海马神经干细胞向星形胶质细胞、小胶质细胞分化,其疗效与电针疗程有一定相关性。