VEGF反义寡核苷酸抑制胆囊癌生长增殖和凋亡的体外实验研究

目的:探讨VEGF反义寡核苷酸转染对人胆囊癌GBC-SD细胞生长、增殖和凋亡的影响。方法:运用Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides,ASODN)和错义寡核苷酸(Scrambled Oligodeoxynucleotide,SODN)转染人胆囊癌(GBC-SD)细胞。采用MTT法测定转染后各组细胞的生长曲线及抑制率,流式细胞术检测转染后不同时间各组细胞凋亡情况。结果:SODN组、SODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长无显著影响(P>0.05),ASODN组及ASODN十Oligofectamine组则能显著抑制GBC-SD细胞生长(P<0.05),且ASODN十Oligofectamine组对GBC-SD细胞生长增殖抑制作用较ASODN组更为强(P<0.05)。流式细胞术检测结果发现ASODN十Oligofectamine组能促进GBC-SD细胞凋亡(P<0.05)。结论:VEGFASODN转染能抑制胆囊癌GBC-SD细胞生长和增殖,Oligofectamine介导能明显增强VEGF ASODN的抑制作用;Oligofectamine介导VEGF反义寡核苷酸转染能促进胆囊癌GBC-SD细胞的凋亡。     

VEGF反义寡核苷酸对人胆囊癌细胞VEGF、Flt-1及KDR mRNA和蛋白水平表达的影响

目的 体外研究Oligofectamine介导的血管内皮生长因子（VEGF）反义寡核苷酸（ASODN）转染对人胆囊癌细胞VEGF、Fit-1及KDR在mRNA和蛋白水平的表达及生长增殖和凋亡的影响。方法运用Oligofectamine介导的VEGFASODN和SODN转染人胆囊癌细胞GBC-SD,半定量RT-PCR检测各组细胞VEGF、Fit-1及KDRmRNA转染前后不同时间的表达变化、ELISA测定转染后各组细胞培养上清液VEGF蛋白浓度。结果ASODN组及ASODN＋Oligofectamine组都能显著抑制VEGF、Fit-1及KDRmRNA的表达,且VEGFASODN＋Oligofectamine的抑制作用比ASODN更强（P〉0．05）。ELISA测定结果显示ASODN组及ASODN＋Oligofectamine组均抑制VEGF蛋白的分泌（P〈0．05）,且ASODN＋Oligofectamine组的VEGF蛋白浓度低于ASODN组（P〉0．05）。结论VEGFASODN能抑制人胆囊癌细胞VEGF、Fit-1和KDR在mRNA水平的表达和VEGF蛋白的表达,从而促进GBC-SD细胞的凋亡;Oligofectamine能明显增强VEGFASODN的抑制效果。     

VEGF反义寡核苷酸抑制裸鼠骨肉瘤生长的实验研究

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸对裸鼠骨肉瘤生长的抑制作用。方法制备BALC/C裸鼠皮下骨肉瘤模型18只,随机分为3组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只。接种MG-63人成骨肉瘤细胞后24 h内,分别皮下注射ASODN及SODN进行治疗,对照组只注射生理盐水,每周2次,连续4周;观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期。断颈处死裸鼠,游标卡尺测量肿瘤体积大小,天平称量肿瘤的重量。结果与对照组瘤重(7.45±0.60 g)比较,VEGF ASODN组(4.13±0.80 g)能明显抑制裸鼠肿瘤生长(P<0.01),VEGF SODN组(6.92±0.69 g)则无明显抑制作用(P>0.05)。VEGF ASODN组、VEGFSODN组抑瘤率分别为44.56%、7.11%。结论VEGF反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内骨肉瘤生长,通过反义寡核苷酸下调VEGF的表达,可达到治疗骨肉瘤的目的,为骨肉瘤的基因治疗提供了实验依据。     

腺病毒介导VEGF-siRNA抑制骨肉瘤组织中VEGF表达的实验研究

目的探讨腺病毒介导的VEGF-siRNA对荷人骨肉瘤裸鼠肿瘤组织中VEGF表达的影响,为靶向骨肉瘤肿瘤血管治疗提供研究基础。方法以MG63细胞悬液(1×106/ml)皮下接种于30只裸鼠,随机分为A、B、C3组;各组于细胞接种后的第7天开始自尾静脉给药。A组注射Ad-VEGF-siRNA100μl,隔日注射,每周注射3次,共注射9次,总量为2×109pfu。B组注射Ad-EGFP100μl,隔日注射,每周注射3次,共注射9次,总量为2×109pfu。C组注射PBS 100μl,隔日注射,每周注射3次,共注射9次。各组分别于接种的14 d和26 d取瘤,以荧光实时定量PCR(real time PCR)各组裸鼠肿瘤组织中VEGF-mRNA的含量。结果14 d和26 d A组裸鼠肿瘤组织中VEGF-mRNA的RQ(relative quantity)平均值分别为(0.088±0.094),(0.075±0.086);B组RQ平均值分别为(0.179±0.103)和(0.167±0.265);C组RQ平均值分别为(0.185±0.085)和(0.183±0.128)。A组RQ平均值与B、C组的差别有统计学意义(P<0.05),而B、C组无差异(P>0.05)。结论腺病毒介导的VEGF-siRNA能够抑制骨肉瘤组织中VEGF的表达,为RNA干扰技术靶向血管治疗骨肉瘤提供了理论可能。     

VEGF反义核酸对Lewis肺癌细胞作用的研究

目的 探讨利用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸的基因治疗肺癌.方法 制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组.接种Lewis肺癌细胞后24h内,用ASODN及SODN皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况.用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达,RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达.结果 VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组、对照组平均瘤重分别为(4.31±0.45)g、(6.47±0.71)g、(6.23±0.76)g.VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为41.8%、5.2%.VEGF反义寡核苷酸能明显抑制VEGF蛋白表达及VEGF mRNA的表达.结论 原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长.     

siRNA对VEGF蛋白表达的影响及对裸鼠移植肾癌的抑制作用

目的探讨siRNA沉默血管内皮生长因子(VEGF)基因对人肾癌裸鼠移植瘤VEGF蛋白的表达水平及生长抑制作用的影响。方法化学合成针对VEGF的siRNA序列,通过脂质体将VEGF-siRNA转染到ACHN细胞中,将转染VEGF-siRNA的ACHN细胞(A组)、转染空质粒的ACHN细胞(B组)及未转染的ACHN细胞(C组)分别接种于裸鼠背部皮下。在SPF环境中饲养裸鼠并观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,每隔5d测定移植瘤体积大小(肿瘤的长轴L,短轴W,肿瘤体积V=1/2LW2),绘制肿瘤生长曲线,采用免疫组化及Western blot法测定裸鼠移植瘤组织切片中VEGF蛋白的表达水平。结果 A组小鼠移植瘤成瘤及生长明显缓慢,移植瘤的体积和质量均低于B、C组,差异有统计学意义(P<0.05);移植瘤组织切片免疫组化及Western blot法检测结果提示:与B、C组相比,A组中VEGF蛋白表达量降低,差异有统计学意义(P<0.05);而B、C组间瘤体的体积重量及VEGF蛋白表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 VEGF在肾癌的发生、发展中起着重要作用,化学合成的VEGF-siRNA可特异性抑制肾癌细胞中VEGF的表达,抑制肿瘤的生长增殖。     

VEGF反义核酸联合放射治疗对裸鼠移植瘤宫颈癌的作用

目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸联合放射治疗对裸鼠移植瘤宫颈癌生长的抑制作用.方法 制备Balc/C裸鼠皮下宫颈癌模型20只,随机分为4组:VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、放射10Gy治疗组、VEGF反义寡核苷酸+放射10 Gy治疗组及对照组,每组5只.分别皮下注射ASODN,对照组注射生理盐水,每周2次,连续4周,放射剂量一次性给予.观察各组裸鼠肿瘤的生长情况、裸鼠的一般情况与生存期,测量肿瘤直径并计算瘤体积.断颈处死裸鼠,天平称量肿瘤的重量.免疫组化法测肿瘤VEGF.结果 VEGF反义寡核苷酸和放射对肿瘤生长均有抑制作用,二者联合作用抑制更显著.放射使VEGF表达升高,ASODN使VEGF表达降低;肿瘤发生明显的凋亡形态学改变.结论 反义寡核苷酸可以下调VEGF的表达,对放射治疗宫颈癌移植瘤有增敏作用,为宫颈癌的综合治疗提供了实验依据.     

放射性125I粒子对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤VEGF表达的影响

目的 探讨放射性125I粒子对肺癌A549细胞裸鼠移植瘤血管内皮细胞生长因子(VEGF)表达的影响.方法 建立肺癌A549细胞裸鼠移植瘤模型,将24只小鼠随机分为对照组和观察组,每组12只.观察组小鼠植入125I粒子,对照组小鼠植入空白粒子.检测裸鼠移植瘤体积、瘤重,计算抑瘤率.采用免疫组织化学法检测移植瘤组织内VEGF蛋白表达.采用PCR法检测移植瘤组织内VEGF mRNA表达.结果 观察组小鼠移植瘤体积及瘤重[(0.658±0.213) g]均明显小于对照组[(1.807±0.625) g],组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05);观察组小鼠平均抑瘤率为(68.2±5.3)%;观察组移植瘤中VEGF蛋白表达及VEGF mRNA表达分别为(22.6±5.9)、(98.7±8.2),均明显低于对照组的(58.5±6.4)、(138.7±5.2),组间比较差异均具有统计学意义(P<0.05).结论 放射性125I粒子植入可显著抑制肺癌A549细胞裸鼠移植瘤生长,抑制VEGF表达可能是其主要作用机制.     

MMP-2反义寡核苷酸对膀胱癌荷瘤裸鼠的治疗作用

目的 探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)反义寡核苷酸对人膀胱癌裸鼠异体移植瘤生长的抑制作用.方法 制备膀胱癌裸鼠移植瘤模型18只,随机分为3组:MMP-2反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、MMP-2正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组,每组6只.待瘤结节直径≥5mm后,分别在肿瘤细胞接种部位周围及中心皮下注射反义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物、正义寡核苷酸/阳离子脂质体复合物和生理盐水.每周2次,连续4周,断颈处死裸鼠,计算肿瘤体积,称量瘤重.常规切片,HE染色,观察组织学形态并进行病理学评估.结果 与对照组瘤重(7.49±0.53)g比较,ASODN组瘤重(4.18±0.53)g明显降低( P<0.01);ASODN组、正义寡核苷酸(SODN)组抑瘤率分别为44.19%、8.41%( P<0.01); ASODN组瘤体病理学特征改善.结论 MMP-2反义寡核苷酸能抑制裸鼠体内移植瘤生长,通过反义寡核苷酸下调MMP-2的表达,有效逆转肿瘤的恶性表型,为膀胱癌的基因治疗提供了实验依据.     

VEGF基因沉默抑制HCT116裸鼠移植瘤生长及血管生成的实验研究

目的 应用RNAi技术沉默血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)基因,探讨其对人结肠癌细胞系HCT116裸鼠移植瘤生长及其血管生成的影响.方法 将自行构建的以VEGF基因为靶向表达短发夹状RNA的重组质粒(pAVU6 27-VEGF-siRNA)转染到结肠癌HCT116细胞株中(C组),以空质粒(pAVU6 27)转染为阴性对照(B组),经G418筛选出阳性克隆细胞,未转染质粒的HCT116细胞株为空白对照(A组),建立裸小鼠皮下移植瘤模型.通过测量移植瘤的质量、体积观察移植瘤生长;免疫组化检测瘤组织中VEGF蛋白表达及组织内的微血管密度(microvessel density,MVD)改变.结果 C组肿瘤瘤块的体积(0.169±0.009)cm3和质量(0.192±0.022)g明显小于A、B组(P＜0.05).A、B组荷瘤组织中VEGF均表达强阳性,表达位于肿瘤细胞的细胞质及细胞膜上,呈棕黄色.C组荷瘤组织中VEGF呈弱阳性表达,组间差异显著(P＜0.05).C组荷瘤组织中MVD明显小于两对照组,组间差异显著(P＜0.05).VEGF表达与MVD呈显著正相关(r=0.810,P＜0.01).结论 应用RNAi技术沉默VEGF基因能明显抑制人结肠癌细胞系HCT116裸小鼠移植瘤的生长,其机制与其抑制移植瘤中VEGF的表达和瘤组织内血管生成有关.     

Expression of VEGF, b-FGF, and their receptors after injection of VEGF on ischemic heart muscle

To study the expression of vascular endothelial growth factor (VEGF) and basic fibroblast growth factor (b-FGF) and their receptors after injection of external VEGF on ischenric heart muscle and to investigate the mechanism of therapeutic myocardial angiogenesis of VEGF. Methods: Standard experimental pigs underwent placement of a left circumflex artery ameroid occluder. Six weeks later, the animals in the experimental group were treated with VEGF (20 μg) by direct epicardial injection (n = 8) and other animals in the control grovp did not receive any treatment (n = 8).Four weeks after therapy, the animals were evaluated with regard to mRNA and protein expression of VEGF and b-FGF and their receptors by RT-PCR and Western blotting. Results: The mRNA expression of VEGF and b-FGF and their receptors by RT-PCR expressing as pereentage of density ratio to the GAPDH control was increased in experimental group versus control group. The protein expression of VEGF and b-FGF and their receptors by Western blot expressing as percentage of density ratio to the Commassie Blue control was increased in experimental group versus control Group. Conclusion: Exogenous VEGF can induce the expression of endogenous VEGF, b-FGF, and their receptors; b-FGF may play a role in the angiogenesis of VEGF.     

急性脑梗死患者血清VEGF、PEDF表达及其比值的变化和临床意义

目的 探讨急性脑梗死患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)、色素上皮衍生因子(PEDF)的表达以及其比值的动态变化,并探讨其临床意义。 方法 采用前瞻性对照实验的研究方法分为脑梗死组和正常对照组,对新诊断的41例急性脑梗死患者入院第1、3、7、14、28天应用双抗体夹心酶联免疫吸附分析法(ELISA)检测血清PEDF、VEGF浓度并计算VEGF/PEDF的比值变化,健康体检者作为正常对照组。 结果 急性脑梗死患者血清VEGF浓度随病程逐渐增高,第7天达到最高浓度(214.72±55.95)ng/L,与对照组比较,差异有统计学意义(t=2.439,P<0.05)。而急性脑梗死组血清PEDF浓度在入院后第1天最低(28.77±8.60)ng/L,与对照组比较差异有统计学意义(t=2.063,P<0.05),随病程时间延长逐渐提高,第14天接近健康人正常水平。急性脑梗死组患者发病第1、3、7天血清VEGF/PEDF比值分别为7.48±1.98、7.86±2.83、7.39±2.18,均高于对照组5.93±1.99,差异有统计学意义(分别t=3.63,P<0.001;t=3.68,P<0.001;t=3.24,P<0.01)。 结论 VEGF/PEDF比值可以作为诊断急性脑梗死的一个检测指标,血清VEGF、PEDF浓度及其比值变化在急性脑梗死患者发病过程中有重要临床意义。      

VEGF、p53和C-myc基因蛋白在胶质瘤中的表达

目的 :研究和探讨突变型 p5 3、C- myc和血管内皮生长因子 (VEGF)基因蛋白在胶质瘤中的表达和在胶质瘤发生过程中的作用及临床病理意义。 方法:6 5例胶质瘤患者分为低级别组 ( ～ 级 ) 2 8例 ,高级别组 ( ～ 级 ) 37例 ,采用免疫组织化学法检测两组胶质瘤 p5 3、C- myc、VEGF 3种基因蛋白的表达 ,并进行统计学分析。结果 :突变型 p5 3、C- m yc和 VEGF在胶质瘤中的阳性表达率分别为 6 3% (39/6 2 )、6 0 % (35 /5 8)、72 % (4 4 /6 1)。两组VEGF、C- m yc的阳性表达率差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ,突变型 p5 3的表达在两组间差异无统计学意义 (P >0 .0 5 ) ,VEGF的产生与 p5 3突变和 C- myc过度表达之间无相关性 (P >0 .0 5 )。结论:p5 3突变和 C- m yc过度表达在胶质瘤发生过程中起重要的作用 ,肿瘤组织产生和分泌 VEGF在胶质瘤快速生长、恶性增殖过程中起关键作用 ,通过阻断 VEGF或其受体抑制成血管过程 ,有望对临床治疗胶质瘤提供一种新途径。     

血清VEGF、VEGF C和uPAR水平与口腔鳞状细胞癌的关系

目的通过检测口腔鳞状细胞癌(OSCC)患者血清中血管内皮生长因子(VEGF)、血管内皮生长因子C(VEGF C)和尿激酶型纤溶酶原激活剂受体(uPAR)的水平,探讨其与OSCC病理学改变和淋巴结转移的关系。方法用酶联免疫吸附分析法检测91例OSCC患者和50例健康人血清中VEGF、VEGF C和uPAR的水平。结果OSCC患者血清VEGF、VEGF C、uPAR含量显著高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.01),血清VEGF、VEGF C和uPAR水平与口腔癌患者的病理分级、浸润方式和淋巴结转移无显著相关性。结论血清VEGF、VEGF C和uPAR水平可为监测口腔癌的发生发展提供实验依据,但对判断OSCC的转移无显著意义。     

子宫内膜癌患者血管内皮生长因子和脂联素及表皮生长因子受体表达的临床意义

目的研究子宫内膜癌患者血管内皮生长因子(VEGF)、脂联素及表皮生长因子受体(EGFR)表达的临床意义。方法选取49例子宫内膜癌患者作为研究组,子宫内膜正常者44例作为对照组,分析两组VEGF和脂联素及EGFR表达。结果研究组VEGF和脂联素的光密度值与对照组比较差异有统计学意义(P<0.05),研究组EGFR表达与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 VEGF和脂联素及EGFR可能参与了子宫内膜癌的发生发展。     

胃腺癌组织中MVD、VEGF及细胞胀亡检测

目的 :检测胃腺癌组织中微血管密度 (MVD)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)与胀亡。方法 :用免疫组织化学方法检测 4 0例胃腺癌组织中MVD和VEGF的表达 ,用透射电镜检测胃癌细胞的胀亡情况。结果 :4 0例胃癌组织中 ,MVD 9～ 78,平均 (36 .5± 1 6 .5 ) ;1 6例VEGF表达阳性 ,阳性率为 4 0 %。胃癌组织中可出现不同时期的胀亡细胞 ,胀亡指数为 (2 .5 94± 0 .1 5 7)。VEGF的表达与胀亡细胞的发生呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论 :胃癌组织中血管形成抑制了细胞胀亡的发生。     

脑星形细胞瘤组织中VEGF、iNOS蛋白的表达及其意义

目的探讨血管内皮生长因子（VEGF）、诱导性一氧化氮合成酶（iNOS）蛋白在脑星形细胞瘤中的表达及其意义。方法采用SP免疫组织化学法，检测VEGF、iNOS蛋白在59例不同病理分级脑星形细胞瘤组织中的表达情况。结果VEGF、iNOS蛋白表达的阳性率分别为76.2％（45／59）、71.2％（42／59），VEGF与病理分级密切相关（P〈0．05）；VEGF、iNOS均与肿瘤单位视野中血管平均值（MVD）密切相关（P〈0．05）。VEGF、iNOS的表达存在相关性。结论VEGF表达与脑星形细胞瘤的发生发展及肿瘤性血管的生成存在密切的相关性；iNOS通过协同和促进VEGF的表达及肿瘤性血管的生成，间接参与肿瘤细胞的恶性演化。     

VEGF、OPN在胰腺癌中的研究进展

胰腺癌为临床较常见的恶性肿瘤,早期难以发现,晚期常有周围组织、血管神经的浸润和淋巴结转移。肿瘤的发生、发展和转移与肿瘤组织内血管壁的通透性增加以及新生血管生成密切相关。血管内皮生长因子是最主要的血管生成因子,可直接作用于血管内皮细胞而增加血管通透性、促进血管内皮细胞增殖。骨桥蛋白是近年来发现的一种糖磷酸化蛋白,是一种转移相关蛋白,能够促进肿瘤组织细胞的生存、增殖和迁移,参与肿瘤组织中毛细血管床的形成,在肿瘤的发展及转移过程中发挥着重要作用。     

血管内皮生长因子在大肠杆菌中表达?提纯及功能测定

目的:利用细菌表达系统合成大量重组血管内皮生长因子(VEGF)蛋白.方法:将VEGF165 cDNA克隆于表达载体PET-32a( )后转染BL-21株表达重组VEGF蛋白,用分离His蛋白的层析柱提纯重组VEGF蛋白.结果:重组VEGF蛋白经氨基酸序列测定证实.Western blot测定发现His蛋白.功能测定发现重组VEGF蛋白可阻断细胞表面Neuropilin-1的表达.结论:上述表达系统制备大量具有生物活性的重组VEGF蛋白