大鼠胚胎卵巢冷冻保存和异体无血管皮下移植的生长

背景:胚胎卵巢组织免疫原性低,不易引起宿主的免疫排斥反应,是卵巢异体移植的理想供体.但由于获取胎儿卵巢的不随意性和来源限制,标本的冷冻显得至关重要,成功的冷冻保存和复苏技术是建立胎儿卵巢库的关键.目的:通过对大鼠新鲜或冻融胚胎卵巢组织异体无血管移植后的组织形态和功能的观察,探讨胚胎卵巢组织异体移植和超速冷冻保存的可行性.设计、时间及地点:随机对照动物实验.于2006-03/05在云南省第一人民医院生殖遗传科进行课题设计,于2006-05/2007-02在云南大学单克隆抗体研究中心完成实验.材料:卵巢来源于孕龄为18～20 d SD大鼠胚胎.取阴道脱落细胞涂片证实有正常动情周期未交配过的SD成年雌性大鼠作为移植对象,分4组:正常对照组(n=10)、去势对照组(n=10)、新鲜胚胎卵巢移植组(n=25)、冷冻胚胎卵巢移植组(n=25).方法:正常对照组仅行皮肤筋膜肌肉切开缝合术,去势对照组切除双侧卵巢组织.将孕龄为18～20 d的新鲜或经超速冷冻法冷冻复苏的大鼠胚胎卵巢植入去势后4周的大鼠颈部皮下作为实验组,分别为新鲜移植组和冷冻移植组.主要观察指标:通过阴道脱落细胞的观察和血清雌二醇、孕酮的测定了解大鼠内分泌恢复情况,并对移植卵巢进行组织学观察.结果:新鲜移植组和冷冻移植组分别有52.17%和38.01%大鼠恢复了动情周期,两组血清雌二醇和孕酮在分别在35和49 d恢复到正常,且动情周期天数与正常对照组比较,差异无显著性意义.冷冻移植组大鼠恢复动情周期虽稍短于新鲜移植组,但差异并无统计学意义.63 d后取出移植物观察,见移植物色泽红润,表面有丰富的血管形成,镜下见卵巢内有大量的小动脉和小静脉;移植物组织学检查发现卵泡的发育,光镜下可见不同发育阶段的卵泡,有成熟卵泡和黄体形成,形态与正常卵巢无明显差别.结论:大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后能存活、生长发育并具有与正常卵巢相似的内分泌功能;超速冷冻法能较好的保存胚胎卵巢的活性,复苏后与新鲜胚胎卵巢组织具有相同的生理活性.     

大鼠卵巢组织的冷冻移植

背景:玻璃化冷冻是应用高浓度的冷冻保护液结合极快的制冷速度,使细胞快速冷冻,避免细胞内外冰晶形成对细胞的破坏作用,是一种比较新的冷冻方法,具有操作简单、冷冻效率高等特点.目的:采用玻璃化冷冻技术冷冻大鼠卵巢组织,比较4种冷冻保护剂对大鼠卵巢组织学和功能的影响.方法:将大鼠随机数字表法分为6组,每组6只:二甲基亚砜+乙二醇组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖组、二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组、去势组、正常对照组.4冷冻组摘除卵巢后应用相应的冷冻保护液冻存,去势组仅摘除卵巢不冻存、不移植,正常对照组不作处理.冻存2周后解冻复苏行同体异位移植,将卵巢组织植入大鼠后肢大腿内侧.移植后30 d,观察阴道上皮类型及动情周期;移植后3个月,经腹主动脉采血检测血清雌二醇水平;回收卵巢组织做组织学检查.结果与结论:4冷冻组均可见卵巢组织结构受损表现,原始卵泡的形态正常率分别为67.9%,71.6%,80.5%,59.4%,初级卵泡形态正常率分别是41.6%,52.3%,55.9%,36.7%.二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组卵泡正常率较二甲基亚砜+乙二醇组、乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高(P<0.05);不同发育阶段卵泡构成比差异无显著性意义,均未见典型的次级卵泡.受损的卵细胞主要表现为体积变小、胞浆内出现空泡、核皱缩等.4冷冻组未出现典型动情周期的细胞类型.移植物自周围组织获得可见的血管供应,将卵巢组织块连接形成网络.移植物内毛细血管丰富,皮质中可见成群的原始卵泡,初级卵泡、次级卵泡所占比例低于原始卵泡,形态与正常者相似.4种冷冻方法冻存卵巢组织血清雌二醇水平较正常对照组明显降低(P<0.01),二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组高于其他冷冻组(P<0.05).结果提示4种冷冻方法均对大鼠卵巢组织有一定程度破坏,初级卵泡的损伤大于原始卵泡.冻存复苏后,卵巢功能恢复,但并不完全,二甲基亚砜+乙二醇+蔗糖+乙酰胺组效果优于另外3组,但移植后动物没有出现规律的动情周期,提示冷冻方法尚需进一步完善.     

枸杞多糖对胎儿卵巢组织冷冻保存的影响

背景：抗氧化剂的应用对于提高卵巢组织冻存后的活力起着很重要的作用。目的：通过观察冷冻保存的胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠肾被膜下的发育情况,探索枸杞多糖在卵巢组织冷冻保存中的作用。方法：实验分为4组。①新鲜移植组：取材后的新鲜胎儿卵巢组织直接进行移植。②冻存对照组：冷冻保护液为基液。③β-巯基乙醇组：冷冻保护液为基液添加100μmol/Lβ-巯基乙醇。④枸杞多糖组：冷冻保护液为基液添加400mg/L枸杞多糖。对冷冻复温后的胎儿卵巢皮质块进行祼鼠的肾被膜下移植,并于移植后12周取材。结果与结论：各组在移植物的存活率上差异无显著性意义（P〉0.05）。在卵泡计数上冷冻对照组最低（P〈0.05）。在卵泡的存活率上,各组间差异均有显著性意义,其中以冷冻对照组最低,枸杞多糖组最高。β-巯基乙醇组和枸杞多糖组卵巢超微结构较冷冻对照组保存的好。提示400mg/L的枸杞多糖和100μmol/L的β-巯基乙醇有利于卵巢组织的冷冻保存,并可显著提高冷冻卵巢组织移植后的存活率。     

冻存卵巢组织移植后抗损伤处理对移植结局的影响

背景:卵巢组织移植是无血管吻合移植,改善卵巢组织对移植后损伤的耐受力是提高冻存后移植卵巢组织卵泡存活和发挥功能的关键环节.目的:比较冻存后卵巢组织自体异位移植后,应用血管内皮生长因子、维生素E、黄芪抗损伤处理对卵巢组织形态和功能恢复的影响.方法:将成年雌性Wistar大鼠随机数字表法分为4组:正常对照组、去势组、自体新鲜卵巢组织移植组(卵巢组织未冻存,直接移植)、冷冻保存卵巢组织移植组.冷冻保存卵巢组织移植组移植后分3组干预:未经抗损伤处理组,血管内皮生长因子、维生素E、黄芪联合抗损伤组,血管内皮生长因子、维生素E联合抗损伤组.移植2个月后检测血清雌二醇水平,苏木精-伊红染色后观察卵泡的形态及正常卵泡数量.结果与结论:应用血管内皮生长因子、维生素E、黄芪联合抗损伤组较未用药物组血清雌二醇水平升高,初级卵泡数量增加,且差异显著(P＜0.05),即抗损伤药物对卵巢形态和功能的恢复有作用.血管内皮生长因子、维生素E、黄芪联合抗损伤组血清雌二醇水平、初级卵泡数量略高于血管内皮生长因子、维生素E联合抗损伤组,但差异无显著性意义.尚不能认为加用黄芪抗损伤处理效果更佳.提示自体异位移植后应用血管内皮生长因子、维生素E、黄芪抗损伤处理对卵巢形态和I功能的恢复均有作用.     

枸杞多糖对胎儿卵巢组织冷冻保存的影响◆

背景:抗氧化剂的应用对于提高卵巢组织冻存后的活力起着很重要的作用.目的:通过观察冷冻保存的胎儿卵巢组织异种移植到裸鼠肾被膜下的发育情况,探索枸杞多糖在卵巢组织冷冻保存中的作用.方法:实验分为4组.①新鲜移植组:取材后的新鲜胎儿卵巢组织直接进行移植.②冻存对照组:冷冻保护液为基液.③β-巯基乙醇组:冷冻保护液为基液添加100μmol/L β-巯基乙醇.④枸杞多糖组:冷冻保护液为基液添加400 mg/L枸杞多糖.对冷冻复温后的胎儿卵巢皮质块进行祼鼠的肾被膜下移植,并于移植后12周取材.结果与结论:各组在移植物的存活率上差异无显著性意义(P >0.05).在卵泡计数上冷冻对照组最低(P <0.05).在卵泡的存活率上,各组间差异均有显著性意义,其中以冷冻对照组最低,枸杞多糖组最高.β-巯基乙醇组和枸杞多糖组卵巢超微结构较冷冻对照组保存的好.提示400 mg/L的枸杞多糖和100μmol/L的β-巯基乙醇有利于卵巢组织的冷冻保存,并可显著提高冷冻卵巢组织移植后的存活率.     

不同冷冻方案保存人类卵巢组织的活性比较

背景：卵巢组织冷冻保存被认为是保存女性生殖内分泌功能安全、有效的方法,但目前尚无统一确定的方案。 目的：探讨3种冷冻方案对人类卵巢组织保存冷冻效果及卵泡活性的影响。方法：采用丙二醇慢速程序冷冻法、二甲基亚砜玻璃化冷冻法、液氮直投法对20例人类卵巢组织进行冷冻保存,复苏后采用细胞存活/死亡荧光分析法计数有活性的细胞,体外培养测定培养液雌二醇浓度及各级卵泡计数,判断3种不同冷冻方案对人类卵巢组织活性的影响。结果与结论：不同冷冻方案冻融后卵巢组织块的活性卵泡率均低于新鲜卵巢组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组最低,液氮直投法组与慢速程序冷冻法组差异无显著性意义。体外培养各冷冻组分泌的雌二醇水平比较,第4天时二甲基亚砜组低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）,至第8天时各冷冻组雌二醇水平与新鲜卵巢组一致。培养14 d组织学观察,各组卵巢组织内生长期卵泡比例增多,始基卵泡仍然占最主要的。新鲜卵巢组织正常卵泡的总数高于冷冻组（P 〈 0.05）,二甲基亚砜组的正常卵泡数低于液氮直投法组和慢速程序冷冻法组（P 〈 0.05）。提示冷冻保存对卵巢组织卵泡有一定的损伤,但仍能保存大部分始基卵泡的活性,经体外培养后可进一步发育并具有分泌功能,在3种冷冻方案中,慢速程序冷冻法和液氮直投法的冷冻效果优于二甲基亚砜玻璃化冷冻法,液氮直投法操作简便,冷冻效果稳定。     

促卵泡刺激素干预改善绵羊卵巢组织玻璃化冻存后异种移植的效果研究

背景:卵巢皮质片移植是无血管吻合移植,因此,提高卵巢组织对冻存-解冻和移植后缺血的耐受力是提高冻存后移植物卵泡存活和延长功能寿命的关键环节.目的:观察促卵泡刺激素在玻璃化冻存过程中对绵羊卵巢组织形态和功能的保存效果,为成人卵巢组织的冻存提供技术方法.方法:BALB/c品系雌性裸鼠随机分为3组.均行羊卵巢皮质片裸鼠异位移植:①新鲜移植对照组,取材后即移植.②玻璃化冻存移植组,采用玻璃化冻存解冻后移植,所用液体均未添加促卵泡刺激素.③添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组,采用冷冻液、解冻液和培养液均添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存后移植.移植后检测受体鼠动情周期恢复率、恢复时间、卵泡数和发育状况,于移植后4周取移植卵巢进行组织学观察、并行血清雌二醇水平分析.结果与结论:含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比动情周期恢复率、每高倍视野卵泡计数差异均无显著性意义(P>0.05),卵泡计数高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05);动情周期恢复需要的天数接近于新鲜移植组,明显短于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P<0.05).移植后4周,含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组组织学观察见卵泡发育,未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组仅偶见原始卵泡.含促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组与新鲜移植组相比血清雌二醇水平差异无显著性意义(P>0.05),显著高于未添加促卵泡刺激素的玻璃化冻存移植组(P< 0.05).结果提示,在玻璃化液中加入促卵泡刺激素可提高冻存绵羊卵巢组织移植后卵泡存活率.     

长期力竭运动动情周期抑制模型大鼠卵巢组织形态和超微结构的变化

背景：研究运动性月经失调女性性腺和卵巢的功能,以及形态学的改变对于探讨运动性月经失调的发生机制具有重要意义。目的：通过建立长期力竭运动致动情周期抑制大鼠模型,观察卵巢的组织形态和细胞超微结构的变化。方法：正常3月龄SD雌性大鼠随机分成对照组和模型组,其中模型组大鼠每日进行一次力竭游泳运动直至其动情周期紊乱,取卵巢组织,苏木精-伊红染色,光镜下观察卵巢组织形态变化,电镜下观察卵巢细胞超微结构的变化。结果与结论：与对照组相比,模型组大鼠卵巢典型生长卵泡和新鲜黄体明显减少,原始卵泡、闭锁卵泡则相对增加,其颗粒细胞、黄体细胞内细胞器明显减少而含有大量的脂滴。提示长期力竭运动可抑制大鼠卵巢卵泡的发育、成熟、排卵与黄体形成,并使卵巢细胞的超微结构发生抑制性改变。     

长期力竭运动动情周期抑制模型大鼠卵巢组织形态和超微结构的变化

背景:研究运动性月经失调女性性腺和卵巢的功能,以及形态学的改变对于探讨运动性月经失调的发生机制具有重要意义。目的:通过建立长期力竭运动致动情周期抑制大鼠模型,观察卵巢的组织形态和细胞超微结构的变化。方法:正常3月龄SD雌性大鼠随机分成对照组和模型组,其中模型组大鼠每日进行一次力竭游泳运动直至其动情周期紊乱,取卵巢组织,苏木精-伊红染色,光镜下观察卵巢组织形态变化,电镜下观察卵巢细胞超微结构的变化。结果与结论:与对照组相比,模型组大鼠卵巢典型生长卵泡和新鲜黄体明显减少,原始卵泡、闭锁卵泡则相对增加,其颗粒细胞、黄体细胞内细胞器明显减少而含有大量的脂滴。提示长期力竭运动可抑制大鼠卵巢卵泡的发育、成熟、排卵与黄体形成,并使卵巢细胞的超微结构发生抑制性改变。     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞腹腔异体移植以及对肾上腺的影响术

背景：应用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊技术包裹细胞进行异体移植,被证明是一种可避免受体产生免疫排异的有效方法。目的：观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化卵巢细胞种植于去卵巢大鼠腹腔后对受体大鼠。肾上腺的影响。设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2007—03,2008—09在首都医科大学生殖医学研究中心完成。材料：取Wistar大鼠卵巢分离培养卵巢细胞,进行微囊化处理,制备包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊。方法：将40只雌性Wistar大鼠随机分为4组：去势组于无菌条件下切除双侧卵巢;微囊移植组手术摘除双侧卵巢后腹腔移植包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊;雌激素替代治疗组手术摘除双侧卵巢后腹腔注射乙烯雌酚0．2mg／kg,每3d注射1次。正常对照组不进行任何处理。主要观察指标：干预后30d放射免疫法检测大鼠血清中雌激素水平,观察肾上腺切片的形态学特点,并利用免疫组织化学SP法检测各组大鼠肾上腺皮质各层增殖细胞核抗原表达变化。结果：①放射免疫法检测正常对照组,雌激素替代治疗组以及微囊移植组雌激素水平明显高于去势组,而正常对照组,微囊移植组,雌激素替代治疗组之间雌激素水平差异无显著性意义。②去势组肾上腺皮质网状带增厚,网状带与球束状带比值增大,束状带和网状带增殖细胞核抗原阳性表达都增加;而微囊移植组及雌激素替代治疗组增殖细胞核抗原阳性细胞明显低于去势组,差异具有显著性意义。结论：微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,所分泌的雌激素可以纠正肾上腺皮质因卵巢摘除而导致的形态改变,并与雌激素替代治疗疗效相近。     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢激素分泌细胞异体移植对垂体形态学的影响

目的:已有研究证实海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊对机体无明显毒副作用且生物相容性好,应用这一技术包裹细胞,可明显延长异体内移植物的存活时间.将海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞体外培养后进行异体移植,观察其治疗卵巢功能丧失模型大鼠的可行性及垂体形态学变化.方法:实验于2006-03/2007-09在首都医科大学生殖医学研究中心完成.①实验动物:30只Wistar雌性大鼠,随机分为正常对照组,卵巢摘除组,微囊移植组,每组10只.实验过程中对动物处置符合动物伦理学要求.②实验方法:卵巢摘除组:无菌条件下切除双侧卵巢:微囊移植组:海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠生物膜包裹传至P2代的大鼠卵巢细胞,制成微囊体外培养,收集24 h培养液以检测雌二醇分泌状态;将微囊化的卵巢细胞移植入已行双侧卵巢切除术的大鼠腹腔.用阴道涂片观察大鼠动情周期恢复情况.术后40 d麻醉后处死动物,放射免疫法检测血清雌二醇质量浓度,垂体组织常规石蜡包埋,连续切片,分别进行苏木精-伊红染色和雌、孕激素受体免疫组织化学染色.LEICA Q500IW自动图像分析仪对垂体细胞的面积,雌、孕激素受体吸光度值进行定量测定.结果:①放射免疫法检测培养液显示,微囊化的卵巢激素分泌细胞具有继续合成和分泌雌二醇的功能.②检测血清中雌二醇质量浓度结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义,正常对照组和微囊移植组之间差异无显著性.⑤动情周期未恢复.④苏木精-伊红染色可见卵巢摘除组大鼠垂体中有大量阉割细胞,平均面积＞180 μm2,与卵巢摘除组比较,微囊移植组大鼠垂体中细胞平均面积和阉割细胞数目均显著减少.⑤垂体雌、孕激素受体免疫组织化学吸光度值结果显示,卵巢摘除组明显低于正常对照组和微囊移植组,差异具有显著性意义.结论:微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,并可以减少垂体内阉割细胞的形态和数目,提高垂体细胞雌激素受体和孕激素受体的表达,提示移植后细胞对垂体有反馈调节作用.     

宿主自身卵巢对移植胚鼠卵巢生长发育影响的实验研究

目的:探讨宿主自身卵巢与移植胚鼠卵巢的生长发育是否存在相互影响的关系.方法:将胚鼠卵巢分别移植至单侧卵巢摘除及去势雌鼠皮下,观察同时存在的自身卵巢对移植卵巢生长发育有无影响,以及自身卵巢是否受移植卵巢影响.结果:单侧卵巢摘除宿主卵巢黄体总体均数较高,差异有统计学意义(F=11.611.P=0.001).去势宿主体内移植的胚胎卵巢中的原始卵泡会继续生长发育出各阶段卵泡,而单侧卵巢摘除者体内的移植停止发育,抑或纤维化吸收.结论:宿主体内卵巢与移植胚鼠卵巢卵泡存在相互竞争关系,自身卵巢较移植物卵泡更具优势.     

海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化大鼠卵巢细胞腹腔异体移植以及对肾上腺的影响

背景:应用海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊技术包裹细胞进行异体移植,被证明是一种可避免受体产生免疫排异的有效方法.目的:观察海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊化卵巢细胞种植于去卵巢大鼠腹腔后对受体大鼠肾上腺的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-03/2008-09在首都医科大学生殖医学研究中心完成.材料:取Wistar大鼠卵巢分离培养卵巢细胞,进行微囊化处理,制备包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊.方法:将40只雌性Wistar大鼠随机分为4组:去势组于无菌条件下切除双侧卵巢;微囊移植组手术摘除双侧卵巢后腹腔移植包裹卵巢细胞的海藻酸钠-多聚赖氨酸-海藻酸钠微囊;雌激素替代治疗组手术摘除双侧卵巢后腹腔注射乙烯雌酚 0.2 mg/kg,每3 d注射1次.正常对照组不进行任何处理.主要观察指标:干预后30 d放射免疫法检测大鼠血清中雌激素水平,观察肾上腺切片的形态学特点,并利用免疫组织化学SP法检测各组大鼠肾上腺皮质各层增殖细胞核抗原表达变化.结果:①放射免疫法检测正常对照组,雌激素替代治疗组以及微囊移植组雌激素水平明显高于去势组,而正常对照组,微囊移植组,雌激素替代治疗组之间雌激素水平差异无显著性意义.②去势组肾上腺皮质网状带增厚,网状带与球束状带比值增大,束状带和网状带增殖细胞核抗原阳性表达都增加;而微囊移植组及雌激素替代治疗组增殖细胞核抗原阳性细胞明显低于去势组,差异具有显著性意义.结论:微囊化大鼠卵巢细胞异体移植后,可在受体大鼠体内继续合成和分泌雌二醇,所分泌的雌激素可以纠正肾上腺皮质因卵巢摘除而导致的形态改变,并与雌激素替代治疗疗效相近.     

玻璃化冷冻对胚胎体内外发育潜能的影响

目的观察新鲜8-细胞胚胎和玻璃化冷冻复苏8-细胞胚胎在囊胚形成率、囊胚孵出率及胚胎种植率、小鼠出生率的差异,探讨玻璃化冷冻对胚胎体内外发育潜能的影响。方法性成熟期雌鼠（〉6～7周龄）106只,取2-细胞胚胎,培养至6～8细胞胚胎时分为新鲜胚胎进行移植（新鲜移植组）和玻璃化冷冻（玻璃化冷冻组）,2周后复苏移植。2组各取50枚移植前胚胎,体外培养48～72h,观察2组胚胎体外培养发育至囊胚及囊胚孵出情况。新鲜胚胎及复苏后的8-细胞胚胎经1～3h培养,选择外形正常胚胎移植于假孕63～67h的受体母鼠的两侧子宫中,妊娠17～20d自然分娩后记录产仔数,比较2组妊娠率、小鼠出生率。结果新鲜移植组囊胚形成率、孵出率、妊娠率、出生率分别为92%,84%,48.93%,13.16%,玻璃化冷冻组囊胚形成率、孵出率、妊娠率、出生率分别为90%,86%,47.06%,12.62%,2组差异均无统计学意义（P〉0.05）。结论玻璃化冷冻复苏对小鼠胚胎体内外发育潜能无明显影响。     

化学去细胞尿道在大鼠皮下的埋置

背景：有研究提出了移植排斥反应的实质是受者免疫系统对供者移植物抗原的免疫应答反应。目的：验证化学萃取去细胞处理对同种异体尿道移植抗原性的影响。方法：取SD大鼠尿道共20根，每段长1 cm。其中10根采用化学去细胞法处理大鼠尿道的免疫原性成分，使其成为去细胞尿道；另外10根不做去细胞处理为新鲜尿道。在10只Wistar大鼠背部皮下植入去细胞尿道，另取10只大鼠背部皮下植入新鲜同种异体尿道。6周后取材行大体和组织学检查。结果与结论：20只Wistar大鼠在皮下埋植尿道后均无自嗜肢体现象，切口愈合良好，饮食正常，无溃疡发生。6周后取材大体观察可见去细胞尿道周围有组织膜形成，而新鲜尿道未见组织膜形成。苏木精-伊红染色可见去细胞尿道逐渐被吸收，被平滑肌组织取代，并可见大小不等血管长入去细胞尿道内，部分有形成血窦的倾向；对照组尿道未见吸收，未见血管长入。提示化学去细胞尿道在大鼠体内逐渐形成类似正常尿道的组织材料，说明化学去细胞同种异体尿道移植的抗原性明显降低，可替代正常尿道海绵体组织。     

人卵巢组织冷冻保存及其评价方式的研究与进展

背景：如何保存有生育需求的患者的卵巢功能使其能获得一定的生育能力,具有重要的意义及广阔的应用前景。目的：综合近年来卵巢组织冷冻的相关研究,对保存及评价方法作以综述,以探讨如何建立最佳的卵巢组织冷冻方案。方法：由第一作者检索1994年1月至2014年1月PubMed数据及万方数据库相关文献。英文检索词为ovariantissue,ovariantissuecryopreservation,freezingfactors;中文检索词为卵巢组织,卵巢组织冷冻,冷冻影响因素。纳入与卵巢组织冷冻技术、影响冷冻化效果的因素、冷冻组织复苏及人卵巢组织移植相关的文献59篇进行分析。结果与结论：目前,卵巢组织冷冻主要分为慢速冷冻、快速冷冻及玻璃化冷冻技术,而不同的患者、组织切片的大小、冷冻保护剂种类、渗透时间及冷冻载体的不同,都会影响到冷冻效果。卵巢组织复苏后,主要通过组织学显微镜下观察卵泡及颗粒细胞的形态并进行计数,观察亚细胞结构的改变评价冻融效果;凋亡信号的检测;免疫组织化学分析检测复苏后增殖及凋亡相关的信息;体外培养检测内分泌水平的变化;基因水平的检测等。近年来,卵巢组织冷冻后的临床应用是将冷冻复苏后的组织进行移植,使患者恢复生殖内分泌功能,或获取成熟的生殖细胞,从而保存女性生育能力。然而,卵巢组织冷冻仍存在一些问题尚需进一步研究。     

不同移植方式对胎鼠脊髓移植物成活生长的效果评估

目的：通过单纯胚胎脊髓移植和胚胎脊髓大网膜双重移植两种方式,分析胎鼠脊髓移植物成活生长情况及形态学变化,为脊髓损伤找寻一条新的治疗途径.方法：实验于2000-01/2002-01在武汉科技大学附属博爱医院神经外科实验室完成.选取Wistar大鼠90只,随机分为两组：单纯胚胎脊髓移植组48只,胚胎脊髓大网膜双重移植组42只.显微镜下造成两组鼠脊髓半侧损伤,取孕14 d的胎鼠脊髓1.0～2.0 mL移植于单纯胚胎脊髓移植组大鼠的脊髓损伤处,胚胎脊髓大网膜双重移植组在此基础上用大网膜覆盖于胚胎脊髓损伤处.术后14 d将两组存活的实验鼠按Ducker＇s评级方法进行瘫痪肢体功能测定（0级：完全瘫;1级：能自主运动,但不能支撑体质量;2级：能站立但不能行走;3级：能行走,但困难伴痉孪;4级：能跑,但有轻度共济失调;5级：正常运动）.分别于术后15,60,120 d将大鼠断头处死,电镜观察移植物存活生长情况及形态学变化.结果：实验纳入大鼠90只,移植术后死亡43只,共47只大鼠进入结果分析.①术后14d两组大鼠移植物的存活率：单纯胚胎脊髓移植组有9只大鼠的移植物存活,存活率52.94%;胚胎脊髓大网膜双重移植组有26只大鼠的移植物存活,存活率86.67%,两组差异显著（P＜0.05）.②术后14 d两组大鼠瘫痪肢体的肌力恢复情况比较：单纯胚胎脊髓移植组移植物存活的9只鼠中仅有2只肌力恢复至Ⅰ～Ⅱ级,胚胎脊髓大网膜双重移植组移植物存活的26只鼠其肌力均得到恢复,其中18只恢复正常.③术后不同时间两组大鼠存活移植物的形态学变化：术后15 d,电镜下移植物内神经细胞生长分化,细胞器增多,结构正常,生长旺盛,并见幼稚神经元发出的粗大神经生长锥;术后120 d则演变为成熟神经元,移植物与宿主有血管沟通现象及新生血管和新髓鞘形成.结论：胚胎脊髓大网膜双重移植治疗脊髓损伤的效果明显优于单纯胚胎脊髓移植,大网膜移植是移植物成活生长及肢体肌力功能恢复的重要因素,提示胚胎性神经组织移植在中枢神经系统损伤的治疗中具有独特作用.     

卵巢移植及移植卵巢的保存

目的:结卵巢移植的研究现状及卵巢组织的冷冻解冻方法。资料来源:应用计算机检索Medline1996-01/2006-12与卵巢移植相关的文章,检索词为“ovary transplantation,auto-ovary transplantation,heterologous transplantation,cryopreservation,vitrification,hysterocarcinoma”,限定文献语种为“English”;同时检索万方数据库2000-01/2006-12相关文章,检索词为“卵巢移植,自体移植,异种移植,低温保存,玻璃化冷冻”,限定文献语种为中文。资料选择:共检索到相关文献280余条,选择卵巢移植及卵巢组织的冷冻解冻方法相关文章,无论观察对象是人还是动物均纳入,筛除明显重复文献。资料提炼:将筛选的文献进一步查找全文,纳入35条文献进行综述。其中26篇论述卵巢的自体移植、异体移植及异种移植的研究进展,另外9篇是介绍卵巢组织的冷冻解冻方法以及各种方法的差异。资料综合:目前卵巢的移植可以分为自体移植、异体移植、异种移植:①目前人类卵巢组织的自体移植无论是异位还是原位移植有效性和实用性尚不完全清晰。理论上自体原位移植在卵泡的发育和恢复生育功能上更具有优势,但是,在实际观测临床应用中,卵巢组织自体异位移植仍然是最佳首选。②目前同种异体移植面临的最大难题就是免疫排斥反应,其次是受体提供者的问题;另外胚胎卵巢组织作为移植物所具有的优越性越来越受到关注,但是在应用于临床中除了有伦理道德等社会问题,还存在潜在的检测不出的基因的异常表达等技术检测问题需要解决。③异种移植仅处于实验室研究阶段,迄今为止绵羊、猪、猫、猴和人等卵巢组织已经作为材料用于实验室异种移植中。在卵巢组织的移植过程中,卵巢组织的冷冻方法有慢速冷冻法、快速冷冻法和玻璃化冷法;大多数冻存的卵巢组织应用快速复温法解冻。结论:随着免疫移植学、卵巢组织冻存技术的发展,卵巢组织的移植技术将成为解决女性生殖及内分泌的最佳有效途径。但是就目前发展状况来看,还存在许多亟待解决的问题。     

化学去细胞神经同种异体移植后近期运动功能的恢复

目的：研究去细胞同种异体神经移植修复大型哺乳类动物粗大和长段周围神经缺损的效果。方法：15只犬分成去细胞神经同种异体移植组6只、自体神经移植组6只、新鲜神经同种异体移植组3只。右侧坐骨神经主干造成5．0cm长缺损，分别以上述3种神经移植物桥接修复。术后6个月进行步态分析：结果：同种异体移植组和自体神经移植组功能恢复一般情况相似．正常组、同种异体移植组及自体神经移植组犬距小腿关节角度平均极大值分别为59．0&;#176;,58.0&;#176;和61．9&;#176;，平均极小值分别为16．4&;#176;，7．6&;#176;和8．4&;#176;。新鲜神经同种异体移植组无任何恢复；同种异体移植组和自体神经移植组的右后肢运动及步态周期非常相似，距小腿关节跖屈及背伸肌群的肌力均有一定程度的恢复，但不及正常犬。结论：化学去细胞神经同种异体移植修复犬坐骨神经长段缺损．在术后6个月近期运动功能恢复与自体神经移植相似。     

人骨软骨组织体外冷冻保存的效果

背景：异体骨软骨移植是治疗关节软骨缺损的有效方法,然而由于移植物体外有效保存时间短,限制了临床应用以及移植物的利用效率。目的：观察梯度降温冷冻保存同种异体关节软骨的保存效果。方法：将关节软骨块经体积分数10%二甲基亚砜预处理后,应用程序冷冻仪以-1℃/min行梯度降温至-4℃,-10℃,-20℃,-40℃各30min,最后至-80℃冷冻保存。结果与结论：保存1,3,6个月及1年后检测发现,与新鲜组相比,冷冻后软骨细胞存活率、细胞活性以及浅、中、深层的蛋白多糖水平下降（P〈0.05）,且软骨细胞存活率、细胞活性以及浅、中、深层的蛋白多糖水平随冷冻保存时间延长而降低（P〈0.05）,提示冷冻保存可有效地延长骨软骨移植物存活时间。