α地中海贫血的基因诊断技术研究

目的建立一套设有内对照的、简便可靠的、诊断广东省常见的3种缺失型α地中海贫血的基因芯片技术,用于α地中海贫血的分子诊断。方法自行设计5组引物,优化PCR反应条件,运用PCR,芯片杂交,根据荧光信号的有无及位置检测中国人常见的3种缺失型（--SEA,-α3.7,-α4.2）α地中海贫血。结果成功地检测中国人常见的3种缺失型α地中海贫血,检测结果与Southern blotting分析及直接测序的结果一致。结论本研究所建立的方法准确、重复性好,便于临床样本分析及人群中α地中海贫血基因的筛查。     

缺失型α地中海贫血的基因芯片检测

目的 探讨基因芯片诊断地中海贫血的方法。方法 共测定了50份已知基因分型的血液样品。抽提基因组DNA，经聚合酶链反应后。进行荧光标记及杂交，扫描芯片荧光信号图像，并将分析的结果与原基因类型进行对照。结果 10例正常个体及40例缺失型。地中海贫血患者被诊断，其中-SEA型29例，占72.5％；-α^3.7型6例，占15.0％；-α^4.2型12.5例，占7％。结果均与原诊断相符。结论 基因芯片法可快速、准确地筛查缺失型α地中海贫血。     

40例α地中海贫血的实验诊断及基因型

在2992例贫血原因待查者中,采用血红蛋白生化分析,诊断α地中海贫血40例,其中,HbH 14例,HbH-Bart′s 9例,α地中海贫血1 12例,α地中海贫血2 5例.继采用限制性内切酶图谱分析结合聚合酶链反应技术,检出基因型:--SEA/-α3.7 23例,--SEA/αα12例,αα/-α3.7 5例.     

α—地中海贫血的基因检测与诊断

α－地中海贫血（α－地贫）是严重危害人类健康的遗传病，其基因背景正不断被揭示，具有遗传异质性。目前检测患及其携带的水平正确正不断提高。随着ＤＮＡ分析技术的不断发展，α－地贫的基因诊断日臻完善，本就α－地贫的基因检测检测的ｇａｐ－ＰＣＲ，Ｍ－ＰＣＲ，ＰＣＲ－ＡＳＯ，ＡＲＭＳ，ＡＣＲＳ，ＤＧＧＥ，ＲＤＢ，ＰＣＲ－ＳＳＣＰ等方法进展作一综述。     

β地中海贫血的基因芯片检测

目的 探讨基因芯片诊断β地中海贫血的方法。方法 应用聚合酶链反应及基因芯片分析了我院24份已知基因分型的血液样品。结果 检测到正常个体4例，β地贫20例。包括6种突变类型CDl7(A→T)、IvS2nt-642(C→T)、CD41—42(-TCTT)、TATAbox nt-29(A→G)、TATA box nt-28(A→G)、CD37／N(G→A)。结论 基因芯片法能同时筛查多种β地贫突变，对开展遗传咨询、基因分析及产前诊断具有重要意义。     

PCR技术快速检测常见缺失型α-地中海贫血-2基因

目的 建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型α-地中海贫血-2的PCR技术,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法 α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌噙胞嘧啶核苷酸含量,使引物的选择和PCR扩增受到限制,对于左缺失型-α^4,2基因,在疾病基因序列测定的基础上,设计了一套全新的三引物PCR体系,用于区别正常和缺失等位基因,为检测右缺失型-α^3,7基因,则设计了四引物多套全新的三引物PCR体系,用于区别正常和缺失等位基因,为检测右缺失型-α^4.2基因和-α^3,7基因的分子诊断,正常人只有1条内对照扩增条带,而α-地中海贫血-2杂合子可见对应的2条扩增条带。结论 该体系可检测-α^3,7和-α^4,2缺失型α-地中海贫血-2基因,有望用于临床样本分子诊断稿发人群基因筛查。     

东莞地区新生儿α-地中海贫血的PCR筛查

目的 了解东莞地区新生儿α-地中海贫血发病率。方法 利用PCR法对1378例新生儿脐血。进行α-地中海贫血的筛查。结果 1378例脐血筛查中，有36例为右侧缺失杂合子(-αα^3.7／αα)，9例为左侧缺失杂合子(-αα^4.2／αα)，发病率分别为2．61％和0．65％。结论 该法快速、准确，可作为常规方法用于临床样品的分子筛查。     

胚胎植入前诊断α-地中海贫血一例

目的对1例α-地中海贫血患者进行植入前胚胎遗传学诊断。方法应用单细胞跨越断裂点荧光聚合酶链反应（PCR）检测技术对1例夫妇双方均为α-地贫杂合子进行了胚胎植入前诊断（PGD）。结果9个胚胎进行PGD,经PCR分析,共获得2个正常胚胎,其中一个胚胎体外发育停滞;2个杂合子胚胎,2个重型地贫胚胎,2个胚胎未检出;移植了3个胚胎,获得临床妊娠。孕17周时经脐带血穿刺,分别证实为完全正常胚胎和杂合子胚胎,现已出生两名健康男婴。结论应用PGD技术可对α-地贫进行胚胎植入前遗传筛查,达到优生的目的。     

闽南地区罕见α地中海贫血基因型分析

目的：了解闽南地区罕见α地中海贫血基因突变类型,减少漏诊、误诊。方法对1879例血液学筛查为小细胞低色素的疑似地贫患者DNA样本,采用多聚酶链反应（ PCR）、反向斑点杂交（ RDB）和测序技术进行基因分析。结果检出α地贫802例（42．68％）,罕见地贫6例（0．32％）,包括2例（0．11％）香港型（HKαα）,2例（0．11％）泰国缺失型,1例（0．05％）-α-27．6缺失型和1例（0．05％）融合基因。结论初步阐明闽南地区独特的罕见α地贫基因型,为减少临床地贫的漏诊、误诊提供指导。     

β地中海贫血的基因芯片检测

目的探讨基因芯片在诊断β地中海贫血中的价值。方法对经筛查初诊的32例β地贫进行基因芯片检测并与斑点杂交法进行比较分析。结果32例β地贫中,基因芯片技术检出32例,斑点杂交法检出30例,两者差别无统计意义(P>0.05)。结论基因芯片技术与斑点杂交法在β地贫的诊断上可以互相代替;基因芯片技术具有快速、高效、自动化等特点且简便、经济、省时省力,较斑点杂交法优越,宜提倡推广应用。     

反向点杂交快速诊断非缺失型α-地中海贫血

目的 建立一种简便快速筛查非缺失型α—地中海贫血点突变的反向点杂交(reverse dot blot,RDB)技术。方法 将生物素直接标记在引物上,选择性扩增人α2珠蛋白基因,将PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交,洗膜、显色后分析结果。结果 采用生物素标记的引物：Bio—C1和Bio—C3可选择性扩增α2珠蛋白基因,PCR产物长度为1085bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系,可以分辨出中国人群中已知的6种非缺失型α—地中海贫血点突变。结论 该反向点杂交检测体系无需巢式PCR扩增,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交;无需进行检测标记物(如生物素)反应,而将生物素直接标记在引物上;无需不同的洗膜条件,故较已报道的同类方法更为简单易行。RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α—地中海贫血点突变。     

单管多重PCR体系快速检测缺失型α地中海贫血

目的采用单管多重PCR体系快速检测三种最常见缺失型α地中海贫血,并探讨该体系应用于临床基因诊断、产前诊断的可行性.方法采用单管多重PCR体系对21例血红蛋白H病和442例临床送检病例血样本进行α地中海贫血基因诊断,另2例取羊水进行产前诊断.结果21例H病中11例为右缺失型H病(-α3.7/--),占52.4%;10例为左缺失型H病(-α4.2/--),占47.6%.442例送检病例中正常(αα/αα)302例;140例为缺失型α地贫,其中东南亚缺失(--SEA/αα)123例,占87.9%(123/140),右失型(-α3.7/αα)10例,占7.1%(10/140),左缺失(-α4.2/αα)7例,占5.0%(7/140).2例羊水中一例为Hb Bart's胎儿水肿胎(--/--),另一例为东南亚缺失(--SEA/αα).结论该体系能快速检测三种最常见缺失型α地中海贫血,方法准确、简便、可靠、重复性好,可望广泛用于临床疑诊病例的基因诊断和产前诊断.     

α-地中海贫血的基因检测与诊断

α-地中海贫血(α-地贫)是严重危害人类健康的遗传病,其基因背景正不断被揭示,具有遗传异质性.目前检测患者及其携带者的水平正不断提高.随着DNA分析技术的不断发展,α-地贫的基因诊断方法日臻完善.本文就α-地贫的基因检测诊断的gap-PCR,M-PCR,PCR-ASO,ARMS,ACRS,DGGE,RDB,PCR-SSCP等方法进展作一综述.     

高效液相色谱技术检测α地中海贫血价值初探

目的探讨应用高效液相色谱技术(HPLC)快速诊断小儿α地中海贫血(α地贫)的可行性。方法收集经分子生物学方法诊断为α地贫的87例患儿EDTA-K2抗凝血标本2ml,采用HPLC方法测定各血红蛋白组分含量,对α地贫进行非基因检测。结果HPLC检出30例11天至3个月α地贫患儿均有一血红蛋白Bart′s(HbBart′s)峰,14例血红蛋白(HbH)病患儿均有一HbH峰。剩余的43例4个月至11岁标准型或静止型α地贫患儿未检出有任何异常峰。结论HPLC与基因分析对诊断3个月以内的α地贫以及HbH病患儿有很好的符合率。而对于4个月以上的标准型与静止型α地贫患儿无诊断意义。     

荧光定量PCR技术在α地中海贫血基因筛查与诊断中的研究

目的 了解本地区孕妇α地中海贫血基因携带情况及其血液学特点,为预防地中海贫血出生缺陷提供科学数据.方法 采用荧光定量PCR技术,对1000例孕妇进行α地中海贫血基因筛查与诊断,阳性标本用传统地中海贫血基因诊断方法进行验证;并同时用血红蛋白电泳技术对该1000例孕妇样本进行α地中海贫血筛查.结果 1000例孕妇中α地中海贫血基因携带16例,携带率为1.6％,基因型分别是：缺失型16例,突变型0例;传统α地中海贫血基因诊断方法验证：基因型分别是：缺失型16例,突变型0例,结果全部吻合;血红蛋白毛细管电泳筛查提示有α地中海贫血者5例.结论 本地区α地中海贫血基因携带率为1.6％,采用合理的方法进行育龄孕妇普遍筛查对预防出生缺陷的发生有积极意义.     

应用MAS PCR技术诊断β地中海贫血

本文应用多重等位基因特异ＰＣＲ技术，对４种常见的β地贫进行基因诊断，成功地对２例β患者进行基因诊断和１例β地贫高危胎儿进行产前诊断。结果表明多重等位基因特异ＰＣＲ人有简便、快速、准确和经济等优点，利于推广应用。     

应用MOEA技术快速诊断β-地中海贫血基因突变

β－地中海贫血（β－地贫）是我国南方诸省常见的遗传性血液病之一。由于目前对β－地贫尚缺乏有效的疗法，故开展产前诊断杜绝重型患儿的出生，是预防该病、提高我国人口素质的有效措施。聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合等位基因特异性寡核苷酸探针（ＡＳＯ）斑点杂交技术是...     

用SYBR-Green Ⅰ实时荧光PCR结合融解曲线分析法诊断α-地中海贫血

目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α-地中海贫血基因型的技术。方法应用SYBR-Green1进行两个实时荧光聚合酶链反应(real-time fluorescence polymerase chain reaction with SYBR-Green1,SYBR-PCR),检测左缺(-α4.2)、右缺(-α3.7)等位基因,同时进行融解曲线(dissociation curve,DC)和Tm(melting temperature)值分析。PCR产物重组到pCR2.1,重组子梯度稀释作为模板检测灵敏度,确定两种等位基因型(-α4.2,-α3.7)的检测下限,并对110份DNA样品进行检测。结果检测-α4.2和-α3.7的PCR产物长度分别为1.65kb、1.9kb,Tm分别为(81.5±0.5)℃、(82.5±0.5)℃,检测下限分别为9×102个拷贝、4.3×102个拷贝。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高10倍。结论SYBR-Green1实时荧光PCR结合融解曲线分析及Tm分析可以灵敏、准确地检测-α4.2、-α3.7、αα(包括αTα)及--SEA4种等位基因,从而为各种缺失型α-地中海贫血做出基因诊断。该技术具有自动化程度高,不需荧光标记探针,成本低,易质控,防污染,高通量等优点,适于临床推广应用。     

217例孕妇羊水产前诊断α地中海贫血基因分析

目的对217例可疑为中、重度α地中海贫血胎儿进行α地贫基因羊水产前诊断,以此降低出生缺陷率。方法应用裂口-聚合酶链反应（裂口-PCR）法及PCR结合反向点杂交技术（RDB-PCR）,对胎儿羊水样本进行中国人常见的α地中海贫血三种缺失型基因和三种突变型基因进行检测。结果在受检的217份羊水中,共检出正常胎儿50例（23.04%）,α地中海贫血静止型15例（6.91%）,轻型81例（37.32%）,中间型39例（17.97%）,重型32例（14.74%）。结论通过地贫基因检测技术行羊水产前诊断可有效的避免中、重度α地中海贫血胎儿的出生,从而降低出生缺陷率。     

α地中海贫血的分子基础及产前诊断

α地中海贫血（α地贫）,是世界上最常见的严重危害人类健康的单基因遗传病。其分子基础为珠蛋白基因缺陷导致珠蛋白链合成障碍,具有遗传异质性。目前,检测患者及其携带者的水平正不断提高。随着DNA分析技术水平的不断发展,α-地贫的基因诊断方法日臻完善,为α地贫的防治提供了有利条件,对优生优育和提高人口质量具有积极的意义。