基于DNA条形码（ITS2）的绞股蓝与其混伪品的分子鉴定方法分析

目的探讨基于ITS2序列的绞股蓝与其混伪品鉴定的新方法。方法从GenBank中下载绞股蓝及其混伪品的ITS2序列,用软件MEGA4.0等进行相关数据分析,通过ITS2数据库预测ITS2二级结构,并用最大简约法构建系统发育树。结果绞股蓝与其混伪品的ITS2序列存在差异,其二级结构在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异,绞股蓝最大种内K2P遗传距离远远小于其与混伪品的最小种间K2P遗传距离,构建的系统发育树显示绞股蓝与其混伪品可明显分开。结论基于DNA条形码的ITS2序列为绞股蓝及其混伪品的准确、简便鉴定提供了新的分子鉴定方法。     

基于ITS2序列的羌活及其混伪品的DNA条形码鉴定

目的 对羌活及其混伪品进行分子鉴定,以确保该药材的质量以及临床疗效。方法 利用PCR测序法,对样品进行核基因ITS2片段扩增并双向测序,所得序列经CodonCode Aligner拼接后,用软件MEGA 4.0进行相关数据分析,并构建邻接（NJ）树。利用已建立的ITS2数据库及其网站预测ITS2二级结构。结果 羌活与宽叶羌活ITS2序列长度均为228 bp,二者种内平均K2P（Kimura-2-parameter）遗传距离均远远小于其与混伪品的种间平均K2P遗传距离;由所构建的系统聚类树图可以看出,羌活与宽叶羌活均表现出了单系性,而同时又与其他混伪品明显分开;比较ITS2二级结构发现,羌活基原植物与其混伪品在4个螺旋区的茎环数目、大小、位置以及螺旋发出时的角度均有明显差异。结论 ITS2序列作为DNA条形码可以方便快捷地鉴别羌活及其混伪品,为其种质资源鉴定及临床安全用药提供了重要分子依据。     

土茯苓及其混伪品的鉴定

~~土茯苓及其混伪品的鉴定@张尚鹏$浙江东阳市人民医院!浙江东阳322100     

龙胆及其混伪品的鉴定

《中国药典》1990年版收载，龙胆为龙胆科植物茶叶龙胆、三花龙胆、龙胆、坚龙胆的干燥报及根茎。已有资料记载[1]以石竹科植物大花剪秋罗（称“甜龙胆”）和菊科植物兔儿伞的报及根茎；尚有用萝率科植物白薇、徐长卿的根及根茎伪充龙胆。我地区某医院曾因误用了龙胆的混伪品，     

冬虫夏草与其混伪品北虫草的ITS测序鉴别

目的:从分子水平鉴别冬虫夏草与其混淆品北虫草。方法:从冬虫夏草及其常见混淆品北虫草中提取DNA,以核基因组通用引物为引物进行扩增,扩增产物经纯化后,用PCR产物直接测序法进行测序。结果:测得各样品rDNA的ITS及5.8S rDNA完全序列,18S和28S rDNA部分序列,分别为冬虫夏草459bp、北虫草548bp;二者ITS具显著差异,其中ITS1差异性达33.31%、ITS2差异性达26.67%。结论:ITS序列可有效地鉴别冬虫夏草及其混淆品北虫草。     

吴茱萸与其混伪品的生药学鉴定研究概况

从吴茱萸的来源、产地、性状、显微结构、理化特性等方面综述了其正品及同属几种常见混伪品生药学鉴定的研究概况,为吴茱萸临床用药安全提供借鉴。     

砂仁及其混伪品的鉴别

砂仁原名缩砂，载于《开宝本草》，为常用芳香化湿中药，商品分国产（阳春砂、绿壳砂、海南砂等以成熟果实入药）和进口（缩砂的成熟果实、种子团、种子、果壳等）两种。由于砂仁在临床上使用量大，价格偏高等原因，近年来出现了以草豆寇、益智、白豆蔻等的种子充砂仁（砂米）流入医药市场。为确保砂仁质量，保证广大人民群众用药安全有效，今对其植物来源、植物形态、外观性状、显微组织特征等生药学作对照鉴别。１植物来源 ①砂仁（Ｆｒｕｃｔｕｓ Ａｍｏｍｉ）为姜科（Ｚｉｎｇｂｅｒａｃｅａｅ）植物阳春砂（Ａｍｏｍｕｍ Ｖｉｌｌｏｓ…     

巴戟天与常见混伪品的rDNA-ITS序列分析及其分子鉴定

目的比较巴戟天与常见混伪品之间的rDNA-ITS碱基序列的差异及其规律,同时为巴戟天及混伪品的指纹图谱鉴别提供分子标记。方法对巴戟天及其常见混伪品的rDNA-ITS进行了PCR扩增、测序,并运用CLUSTALX、MEGA软件对该区进行序列分析。结果测定了巴戟天及其混伪品的rDNA-ITS区序列,包括ITS1、5.8S和ITS2全长序列以及18S、26S部分序列。巴戟天与假巴戟天、羊角藤在ITS1和ITS2区的差异性分别为2.9%~5.8%和2.9%~4.2%,而与虎刺在ITS1和ITS2区的差异性则为21.2%和18.9%。根据ITS序列特征构建的系统树,混伪品假巴戟天与羊角藤首先聚类,然后与巴戟天聚在一起,而虎刺则单独聚为一支。结论rDNA-ITS序列可作为巴戟天与混伪品的一种较好的分子指纹图谱的标记方法。     

巴戟天及其伪品的psbA-trnH序列鉴定

目的 利用叶绿体基因psbA-trnH间区序列探讨巴戟天及其常见伪品大果巴戟、樟叶巴戟、羊角藤、虎刺的分子鉴定方法.方法 分别提取巴戟天及其伪品植物的总DNA,经PCR扩增纯化后,测序,利用Clustal X和MEGA 3.1软件对序列进行分析.结果 各样品psbA-trnH序列长度为306 bp,巴戟天及其伪品之间存...     

基于TCMGIS的建泽泻产地适宜性分析

目的 为福建泽泻的科学区划及种植提供产地适宜性分析. 方法选取海拔、土壤、降水量、日照、相对湿度等关键生态因子,应用中药材产地适宜性分析地理信息系统(TCMGIS)进行分析. 结果影响福建泽泻种植的生态因素很多,现产地以建瓯市、建阳市、同安县为主. 结论南平、漳州、三明、龙岩地区适宜大面积推广种植泽泻.     

柱前衍生RP-HPLC法测定泽泻中氨基酸的含量

目的 分析不同产地泽泻中氨基酸含量及其特征性。方法 采用邻苯二甲醛(OPA)、氯甲酸芴甲酯(FMOC)联合柱前衍生RP-HPLC测定泽泻中的17种氨基酸。结果 氨基酸质量浓度与峰面积呈良好的线性关系，r均在0．99以上。不同产地泽泻中氨基酸含量有一定差别。结论 该方法适宜泽泻药材中氨基酸含量的测定。     

泽泻有效部位对肾草酸钙结石模型大鼠肾组织骨桥蛋白表达的影响

目的研究泽泻有效部位对大鼠肾草酸钙结石形成和肾组织骨桥蛋白(OPN)表达的影响,探讨泽泻抑制尿结石形成的机制。方法采用现代植化和生物活性导向分离的方法分离、提取泽泻的有效部位。将30只大鼠随机分成3组对照组、模型组、泽泻组。以乙二醇和1α-羟基维生素D3ig制备大鼠肾草酸钙结石模型。检测各组大鼠血及尿生化、肾Ca2 水平、24h尿草酸分泌量和肾组织病理学改变,并采用免疫印迹(Western blotting)和半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分别观察各组大鼠肾组织OPN蛋白及其mRNA的表达水平。结果ig泽泻有效部位(主要以四环三萜类化合物为主)大鼠的血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、肾Ca2 水平、24h尿Ca2 分泌量、肾组织草酸钙晶体的分布、OPN蛋白及其mRNA的表达水平均显著低于模型组(P<0.01)。结论泽泻有效部位能抑制大鼠肾组织OPN的表达,减少肾组织草酸钙结晶的沉积,从而能有效抑制大鼠肾草酸钙结石的形成。     

泽泻的双波长HPLC指纹图谱研究

目的 采用双波长HPLC法建立泽泻指纹图谱,为科学评价和控制泽泻的质量提供依据。方法 色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm);流动相为乙腈-水;检测波长：254 nm(0～13.00 min),210 nm(13.01～60.00 min);体积流量：1.0 mL/min。结果 采用双波长对福建和四川两个产地20批泽泻进行指纹图谱研究,分别确定了18和23个共有峰,并指认其中3个色谱峰。结论 建立的双波长HPLC法色谱指纹图谱可以为泽泻药材的鉴别和质量评价提供依据。     

泽泻不同溶剂提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响

目的　研究泽泻不同溶剂提取物对大鼠尿草酸钙结石形成的影响 ,并确定其抑制尿草酸钙结石形成的有效部位。方法　通过 ig不同剂量的泽泻不同溶剂提取物对乙二醇和氯化铵诱导的大鼠肾草酸钙结石模型进行试验研究。结果　泽泻乙酸乙酯浸膏高剂量组大鼠的血清 Cr,BU N,肾 Ca2 +含量 ,2 4 h尿 Ca2 +分泌量 ,肾组织的草酸钙晶体沉积均明显低于成石组 (P<0 .0 5 )。结论　泽泻乙酸乙酯浸膏能抑制实验性高草酸尿症大鼠尿草酸钙晶体的形成 ,是泽泻抑制尿草酸钙结石形成的有效部位。     

一种泽泻混淆品的鉴定研究

目的：区别泽泻与混淆品的鉴别特征。方法：运用性状鉴别、显微鉴别和薄层色谱法对泽泻及混淆品进行了比较鉴别研究。结果：窄叶泽泻药材较小；显微特征内皮层细胞壁稍厚，木化，分泌腔较少；薄层色谱中在与23－乙酰泽泻醇－B标准品相对应位置上不显斑点。结论：以23－乙酰泽泻醇－B为对照品，按实验条件进行薄层色谱试验，可有效鉴别泽泻及其混淆品。     

泽泻中23-乙酰泽泻醇B的含量测定研究

目的 主要是确定泽泻的最佳采收时间、最佳炮制工艺、制定泽泻的定量标准，确保泽泻临床用药安全有效。方法 采用高效液相色谱法测定各样品中23－乙酰泽泻醇B的含量。结果 23－乙酰泽泻醇B的平均回收率为98．80％，符合分析要求。泽泻中23－乙酰泽泻醇B的含量以不低于0．050％为宜。结论 可作为泽泻定量控制的方法。     

泽泻炮制过程中23-乙酰泽泻醇B的转化

目的分析泽泻中三萜类成分在炮制加工过程中的变化。方法采用超临界流体色谱分离技术(SFC)及HPLC测定方法,对泽泻加工炮制前后的三萜类成分的变化进行研究。结果在泽泻药材加工成生泽泻饮片的烘干(70℃)过程中,有少量23-乙酰泽泻醇B转化成了24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B;而在泽泻盐制(190~200℃)及麸制(160~170℃)过程中,23-乙酰泽泻醇B则大量转化为24-乙酰泽泻醇A和泽泻醇B,两者又进一步转化成了泽泻醇A。结论在高温炮制过程中,泽泻药材中三萜类主成分23-乙酰泽泻醇B出现两条转变途径,一条是氧环开裂并重排生成24-乙酰泽泻醇A,进一步脱乙酰基转化成泽泻醇A;另一条是先脱乙酰基生成泽泻醇B,继而氧环开裂转化成泽泻醇A。     

微波消解-冷原子荧光分析法测定泽泻和南板蓝根的痕量汞

目的 建立泽泻、南板蓝根中痕量汞的测定方法.对样品的前处理方法和仪器工作条件进行探讨和优化.方法 采用硝酸-氢氟酸-过氧化氢体系微波消解-冷原子荧光法测定闽产中药建泽泻、南板蓝根中痕量汞.结果 平均回收率95.6%～104.8%,精密度＜3.5%.仪器工作参数:测定波长253.7 nm,负高压410 V,载气流量1.5 L/min,屏蔽气流量0.1 L/min,进样量0.5 L/min,样品还原时间40 s.结论 建立的微波消解-冷原子荧光法方便、快捷、准确,可用于南板蓝根、泽泻中痕量汞测定.     

建泽泻鲨烯合酶基因克隆及其生物信息学分析

目的 对建泽泻原萜烷型三萜类成分生物合成关键酶鲨烯合酶（squalene synthase,SS）进行基因全长的克隆和生物信息学分析。方法 以建泽泻总RNA为模板,运用同源克隆法和RACE技术克隆建泽泻SS基因的cDNA全长,并通过DNAMAN软件及ExPASy在线分析等方法对其进行生物信息学研究。结果 获得建泽泻SS基因全长cDNA,GenBank注册号为JX866770,序列分析表明,所克隆的cDNA序列全长为1 577 bp,包含一个长1 230 bp的开放阅读框架,编码409个氨基酸的蛋白,与其他药用植物具有较高的同源性。预测该蛋白的相对分子质量为4.68×10⁴,等电点为5.97,无信号肽,包含2个富含天冬氨酸（DXXDD）的保守功能域。结论 首次克隆获得建泽泻SS基因的全长cDNA,为泽泻原萜烷型三萜类成分生物合成途径阐明与生物工程应用提供科学依据。