肿瘤浸润淋巴细胞对结肠癌细胞的杀伤作用及机制

目的探讨肿瘤浸润淋巴细胞在结肠癌细胞杀伤中的作用及机制。方法从6例结肠癌患者转移淋巴结中分离TIL细胞,采用^51Cr释放法测定其杀伤结肠癌SW480细胞的作用;采用流式细胞术测定结肠癌细胞的凋亡;采用固定化蛋白印迹法（Western blot）测定TIL细胞和结肠癌细胞Fas、FasL蛋白的表达。结果TIL细胞能有效杀伤结肠癌SW480细胞,其杀伤作用明显强于淋巴因子活化的杀伤细胞（100：1,P=0.004;50：1,P=0.002;10：1,P=0.006）和细胞因子诱导的杀伤细胞（100：1,P=0.001;50：1,P=0.002;10：1,P=0.008）,差异具有统计学意义（P〈0.01）;TIL细胞能促进结肠癌细胞的早期凋亡;TTL细胞高表达FasL分子,而SW480细胞高表达Fas分子,不表达FasL分子。结论TIL细胞能有效杀伤不表达FasL分子的结肠癌细胞,其机制可能通过Fas/FasL通路诱导结肠癌细胞的凋亡。     

Fas和FasL在胆囊癌免疫逃逸中的作用

目的探讨Fas／FasL在胆囊癌免疫逃逸机制中的作用。方法（1）应用SP免疫组织化学法研究26例胆囊癌组织、18例胆囊腺瘤组织、3例胆囊上皮不典型增生组织和20例慢性胆囊炎组织中Fas蛋白和FasL蛋白的表达水平；（2）运用TUNEL法原位检测在上述4种组织中浸润的淋巴细胞的凋亡。（3）比较在不同的胆囊癌临床病理类型中Fas蛋白和FasL蛋白的表达情况和在原位胆囊癌组织浸润的淋巴细胞的凋亡情况。结果（1）Fas蛋白表达的阳性率在上述4种组织之间的差异无统计学意义。FasL蛋白表达的阳性率在胆囊癌组织显著高于慢性胆囊炎组织（χ^2=4．89。P〈0．05）；（2）浸润的淋巴细胞的凋亡数量在高分化癌显著低于低分化癌（t=2．52，P〈0．05）．在腺瘤和慢性炎症组织中未见到浸润的淋巴细胞的凋亡。（3）浸润的淋巴细胞的数量在腺瘤组织显著低于癌组织（t=6．99，P〈0．01），在慢性炎症组织显著低于腺瘤组织（t=3．66，P〈0．01）：在高分化癌显著低于低分化癌（t=5．31，P〈0．01），在NevinⅠ、Ⅱ、Ⅲ期显著低于Ⅳ、Ⅴ期（t=3．76。P〈0．01）。结论胆囊癌细胞表达的FasL通过诱导在癌组织浸润的淋巴细胞的凋亡从而使癌细胞逃避机体的免疫监视，它的上调表达在胆囊癌的分化、浸润和转移过程中扮演重要角色。     

Fas配体诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用

目的　探讨Fas配体 (FasL)诱导淋巴细胞凋亡与肾癌免疫攻击作用的关系。　方法　采用免疫组化技术检测 4 4例肾癌组织FasL表达及肿瘤周围浸润淋巴细胞 (TIL)凋亡情况 ,并应用肾癌细胞株 786 0、GRC 1与JurkatT淋巴细胞共培养检测T细胞凋亡率。SP法检测Ki6 7表达 ,评价肾癌预后。　结果　 (1) 4 4例肾癌组织FasL表达阳性率 4 6 .5 % ,高于正常肾组织的 2 3.2 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。随肾癌分期增加 ,FasL表达阳性率增加。肾癌FasL表达率与Ki6 7表达率呈显著正相关 (r =0 .93,P <0 .0 1)。 (2 )肾癌组织TIL凋亡率为 33.9% ,高于正常肾组织的3.5 % ,差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。肾癌FasL表达率与TIL凋亡率呈显著正相关 (r =0 .96 ,P <0 .0 1)。 (3) 786 0FasL表达率 18.6 % ,GRC 1表达率 2 .3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。Ju rkat细胞与 786 0细胞共培养的凋亡率 14 .9% ,与GRC 1共培养的凋亡率 1.3% ,二者差别有显著性意义 (P <0 .0 1)。中和抗体NOK 2中和 786 0细胞FasL后 ,与之共培养的Jurkat细胞凋亡率显著减少 (P <0 .0 1)。　结论　肾癌组织FasL表达增高 ,以此诱导淋巴细胞凋亡 ,实现对宿主的免疫攻击。     

大肠癌浸润淋巴细胞Fas配基表达与癌细胞凋亡的关系

目的　研究结肠直肠癌浸润淋巴细胞Fas配基 (FasL)表达与癌细胞凋亡的关系。　方法　用免疫组化方法检测 86例结肠直肠癌及切缘正常大肠组织的Fas蛋白、FasL的表达 ;用TdT酶介导的DNA3′ OH末端 缺口染色方法检测癌细胞的调亡指数 ,并分析浸润淋巴细胞FasL表达与癌细胞凋亡指数的关系。　结果　 86例结肠直肠癌组织呈Fas蛋白染色阳性 5 3例 (6 1 6 % ) ,正常大肠组织则未见染色 ,癌组织旁浸润淋巴细胞FasL染色阳性 6 9例 (80 2 % )。癌组织Fas蛋白阳性组中 ,浸润淋巴细胞FasL染色程度与癌细胞凋亡指数呈正相关 (P <0 0 1) ,FasL染色越强 ,凋亡癌细胞越多。Fas蛋白阴性组中则不存在这种相关性。　结论　癌旁浸润淋巴细胞通过其表面的FasL与大肠癌细胞表面的Fas蛋白作用 ,是诱导癌细胞凋亡的途经之一。提高癌细胞Fas蛋白的表达及应用特异性Fas抗体 ,将为大肠癌治疗提供新思路。     

Galectin-3在甲状腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨 Galectin-3在甲状腺肿瘤组织中的表达及其临床意义。方法：运用免疫组织化学方法，检测50 例甲状腺癌(其中甲状腺乳头状癌32例，甲状腺滤泡状癌18例)、45例甲状腺腺瘤及20例正常甲状腺组织中 Galectin-3的表达。结果：50例甲状腺癌中，Galectin-3表达阳性者达45例(90． 0%)，其中29例为强阳性；45例甲状腺 腺瘤中，仅2例(4． 4%)Galectin-3阳性者，且均为弱阳性；20例正常甲状腺 Galectin-3均为阴性。Galectin-3表达阳性 率在甲状腺癌中显著高于甲状腺腺瘤及正常甲状腺(P＜0． 01) 。甲状腺乳头状癌与滤泡状癌 Galectin-3表达阳性率无 显著差异(P＞0． 05) 。淋巴结转移者 Galectin-3表达阳性率与无淋巴结转移者相比无显著差异(P＞0． 05) ，但淋巴结转移 者 Galectin-3阳性表达强度显著高于无淋巴结转移者(P＜0． 05) 。结论：Galectin-3可作为鉴别甲状腺良、恶性肿瘤的重 要参考指标，其表达强度的检测有助于甲状腺癌转移的预测。     

CD44v6在甲状腺癌组织中的表达及其意义

目的 探讨甲状腺癌组织中CD44v6抗原的表达及其临床意义。方法 应用微波－ISAB免疫组织学法，检测50例甲状腺癌、45例甲状腺瘤和20例癌旁状腺组织中CD44v6的表达。结果 甲状腺癌中CD44v6表达阳性率（64．0％）显著高于甲状腺腺瘤（37．0％）和癌旁甲状腺组织（25．．0％（均P＜0．05）。CD44v6表达与甲状腺癌组织类型无关；CD44v6表达阳性率在淋巴结转移者显著高于无淋巴结转移者（P＜0．05）；病理分期Ⅲ－Ⅳ期病例显著高于病理分期Ⅰ－Ⅱ期病例（P＜0．05）。CD44v6阳性的甲状腺癌复发及死亡率显著高于CD44v6阴性者（P＜0．05）。结论 CD44v66表达对甲状腺癌恶性程度判断、生物学行为预测和预后评估是一种有意义的客观指标。     

结直肠癌组织中胃泌素的表达与Fas／FasL和天冬半胱氨酸蛋白酶的关系

目的了解胃泌素（GAS）mRNA及其蛋白在结直肠癌组织中的表达情况，并探讨其与结直肠癌细胞凋亡指数（AT）和凋亡调控基因Fas／FasL、天冬半胱氨酸蛋白酶（easpases）的关系。方法采用巢式RT-PCR方法检测79例结直肠癌组织中GAS的mRNA表达．用TUNEL法检测细胞凋亡情况，结直肠癌组织中GAS、Fas／FasL、caspase-3、caspase-8的蛋白表达采用免疫组织化学SP法。结果结直肠癌组织中GASmRNA与其蛋白表达呈正相关（rGAS=0．99，P〈0．01）．高、中分化结直肠癌组织中GASmRNA及其蛋白的表达明显低于低分化者（χ^2，（高与低）=10．47、10．23，均P〈0．01；χ^2（中与低）=6．68、4．95，均P〈0．05）；GASmRNA及其蛋白在乳头状腺癌、管状腺癌的阳性表达率明显低于黏液印戒细胞癌及未分化癌（χ^2（乳与黏印）=4．80、6．22，χ^2（乳与未）=5．44、8．43，χ^2（管与黏印）=4．40、4．38．χ^2（管与未）=4．92、6．43，均P〈0．05）；DukesA、B期的GASmRNA及其蛋白阳性表达率明显低于C、D期（χ^2=4．84、4．45，均P〈0．05）。GAS高、中表达组的细胞AI明显低于低表达组，差异有统计学意义（q（高与低）=6．71，q（中与低）=4．60，均P〈0．01）；FasL阳性表达率在GAS低、中、高表达3组间相比。差异具统计学意义（χ^2=9．35，P〈0．011，其中FasL在GAS高、中表达组的阳性表达率明显高于低表达组（χ^2（高与低）=6．24．χ^2（中与低）=4．74，均P〈0．05）：结论GAS对结直肠癌细胞凋亡的调控可能与Fas／FasL的表达失衡及其功能和信号系统的紊乱有关。GAS的检测可作为临床结直肠癌生物学行为的评估指标之一．     

Doxycycline抑制人肝癌细胞系HepG2生长的实验研究

目的：观察多西环素（Doxycycline）对人肝细胞性肝癌细胞系HepG：生长抑制和凋亡的作用，并初步探讨其作用机制。方法：不同浓度的Doxycycline（5、10、20、30和50mg／L）对体外培养人肝癌细胞系HepG：进行不同的时间干预（24、48和72h），MTT法测定细胞生长抑制率，TUNEL法检测细胞凋亡率，免疫细胞化学检测Fas、FasL及MMP-2蛋白表达的变化。结果：Doxycycline作用HepG2细胞48h和72h后，细胞生长被明显抑制，与无药对照组比较差异有统计学意义（P〈0．001），且呈时间、浓度依赖趋势。其细胞凋亡率较无药对照组也明显升高（P〈0．01）；20mg／L Doxycycline作用于癌细胞48h后，实验组FasL蛋白阳性表达较无药对照组明显升高，MMP-2蛋白阳性表达较无药对照组明显降低，两组差异均有统计学意义（P〈0．01），而Fas蛋白表达则差异无统计学意义（P〉0．05）。结论：Doxycycline对人肝癌细胞系HepG2具有明显的生长抑制和促凋亡作用，其机制可能与下调MMP-2、上调FasL从而启动Fas／FasL膜受体途径有关。     

Fas/FasL在强直性脊柱炎患者外周血T细胞亚群上的表达

目的检测强直性脊柱炎（As）患者外周血T细胞亚群上的Fas／FasL的表达水平，探讨Fas／FasL诱导的细胞凋亡在As免疫学发病机制中的作用。方法以临床确诊的60例As患者作为研究对象，同时选择30例正常对照，运用流式细胞仪（FCM）检测其外周血CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋T细胞亚群上的Fas／FasL表达水平。结果早、晚期AS患者外周血CD3^＋CD4^＋T细胞上的FasL的表达率分别为（0．59％、0．93％），CD3^＋CD8^＋T细胞上的FasL的表达率分别为（2．93％、4．32％），与健康对照组（0．48％、1．14％）比较，其表达率差异具有统计学意义（P〈0．05）；与健康对照组外周血CD3^＋CD4’、CD3^＋CD8’T细胞上的Fas表达率（58．25％、59．91％）比较，早期AS患者外周血CD3^＋CD4^＋T细胞上的Fas的表达率（64．75％）明显升高（P〈0．05），而CD3^＋CD8^＋T细胞上的Fas的表达率（48．64％）明显降低（P〈0．05），Fas在晚期AS患者外周血CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋T细胞上的表达率（57．63％、56．32％）无明显变化。结论Fas、FasL在外周血T细胞亚群上的表达水平与AS的病情发展阶段相关；Fas、FasL的异常表达所导致T细胞凋亡功能紊乱可能是AS发病的重要机制之一。     

甲状腺病变组织中端粒酶活性的测定及其意义

目的 了解几种常见甲状腺病变组织中端粒酶活性的区别。方法 用端粒重复序列扩增法测定19例甲状腺癌、15例甲状腺癌癌旁组织、21例甲状腺腺瘤、17例结节性甲状腺肿及13例正常甲状腺组织端粒酶的活性。结果 94．74％（18／19）的甲状腺癌表达端粒酶活性,与癌旁组织（6．67％）、甲状腺腺瘤（4．67％）、结节性甲状腺肿（0％）及正常甲状腺组织（0％）比较,差异均有显著性意义（P＜0．0001）。结论 端粒酶是甲状腺癌定性的良好标志物,且在甲状腺病变的鉴别诊断中具有重要意义。     

染料木黄酮对去势小鼠脾细胞凋亡及雌激素受体表达的影响

目的探讨染料木黄酮(GEN)对去势(OVX)小鼠脾细胞凋亡、凋亡基因Fas、FasL及雌激素受体(ER)亚型表达的影响。方法流式细胞仪检测不同浓度GEN对OVX小鼠脾细胞的凋亡率,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测细胞内Fas、FasL及ERα、ERβ mRNA的表达。结果OVX+GEN组与青年组相比,脾细胞凋亡率在GEN两个高浓度(37.0、92.5μmol/L)时都显著增高(P均<0.05);而Fas基因表达在GEN 92.5μmol/L时显著增高(P<0.05),FasL基因表达在GEN两个高浓度均显著高于青年组(P均<0.05);与OVX空白组相比,GEN最高浓度(92.5μmol/L)时凋亡率显著增高(P<0.01),Fas、FasL基因的表达均显著增高(P均<0.05)。ERα、ERβ基因的表达随GEN浓度增加而呈增加趋势,在GEN最高浓度(92.5μmol/L)时显著高于OVX空白组(ERα:P<0.05;ERβ:P<0.01)。结论高浓度GEN致脾细胞凋亡,与上调凋亡促进基因Fas、FasL基因表达有关。低浓度GEN可能逆转OVX小鼠脾细胞凋亡。高浓度GEN增加ERα、ERβ基因表达。GEN对脾细胞凋亡、ERs表达的调节可能不完全通过ER途径。     

复方苦参注射液诱导胃癌细胞凋亡的机制

目的探讨复方苦参注射液对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响及其可能机制。方法体外培养胃癌细胞系SGC-7901，四甲基偶氮唑盐（MTT）法测定药物对SGC-7901细胞生长的抑制作用；透射电镜下观察肿瘤细胞的超微结构变化；应用流式细胞术（FCM）检测肿瘤细胞凋亡情况和Fas、FasL蛋白的表达；分光光度法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶（caspase）-3活性的变化。结果不同浓度复方苦参注射液对SGC-7901细胞生长均有一定的抑制作用。0．5g／L、1．0g／L和1．5g／L复方苦参注射液组SGC-7901细胞凋亡率分别为39．80％、58．11％和79．00％，呈明显的量效关系；复方苦参注射液组以早期凋亡细胞为主，氟尿嘧啶对照组以晚期凋亡细胞为主。Fas蛋白表达及FasL蛋白表达与凋亡均呈显著正相关：Fas蛋白表达及FasL蛋白表达之间呈显著正相关。复方苦参注射液组caspase．3酶活性随着药物浓度而升高，且酶活性变化与细胞凋亡率变化呈正相关。结论复方苦参注射液可有效诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡，其机制可能与上调Fas／FasL蛋白表达、激活caspase-3酶有关。     

Fas、FasL和Bcl-2在膀胱癌组织的表达及意义

目的　研究Fas蛋白 (CD95 /Apol 1,Fas)、Fas配体 (Fasligand ,FasL)及Bcl 2在膀胱癌组织中的表达 ,并探讨其临床意义。方法　采用免疫组化LSAB法检测 5 0例膀胱癌组织及 6例正常膀胱黏膜中Fas、FasL和Bcl 2的表达。结果　Fas、FasL及Bcl 2在膀胱癌组织中的阳性表达率分别为 5 0 %、38%、4 2 %。膀胱癌组织FasL和Bcl 2的阳性表达率明显高于正常组织 (P <0 .0 5 ) ,Fas明显低于正常组织 (P <0 .0 5 )。Fas的表达与膀胱癌病理分级、复发有关 (P <0 .0 5 ) ;FasL、Bcl 2表达与各项病理指标均无关 (P >0 .0 5 )。结论　Fas的表达降低与膀胱肿瘤的恶性化程度有关。     

The evaluation of Fas/Fas ligand system in renal cell carcinoma--the effect of preoperative interferon-alpha therapy

OBJECTIVES: In order to investigate the effect of preoperative interferon (IFN)-alpha on Fas/Fas ligand (FasL) system, we examined Fas and FasL expression and the occurrence of apoptotic cell death in a preoperative therapy group, and in a control group using surgically resected renal cell carcinoma (RCC) tissues. METHODS: Ten cases were served as the preoperative therapy group, and sixteen cases as the control group. IFN-alpha was administered at five megaunits daily intramuscularly for two weeks in the preoperative therapy group. Immunohistochemistry for Fas and FasL, and terminal-deoxynucleotidyl-transferase (TdT)-mediated digoxigenin-dUTP nick end-labeling (TUNEL) were employed. We defined the labeling index (LI) as percentage of Fas- or FasL-positive cells in carcinomatous cells, and apoptotic index (AI) as percentage of TUNEL-positive cells in carcinomatous cells. RESULTS: Significant correlations were found between the LIs of Fas and AIs in all 26 cases. LIs of Fas and AIs of the preoperative therapy group were significantly higher than those of the control group. FasL expression was detected in nine out of ten cases in the preoperative therapy group, and in fourteen out of sixteen cases in the control group. There were no significant differences in LIs of FasL between two groups. CONCLUSION: These data suggest that apoptosis via the Fas/FasL system is functional, and that preoperative IFN-alpha treatment may up-regulate the Fas/FasL system in RCC. On the other hand, we need to investigate about an immune-escape mechanism through the FasL expression considering the relatively frequent expression of FasL in our results in RCC from now.     

Fas and Fas-ligand expression in human pancreatic cancer

OBJECTIVE: To investigate Fas and FasL expression in pancreatic tissues and cultured pancreatic cancer cell lines, and to assess the ability of anti-Fas antibodies to induce apoptosis. SUMMARY BACKGROUND DATA: Activation of the Fas receptor by Fas-ligand (FasL) results in apoptosis, and dysregulation of this pathway may contribute to abnormal cell proliferation. METHODS: Northern blotting and immunohistochemistry were used to compare Fas and FasL expression in normal and cancerous tissues. DNA 3'-OH end labeling was used to detect apoptotic cells. The effects of Fas activation on cell growth and signaling pathways were investigated in culture. RESULTS: Pancreatic cancers exhibited increased Fas RNA levels, whereas FasL mRNA levels were similar in both groups. Despite the colocalization of Fas and FasL in the cancer cells, an apoptotic signal was present in approximately 10% of these cells in only 2 of 16 cancer samples. Fas and FasL were coexpressed in all four cell lines, whereas Fas-associated phosphatase 1 was below the level of detection in all cell lines. Only COLO-357 cells underwent apoptosis after Fas activation. Apoptosis was associated with enhanced activation of jun kinase (JNK) and p38 mitogen-activated protein kinase (MAPK). In the presence of actinomycin D, Fas antibody also induced apoptosis in the other three cell lines. CONCLUSIONS: These results suggest that pancreatic cancer cells are resistant to Fas-mediated apoptosis by mechanisms excluding receptor downregulation or Fas-associated phosphatase upregulation and raise the possibility that Fas-mediated apoptosis may be dependent on the activation of the JNK/p38 MAPK pathway in these cells.     

维生素E琥珀酸酯对乳腺癌荷瘤裸鼠的抑瘤作用

目的 检测维生素E琥珀酸酯（VES）对裸鼠荷乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用。方法 裸鼠皮下接种MCF-7乳腺癌细胞建立荷瘤裸鼠模型。以150mg／kg（体重）剂量的VES治疗模型鼠共5周。处死动物后测量肿瘤大小。以流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞表面Fas和FasL的表达；以免疫组化法检测肿瘤组织Fas和FasL的表达，并以TUNEL法检测细胞凋亡指数。结果 VES对荷乳腺癌裸鼠具有显著的增殖抑制作用。细胞周期分析显示，VES冶疗后肿瘤细胞表现为G0／G1期阻滞，肿瘤组织和细胞表面的Fas和FasL均出现上调，同时细胞的凋亡指数升高。结论 VES对于MCF-7乳腺癌荷瘤裸鼠具有强效的抑制作用，其机制与上调肿瘤细胞Fas／FasL表达，促进细胞凋亡有关。     

Fas Ligand gene transfer enhances the survival of tissue-engineered chondrocyte allografts in mini-pigs

BACKGROUND AND PURPOSE: Since the Fas/Fas Ligand (FasL) interaction has been recognized as an apoptotic pathway, it eliminates the activated T cells and promotes the survival of grafts. In this study, the effect of FasL transfection of pig chondrocytes on allogeneic transplantation was examined in vitro and in vivo. METHODS: Chondrocytes were isolated from articular and aural cartilages of anesthetized Guizhou Xiang (Gz) pig. The cells were transfected with G418 selected virus, packed from PA317 cells with a constructed plasmid using pig FasL (pGCEN-FasL). The apoptotic effect of FasL transfection was examined on Jurkat cells and activated recipient Gz T cells. The FasL expression was assessed by Western blot and flow cytometry. FasL+chondrocytes-Pluronic F-127 complex was injected into the right abdomen of recipient Gz pig. Histology and morphology of the engineered tissue were examined after 2 and 5 weeks of transplantation. RESULTS: The FasL expression was confirmed in pGCEN-FasL transfected chondrocytes. The expression of FasL of chondrocytes from Gz pig was analyzed by FACS. The apoptosis of Jurkat cells and activated recipient Gz T cells was increased by co-culture with FasL(+) chondrocytes (53.41% and 30.38% (E/T=10:1), in contrast of 32.27% and 13.16% with the control chondrocytes, respectively, P<0.01). FasL(+) chondrocytes-Pluronic F-127 implant expressed FasL and Type II collagen at the 5th week and survived until the 8th week. INTERPRETATION: The result indicates that the expression of FasL by chondrocytes is capable of inducing apoptosis of activated T cells. This suggests a potential role for allogeneic transplantation with chondrocytes.     

bcl-2和Fas/FasL系统在肝癌细胞凋亡中的作用

目的 探讨ｂｃｌ－２和Ｆａｓ／ＦａｓＬ系统在肝癌细胞凋亡过程中的作用。方法 应用免疫组织化学方法检测３６例肝癌和４９例肝硬化组织中ｂｃｌ－２、Ｆａｓ和ＦａｓＬ的表达,用ＴＵＮＥＬ法检测肝中的细胞凋亡。结果 肝癌组织与肝硬化组织比较, 细胞明显减少;肝癌和肝硬化组织中ｂｃｌ－２的表达率分别为１６．６６％和６７．３４％;Ｆａｓ的表达率分别为５２．７７％和７３．４７％;ＦａｓＬ的表达率分别为７２．２２％