间甲肾上腺素类物质对诊断嗜铬细胞瘤的意义

嗜铬细胞瘤是以儿茶酚胺大量分泌为特征的肿瘤。研究发现与儿茶酚胺相比，检测间甲肾上腺素类物质(MNs)诊断嗜铬细胞瘤有更高的敏感性和特异性，是最佳生化指标。对于影像学检查无法发现的疑难病例，不同部位血MNs测定有助于其定位诊断。MNS包括间甲肾上腺素(MN)和去甲变。肾上腺素(NMN)。嗜铬细胞瘤患儿的MN平均水平高于成人，而NMN的平均水平较成人低；同时男孩MNs水平要高于女孩。对于家族性视网膜小脑及脊髓血管瘤病或多发性内分泌腺瘤合并嗜铬细胞瘤的病例，MNs诊断的敏感性低于散发病例，特异性则高于散发病例。     

间甲肾上腺素类物质对诊断嗜铬细胞瘤的意义

嗜铬细胞瘤是以儿茶酚胺大量分泌为特征的肿瘤。研究发现与儿茶酚胺相比,检测间甲肾上腺素类物质(MNs)诊断嗜铬细胞瘤有更高的敏感性和特异性,是最佳生化指标。对于影像学检查无法发现的疑难病例,不同部位血MNs测定有助于其定位诊断。MNs包括间甲肾上腺素(MN)和去甲变肾上腺素(NMN)。嗜铬细胞瘤患儿的MN平均水平高于成人,而NMN的平均水平较成人低;同时男孩MNs水平要高于女孩。对于家族性视网膜小脑及脊髓血管瘤病或多发性内分泌腺瘤合并嗜铬细胞瘤的病例,MNs诊断的敏感性低于散发病例,特异性则高于散发病例。     

高效液相色谱-电化学法测定人血浆中罗红霉素浓度

目的 应用高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ECD)测定人血浆中罗红霉素(RM)含量.方法 用Kromasil C18色谱柱,流动相为甲醇:乙腈:磷酸盐缓冲液(39:11:50),检测器为电化学检测器,电位1.2 V、流速0.9 ml/min,内标法定量.结果 本法的线性范围是0.146 9～18.8 mg/L,回归方程Y=0.085 946 9 X、r=0.999 2,平均加样回收率为102.6%～105%,日内RSD和日间RSD均小于6.3%.结论 本法具有简便、灵敏、准确、稳定的特点,适用于RM血药浓度监测.     

甲氧基肾上腺素类物质、3-甲氧酪胺及嗜铬粒蛋白A在PPGL诊断中的作用

嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(pheochromocytoma and paraganglioma, PPGL)是继发性高血压的病因之一,近年来其患病率呈上升趋势。甲氧基肾上腺素类物质(metanephrines, MNs)是儿茶酚胺(catecholamine, CA)的中间代谢产物。目前,血、尿MNs均已被广泛推荐为PP...     

人血浆肾上腺素及去甲肾上腺素的高效液相色谱—电化学检测法

儿茶酚胺类(CA_s)包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)及多巴胺(DA),是人体内含量极微而又具有重要生理活性的激素和神经递质。测定这些物质国内外曾有报道用高效液相色谱(HPLC)、气质联用、放射免疫和酶免疫等分析方法。高效液相色谱-电化学检测法(HPLC-ED)简便、快速、灵敏而应用广泛。但由于正常人血中CA_s含量极微,采用普通的HPLG-ED法难以测得。本法采用全套国产仪器,通过建立双柱双泵的HPLC-ED系统使检测水平大为提高,最小检测量从普通的5910pmol/L减少到177pmol/L,提高了30倍以上。     

高效液相测定胆汁结合胆汁酸方法的改进

高效液相色谱法(HPLC)测定胆汁酸具有分离效能高、分析速度快、流动相可选择范围宽、灵敏度高及仪器化程度高等优点。既往的实验方法常常因为分离时问较长或条件要求高,限制了大批样品测定的临床应用。我们通过综合既往胆汁样品处理方法以及测定条件,调整流动相pH值、极性、柱温等,缩短分离时间,为胆汁样品的大批量测定创造条件。     

高效液相色谱法在肝康胶囊中黄芪甲苷含量测定中的应用

2007年1月～2008年1月,我们采用高效液相色谱法(HPLC)对肝康胶囊(由黄芪、猪苓、茵陈、黄芩等16味中药组成)中黄芪甲苷的含量进行了测定.现报告如下.     

应用高效液相色谱-质谱/质谱联用技术检测贝达喹啉血药浓度

目的 采用高效液相色谱-质谱/质谱联用(HPLC-MS/MS)技术检测人血浆中贝达喹啉浓度, 并对其应用效果进行评价。方法 人血浆样品经乙腈沉淀蛋白等处理后检测,液相色谱采用Agilent ZORBAX SB-C18 色谱柱(2.1mm×100mm, 3.5μm) 为分析柱,以甲醇-5mmol/L甲酸铵水溶液(含0.1% 甲酸) (85∶15, V/V) 为流动相, 质谱使用电喷雾离子源(ESI), 以正离子多反应监测(MRM) 方式进行检测,分析时间为3min。结果 本测定方法不受血浆中内源性物质干扰, 贝达喹啉母离子和定量子离子的质荷比(m/z)为555.2→58.3,标准曲线线性范围为0.1~5.0μg/ml,方法的日内、日间精密度(相对标准偏差,RSD) 均小于10%, 准确率为97.8%~107%。用建立的方法检测了12例服用贝达喹啉的结核病患者,服药剂量为每日400mg时,贝达喹啉峰浓度为(3.17±1.14)μg/ml,谷浓度为(1.12±0.64)μg/ml;服药剂量为200mg/次,每周3次时,贝达喹啉峰浓度为(2.01±0.87)μg/ml,谷浓度为(0.65±0.30)μg/ml,48份样本血药浓度均在检测范围内(0.1~5.0μg/ml)。结论 本研究建立了抗结核新药贝达喹啉血浆中药物浓度的HPLC-MS/MS联用方法, 该方法适用于临床结核病患者血浆样品中贝达喹啉浓度的快速分析。     

中国不同地区寄生虫氨基酸组成的反相高效色谱(RP-HPLC)测定

目的为了搞清寄生虫生长、发育、代谢、繁殖的特征规律,对寄生虫病进行有效的防治,有必要搞清它们蛋白氨基酸组成.方法采用2,4二硝基氟苯柱前衍生化法,对经盐酸充分水解的中国不同地区,不同种类马来丝虫及其幼虫蛋白质氨基酸组成在反相高效液相色谱柱(RP-HPLC)上进行分离,在紫外吸收(360nm)检测器上进行定量测定.分离中所选用洗脱液为A0.060mol/LNaAc(pH6.40);B乙腈/冰(11,V/V),采用梯度洗脱模型.对定量测定结果进行统计学处理,表明该方法有高的定量精确度和重复性.结果寄生虫蛋白质经水解后,在RP-HPLC柱上分离出18种不同的氨基酸,雄性(154μg/mg～351μg/mg)和雌性(179μg/mg～440μg/mg)氨基酸含量,没有明显的差异.但不同省区的氨基酸含量存在着一定的差异.从南方福建省的18种氨基酸含量179μg/mg到北方辽宁省的440μg/mg,无论是雄性还是雌性马来丝虫中酸性氨基酸的相对量均高于碱性氨基酸,如雌性马来丝虫Glu含量占氨基酸总量平均为12.5%,Lys为6.03%,芳香族氨基酸的含量相对较低,Try占氨基酸总量的0.70%,感染期幼虫和微幼虫18种氨基酸总量为111μg/mg和1052g/mg,低于成虫平均270μg/mg的含量.结论该方法具有快速、简便、灵敏、经济、准确和再现性好等优点,所测得的定量结果,为研究寄生虫的种内分化、种下分类和生长、发育、代谢等生命活动具有重要意义,并为寄生虫的体外培养和免疫学诊断及治疗研究提供了有益的信息.     

人MxA基因启动子-88/-123位多态性荧光PCR检测方法的建立及临床应用

目的 建立一套快速、灵敏和特异的人抗黏液蛋白A(MxA)基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性检测体系,为合理应用IFN-α治疗慢性乙型肝炎提供分子生物学检测手段.方法 对经IFN-α治疗的患者进行HBV DNA、HBV基因分型及MxA基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性位点检测,确定基因多态性与IFN-α治疗效果之间的关系.通过各种条件优化实验,建立MxA基因启动子中干扰素刺激应答元件-88/-123位多态性荧光PCR检测体系,并通过与DNA序列分析法检测结果的对比,验证荧光PCR检测体系的灵敏性及特异性,从而对该体系的临床适用性进行初步评估.采用卡方检验计算P值、回归分析法计算对比率和95%可信区间.结果 MxA基因启动子干扰素刺激应答元件中-88位为G/T杂合型和-123位为C/A杂合型者皆为IFN-α敏感型,-88位为G/G纯合型和-123位为C/C纯合型者为IFN-α不敏感型.与DNA序列分析的金标准相比,荧光PCR检测的符合率为99.65%.结论 荧光PCR检测体系,可灵敏、快捷地检测患者MxA基因多态性位点.     

T-2粗毒素的生物合成及检定

目的 利用大骨节病病区粮食分离出产毒镰刀菌,生物合成T-2粗毒素.方法 从大骨节病病区玉米粮样中分离出产毒镰刀菌,经纯化培养后,接种于无菌玉米培养基,光镜下根据菌落特点和菌体形态、分生孢子的特点来鉴别菌种,而培养产物经有机溶剂提取、减压浓缩和硅胶柱层析纯化所得浓缩液,用薄层层析法和高效液相色谱法鉴定毒素和产毒量.结果 从病区粮样中分离出的产毒菌株为三线镰刀菌,将其接种于玉米培养基,可得T-2粗毒素约250 mg/kg.结论 大骨节病病区存在着镰刀菌的污染,并由此带来T-2毒素污染.T-2毒素生物合成及提取方法有可行性,其成本较低,适于实验室研究.     

嗜铬细胞瘤的诊治策略

嗜铬细胞瘤是一种少见的疾病,其在高血压人群中的患病率为0.5%～1%,其所致恶性高血压是导致心力衰竭、心肌梗死、脑卒中和肾功能受损的重要危险因素,因此对嗜铬细胞瘤的早期诊断、早期治疗显得尤为重要.现就嗜铬细胞瘤的临床特征、生化诊断、定位诊断、处理、基因筛查等进行探讨.     

An improved method for plasma methimazole assay and its clinical application

An improved method for plasma methimazole assay using high performance liquid chromatography is described. The plasma samples were treated with sodium bisulfite and ammonium sulfate prior to extraction with chloroform. This pretreatment of the samples raised the extraction coefficient to 90%, while simple extraction yielded only 55%. The minimal detection limit was 0.02 microgram/ml, and the coefficient of variation at the level of 0.2 and 1.0 microgram/ml was less than 5%. Pharmacokinetics of methimazole was studied after a single oral dose (20 mg/m2) in six subjects including two healthy adults and four thyrotoxic children. Plasma levels of methimazole showed a peak concentration of 1.03 +/- 0.25 microgram/ml approximately one hour after the drug administration. Plasma half-life, area under the curve and distribution volume were 4.56 +/- 0.71 hr, 7.05 +/- 0.95 microgram/ml X hr, and 630 +/- 110 ml/kg respectively.     

18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱比较

目的 用本实验室所建立的高效液相色谱分枝菌酸分析方法，构建18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱库，并对该库的分枝菌酸指纹谱进行比较。方法 标准菌株按常规方法，分别转种到改良罗氏培养基斜面上培养，待菌落形成后，用化学法从培养物中提取细胞壁的分枝菌酸，经皂化、酸化和衍生后，制备出良好的分析样品，用于色谱检测分析。结果 成功地构建了18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱库，该指纹谱的重复性日内变异系数为0．20％-0．83％，均〈1％。每种分枝菌酸的指纹谱都具有各自的特征，峰形也有一定规律，根据峰形的特点将其分为3类：A类（单组峰）包括结核、牛、戈登、爱知、堪萨斯、海分枝杆菌和卡介苗，B类（2组峰）包括蟾蜍、土地、新金色、不产色和浅黄分枝杆菌，C类（3组峰）包括胞内、鸟、金色、偶然、副偶然、脓肿和耻垢分枝杆菌。结论 依据18种分枝杆菌标准菌株的分枝菌酸指纹谱，即可对分枝杆菌菌种进行鉴定。卡介苗与牛分枝杆菌的分枝菌酸指纹谱的峰形存在很大差别，该现象很可能作为结核病潜伏感染和分枝杆菌耐药机制的一种新理论依据。     

高效液相色谱法测定砖茶中儿茶素和生物碱含量的研究

目的 建立测定砖茶中儿茶素和生物碱的色谱分析方法,同时寻找出砖茶中儿茶素和生物碱的较优提取条件.方法 采用高效液相色谱法分离检测砖茶中儿茶素和生物碱,并进行回收率、精密度、稳定性实验.分别采用水、乙醇作为提取溶剂对砖茶中儿茶素和生物碱提取情况进行正交实验,再比较水和醇的提取效果,以获得提取砖茶中儿茶素和生物碱的较优提取条件.结果 高效液相色谱法可同时分离并检测出砖茶中儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表没食子儿茶素没食子酸酯、没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯6种儿茶素以及咖啡碱、可可碱2种生物碱.各组分的峰面积和浓度之间具有良好的线性关系,决定系数(R2)范围为0.9990 ～ 0.9999;加标回收率范围为83.78％～ 106.35％.精密度较好[峰面积相对标准偏差(RSD)范围为0.50％～1.51％].砖茶中儿茶素和生物碱较优提取条件为:乙醇浓度80％、料液比1∶10、温度80℃、时间30 min.结论 乙醇作为提取剂的高效液相色谱法的较优提取条件,对砖茶中6种儿茶素和2种生物碱分离度较好,定性准确,快速灵敏.     

变性高压液相色谱法分析肺癌患者痰标本Rb2/p130、p53基因突变

目的 探讨变性高压液相色谱(DHPLC)法分析肺癌患者痰标本Rb2／p130和p53突变及其作为分子诊断标记的可行性。方法 DHPLC法分析47例患者痰标本[35例肺癌(男22例,女13例,年龄16～81岁;其中腺癌17例,鳞癌12例,小细胞癌4例,肺泡癌1例,腺鳞癌1例),12例对照(男7例,女5例,年龄38～68岁;其中结核1例,肺炎1例,支气管扩张症2例,肺泡蛋白沉积症1例,结节病1例,多发性软骨炎1例,慢性阻塞性肺疾病5例)]Rb2／p130基因Exon19～22和p53基因Exon5～9突变。结果 肺癌患者Rb2／p130突变检出率为22．86％(8／35),p53突变检出率为28．57％(10／35),对照者均未检出1例(P=0．049,P=0．046)。作为肺癌诊断分子标记,Rb2／p130特异度100％,灵敏度22．86％;p53特异度100％,灵敏度28．57％;联合检测Rb2／p130和p53特异度100％,灵敏度51．43％。结论 联合分析痰标本Rb2／p130和p53基因突变可提高诊断的灵敏度。     

硫唑嘌呤致血液系统危象的临床特征与酶学基础

目的探讨硫唑嘌呤导致血液系统危象的规律和发生机制。方法8例曾经口服硫唑嘌呤后出现血液系统危象者为病例组,分析其副作用发生的临床特征。选择16例同病种、同期服用过硫唑嘌呤,而没有出现血液系统损害的患者为对照组。盲法检测这两组病人红细胞巯嘌呤甲基转移酶(TPMT)的活性。采用Wilcoxon秩和检验的方法,分析两组间TPMT活性的差异。结果8例均表现为严重的白细胞及血小板减少和严重脱发。时间为使用硫唑嘌呤的第22~31日,中位数26d。血白细胞谷值(0.3~0.6)×109/L,血小板谷值(3.0~9.0)×109/L;有6例检查骨髓象均显示骨髓增生低下。全部病人在停用硫唑嘌呤后11~18d后血象完全恢复正常。病例组的TPMT活性为0.16～2.91U/ml红细胞(RBC),对照组的TPMT活性为3.82～21.68U/mlRBC,Z=3.919,P=0.0001,差异有统计学意义。结论小剂量硫唑嘌呤导致血液系统危象主要与TPMT的活性有关,TPMT活性明显低下者,可以在用药第3～4周时发生严重副作用。     

抗去唾液酸糖蛋白受体酶联免疫检测法的建立及临床初评

目的 建立肝脏特异性自身抗体的ELISA检测方法，辅助自身免疫性肝炎的诊断。方法 利用亲和层析法从人肝脏组织中直接纯化去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)，经免疫学鉴定后以此纯化抗原包被微孔板，酶联免疫固相吸附试验检测去ASGPR的自身抗体(抗-ASGPR)。结果 本研究从10g肝组织纯化ASGPR，总量为1．6mg。经SDS-PAGE和Dot-ELISA验证，纯化ASCGPR纯度高、具有抗原活性。ASGPR预吸附可阻断血清抗体与ASGPR间的免疫反应，类风湿因子、梅毒阳性血清不干扰本ELISA法的抗原抗体反应。33例自身免疫性肝炎(AIH)患者中检出抗-ASGPR24例，阳性率为72．7％。在临床上高度怀疑AIH的10例患者中，抗-ASGPR阳性者有7例。原发性胆汁性肝硬化、病毒性肝炎、肝炎后肝硬化、肝癌、胆囊炎患者中阳性检出率分别为21．4％(9／42)、16．8％(16／95)、16．1％(10／62)、10．7％(3／28)、14．3％(1／7)。药物性肝炎、酒精性肝炎、系统性红斑狼疮和类风湿性关节炎患者中未检测到抗-ASGPR。200名健康体检者阳性率为4．6％。抗-ASGPR检测对AIH诊断的特异性为89．6％。结论 本研究所建立的抗-ASGPR ELISA检测方法可靠、特异性好。抗-ASGPR检测有助于AIH的诊断，尤其是对那些抗核抗体、平滑肌抗体、肝肾微粒体-1型抗体等自身抗体均阴性、临床高度怀疑AIH病例的诊断可能更为有用。