复方SZ滴眼液和阿魏酸钠对紫外线损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响

目的:研究复方SZ滴眼液(Compound shui zhi eye drop,SZ)和阿魏酸钠(Sodium ferulate,SF)对紫外线(Ultraviolet,UV)损伤的人晶状体上皮细胞抗氧化酶及其基因表达的影响。方法:采用UV照射体外培养的人晶状体上皮细胞(Human lens epithelial cell,HLEC),同时用SZ、SF和吡喏克辛钠滴眼液(Pirenoxine sodium,PS)与HLEC共同孵育,并检测HLEC中超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(Glutathi-one peroxidase,GSH-px)和过氧化氢酶(Catalase,CAT)的活性和SODmRNA、GSH-pxmRNA和CATmRNA的基因表达。结果:UV组的HLEC抗氧化酶活性和基因表达均比对照组显著降低(P0.01)。SZ、SF和PS组的SOD、GSH-px和CAT的活性显著高于UV组(P0.01,P0.05);SODmRNA、GSH-pxmRNA和CATmRNA的表达也显著高于UV组(P0.01)。结论:SZ、SF和PS均能防护UV照射引起的HLEC氧化损伤,SZ和SF的作用优于PS。     

蜕皮甾酮对氧化损伤的人晶状体上皮细胞凋亡的防护作用

目的:探讨蜕皮甾酮(ECR)对氧化损伤的人晶状体上皮细胞(HLEC-B3)凋亡有无抑制作用。方法:本研究在终浓度300μmol/LH2O2培养液中复制HLEC凋亡模型,并以雌二醇(E2)作为阳性对照,在透射电子显微镜下观察HLEC-B3超微结构的改变,采用FCM法检测HLEC-B3凋亡率及线粒体膜电位的变化。结果:超微结构研究显示,H2O2组绝大多数HLEC-B3发生凋亡,并呈凋亡各期改变的全过程;E2、ECR组仅少数HLEC-B3发生凋亡,并多为早期或中期的轻微改变。FCM结果显示:H2O2组HLEC凋亡率显著高于空白对照组;E2和ECR组凋亡率均低于H2O2组(P0.01)。H2O2组线粒体跨膜电位比对照组显著下降;E2组和ECR组的线粒体跨膜电位均比H2O2组升高(P0.01)。结论:ECR可减轻实验性氧化损伤的HLEC凋亡程度,为寻求防治老年性白内障的药物提供实验依据。     

晶体上皮细胞凋亡与白内障的发生

晶体上皮细胞凋亡与白内障的发生马文新１汤海洲１唐由之２白内障是世界上最主要的致盲病因，许多因素如氧化应激、辐射、化学毒物等已被证明对体内外白内障的形成起重要作用，但对这些因素诱导白内障发生的细胞基础尚缺乏深刻认识。近年来细胞凋亡（ａｐｏｐｔｏｓｉｓ）...     

细胞凋亡抑制剂防护晶状体上皮细胞氧化损伤及信号转导机制

目的：探讨细胞凋亡抑制剂阿魏酸钠（SF）、五味子乙素（Sch B）、菊花（FC）、车前子（SP）对过氧化氢（H2O2）所致氧化损伤的晶状体上皮细胞（LEC）活性以及细胞内钙（Ca2＋）、环磷酸腺苷（cAMP）、环磷酸鸟苷（cGMP）的影响,研究四种细胞凋亡抑制剂防治白内障的细胞信号转导机制。方法：将传代培养的牛LEC与H2O2共同孵育复制氧化损伤的模型,同时加入SF和Sch B单体及FC和SP水提取液孵育后,采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）检测LEC活性,采用荧光分光光度法检测LEC内钙离子的浓度（[Ca2＋]i）、放射免疫分析法检测LEC内cAMP和cGMP含量,并探讨不同浓度和不同孵育时间（12h、24h、36h）的影响。结果：①H2O2组LEC活性下降,SF、Sch B、FC、SP均可明显增强氧化损伤的LEC活性（P〈0.01）,呈浓度依赖关系和时间依赖关系。②H2O2组LEC的[Ca2＋]i升高,SF、Sch B、FC、SP均可显著降低氧化损伤LEC的[Ca2＋]i（P〈0.01）,呈时间-效应关系。③H2O2组LEC的cAMP浓度升高、cGMP浓度下降,SF、Sch B、FC、SP均可使氧化损伤的LEC的cAMP水平显著降低（P〈0.01）、cGMP水平显著升高（P〈0.01）,也呈时间-效应关系。结论：四种细胞凋亡抑制剂SF、Sch B、FC、SP可明显抑制LEC氧化损伤及凋亡,通过[Ca2＋]i、cAMP、cGMP信号转导及相互作用调节生物学效应可能是其主要的细胞和分子生物学机制。     

乙醇诱导人胃上皮细胞株凋亡的研究

目的 探讨建立乙醇诱导人胃上皮细胞株(GES-1)凋亡模型的方法和可行性。方法 采用罗氏细胞实时动态分析仪、MTT比色法、Hoechst染色法、Annexin V-FITC/PI凋亡流式检测研究不同浓度的乙醇对人胃上皮细胞株(GES-1)凋亡作用。结果 (1)当乙醇浓度大于0.5 mol·L-1时,对GES-1细胞株有明显的诱导凋亡作用,而考察的TNF-α(100,50 ng·mL-1)则没有明显的细胞凋亡诱导作用;(2)通过形态学观察,发现乙醇模型组GES-1细胞株出现明显的凋亡细胞形态学改变;(3)Annexin V-FITC/PI凋亡流式分析结果发现乙醇浓度大于0.2 mol·L-1对细胞具有明显的诱导凋亡作用,乙醇主要诱导GES-1细胞株进入早期凋亡,且具有浓度依赖性,但该诱导作用具有时效性,在作用持续60 min后,其诱导作用会逐渐减弱。结论 乙醇对GES-1细胞株具有明显的诱导细胞凋亡作用,且具有浓度依赖性及时效性;本凋亡模型具有较好的重现性。     

芪归解毒汤对硫酸镍诱导晶状体上皮细胞凋亡的抑制作用

目的观察芪归解毒汤对硫酸镍诱导正常人晶状体上皮细胞(Lens epithelium cell,LEC)凋亡的影响。方法体外培养正常人晶状体上皮细胞,用血清药理学方法制备含芪归解毒汤药物血清,用药物血清和硫酸镍处理培养的LEC,采用流式细胞术检测LEC凋亡率;透射电子显微镜观察LEC超微结构改变和凋亡小体形成。结果硫酸镍组LEC凋亡率(26.99±2.58)高于中药组LEC(12.21±2.42),硫酸镍组和中药组LEC凋亡率均高于对照组(0.8±0.16),三组间差异有统计学意义(x2=-20.489,P0.01),两两比较均有统计学意义(P0.01)。透射电镜观察到硫酸镍组LEC各阶段均有细胞凋亡,可见到LEC凋亡后的继发性坏死。中药组LEC呈凋亡早期改变,只有少数LEC呈凋亡改变,未见有凋亡后继发性坏死的LEC。结论芪归解毒汤药物血清可有效地抑制硫酸镍诱导的LEC凋亡。     

内障丸加减方对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞中Bcl-2及Bax表达的影响

目的观察中药单体与含药血清对氧化损伤大鼠晶状体上皮细胞(LECs)中Bcl-2及Bax表达的干预作用异同,探讨内障丸加减方预防或延缓白内障发生发展的作用机制。方法取3只8周龄大鼠,予内障丸加减方45 g/(kg.次)灌胃,每日2次,连续3 d,末次灌胃后1 h,制备含药血清。以Medium199培养液30 mL+青霉素注射液20万U/L+链霉素注射液25万U/L制备成培养液5份,分别为空白对照组、模型组、槲皮素组、含药血清组及空白血清组,除空白对照组外,其余各组培养液以30%过氧化氢(H2O2)溶液诱导Fenton反应。然后含药血清组及空白血清组分别加入相应的血清,将各培养液置于无菌6孔培养板中,每孔含培养液3 mL。另取15只4～5周龄大鼠随机分为5组,分别为空白对照组、模型组、槲皮素组、含药血清组及空白血清组,每组各3只。无菌操作提取晶状体,将晶状体放入含有相应培养液的培养孔中,每孔3枚。经24 h后,取囊膜铺片,以免疫组化法检测LECs的凋亡相关基因Bcl-2及Bax表达,在光学显微镜下观察Bcl-2及Bax的表达情况。结果空白对照组、槲皮素组及含药血清组Bcl-2及Bax表达与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05),空白血清组与模型组Bcl-2及Bax表达无统计学意义(P>0.05)。空白对照组、槲皮素组及空白血清组Bcl-2及Bax表达与含药血清组比较差异有统计学意义(P<0.05)。过氧化氢诱导的大鼠LECs凋亡,模型组和空白血清组Bax的表达上调明显,而Bcl-2的表达下调。槲皮素及含药血清组与模型组及空白血清组相比,LECs的Bcl-2的表达显著上调,而Bax的表达明显下调。含药血清组比槲皮素组更能有效上调Bcl-2的表达,降低Bax的表达。结论内障丸加减方的血清活性成分能有效保护LECs的细胞结构,上调Bcl-2基因的表达,抑制细胞凋亡。     

阿魏酸钠对Ang Ⅱ诱导内皮细胞凋亡的抑制作用

目的:研究AngⅡ诱导内皮细胞凋亡作用及阿魏酸钠(SF)的抗凋亡作用和可能机制。方法:将体外培养的猪髂动脉内皮细胞(PIECs)随机分为:对照组、AngⅡ组、SF组、SF+AngⅡ组。倒置显微镜下观察细胞生长状况,MTT法检测PIECs;存活率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡状况和细胞内活性氧(ROS)水平,比色法法测定上清中MDA含量。结果:与对照组比较,AngⅡ组细胞凋亡率、上清中MDA含量及细胞内ROS水平增加(P<0.01),细胞存活率降低(P<0.01)。SF则降低细胞凋亡率(P<0.05)、上清液MDA含量及细胞内ROS水平(P<0.01),增加细胞存活率(P<0.05),但高浓度的SF有一定的细胞毒性。结论:SF可以抑制Ang诱导的内皮细胞凋亡,该作用与SF降低上清中MDA含量和降低细胞内ROS生成有关。     

枸杞多糖对人视网膜色素上皮细胞光损伤保护的实验研究

目的 观察不同纯度枸杞多糖(lycium barbarum polysaccharides, LBP)对光诱导人视网膜色素上皮(retinalpigment epithelium, RPE)细胞凋亡作用的影响,进一步探究其保护机制。方法 体外培养人视网膜色素上皮细胞(ARPE-19),建立hRPE细胞光损伤模型,分别用不同纯度的枸杞多糖(50%、65%)对hRPE细胞进行干预,于光照24h后进行相应指标检测。采用CCK-8法检测hRPE细胞活力;通过流式细胞术(FCM)检测光照对hRPE细胞凋亡率的影响;通过蛋白免疫印迹(Western blot)法分别检测Bcl-2、Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白分子表达量变化。实验组分为正常组、模型组、不同纯度枸杞多糖(50%、65%)干预组。结果 与正常组比较,模型组细胞存活率显著降低、细胞凋亡率显著升高,Bax、 Caspase-3、Caspase-9蛋白表达显著升高,Bcl-2蛋白表达、Bcl-2/Bax比值明显降低(P<0.01);与模型组比较,枸杞多糖(50%、65%)干预组细胞存活率显著升高,枸杞多糖各纯度组细...     

阿魏酸钠体内动力学参数的研究

阿魏酸钠是中药当归、川芎的主要有效成分之一,具有抑制血小板聚集和释放作用,现已人工合成并制成制剂,用于治疗血管栓寒性脉管炎,急性脑血栓和偏头痛等,了解、研究此药物在体内吸收、分布、消除过程,正确确定药物分布速率、消除速率、达峰时间,达峰浓度等参数,对指导临床用药有重要的价值。资料、方法、结果用改进高效液想色谱法测定血浆中药物浓度,,取新西兰纯白兔6只,体重2.15-3.35kg,雌雄各半,阿魏酸钠给药剂量25mg/kg,空腹灌胃给药,给药后5、10、20、30、40、60和120分钟从耳缘静脉取血1.5ml,所得浓度数据如下:     

急性高眼压对兔晶状体上皮细胞的影响

目的观察急性高眼压状态下兔晶状体上皮细胞凋亡,Bcl-2、PCNA表达的动态变化,以证实凋亡是青光眼性白内障的早期表现。方法36只健康无眼疾成年灰兔随机分为A、B、C、D4组,每组18只眼。将每组再随机分入对照组、50 mm Hg组、80 mm Hg组,保证每只兔两只眼不在同一组。对照组做玻璃体穿刺,不灌注。50 mm Hg组、80 mm Hg组玻璃体穿刺后灌注乳酸钠林格注射液,调整灌注高度控制相应眼压。A、B、C、D组动物分别在灌注3、6、9、12I小时后处死并摘除眼球,取晶状体前囊膜制作晶状体上皮细胞铺片,进行TUNEL染色,Bcl-2、PCNA免疫组化染色。结果1.对照组极少见凋亡细胞,随眼压升高、灌注时间的延长,晶状体上皮细胞出现凋亡并且数量增加(P<0.01)。2.BCL-2蛋白在对照组中有少量表达,高眼压状态下表达随时间延长、眼压增高而增加、染色增强。与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。3.PCNA阳性染色位于晶状体赤道部,中央区无阳性细胞。对照组与实验组无统计学差异(P>0.05)。结论在急性高眼压状态下,晶状体上皮细胞开始出现凋亡并随眼压程度、高眼压持续时间的延长而增加。认为凋亡也是青光眼性白内障起始的细胞学基础。     

Ocimum sanctum extracts attenuate hydrogen peroxide induced cytotoxic ultrastructural changes in human lens epithelial cells

Hydrogen peroxide (H₂O₂) is the major oxidant involved in cataract formation. The present study investigated the effect of an aqueous leaf extract of Tulsi (Ocimum sanctum) against H₂O₂ induced cytotoxic changes in human lens epithelial cells (HLEC). Donor eyes of the age range 20–40 years were procured within 5–8 h of death. After several washings with gentamicin (50 mL/L) and betadine (10 mL/L), clear transparent lenses (n = 6 in each group) were incubated in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) alone (normal) or in DMEM containing 100 µm of H₂O₂ (control) or in DMEM containing both H₂O₂ (100 µm ) and 150 µg/mL of Ocimum sanctum extract (treated) for 30 min at 37 °C with 5% CO₂ and 95% air. Following incubation, the semi‐hardened epithelium of each lens was carefully removed, fixed and processed for electron microscopic studies. Thin sections (60–70 mm) were contrasted with uranyl acetate and lead citrate and viewed under a transmission electron microscope. Normal epithelial cells showed intact, euchromatic nucleus with few small vacuoles (diameter 0.58 ± 0.6 µm) in well‐demarcated cytoplasm. After treatment with H₂O₂, they showed pyknotic nuclei with clumping of chromatin and ill‐defined edges. The cytoplasm was full of vacuoles (diameter 1.61 ± 0.7 µm). The overall cellular morphology was typical of dying cells. Treatment of cells with Ocimum sanctum extract protected the epithelial cells from H₂O₂ insult and maintained their normal architecture. The mean diameter of the vacuoles was 0.66 ± 0.2 µm. The results indicate that extracts of O. sanctum have an important protective role against H₂O₂ injury in HLEC by maintaining the normal cellular architecture. The protection could be due to its ability to reduce H₂O₂ through its antioxidant property and thus reinforcing the concept that the extracts can penetrate the HLEC membrane. Copyright © 2009 John Wiley & Sons, Ltd.     

蜕皮甾酮对氧化损伤的HLEC线粒体超微结构的影响

目的探讨植物雌激素蜕皮甾酮（ecdysterone,ECR）保护氧化损伤的人晶状体上皮细胞（human lens epithelial cells,HLEC）亚细胞水平的形态结构的变化。方法实验分4组：正常对照组、过氧化氢（hy—drogen peroxide,H2O2）组、雌二醇（B—Estradiol,E2）和ECR组。密度梯度离心法分离出HLEC线粒体,透射电镜观察HLEC线粒体超微结构。结果正常对照组线粒体双层膜结构完整,嵴结构完整,线粒体几乎未受损伤;H2O2组线粒体双层膜结构不完整,嵴结构断裂消失,线粒体受损伤;ECR组和E2组线粒体双层膜结构稍完整,嵴结构断裂,线粒体受损伤,但较H2O2组情况好。结论植物雌激素ECR对H2O2诱导氧化损伤的HLEC线粒体超微结构有保护作用。     

热休克蛋白70在老年性白内障晶状体上皮细胞的表达及意义

目的探讨热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP70）在老年性白内障晶状体上皮细胞中的表达及意义，进一步阐明老年性白内障的发病机制。方法以人类晶状体前囊膜为研究对象，正常对照组20例（20眼），老年性白内障组104例，104例白内障分为3组：皮质性组、核性组、后囊下组。按同组中性别相同、年龄相近原则将两个囊膜合二为一作为一个标本，用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法检测HSP70基因在20例皮质性白内障、17例核性白内障、15例后囊下性白内障及10例正常对照组中晶状体上皮细胞中的表达。以β-Aetin作为内参校正，并对获得的指标进行统计学分析。结果老年性白内障组HSP70的表达高于正常对照组，差异有显著性（P〈0．001）。老年性白内障各型间HSP70的表达不同，皮质性组〉核性组〉后囊下性组，差异有显著性（P〈0．05）。结论热休克蛋白70参与老年性白内障的发生发展，在皮质型的发生发展中起重要作用，各型老年性白内障发病机理不同。     

前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ诱导人脐静脉内皮细胞凋亡的影响

目的观察前荷叶碱对血管紧张素Ⅱ(A ngⅡ)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC s)凋亡的影响,探讨其对HUVEC s的保护作用机制。方法体外培养HUVEC s细胞系ECV 304,以10μm o l/L卡托普利或10、1、0.1、0.01μm o l/L前荷叶碱作用于HUVEC s,30 m in后再加入A ngⅡ1μm o l/L,光镜下观察细胞形态,M TT法观察前荷叶碱对HUVECs活性的影响,比色法测定NO、总一氧化氮合酶(tNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)水平,流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果与对照组比较,Ang能明显诱导HUVECs的凋亡(P<0.01),10μmol/L卡托普利及0.01~10μmol/L前荷叶碱可明显改善内皮细胞形态,组织活性明显升高(P<0.05),能增加HUVECs释放NO及生成tNOS(P<0.05),但对iNOS影响不大,使Ang诱导的HUVECs凋亡细胞数明显减少(P<0.05)。结论前荷叶碱通过增加NO生成而抑制Ang诱导的HUVECs凋亡,从而发挥可能的内皮保护功能。     

复明眼液对体外诱导的兔晶状体上皮细胞凋亡的影响

目的 探讨中药复明眼液对兔晶状体上皮细胞(1ens epithelial cells,LEC)凋亡的影响。方法 采用H2O2诱导体外培养的兔IEC，用SOD超微量快速测定和TBA荧光法分别检测不同浓度的复明眼液对兔LEC的超氧化物歧化酶(superoxide dismulase,SOD)活性和脂质过氧化物(lipid peroxide,LPO)含量的影响。结果 终浓度400μg/ml、800μg/ml复明眼液可明显降解兔LEC的LPO含量。结论 一定浓度的复明眼液具有提高兔LEC抗氧化作用的能力。保护兔LEC免受氧化损伤的作用，防止兔LEC发生凋亡。     

雷公藤红素对胆管细胞的毒性作用及机制研究

目的研究雷公藤红素对人肝内胆管上皮细胞(human biliary epithelial cells,HIBEC)的毒性作用及机制。方法通过CCK-8实验及显微镜观察记录雷公藤红素对细胞形态和活力的影响;通过细胞划痕实验检测雷公藤红素对细胞迁移能力的影响;通过流式细胞术检测雷公藤红素对细胞周期的影响和对细胞凋亡的诱导作用;通过qRT-PCR和Western blotting检测雷公藤红素对凋亡相关基因Caspase-3、Bax、Bcl-2基因和蛋白的表达情况。结果雷公藤红素在400～2 000 nmol/L下,抑制细胞增殖,改变细胞形态;在200～800 nmol/L下,抑制细胞的迁移能力;在800～1 200 nmol/L下,出现G_0/G_1期阻滞作用;在400～1 200 nmol/L下,诱导细胞凋亡并增加相关基因的表达量。结论雷公藤红素可通过影响胆管细胞活力,改变其迁移能力,阻滞细胞周期并促进细胞凋亡的方式产生胆管毒性。     

莪术、三氧化二砷对晶状体上皮细胞增殖及信号转导分子的影响

目的：探讨莪术(RC)、三氧化二砷(As₂O₃)对晶状体上皮细胞(LEC)增殖及细胞信号转导的影响,为防治后发性白内障提供实验依据。方法：采用重组人碱性成纤维细胞生长因子(rhbFGF)诱导牛LEC增殖；四甲基偶氮唑蓝法(MTT)检测RC,As₂O₃对LEC增殖的抑制率；流式细胞术(FCM)检测RC,As₂O₃对LEC增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达的抑制作用；荧光分光光度法检测LEC内［Ca²⁺］i、放射免疫分析法检测cAMP和cGMP。结果：RC,As₂O₃对rhbFGF诱导的LEC增殖的抑制率增加(P＜0.01)；明显下调rhbFGF诱导增殖的LEC内PCNA蛋白表达(P＜0.01)；使增殖的LEC内［Ca²⁺］i和cAMP显著增高(P＜0.01),cGMP显著降低(P＜0.01)。上述指标均呈剂量-效应关系。结论：RC,As₂O₃能显著抑制LEC增殖；Ca²⁺,cAMP和cGMP细胞信号转导是其抑制LEC增殖的重要分子机制；RC,As₂O₃对防治后发性白内障具有广阔的前景。     

白内障超声乳化人工晶状体植入治疗葡萄膜炎并发白内障

目的：观察对葡萄膜炎并发白内障进行超声乳化人工晶状体植入术的疗效。方法：对28例32只眼葡萄膜炎并发白内障行超声乳化及人工晶状体植入术，其中2只眼联合小梁切除术，2只眼联合周边虹膜切除术。结果：术后30只眼（93．75％）视力较术前提高。术后6个月裸眼视力≥0．5者25只眼（78．13％），0．3－0．5者2只眼（6．25％），0．1－0．3者3只眼（9．38％），＜0．1者2只眼（6．25％）。结论：白内障超声乳化人工晶状体植入术治疗葡萄膜炎并发白内障术后炎症反应轻，视力恢复好。