恶性黑素瘤患者外周血酪氨酸酶与临床分期的相关性研究

使用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）检测恶性黑素瘤患者外周血中酪氨酸酶ｍＲＮＡ,并与健康供血者和其它皮肤恶性肿瘤患者对照。结果：６８例恶性黑素瘤患者,临床Ⅰ期和Ⅱ期酪氨酸酶ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率分别为６．５％和１３．３％,Ⅲ期为４２．９％,Ⅳ期（即有远距离转移者）为８７．５％（Ｐ＜０．００１）。说明外周血中酪氨酸酶ｍＲＮＡ阳性率与临床分期有明显的关系,而与性别、肿瘤发病部位和病理学分类无关（Ｐ＞０．０５）。在健康供血者和其他皮肤恶性肿瘤患者血液中酪氨酸酶ｍＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ均为阴性。提示酪氨酸酶ｍＲＮＡ具有特异性。     

大肠癌患者外周血CK—20mRNA基因表达的初步研究

目的 探讨大肠癌患者外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ（细胞角蛋白－２０ｍＲＮＡ）基因表达及其临床意义。方法 用ＲＴ－ＰＣＲ９志录－多聚酶链反应）法检测了３４例大肠癌患者外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ的表达情况。结果 按Ｄｕｋｅｓ分期外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ的表达率分别是：Ａ期２０％,Ｂ期３７．５％,Ｃ期５３．３％,Ｄ期８３．３％。结论 大肠癌患者外周血ＣＫ－２０ｍＲＮＡ的基因表达与Ｄｕｋｅｓ分期有一定关系,并且     

PCR扩增杂交试验检测HCV-RNA

目的：评价ＰＣＲ扩增杂交试验（ＰＣＲ－Ｈｙｂ）在ＨＣＶ－ＲＮＡ检测中的应用。方法：对２８例丙型肝炎患者和５例非丙型肝炎患者采用ＰＣＲ扩增杂交（ＰＣＲ－Ｈｙｂ）试验、套式ＲＴ－ＰＣＲ及ｂＤＮＡ信号扩增试验检测ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果：三种方法的阳性率分别为７１．３４％（２０／２８）、７８．５７％（２２／２８）、１００％（２７／２７）。ＰＣＲ－Ｈｙｂ与套式ＲＴ－ＰＣＴ的阳性符合率为９３．９３％（３１／３３），与ｂＤＮＡ结果呈现较好的相关性（ｒ＝０．８０８３）。结论：ＰＣＲ－Ｈｙｂ具有较好的特异性和敏感性，并在抗病毒治疗时的动态观察有一定价值。     

咳喘落协同地塞米松抑制哮喘大鼠白细胞介素4，5mRNA表达

目的 探讨咳落协同地塞米松拮抗支气管哮喘气道变应性炎症作用的分子机制。方法 采用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）半定量地测定了不同剂量的咳喘落对哮喘大鼠肺组织和外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＩＬ－４ｍＲＮＡ、ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达的影响。结果 哮喘时大鼠肺组织和ＰＢＭＣ中ＩＬ－４ｍＲＮＡ与ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达均增强，显然高于空白对照组（Ｐ〈０．０１），经大剂量咳落治疗后，其表达同时显著降低（Ｐ〉     

喉癌患者多药耐药基因,多药耐药相关蛋白基因的表达及临床意义

应用逆转录－多聚酶链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测了３５例喉癌患者ＭＤＲ－１ｍＲＮＡ、ＭＲＰｍＲＮＡ基因的表达,同时,应用免疫组化ＳＡＢＣ法检测了６１例患者ＭＤＲ－１基因产物Ｐ－ｇｐ。喉癌组织中ＭＤＲ－１ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ的阳性表达率分别为３７．１％（１３／３５）和３４．４％（２１／６１）;３５例ＲＴ－ＰＣＲ检测标本中,两项指标间有一定的相关性（Ｐ〈０．０１）。晚期患者（Ｔ３－４,１８／１０）,     

反转录聚合酶链反应检测自身免疫疾病和正常人外周血淋巴 …

目的：探讨癌基因Ｃ－ｍｙｃ在自身免疫病患者和正常人外周血淋巴细胞上的表达情况。方法；分离正常人及系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血淋巴细胞，采用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，比较正常人及自身免疫病患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达程度。结果：ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃ ｍＲＮＡ表达较正常人和ＲＡ患者高，ＲＡ和正常人之     

急性白血病患者mdr—1基因与P—gp糖蛋白表达

目的：评价ｍｄｒ－１基因与Ｐ－ｇｐ糖蛋白在急性血病（ＡＬ）细胞中表达的相关性及其临床意义。方法：分别应用ＲＴ－ＰＣＲ及流式细胞术（ＦＣＭ）３２例ＡＬ患者白血病细胞中的ｍｄｒ－１ ｍＲＮＡ及Ｐ－ｇｐ糖蛋白表达率及表达水平，同时检测１４例正常人作为对照。结果：临床非耐药组ｍｄｒ－１阳性率为２２．２％，Ｐ－ｇｐ阳性率为３３．３％，而临床耐药组两者分别为７８．６％，８５．７％，均与临床治疗结果有极显著的一     

荧光定量PCR技术在检测HCV—RNA中的应用

目的 评价荧光定量ＰＣＲ技术测定ＨＣＶ－ＲＮＡ水平的价值,探讨ＰＢＭＣ中检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的意义。方法 采用荧光定量ＫＲ及ＲＴ－ＰＣＲ技术同时检测８７例血液透析患者的血清和淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ。结果血清、淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ的荧光定量ＰＣＲ检出率（４９．４％、６９．０％）,分别高于相应标本中ＨＣＶ－ＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ阳性率（３３．３％、３５．６％）（Ｐ ＜０．０５）。血清、淋巴细胞中同时检出ＨＣＶ－ＲＮＡ的一致率,荧光定量ＰＣＲ法（３１．０％）显著高于ＲＴ－ＰＣＲ定性法（６．９％）（Ｐ＜０．００１）． 荧光定量ＰＣＲ法,淋巴细胞中ＨＣＶ－ＲＮＡ检出率高于血清（Ｐ＜０．０１）。结论 与 ＲＴ－ＰＣＲ相比,荧光定量ＰＣＲ技术检测 ＨＣＶ－ＲＮＡ敏感性较高,对ＰＢＭＣ内ＨＣＶ－ＲＮＡ检测有利于提高ＨＣＶ检测的阳性率。     

应用RT—PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５’端非编码（５’ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶ ＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测定－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），和ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶ ＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶ ＲＮＡ，更早地确诊丙型肝     

急性早幼粒细胞白血病PML-RAR_αmRNA的检测和临床意义

应用热启动ＲＴ ＰＣＲ 方法检测急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）ＰＭＬ ＲＡＲαｍ ＲＮＡ，与传统“巢式”ＰＣＲ 比较，仅需１ 对引物而获１０－ ４ 的敏感性。对７ 例ＡＰＬ患者，分别在诊断时及缓解后进行ＰＭＬ ＲＡＲαｍ ＲＮＡ的动态监测。这些患者分别接受如下治疗：２ 例仅给予全反式维甲酸（ＡＴＲＡ） 治疗；其余５ 例接受ＡＴＲＡ 联合化疗药物治疗。所有缓解后患者均进一步接受强化治疗。每月均对骨髓及外周血标本进行ＰＭＬ ＲＡＲαｍＲＮＡ 的检测，发现仅予ＡＴＲＡ 可获血液学缓解，但不能达到ＰＣＲ 缓解，骨髓及外周血仍存在ＰＭＬ ＲＡＲαｍＲＮＡ；而接受ＡＴＲＡ 联合化疗药物治疗获缓解后，骨髓及外周血ＰＣＲ 结果均阴性，显示了对恶性克隆的有效根除。２ 例患者ＰＣＲ 结果持续阳性，并在６ 个月后复发。ＰＣＲ方法不仅可评价化疗效果，指导临床用药，更可以预测复发。     

急性髓细胞白血病细胞IL-2受体基因的研究

为研究髓细胞白血病（ＡＭＬ）细胞白介素－２受体（ＩＬ－２Ｒ）基因及ＩＬ－２在ＡＭＬ中的作用，用逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）对４１例ＡＭＬ患者化疗前白血病细胞ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ进行检测，并对部分ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞用３Ｈ－ＴｄＲ掺入法测定其对重组人ＩＬ－２（ｒｈＩＬ－２）的反应。结果显示，ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒα和ＩＬ－２β基因表达是一普遍现象，４１例中白血病细胞有ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达分别为２８例（６８．３％）和３２例（７８．０％），ＩＬ－２ＲαｍＲＮＡ和ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ同时表达者２１例（５１．２％）。ＩＬ－２Ｒ基因阳性表达细胞对ｒｈＩＬ－２的体外反应呈不均一性，表现为细胞增殖、受抑或不反应，８例中仅１例Ｍ５型患者细胞呈增殖反应。本研究表明ＡＭＬ细胞ＩＬ－２Ｒ基因表达是一普遍现象，这些细胞在体外对ｒｈＩＬ－２的反应呈不均一性，大多表现为无反应或受抑。     

凋亡诱导基因TRAIL的受体在卵巢肿瘤中的表达

应用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测３例正常卵巢、６例良性卵巢肿瘤和１６例恶性卵巢肿瘤组织中ＴＮＦ家族新成员ＴＲＡＩＬ的受体ＤＲ５,ＤｃＲ１和ＤｃＲ２表达。结果显示：正常人外周血淋巴细胞及３例正常卵巢组织中ＴＲＡＩＬ受体均为阳性表达。良性卵巢肿瘤中ＤＲ５阳性表达率为８３．３％（５／５）,ＤｃＲ１为８３．３％（５／６）,ＤｃＲ２为１００％（６／６）。恶性卵巢肿瘤中Ｄ Ｒ５阳性表达率为６８．８％（１１／１６）,Ｄ     

反转录聚合酶链反应检测自身免疫疾病和正常人外周血淋巴细胞C-myc癌基因的表达

目的：探讨癌基因Ｃ－ｍｙｃ在自身免疫病患者和正常人外周血淋巴细胞上的表达情况。方法：分离正常人及系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）、类风湿性关节炎（ＲＡ）患者外周血淋巴细胞，采用异硫氰酸胍一步法提取ＲＮＡ，利用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，比较正常人及自身免疫病患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达程度。结果：ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达较正常人和ＲＡ患者高，ＲＡ和正常人之间没有差异。ＨＬ－６０细胞系Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达最强，ＧＢＣ胃癌细胞株较正常人为高。结论：提示Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ在肿瘤细胞株及ＳＬＥ患者外周血淋巴细胞上有较高的表达，认为自身免疫病原癌基因的表达在其发病机理中具有重要的作用。     

哮喘中外周血单个核细胞白细胞介素5表达及意义研究

该文研究了哮喘豚鼠嗜酸性粒细胞（ＥＯＳ）在外周血及支气管肺泡灌洗液（ＢＡＬＦ）中的变化,用ＲＴ－ＰＣＲ半定量测定了外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）及支气管组织白细胞介素５（ＩＬ－５）ｍＲＮＡ表达量。结晶显示哮喘豚鼠ＥＯＳ及ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达量均较对照组及地塞米松干预组显著升高,ＰＢＭＣ中ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达量与支这组织ＩＬ－５表达及外周血ＥＯＳ计数成正相关。提示哮喘豚鼠ＰＢＭＣ、ＩＬ－５ｍＲＮＡ表达     

CEA分泌性肿瘤微循环检测体会

目的 检测肿瘤外周血肿瘤细胞,建立肿瘤微循环转移早期诊断的方法。方法 取ＣＥＡ分泌性肿瘤患者外周血,分离其有核细胞后进行细胞总ＲＮＡ的抽提,运用ＲＴ－ＰＣＲ进行基因检测。结果 以ＰＣＲ终产物出现１３１ｂｐ带定为ＣＥＡｍＲＮＡ阳性,结果２０例患者总阳性率５５％。结论 ＲＴ－ＰＣＲ是分子生物学领域的新技术,已成为肿瘤微循环检测的方法,具有灵敏度高的优点。在该技术运用中的一些注意事项。     

应用RT－PCR检测丙肝病毒246例分析

用ＲＴ－ＰＣＲ（逆转录聚合酶链反应）扩增丙型肝炎病毒５′端非编码（５′ＮＣＲ）序列，２４６例肝炎患者中ＨＣＶＲＮＡ（丙型肝炎病毒核糖核酸）阳性者４５例，阳性率１８．３％（４５／２４６），凡阳性者用酶联免疫法测抗－ＨＣＶ（抗丙型肝炎病毒抗体），其中２４例测到抗－ＨＣＶ，阳性重叠率５３．３％（２４／４５），用ＲＴ－ＰＣＲ法检测ＨＣＶＲＮＡ，能在抗－ＨＣＶ转阳以前检出ＨＣＶＲＮＡ，更早地确诊丙型肝炎。     

幽门螺杆菌感染者胃粘膜中白介素—8mRNA的竞争RT—PCR检测

目的：从分子水平探讨幽门螺杆菌（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｒｏｌｉ，ＨＰ）感染对细胞因子ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达的影响，说明竞争ＲＴ－ＰＣＲ法是定量细胞因子的精确方法。方法：３５例幽门螺杆菌感染患者，抗菌治疗前后分别取胃窦部活检粘膜２块，经逆转录反应合成ｃＤＮＡ，经竞争ＲＴ－ＰＣＲ法测定ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达量，按配对ｔ检验处理数据。结果：根除成功者２８例，粘膜中ＩＬ－８ｍＲＮＡ的表达量显著下降（Ｐ＜０．０１），而根除失败者７例，粘膜中ＩＬ－８ｍＲＮＡ表达量无明显变化（Ｐ＞０．０５）。结论：ＨＰ感染可诱导粘膜中产生过量的细胞因子ＩＬ－８，竞争ＲＴ－ＰＣＲ法是定量细胞因子的精确方法。     

鼻咽癌组织C—erbB—2表达与细胞增殖和预后的关系

应用免疫组化及原位杂交方法，对良恶性鼻咽组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２表达及增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）进行检测。结果显示：鼻咽癌（ＮＰＣ）组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白和ｍＲＮＡ阳性率分别为８７．８％和８４．０％，二者同时表达为８４．０％；癌旁粘膜中二者阳性率分别为７４．６％和７６．５％，同时表达为８２．４％。泡状核细胞癌ＰＣＮＡ ＳⅡ值明显高于低分化鳞癌（Ｐ〈０．０１）。癌组织中Ｃ－ｅｒｂＢ－２蛋白阳性病例     

急性白血病细胞肿瘤坏死因子mRNA表达及其意义

目的 了解急性白血病不同类（亚）型及不同病期患者肿瘤坏死因子（ＴＮＦ）在ｍＲＮＡ水平表达的差异。方法 应用ＲＴ－ＰＣＲ半定量法检测急性白血病患者６５例（初治４９例,复发８例,缓解８例）外周血或骨髓血单个核细胞ＴＮＦ－ｍＲＮＡ表达量,并以１５例献血员及健康志愿者为对照。结果 （１）急性白血病初治组的ＴＮＦｍＲＮＡ表达阳怀率虽低于对照组,但平均表达量显示高于对照组,其中Ｍ５ａ的ＴＮＦｍＲＮＡ表达量显示     

uPAR mRNA测定及其在U937细胞中的表达

目的 研究凝血酶、ＴＮＦ－α、ＩＦＮ－γ等对Ｕ９３７细胞表达ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的影响,观察凝血系统、炎症介质与纤溶功能变化间的关系。 方法 建立并应用逆转录ＰＣＲ（ＲＴ－ＰＣＲ）法测定培养Ｕ９３７细胞的ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ。 结果：１．经测定批间变异系数（ＣＶ间）确认了ＲＴ－ＰＣＲ法测定ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ的稳定性;２．以不同浓度凝血酶刺激２４ｈ,对Ｕ９３７细胞表达ｕＰＡＲ ｍＲＮＡ有抑制和促进两种不