HFCL细胞下调HL-60细胞cxcr4基因的表达及意义

目的:研究正常人骨髓成纤维样基质细胞HFCL对急性髓细胞白血病HL-60细胞cxcr4基因表达的影响及意义. 方法:采用流式细胞仪检测细胞周期,NBT还原实验和CD11b, CD14, CD13, CD33细胞表面抗原的测定作为细胞分化的指标;采用半定量RT-PCR, Northern blot检测cxcr4基因的表达. 结果:HL-60细胞与HFCL细胞共培养后,NBT阳性细胞增高,CD11b和CD14的表达增多,并有明显的统计学意义;而且cxcr4 mRNA的表达下调. 结论:HFCL细胞能诱导HL-60细胞部分向单核细胞分化,并使趋化因子受体cxcr4表达下调.     

ADFMChR诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化

目的:研究5-烯丙基-7-二氟甲基白杨素(ADFMChR)诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化作用。方法:体外培养人急性髓性白血病HL-60细胞。瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞分化的形态学改变;细胞免疫组织化学法和间接免疫荧光显微镜观察细胞表面分化抗原CD11b表达。结果:瑞氏-吉姆萨染色结果显示,ADFMChR诱导HL-60细胞发生分化成熟的形态学变化;细胞免疫组织化学显示ADFMChR增加HL-60细胞粒细胞系的特异性表面分化抗原CD11b的表达;间接免疫荧光显示经ADFMChR处理的HL-60细胞表面分化抗原CD11b表达增强,阳性表达率呈剂量依赖性升高。结论:ADFMChR具有诱导HL-60细胞分化的作用。     

氨基葡萄糖硫酸盐抑制白血病细胞HL60增殖并诱导其分化

目的:研究氨基葡萄糖硫酸盐(GS)对白血病细胞HL60的增殖和分化的影响. 方法:采用台盼蓝活细胞计数法检测不同浓度的GS对HL60细胞增殖的影响;细胞化学染色法观察药物作用后细胞形态的变化;流式细胞仪检测药物对HL60细胞周期的影响及细胞表面分化抗原CD11b,CD14,CD13和CD33表达的影响. 结果:GS能明显抑制HL60的增殖;经5 mmol/L GS处理5 d后,HL60细胞体积缩小,核浆比例降低,核仁减少甚至消失,核染色质趋向致密,核形态扭曲折叠或分叶;5 mmol/L GS处理48 h后, G1期细胞由37.8%增加至47.9%,S期由46.8%减低至40.6%,G2期峰轻度减低, 未发现亚二倍体峰. 经1 mmol/L,5 mmol/L GS分别处理120 h后,CD11b和CD14的表达分别由2.3%,0.5%升高至23.0%,11.9%和15.8%, 4.3%,CD33及CD13的表达未见明显变化. 结论:GS能抑制白血病细胞HL60的增殖,并诱导其向成熟单核、粒细胞分化.     

黄荆子乙酸乙酯提取物诱导HL-60细胞分化

目的:观察黄荆子乙酸乙酯提出物(EVn-50)诱导人急性髓性白血病HL-60细胞分化作用。方法:体外培养HL-60细胞,MTT法测定细胞活性;瑞氏-吉姆萨染色法观察细胞分化形态学变化,间接免疫荧光显微镜观察细胞表面分化抗原CD11b表达。结果:EVn-50抑制HL-60细胞活性,其IC50值为6.29μg/mL,与全反式维甲酸(ATRA)10.35μg/mL相比较强;EVn-50具有诱导HL-60细胞向粒细胞系分化并表达分化抗原CD11b的作用,其阳性表达率呈剂量依赖性升高。结论:EVn-50具有诱导HL-60细胞分化的作用。     

六亚甲基二乙酰胺体外诱导HL-60 细胞分化的机制

目的探讨六亚甲基二乙酰胺(HMBA)体外诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株HL-60细胞分化的分子机制。方法HL-60细胞与HMBA体外培养3d；运用流式细胞仪测定细胞分化抗原CD11b、CD14及细胞内Cyclin D、Cyclin E、p27抗原；半定量PT-PCR分析c-myc、Rb基因 mRNA的表达。结果HL-60细胞经HMBA处理后显示CD11b表达显著增高；胞内抗原Cyclin E表达显著下降，Cyclin D、p27表达显著增高，并呈剂量依赖关系；RT-PCR反应显示c-myc mRNA表达显著下调，Rb mRNA表达显著增高。结论HMBA能体外诱导HL-60细胞分化，其机制可能是通过下调Cyclin E、上调p27；同时使得增殖分化相关基因c-myc mRNA表达下调、Rb mRNA表达上调而使细胞阻滞于G1期，抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

芳维A酸乙酯对HL-60细胞CD11b、CD15表达的影响

目的观察芳维A酸乙酯(arotinoid ethylester, AE)在HL-60细胞分化成熟过程中对其CD11b、CD15表达的影响,初步探讨AE治疗脓疱型银屑病的可能机制.方法 HL-60细胞以二甲基亚砜(dimethylsulfoxide, DMSO)、全反式维A酸(all-trans-retinoic acid, ATRA)、AE诱导培养,5 d后用流式细胞仪检测HL-60细胞表面CD11b和CD15的表达.结果 HL-60细胞经DMSO、ATRA、AE诱导后CD11b和CD15荧光标记率均比诱导前提高;ATRA组HL-60细胞CD11b和CD15荧光强度显著低于DMSO组,AE组HL-60细胞CD11b和CD15荧光强度显著低于ATRA组.结论 AE可明显抑制HL-60细胞表达CD11b、CD15;AE可能通过抑制参与炎症反应的中性粒细胞表达CD11b、CD15而降低中性粒细胞参与炎症反应的过程.     

小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及增殖抑制作用

目的 研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞增殖与分化的影响。方法 应用锥虫蓝排染法、生长曲线测定法、克隆形成实验检测药物对HL-60细胞生长的影响；细胞分化根据细胞形态、硝基四氮唑蓝(NBT)还原能力、细胞表面标记的改变来判断；细胞周期变化用流式细胞仪测定。结果 HL-60细胞经小檗碱处理后生长明显受抑，IC50为5．29(24h)，2．65(48h)，0．74(72h)mg／L。选择1，2，4，8mg／L小檗碱作用于HL-60细胞，动态观察发现HL-60细胞向成熟细胞分化：细胞核变小，核浆比减少；NBT还原能力显著增强；CD11b表达升高，4mg／L组CD11b阳性率高达85．1％。细胞周期分析发现，小檗碱处理后细胞阻滞于G0／G1期，S期细胞明显减少。结论 盐酸小檗碱可抑制HL-60细胞的增殖，并诱导HL-60细胞向成熟细胞分化。     

二甲基亚砜诱导HL-60细胞分化的细胞周期时相性研究

目的:探讨二甲基亚砜(dimethylsulphoxide,DMSO)诱导分化的HL-60细胞周期变化,进一步揭示细胞分化在细胞周期中特定的时相。方法:以分化诱导剂DMSO(终浓度为2.5%,v/v)影响下不同时间点的HL-60细胞为检测对象,应用流式细胞术分析细胞的大小及细胞表面的分化标志;碘化丙啶染色后用激光共聚焦显微镜观察细胞形态,从而对已分化细胞进行确认;应用流式细胞术分析药物诱导的细胞周期变化;再应用流式分选术结合激光共聚焦显微镜观察各期细胞形态,进一步揭示药物诱导的细胞分化在细胞周期中的时相特异性;应用流式细胞术检测G₁期Ki67的表达水平。结果:随着药物诱导时间的延长,被诱导的HL-60细胞体积逐渐增大;48h后,被DMSO诱导细胞开始表达分化标志物CD11b,并出现细胞核型的变化。被诱导的HL-60细胞的细胞周期图出现G₀/G₁峰升高,S期水平下降。随着药物诱导时间的延长,G₁期Ki67的表达水平逐渐下降。只有在G₁期细胞中可见到已分化细胞。结论:DMSO可以诱导HL-60细胞周期的G₁早期→G₁晚期阻滞,并诱导HL-60沿着粒系方向分化,细胞分化完成于细胞周期中的G₁早期。     

竹节参总皂苷对人白血病细胞株HL-60的作用

目的:研究竹节参总皂苷(total saponins of Panax japonicus,TSPJ)对人白血病细胞HL-60的作用,探讨其作用机制,为进一步开发竹节参提供理论依据。方法:体外培养人早幼粒白血病细胞HL-60,细胞计数法观察TSPJ对细胞活力的影响,四唑氮蓝(nitroblue tetrazolium,NBT)测定其对细胞还原能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期变化和膜表面分化抗原CD11b的表达情况。结果:和阴性对照组比较,不同浓度TSPJ处理的细胞活力显著下降,NBT阳性细胞增多,G_0/G_1期细胞增多,S期细胞减少,膜表面分化抗原CD11b的表达量增多。结论:TSPJ对体外培养的HL-60细胞生长育一定抑制作用,其作用机制与诱导细胞分化和周期阻滞有关。     

抗CD44单克隆抗体A3D8对人白血病细胞系HL-60细胞增殖及分化的影响

目的 探讨抗CD44单克隆抗体A3D8对HL-60细胞增殖及分化的影响，寻找急性髓系白血病(AML)治疗的新靶点。方法 以AML细胞株HL-60为模型，通过观察细胞生长、形态学、表面分化抗原、细胞周期和细胞因子表达，以及应用硝基四氮唑蓝(NBT)还原实验来研究抗CD44单克隆抗体A3D8对细胞增殖及分化的影响。结果 HL-60细胞高表达CD44；A3D8以浓度和时间依赖性方式抑制HL-60细胞生长。A3D8使HL-60细胞周期阻滞在G0／G1期，CD11b、CD14表面抗原阳性率明显增高，细胞体积增大，核／浆比例减小，核染色质聚集，NBT还原实验阴性，细胞表达粒细胞集落刺激因子mRNA，呈现向单核细胞系方向分化。结论 A3D8可抑制HL-60细胞增殖，并诱导其向单核系细胞分化，CD44有可能成为AML治疗的新途径。     

盐酸小檗碱对HL-60细胞的诱导分化及其作用机制

目的：研究盐酸小檗碱对人早幼粒白血病HL-60细胞诱导分化的作用履其分子机制。方法：HL-60细胞经盐酸小檗碱处理后，观察细胞形态学变化，以及细胞NBT还原能力的改变，用流式细胞仪测定细胞增殖周期、CD11b、C-myc、C-fos表达。结果：盐酸小檗碱作用于HL-60细胞后，形态学观察显示分化细胞的特征；NBT还原能力增强；CD11b表达升高；细胞被阻滞于G0／G1期，S期细胞数明显减少；C-myc基因表达减弱，C-fos基因表达增强。结论：盐酸小檗碱可诱导HL-60细胞分化戍熟，其机制可能是通过调控与HL-60细胞增殖、分化相关基因表达，抑制DNA合成，从而抑制细胞增殖，诱导细胞分化。     

NB4细胞和HL60细胞向粒细胞分化过程中细胞表面CD11b和CD18表达的比较

目的:比较髓系白血病细胞株NB4细胞和HL60细胞向粒细胞分化过程中细胞表面抗原CD11b和CD18的表达。方法:用全反式维甲酸(ATRA)诱导NB4细胞和HL60细胞向粒细胞定向分化,用MGG染色法进行初步鉴定,用FACS检测并比较两株细胞在分化前后细胞表面CD11b和CD18的变化,用Western blot检测两株细胞分化前后CD18的蛋白表达。结果:与分化前相比,两株细胞分化后细胞表面CD11b和CD18的表达均明显升高,并且这样的变化在NB4细胞中较HL60细胞更加显著。结论:分化NB4细胞可能较分化HL60细胞是更方便的粒细胞模型。     

罗格列酮经PPARγ受体介导HL-60细胞成熟分化

目的：研究人过氧化物酶体增殖物激活受体1（PPARγ）在白血病HL-60细胞分化中的作用．方法：采用Li—pofectamine2000脂质体进行HL-60细胞质粒转染．实验分单纯HL-60细胞培养组,空载体pIRES2-EGFP转染组,10μmol／L罗格列酮干预组和10μmol／L罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组．荧光显微镜观察转染细胞绿色荧光蛋白（GFP）表达．流式细胞仪检测转染效率,并对转染细胞成熟粒．单细胞特异性标志CD11b和CD14的表达进行分析．结果：转染的HL-60细胞可见绿色荧光表达,phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染效率为55％．流式细胞仪检测结果表明,罗格列酮干预组和罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染组的CD11b＋和CD14＋细胞检出率均显著高于未转染细胞组与空载体转染组（P〈0．05）,且罗格列酮联用phPPARγ-IRES2-EGFP质粒转染具有协同效应;而未转染细胞组与空载体转染组2种表型细胞百分率差异均无统计学意义（P〉0．05）．结论：罗格列酮可通过激活PPARγ促进HL-60细胞向粒-单细胞成熟分化,有望成为治疗白血病的候选药物．     

表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系的建立及其在HL-60细胞分化过程中的作用

目的:建立表达人Jagged1基因的骨髓基质细胞系,并研究Jagged1基因表达在HL-60细胞诱导分化过程中的作用.方法:构建含有人全长Jagged1基因的逆转录病毒载体MSCV-Jagged1/neoR,将其导入包装细胞PT67并收获病毒上清,用病毒上清转染骨髓基质细胞系HFCL,经G418筛选得HFCL-pMSCV-Jagged1细胞,用Western印迹方法检测Jagged1基因的表达;将HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1细胞、HFCL细胞在含有全反式维甲酸(ATRA)的培养液中共培养,流式细胞仪检测不同时间点HL-60细胞CD11b的阳性率.结果:Western印迹方法证明HFCL-pMSCV-Jagged1细胞Jagged1表达水平明显高于HFCL细胞;HL-60细胞与HFCL-pMSCV-Jagged1、HFCL共培养48和72 h后,CD11b阳性率在Jagged1组明显低于HFCL组(P<0.05).结论:Jagged1基因表达可以较为显著地抑制ATRA诱导的HL-60细胞的分化.     

DRAM-1(自噬调控基因-1)慢病毒包装及对HL60细胞分化作用的研究

目的观察HL60细胞分化过程中DRAM-1变化,观察抑制DRAM-1表达对HL60细胞系分化的影响。方法 0.2×106/ml的HL60细胞系中加入维甲酸1μmol,分别在24h、48h、72h、96h流式细胞仪检测细胞表面CD11b表达,RT-PCR检测DRAM-1 mRNA、CEBPE、CSF3R表达。采用慢病毒转染293T细胞,收集培养液上清,感染HL60细胞,RT-PCR检测慢病毒感染后的DRAM-1 mRNA表达。结果 ATRA处理组较未处理组DRAM-1mRNA在HL60细胞系分化过程中表达明显增高。慢病毒感染细胞后,RT-PCR显示DRAM-1表达较对照组降低,等量ATRA处理,CD11b表达下降。结论 DRAM-1在HL60细胞系分化过程中表达增高。抑制DRAM-1表达阻碍HL60细胞系分化。     

大蒜油诱导HL-60细胞分化的实验研究

目的：观察大蒜油对HL-60细胞的诱导分化作用。方法：MTT法检测大蒜油对HL-60细胞的增殖抑制,Giemsa染色观察细胞形态改变,流式细胞术分析细胞周期改变,并检测CD11b、CD15的表达。RT-PCR检测bcl-2、c-myc／mad、mpo基因mRNA的表达。同时设ATRA、As2O3为阳性对照,与大蒜油的作用进行比较分析。结果：大蒜油明显抑制了HL-60细胞增殖,使大部分细胞阻滞于G0／G1期,作用强于ATRA和As2O3;诱导细胞成熟分化的能力与ATRA接近,优于As2O3;通过抑制bcl-2、c-mvc和mpo基因的表达,促进mad基因的表达来发挥作用。结论：大蒜油对HL-60细胞有明显的增殖抑制和诱导分化作用,有可能成为新的临床诱导分化剂。     

核干细胞因子基因沉默对HL-60细胞分化特征的影响

目的:探讨核干细胞因子(NS)特异性短发夹RNA(shRNA)沉默NS基因对白血病细胞HL-60分化的影响。方法:用体外合成的NS-shRNA转染HL-60细胞,Western blot检测转染细胞NS蛋白,Wright-Giemsa染色观察细胞形态学改变,流式细胞仪(FCM)测定细胞表面分化抗原变化,细胞髓过氧化物酶(MPO)和过碘酸-雪夫反应(PAS)测定细胞化学特征的变化。以转染无关shRNA序列的细胞作阴性对照,以未转染细胞作空白对照。结果:NS-shRNA转染的HL-60细胞NS蛋白较对照组降低;转染细胞细胞核和细胞质都出现了成熟和分化特征,分化抗原CD11b、CD33、CD14、CD64、HLA-DR增高,CD38降低,显示有向粒系继续成熟和向单核系重新分化的趋势;转染细胞内MPO活性增强,PAS反应增强。结论:阻断NS基因表达能促使HL-60细胞重分化。