λ噬菌体DNA的快速提取法

从ｃＤＮＡ文库中筛选目的片段是获得新基因的常用和可靠手段。由于具有能扩增和长期保存不失活的优点，目前一般用λ噬菌体ＤＮＡ来作为ｃＤＮＡ文库载体。因此提取λ噬菌体ＤＮＡ便成为鉴定ｃＤＮＡ文库重组效率和获得目的片段的必由之路。通常提取λ噬菌体ＤＮＡ采用２...     

简便快速的血中DNA提取纯化法

目的 为了探讨血中DNA提取纯化的简便快速的方法。方法 用Tritonx-100同时反复破碎红细胞和白细胞，然后用NaClO4、SDS解聚核蛋白，用PCI抽提，Sephader G-25柱层析。结果 A260／A280可达1．78～1．80，平均产量20．3μg/ml，全过程2～3h。结论 这种方法用于临床经济、快速、得率高，诊断结论可靠。     

微波炉加热质粒DNA快速提取法

介绍一种以微波炉加热快速提取质粒的方法，所提取的ＤＮＡ纯度，重复性均好，操作简便，整个提取过程不超过２０ｍｉｎ，省时省力，适用于规模筛选重组克隆子，也可直接用于转化、酶切及ＤＮＡ序列测定。     

改良裂解法提取微量组织DNA的研究

为了探讨微量组织核酸的冷静 效的提取方法,采用改良裂解法提取２５例微量胃粘膜组织村本的核酸,同时与经典的饱和酚抽提法和简便的消化煮沸法进行比较,用１％琼脂糖电泳观察结果,并用分光光度法检测提取核酸的量。结果显示该法的提取纯度接近酚抽提法,所获核酸的量较多,而所需的时间最短;     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核 ,用氯仿∶异戊醇 ( 2 4∶1 )直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高 ,A2 60nm/A2 80nm=1 .83± 0 .1 3,每毫升外周血可得DNA 33± 3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效 ,适用于批量临床标本的处理。     

全血基因组DNA快速提取法

目的　建立一种简便、快速、有效、微量外周血基因组DNA的提取方法。方法　采用NaI作细胞裂解剂裂解细胞和细胞核,用氯仿:异戊醇(2 4 :1)直接提取基因组DNA。结果　该方法提取外周血基因组DNA的纯度高,提取效率每毫升外周血可得DNA 33±3.5 2 μg。结论　本法简便、快速、有效,适应于批量临床标本的处理。     

碱裂解法提取质粒DNA的研究

目的对碱裂解法提取质粒DNA中主要试剂的作用进行研究.方法采用不同的溶液Ⅰ、溶液Ⅱ、溶液Ⅲ分别进行质粒DNA的提取.结果方法3得到质粒DNA的量明显偏少,方法4得到的质粒DNA含蛋白质较多.结论溶液Ⅰ对实验结果影响不大,溶液Ⅱ中的NaOH关系到所提取质粒DNA量的多少,溶液Ⅲ中的醋酸钾是蛋白质能否去除的一个重要因素.     

改良SDS法快速提取赤芍干叶片DNA的研究

目的 从富含多糖和小分子杂质的赤芍干叶片中快速分离出适用于各生物技术分析的高质量基因组DNA,为赤芍的鉴定研究提供实验基础。方法 以常规的SDS法为基础,进一步优化DNA提取各步骤,获得了一种快速可行的提取高质量赤芍干叶片DNA的方法。结果 使用该方法从4个不同产地的赤芍干叶片中分离的DNA A_260/A280分别为1.90、1.88、1.91、1.93,所需时间均小于2.5 h,所得DNA分别直接用于PCR分析,结果满意。结论 该方法用于提取赤芍干叶片DNA快速可行,可有效地从富含多糖和小分子杂质的组织中分离出高质量DNA,方法简便、快速,成本低。     

外周血DNA简易提取法

从人血液中或组织中提取ＤＮＡ是现代分子生物学研究获得大分子ＤＮＡ的普遍方法，我们对经典［１～４］的ＤＮＡ提取法进行了一些改进和简化，获得了较好的效果，现介绍如下。１方法与结果取ＡＣＤ抗凝血２ｍｌ，加入等量质量浓度为３％明胶生理盐水（含０．５％ＥＤＴＡ...     

人外周血细胞DNA快速提取

外周血采集方便,是核酸筛查时常规取样途径。提取外周血DNA经典方法常需分离白细胞并经表面活性剂和蛋白酶K(SDS-PK)处理,操作比较繁琐。Bowtell等报告以浓盐酸胍(GHCL)溶液作为蛋白变性剂用于染色体DNA的提取,原方法未经酚抽提而将细胞裂解液与乙醇混合后,采用末端为“U”型的玻璃棒将线状DNA挑出,在实验室试用后发现,在体外培养细胞或组织DNA取样量较多时才易将DNA分子绕在玻璃棒上,且操作时体积大于20ml。为了适用于数毫升全血DNA快速提取。辅     

低剂量辐射诱导小鼠胸腺细胞DNA裂解适应性反应的剂量率效应

目的：观察低剂量辐射诱导胸腺细胞DNA裂解适应性反应的剂量率效应。方法：用X射线照射Kunming雄性小鼠,其诱导剂量（D1）及其后攻击剂量（D2）分别是75 mGy和1.5 Gy,D1剂量率为6.25、12.5、25、50、100和200 mGy•min^-1,D2剂量率为287 mGy•min^-1,D1 和D2间隔6 h。通过荧光分光光度计检测DNA裂解断片的变化。结果：D2组胸腺细胞DNA裂解率明显高于假照组（P<0.001）;当D1剂量率为6.25、12.5和25 mGy•min^-1,D1＋D2组DNA裂解率明显低于D2组（P<0.05或P<0.01）。 结论：当D1在75 mGy,剂量率为6.25～25 mGy•min^-1;D2为1.5 Gy,剂量率为287 mGy•min^-1;D1和D2间隔6 h,可在全身照射条件下诱导小鼠胸腺细胞DNA裂解的适应性反应。     

一种制备质粒DNA的改良碱裂解法

目的介绍一种快速获取高纯度质粒DNA的方法。方法使用替代试剂，建立改良的碱裂解法进行质粒DNA提取，并用琼脂糖电泳验证所得的质粒的质量，紫外测量估算产量及纯度。限制性酶切验证其用度。结果琼脂糖电泳显示质粒DNA条带明亮，以超螺旋方式为主。A260／280为1．903，含量为320μg／mL，酶切后得到约500bp的目的片段。结论改良碱裂解法操作简单、实用，所得样品纯度高，达到了分子生物学常规实验的要求。     

3种方法对临床菌血症样本细菌DNA提取的比较

目的寻找一种简单、有效的提取临床菌血症样本细菌DNA的方法．方法分别用碱液加热裂解法、溶菌酶法和商品DNA提取液法提取细菌DNA,用临床常见病原菌特异性引物,进行PCR扩增．结果（1）商品DNA提取液法提取革兰阴性菌DNA,经PCR扩增后得到特异性目的片段,但未扩增出革兰阳性菌的特异性目的片段;（2）碱液加热裂解法、溶菌酶法提取革兰阴、阳性菌DNA,经PCR扩增后均得到特异性目的片段,但碱液加热裂解法比溶菌酶法能扩增到更低浓度的细菌DNA目的片段．结论碱液加热裂解法是3种方法中最简单有效的细菌DNA提取方法,适用于临床病原菌基因组DNA提取．     

PCR技术在快速筛选DNA文库中的应用

目的探讨运用PCR(polymerase chain reaction)方法快速筛选DNA文库的可行性.方法以猪α-1,3GT cDNA片段为探针,用cDNA上的特异性序列合成的引物,采用噬菌斑原位杂交和PCR相结合的方法,对猪的gDNA文库进行α-1,3GT基因筛选,经酶切、Southern Blot、测序和荧光原位杂交定位.结果经过两次杂交和一次PCR即得信号很强的7个阳性单克隆,插入子均在8kb以上,且包含第三内含子,其中3个片段测序证实含第三、第四外显子;荧光原位杂交证实该基因位于染色体1q2.10-q2.11.结论PCR可以应用于快速筛选DNA文库.     

流感病毒裂解方法优化研究

目的研究流感病毒的裂解剂及裂解灭活条件。方法使用两种裂解剂TritonX100和TritonN101以不同浓度对流感病毒单价纯化液作用,通过电镜进行裂解效果观察,确定最佳裂解时间,用单向免疫扩散法检测HA含量作为评价指标。同时,观察先灭活再裂解和先裂解再灭活对病毒裂解效果的影响。结果TritonX100的裂解效果较优越,0.5%~1%TritonX100作用90min可使流感病毒裂解完全;TritonX100与甲醛作用的先后顺序对病毒的裂解灭活效果影响不大。结论0.5%~1%TritonX100可得到流感病毒的最佳效果。     

碱裂解法快速提取口腔拭子DNA对CHRNA3基因多态性的研究

目的建立一种快速的从口腔拭子中提取DNA的方法,研究其在尼古丁乙酰胆碱受体α3(CHRNA3)基因多态性分析中的应用。方法以NaOH和乙二胺四乙酸(EDTA)配制碱裂解液,以三羟甲基氨基甲烷-EDTA(TE)为中和液,经加热裂解和中和两步提取口腔拭子DNA。以提取的DNA为模板,用聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析对CHRNA3基因的rs6495309进行分型。对不同基因型的样本测序验证。结果 PCR扩增和酶切的靶带清晰,无非特异性条带。酶切结果与测序结果吻合。结论碱裂解法提取口腔拭子DNA具有快速、简便、经济、可靠的特点,可以用于CHRNA3基因多态性的分析。     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

腰椎间盘突出症胶原酶盘外溶解治疗的临床观察

目的应用国产胶原酶进行盘外注射治疗腰椎间盘突出症150例,观察其近期、中期、远期疗效。方法在X线光电视屏幕引导下。将胶原酶1200U注入突出部位的硬脊膜前腔。结果近期有效率75.99%,其中优良率46.66%;中期总有效率83.32%,其中优良率64.66%;远期总有效率88.66%,其中优良率76.66%;X2检验,P〈0.01。近期、中期、远期疗效有显著差别,远期疗效更加稳定。结论胶原酶溶解术治疗腰椎间盘突出症确实是非手术治疗中的有效方法之一。     

理肺止咳汤煮散剂药效学实验研究

目的：考察理肺止咳汤煮散剂的药理作用。方法：采用各种实验性模型,给予大、小鼠、豚鼠灌胃不同剂量理肺止咳汤煮散剂,观察理肺止咳汤对氨水致小鼠咳嗽的影响、对磷酸组胺诱发豚鼠哮喘的影响、对小鼠气管酚红排泌的影响、对大鼠被动皮肤过敏性的影响等。结果：理肺止咳汤能延长小鼠咳嗽潜伏期和减少咳嗽次数;理肺止咳汤能延长豚鼠的引喘潜伏期;理肺止咳汤能增加小鼠气管酚红排泌量;理肺止咳汤能降低大鼠被动过敏蓝斑皮肤OD值。结论：理肺止咳汤煮散剂有一定的止咳、平喘和化痰作用,能增强大鼠抗过敏能力。