结肠癌患者外周血淋巴细胞CD8和CD28的表达

[目的]探讨结肠癌患者外周血淋巴细胞CD8、CD28的表达及其临床意义。[方法]用流式细胞术对51例结肠癌患者和30例健康体检者外周血淋巴细胞CD8及CD28进行了检测。[结果]结肠癌组CD8^＋ CD28^-细胞与对照组比较明显增高（P〈0．05），CD8^＋ CD28^＋细胞明显低于健康对照组（P〈0．01）。结肠癌患者手术后CD8^＋ CD28^-细胞与手术前比较明显减低（P〈0．01），手术后CD8^＋ CD28^＋细胞与手术前比较明显增高（P〈0．05）。结肠癌患者淋巴结转移组CD8^＋ D28^＋细胞明显低于未转移组（P〈0．01）。Dukes’C期结肠癌患者CD8^＋ CD28^-细胞与Dukes’A期和Dukes’B期相比明显增高（分别P〈0．01，P〈0．05），随着临床分期的进程，CD8^＋ CD28^＋细胞、CD8^- CD28^＋细胞逐渐减低（分别P〈0．01．P〈0．05）。[结论]检测结肠癌患者的外周血中的CD8 和CD28的表达，对了，解患者的免症状况，疾病进展和指导临床对患者进行免疫调节治疗方面有一定的价值。     

老年肺癌患者血清T淋巴细胞亚群CD28的检测及临床意义

目的：探讨老年肺癌患者淋巴细胞免疫功能状态、临床意义及与肺癌病理类型、临床分期的关系。方法：采用三色免疫荧光标记流式细胞术检测35名正常老年人及32例老年肺癌患者外周血的总T淋巴细胞（CD3^＋）、辅助／诱导T淋巴细胞（CD4^＋）、抑制／细胞毒T淋巴细胞（CD8^＋）、细胞毒T细胞（CD8^＋CD28^＋）和抑制T细胞（CD8^＋CD28）。结果：老年肺癌组CD4^＋Tz细胞（t=2．01，P〈0．05）和CD3^＋、CD8^＋T细胞及CD8^＋CD28^＋T细胞亚群明显低于老年正常对照组，t=2．01，P〈0．01；CD8^＋CD28T细胞亚群明显高于老年正常对照组，t=2．01，P〈0．01；老年肺癌患者中，T淋巴细胞及亚群CD28的表达在TNM临床分期及病理类型间差异均无统计学意义，t=2．11，P值均〉0．05。结论：老年肺癌患者存在明显的T淋巴细胞亚群免疫功能紊乱，抗肿瘤能力明显下降，并导致病情恶化更严重，且与病理类型及临床分期无关。     

免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型的建立及其鉴定

目的：建立具有人免疫学特性的高转移肝癌SCID鼠模型。方法：SCID小鼠腹腔注射人外周血淋巴细胞,皮下接种人高转移肝癌细胞MHCC97-H,免疫重建人高转移肝癌SCID小鼠模型,并鉴定建立的结果。结果：①免疫重建荷人高转移肝癌细胞小鼠的成瘤率为100％,较荷瘤组成瘤潜伏期延长,体积缩小（P〈0．05）;转移率为100％,其从皮下转移到肝脏所需时间较荷瘤组延长（P〈0．05）。②第2、4、6周小鼠血中人IgG含量的测定：同期相比,人化荷瘤组小鼠血中人IgG含量高于人化组（P〈0．05）。③第6周SCID小鼠外周血中人CD3^＋T淋巴细胞和人CD20^＋B淋巴细胞含量的测定：人化荷瘤组小鼠血中人CD3^＋T淋巴细胞和人CD20^＋B淋巴细胞含量高于人化组（P〈0．05）。④免疫组化检测人化荷瘤组小鼠脾脏中存在人CD3^＋T淋巴细胞和CD20^＋B淋巴细胞。结论：成功建立免疫重建荷人高转移肝癌SCID鼠模型,为肝癌转移的研究及治疗提供了理想的动物模型。     

肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系

目的研究肝癌荷瘤小鼠调节性T细胞数量的改变及其与肿瘤生长的关系。方法采用小鼠肝癌细胞系H22接种BALB／c小鼠,建立肝癌模型;采用流式细胞术方法检测CD4^＋ CD25^＋T／CD4^＋T细胞的比例;以RT-PCR和流式细胞术检测Foxp3基因的表达。以免疫磁珠分选法纯化CD4^＋CD25^＋T和CD4^＋CD25^-T细胞;在体外,用3H-TdR掺入法检测T细胞的增殖情况;在体内,观察荷瘤小鼠来源的CD4^＋CD25^＋T细胞对肿瘤生长的作用。结果（1）荷瘤小鼠在引流淋巴结中,CD4^＋CD25^＋T细胞占CD4＋T细胞（18．80％±0．06％）比例增高,与对照组（9．50％±0．03％）相比,差异有统计学意义（P〈0．01）;在非引流淋巴结（LN）和脾脏（SP）中,荷瘤小鼠CD4^＋CD25^＋T／CD4^＋T比例分别为16．28％±0．02％和17．28％±0．06％,与对照组9．50％±0．03％和11．08％±0．04％相比,差异有统计学意义（P〈0．01,P〈0．05）;同时,调节性T细胞特异性标志Foxp3 mRNA的表达也升高。在同一只荷瘤小鼠中,引流淋巴结中CD4^＋CD25^＋T细胞数量（18．8％±0．06％）较对侧非引流淋巴结（16．28％±0．02％）略有升高,但差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）从荷瘤小鼠中纯化的CD4^＋CD25^＋T细胞,在体外对抗CD3单抗的刺激无反应,但能抑制CD4^＋CD25^-T细胞的增殖。（3）CD4^＋CD25^＋T／CD4＋T比例与肿瘤大小呈正相关,并且可以抑制CD4^＋CD25^-T细胞的抗肿瘤效应。结论肝癌细胞在小鼠体内的生长可以提高调节性T细胞的数量,其数量的高低与肿瘤的大小呈正相关,提示清除调节性T细胞将是肿瘤免疫治疗的策略之一。     

肝癌微环境中CD4+CD25+Treg细胞与肿瘤免疫细胞的关系

[目的]探讨肝癌微环境中Treg细胞的数量增多与HCC临床分期晚的可能原因。[方法]双重酶标免疫组织化学方法检测52例HCC组织中CD4^＋CD25＋Treg细胞以及CD4^＋CD25-T（CD4^＋T）细胞分布，免疫组化EnVision法检测20例HCC组织中CD8＋T细胞分布。[结果]正常肝脏组织中未发现Treg细胞。HCC组织中Treg细胞数量较癌旁组织明显增多（P=0．000），且肝癌组织中Treg细胞的数量与其浸润性CD4＋T淋巴细胞的数量以及CD4＋T/CD8^＋T比值呈显著负相关（r=-0．539，P=0．014；r=-0．545，P=0．000），而与浸润性CD8^＋T淋巴细胞的数量无明显相关性（f=-0．403，P=0．078）。[结论]Treg细胞在体内可能通过细胞接触的方式抑制CD8^＋T淋巴细胞的增殖来抑制肿瘤局部的免疫，去除或减少HCC微环境中浸润件Tree细胞数量可能提高肿瘤局部免疫治疗效果。     

MMP-9和CD4+/CD8+在乳腺癌淋巴结转移过程中的作用

目的探讨基质金属蛋白酶9（MMP-9）的表达变化以及转移肿瘤周围CD4^＋T细胞／CD8^＋T细胞数量和比值在乳腺癌淋巴结转移发展过程中的作用。方法收集92例乳腺癌患者的腋窝淋巴结293枚。采用免疫组化的方法行细胞角蛋白19（CK-19）以及肌动蛋白染色，筛选出含有微转移、孤立肿瘤细胞的淋巴结。对筛选出的淋巴结行MMP-9、CIM及CD8染色，观察不同转移情况下MMP-9、CD4及CD8的表达情况。结果293枚淋巴结中，明显转移的为84枚（28．67％），有微转移的为42枚（14．33％），孤立肿瘤细胞为22枚（7．51％）；所有明显转移灶周围均有肌动蛋白表达，34枚（80．95％）含有微转移的淋巴结中微转移灶周围有肌动蛋白表达；84枚有明显转移的淋巴结中，MMP-9均呈阳性表达，其中66枚（78．57％）淋巴结高表达（＋＋＋），18枚（21．43％）为中度表达（＋＋）；42枚含有微转移的淋巴结中，1枚（2．38％）呈高表达（＋＋＋），24枚（57．14％）淋巴结呈中度表达（＋＋），15枚（35．72％）淋巴结呈低表达（＋），2枚（4．76％）淋巴结无表达。22枚孤立肿瘤细胞中，3枚（13．64％）呈低表达，其余19枚（86．36％）淋巴结无表达。CD4^＋细胞表达率在有明显转移的淋巴结中明显高于微转移和无转移的淋巴结（P〈0．05）；CD8^＋细胞在有明显转移、微转移及无转移淋巴结之间没有明显差异（P〉0．05）。CD4^＋／CD8^＋在无转移的淋巴结明显低于有明显转移者（P〈0．05）。结论MMP-9的高表达可能是促进淋巴结内肿瘤细胞生长和侵袭的重要原因之一；肿瘤细胞可导致淋巴结癌转移灶局部CD4^＋T淋巴细胞明显增多，导致CD4^＋／CD8^＋比值升高，提示机体在淋巴结局部对肿瘤细胞的免疫应答改变可能是肿瘤细胞得以发展的原因之一。     

原发性肝细胞癌微环境中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞分布与局部免疫的关系

目的通过检测原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma,HCC）局部肝癌组织和癌旁组织中T细胞亚群的分布情况,探讨在肝癌发生、发展过程中CD4^＋CD25^＋调节性T细胞与局部免疫状态的关系。方法54例肝癌组织和癌旁组织及10例正常肝组织用免疫组织化学S—P法标记CD4^＋T细胞、CD8^＋T细胞及CD4^＋CD25^＋调节性T细胞（CD4^＋CD25^＋Tr细胞）,并对组织中CD4^＋CD25^＋Tr细胞与CD4^＋T、CD8^＋T及CD4^＋T／CD8^＋T值进行相关性分析。结果54例肝癌、癌旁组织中CD4^＋CD25^＋Tr细胞单个高倍视野平均数分别为5．6208±2．7235和3．8554±1．6018（P=0．001）;肝癌中CD4^＋CD25^＋Tr细胞数目与肿瘤大小、有无子灶有关,组间差异有显著性（P〈0．01）;肝癌中CD4^＋CD25^＋Tr数量与CD4^＋T细胞的数量以及CD4^＋T／CD8^＋T值呈显著负相关（r=-0．459,P=0．015;r=-0．563,P=0．011）,而与浸润性CD8^＋T细胞的数量分布无关（r=-0．485,P=0．072）。结论在肝癌微环境中CD4^＋T淋巴细胞表达降低,CD4^＋CD25^＋Tr细胞表达增高,后者可能通过抑制CD4^＋T淋巴细胞的增殖来抑制肝癌局部免疫,从而促进肿瘤的进展以及侵袭或转移。     

CD80 CD86和CD137L基因联合表达对小鼠肝癌种植模型肿瘤免疫原性的影响

目的探讨CD80、CD86和CD137L基因联合表达对肿瘤免疫原性的影响。方法按接种变异瘤株不同,将BALB／C小鼠随机分成A组（H22．Wt细胞）、B组（H22-neo细胞）、C组（H22-CD80／CD86^＋细胞）、D组（H22．CD137L^＋细胞）、E组（H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞）5组,建立H22．BALB／C小鼠荷肝癌模型,A、B组为对照组。观察小鼠成瘤率、成瘤潜伏期、荷瘤鼠存活率及肿瘤增殖情况。通过复种试验观察转基因对H22变异株免疫原性和机体免疫保护作用的影响。结果E组首次接种成瘤率仅有50．0％,显著低于其余4组（P〈0．01）。首次接种后,C组荷瘤鼠肿瘤生长受到明显抑制,有2只荷瘤鼠肿瘤完全消退。E组肿瘤生长所受抑制较C组更为明显,肿瘤峰值体积显著小于C组,且有3只荷瘤鼠肿瘤完全消退。其余3组荷瘤鼠未见肿瘤完全消退。与A、B、D组相比,C、E组荷瘤鼠生存率显著改善（P〈0．01）,而C、E两组荷瘤鼠生存率差异无统计学意义（P〉0．05）。复种试验表明,C、E组荷瘤鼠再次成瘤率低于对照组,E组与C组差异也有统计学意义（P〈0．01）;第3次接种后,E组成瘤率显著低于C组（P〈0．01）。E组中5只首次接种未成瘤的小鼠,于第21天重复接种H22-Wt细胞,小鼠100％排斥肿瘤,于第56天第3次接种H22／Wt细胞,小鼠仍然100％排斥肿瘤。结论CD80＋CD86和CD137L单独或者联合表达均可显著降低野生型H22细胞株致瘤性,CD80、CD86和CD137L基因联合表达显著改善了野生型H22细胞的免疫原性。     

化疗对肺癌患者外周血中CD4~＋ CD25~＋调节性T细胞数目的影响及意义

目的研究化疗药物对肺癌患者外周血中Treg（CD4＋ CD25＋调节性T细胞）的影响及意义。方法采集60例肺癌术后患者化疗前1天及化疗后第10天外周静脉血,应用流式细胞技术检测外周血中Treg细胞以及CD3＋、CD4＋、CD8＋T、NK细胞占T淋巴细胞百分比,CD4＋T/CD8＋T比值。结果化疗前NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞比率明显高于健康对照组（P〈0.05）;且Ⅳ期患者调节T细胞比率明显高于Ⅲ期患者（P〈0.05）。化疗后NSCLC患者外周血CD4＋ CD25＋调节T细胞较化疗前显著降低（P〈0.05）。化疗前后不同病理分型患者外周血中CD4＋CD25＋细胞变化差异无统计学意义。化疗后CD8＋T细胞占T淋巴细胞比例（28.129±10.900）%较化疗前（24.876±6.631）%升高（P〈0.05）。化疗后CD4＋/CD8＋（1.506±0.691）较化疗前（1.680±0.704）降低（P〈0.05）。结论肿瘤负荷可显著促进肺癌患者外周血Treg细胞分化,化疗后肺癌患者Treg细胞比例下降。     

经口给予黄芪提取物对H22肝癌荷瘤小鼠影响的实验研究

目的：综合分析黄芪提取物对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖、凋亡及机体免疫功能的影响。方法：采用病理形态学观察、免疫组化、流式细胞术和免疫学方法研究灌胃不同剂量黄芪提取物（ASA）对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖与凋亡、脾脏CD4^＋／CD8^＋T淋巴细胞比例及腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响。综合评价ASA对H22荷瘤小鼠的影响。结果：ASA对H22荷瘤小鼠肿瘤重量、肿瘤细胞增殖均无明显影响。除ASA0．031mg／g组外，ASA0．125mg／g、0．500mg／g和2．000mg／g组肿瘤细胞凋亡率和Bax的表达均明显高于对照组（P〈0．01），而实验组Bcl-2表达则明显低于对照组（P〈0．01）。ASA可增加荷瘤小鼠脾脏CD4^＋／CD8^＋比例，提高腹腔巨噬细胞吞噬能力。结论：ASA对H22肝癌荷瘤小鼠肿瘤细胞增殖无明显影响．但可在一定程度上促进肿瘤细胞凋亡，提高机体免疫功能。     

人CD46、CD55和CD59与肿瘤免疫逃逸及免疫治疗

膜结合补体调节蛋白CD46、CD55和CD59在肿瘤细胞膜上表达或过表达,保护肿瘤细胞免受免疫系统的攻击,成为肿瘤细胞免疫逃逸的途径之一.如何下调肿瘤细胞表面三者表达或抑制其功能以增强其对补体依赖的细胞毒作用的敏感性备受关注.     

Enhanced myeloid specificity of CD117 compared with CD13 and CD33

The c-kit proto-oncogene encodes a 145 kd tyrosine kinase transmembrane receptor, which plays a key role in haemopoiesis. The c-kit has been classified as CD117 and is especially useful in the differential diagnosis of acute myelogenous leukemia (AML) and acute lymphoblastic leukemia (ALL). We analysed 104 consecutive cases (55 AML, 23 B-cell lineage ALL, three T-cell ALL, 11 blast crisis of chronic myeloproliferative disorders and 12 cases of myelodysplastic syndromes with more than 10% of blasts) referred to our Hospital for immunophenotypic diagnosis and compared the expression pattern of CD13, CD33 and CD117 using the same fluorochrome (phycoerythrin-PE). The recommendations of the EGIL group were followed in order to establish lineage involvement of the blastic population. The threshold used to assign positivity for CD117 was 10%. Bcr/abl, TEL/AML-1 and MLL rearrangements were assessed by molecular methods. CD117 expression was detected in 91% of AML and MDS. All the negative cases corresponded to acute monocytic leukemias. The calculated specificity for myeloid involvement was 0.86 for CD117, 0.36 for CD13 and 0.44 for CD33 (P < 0.005). CD117 was also positive in four cases of ALL. None of these cases showed bcr/abl or MLL rearrangements. In the light of these findings, CD117 expression should yield a higher score, at least one point, in the system currently applied for the diagnosis of biphenotypic acute leukemias (BAL) as its myeloid specificity is greater than that of CD13 and CD33. Moreover, its absence in AML could identify two subgroups of M5b cases. The coexpression of CD117 with cytoplasmic CD79a is often associated with CD7 reactivity, suggesting a stem cell disorder. CD117 should be included on a routine basis for the immunophenotypic diagnosis of acute leukemias.     

CD5, CD10, and CD23 expression in Waldenstrom's macroglobulinemia

CD5, CD10, and CD23 are cell surface antigens used to distinguish B-cell disorders. The expression of these antigens and their clinical significance in Waldenstrom's macroglobulinemia (WM), an uncommon B-cell disorder, remains to be clarified. We therefore determined expression of CD5, CD10, and CD23 by flow cytometric analysis on bone marrow lymphoplasmacytic cells (CD19+ k/l light chain restricted) for 171 serially biopsied patients with findings of the consensus panel definition of WM. Importantly, we also correlated laboratory and clinical data, as well as existence of a familial history of a B-cell disorder in view of reports suggesting familial predisposition in WM. These studies demonstrated tumor cell expression of CD5, CD10, and CD23 in 15 of 171 patients (9%), 11 of 161 patients (7%), and 37 of 105 patients (35%), respectively. Coexpression of CD23 with CD5 or CD10 was common. Tumor Lymphoplasmacytic from 10 of 15 (66%) and 3 of 11 (27%) patients with WM that expressed CD5 and CD10, respectively, also showed expression of CD23 (P = 0.01 and P = 0.08, respectively). Among patients with CD23 expression, increased serum immunoglobulin (Ig) M levels were observed compared with patients without CD23 expression (P = 0.05). No differences in age at diagnosis; presence of adenopathy and/or splenomegaly; bone marrow involvement; serum IgA, IgB, and b2 macroglobulin levels; hematocrit; platelet count; or familial history of WM or a related B-cell disorder were observed among patients with and without CD5, CD10, and CD23 expression. These studies demonstrate that CD5, CD10, and CD23 are commonly found in WM and that their expression should not exclude the diagnosis of WM. Moreover, expression of CD23 may define a clinically distinct subset of patients with WM.     

CD46 CD55 CD59在结肠癌组织中的表达及意义

目的:检测CD46、CD55、CD59在结肠癌组织中的表达情况,分析其与结肠癌临床病理参数间的相关性及意义。方法:选取有详细性别、年龄、组织分化、病理分期、肿瘤部位、组织类型资料的组织芯片标本,包括121 例结肠癌和121 例癌旁结肠组织,均为2004年10月至2006年6 月第四军医大学西京消化病医院胃肠外科手术切除标本。应用免疫组织化学改良二步法分别检测CD46、CD55、CD59的表达情况。结果:CD46、CD55及CD59在结肠癌组织中的阳性表达率均显著高于对应的癌旁组织（P < 0.001）。 CD46表达水平与性别、年龄、组织分化、TNM 病理分期、肿瘤位置、病理组织类型均无关（P > 0.05）。 CD55、CD59的表达水平与性别、年龄、肿瘤位置、病理类型无关（P > 0.05）,而与组织分化、TNM 病理分期有关（P < 0.05）。 其表达强度阳性率中低分化组明显高于高分化组（P < 0.05）。 TNM 分期中Ⅲ、Ⅳ期患者肿瘤病理组织强阳性表达率高于Ⅰ、Ⅱ期阳性表达率,两者比较有统计学意义（P < 0.05）。 结论:CD46、CD55及CD59在结肠癌组织中高表达,特别是CD55、CD59的表达与肿瘤分化、病理分期相关,提示三者表达水平与结肠癌生物学行为密切相关。      

经典型霍奇金淋巴瘤CD15及CD30蛋白表达的研究

目的：探讨CD15和CD30在经典型霍奇金淋巴瘤（cHL)H/RS细胞的表达及区别。方法：采用SABC法对32例cHL中CD15和CD30蛋白的表达进行检测。结果：CD15阳性25例,阳性率为78．1％,CD30阳性30例,阳性率为93．8％,各型之间阳性表达没有显著性差异,2例蛋白表达之间也无显著性差异。结论：CD15和CD30均可作为cHL的诊断免疫标记。