间充质干细胞来源外泌体治疗骨性关节炎机制的研究进展

随着社会老龄化,骨性关节炎已成为骨科多发病和常见病.间充质干细胞移植在骨性关节炎治疗中有明显优势,间充质干细胞分泌的外泌体在其中发挥重要作用.外泌体作为细胞间的通信载体,通过传递生物活性物质,调节细胞间信号传导、免疫炎症、细胞增殖和生物能等过程,延缓骨性关节炎进程.本文就间充质干细胞来源外泌体治疗骨性关节炎机制的研究进...     

间充质干细胞源性外泌体治疗脊髓损伤的研究进展

脊髓损伤是严重的创伤性疾病,影响患者损伤部位及以下的运动、感觉与自主神经功能障碍。现有治疗手段单一、且效果不佳。间充质干细胞源性外泌体可通过调节炎症反应、改善血-脊髓屏障、减少细胞凋亡、促进轴突生长、修复瘢痕组织等方式,改善和治疗脊髓损伤造成的神经细胞功能障碍。因其在临床治疗应用上的潜力,间充质干细胞源性外泌体成为治疗脊髓损伤的研究热点。     

间充质干细胞来源外泌体与肿瘤关系的研究进展

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)可产生大量外泌体.许多研究发现MSCs来源外泌体可调节肿瘤的增殖和凋亡、血管新生、肿瘤干细胞活性、侵袭与转移及肿瘤免疫,抑制肿瘤细胞增殖,且能提高肿瘤细胞对化疗的敏感性.本文对M SCs分泌的外泌体在肿瘤发生发展及肿瘤治疗过程中的作用进行综述.     

人骨髓来源间充质干细胞分泌外泌体特性研究

本研究旨在探讨正常人骨髓间充质干细胞（bonemarrowmesenchymalstemcells,BMMSC）分泌的外泌体（exosome）免疫调节功能及支持血管形成能力。收集第4—6代BMMSC上清液提取外泌体,应用透射电镜观察其形态,蛋白印迹法检测其表面特异标志CD9,bicinchoninicacid（BCA）方法定量检测外泌体分泌量;与正常人外周血单个核细胞（peripheralbloodmononuclearcells,PBMNC）作用72h后用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测PBMNC分泌的γ-干扰素（IFN-γ）;实时定量PCR检测外泌体内免疫相关microRNA表达;共聚焦显微镜观察外泌体与人脐带静脉内皮细胞（humanumbilicalveinendothelialcells,HUVEC）的作用方式,与HUVEC共培养后观察其网状结构形成;应用裸鼠体内试验检测外泌体对血管形成能力的作用。结果表明,正常人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体近似圆形,直径在40—160nm之间,表达表面标志CD9,其分泌量与接种细胞数呈线性关系,可抑制PBMNC分泌IFN-γ（P〈0．01）,内含有免疫相关microRNA如miR301、miR22和miR-let-7a等,能促进HUVEC网状结构形成和血管形成（P〈0．01）。结论：BMMSC分泌外泌体具有免疫调节功能与支持血管形成作用。     

人胚胎干细胞源性间充质干细胞来源的外泌体生物学特性的研究

目的探讨人胚胎干细胞源性间充质干细胞(human embryonic stem cell derived mesenchymal stem cells,hESCMSCs)来源的外泌体的生物学特性。方法将已注册的未分化、人类ESC H9细胞系诱导成间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs),通过旋转超滤法从培养基中提取外泌体(exosomes)。流式细胞分析技术鉴定hESC-MSCs表面标志物,对间充质干细胞进行三系分化诱导,利用透射电镜、Izon qNano纳米粒子分析系统观察外泌体的形态和大小,Western blotting鉴定外泌体表面特异性标志物,观察hESC-MSCs-Exo对人微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMEC-1)增殖和迁移的影响。结果成功诱导形成hESC-MSCs,并收集纯化外泌体。诱导后的MSCs CD29、CD73、CD90、CD105、CD146、CD44表达阳性,CD34、CD133、CD45、HLA-DR-PE表达阴性;hESC-MSCs通过诱导完成成骨、成脂和成软骨分化;hESCMSCs-Exo为粒径在40~100nm的囊泡,表达特异性的表面标志物CD9、CD63和CD81;体外促进HMEC-1的增殖和迁移。结论 hESC-MSCs-Exo作为一种生物活性囊泡,能够促进血管内皮细胞的增殖和迁移;hESC-MSCs-Exo来源无限,可为临床组织损伤的修复治疗提供丰富的干细胞外泌体来源。     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景:研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡.目的:观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响.方法:将0.001,0.01,0.1,1.0 μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48 h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照.倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响.结果与结论:与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高(P<0.01),其中辛伐他汀浓度在0.1 μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著(P<0.01);同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0 μmol/L组细胞凋亡率下降(P<0.01),其中0.1 μmol/L组凋亡率下降最显著(P<0.01).0.1 μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断.说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关.     

辛伐他汀对高糖高脂诱导人骨髓间充质干细胞凋亡的影响

背景：研究表明,他汀类药物能够促进骨髓间充质干细胞的增殖与黏附能力,抑制高糖高脂培养下骨髓间充质干细胞的凋亡。目的：观察辛伐他汀对高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞凋亡的影响。方法：将0.001,0.01,0.1,1.0μmol/L辛伐他汀分别与高糖高脂诱导条件下人骨髓间充质干细胞培养48h,以正常培养骨髓间充质干细胞及高糖高脂诱导条件下培养的骨髓间充质干细胞为对照。倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法比较不同浓度辛伐他汀对高糖高脂环境下骨髓间充质干细胞存活率的影响,应用流式细胞术检测细胞凋亡,加入PI3K/Akt信号转导通路抑制剂LY294002后辛伐他汀对骨髓间充质干细胞凋亡的影响。结果与结论：与高糖高脂诱导组比较,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组骨髓间充质干细胞存活率均升高（P〈0.01）,其中辛伐他汀浓度在0.1μmol/L时骨髓间充质干细胞存活率升高最显著（P〈0.01）;同时流式细胞仪检测结果显示,辛伐他汀0.01,0.1,1.0μmol/L组细胞凋亡率下降（P〈0.01）,其中0.1μmol/L组凋亡率下降最显著（P〈0.01）。0.1μmol/L辛伐他汀对骨髓间充质干细胞的影响可被LY294002阻断。说明辛伐他汀能抑制高糖高脂诱导条件下骨髓间充质干细胞的凋亡,其机制可能与PI3K/Akt信号途径有关。     

白血病细胞K562来源的外体对人脐带间充质干细胞作用的研究

目的探讨白血病细胞株(K562)来源的外体(exosomes)对人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesenchymal stemcells,hucMSCs)的影响。方法用离心超滤和蔗糖密度梯度超速离心法从K562细胞的培养上清液中分离并纯化exosomes。透射电子显微镜观察其形态;将exosomes与hucMSCs共育,细胞计数板法检测exosomes对hucMSCs增殖的影响;实时荧光定量PCR检测肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)相关基因FAP、α-SMA和IL-6的表达;western blot检测exosomes标志性蛋白CD9、CD81及CAFs相关蛋白FAP,α-SMA的表达。结果透射电镜下观察分离的exosomes呈椭圆或碟状的囊泡结构,直径在30～100 nm;细胞计数板法检测结果表明,不同浓度的exosomes均能抑制hucMSCs细胞增殖且呈剂量依赖性(P均<0.05);荧光定量PCR结果表明,不同浓度的exosomes作用于hucMSCs,其FAP、α-SMA和IL-6表达量明显增加(P均<0.05);western blot结果表明,exosomes可表达标志性蛋白CD9、CD81,且exosomes作用hucMSCs后FAP、α-SMA蛋白表达量增加。结论 K562细胞来源的exosomes能抑制hucMSCs增殖,且能诱导hucMSCs向CAFs的分化。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体对促进大鼠坐骨神经钳夹伤的修复作用

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)来源的外泌体对大鼠坐骨神经损伤的治疗效果.方法 随机将24只SD大鼠平均分为3组.各组大鼠暴露出右侧坐骨神经后,在坐骨神经分叉处上方5 mm处用显微止血钳第二齿钳夹神经3次,每次10 s,中间间隔5 s.Exosome组在钳夹伤附近的神经外膜下注射5μl外泌体,Control组在相...     

间充质干细胞外泌体在神经系统疾病治疗中的 研究进展

外泌体是多种细胞均可分泌的纳米微囊泡,主要通过转运蛋白质、脂质、微小RNA等信号分子参与 多种信号通路,进行细胞间信息传递、免疫应答、抗原呈递等。神经系统损伤后仅可引起有限的神经修复, 缺乏持续性的再生能力,而间充质干细胞移植疗法可促进受损神经元的突触连接和内源性神经元生长。 越来越多的证据表明,间充质干细胞外泌体可能是这种再生疗法发挥作用的重要介质。本文结合最新的 文献,对间充质干细胞外泌体在神经系统疾病中的应用及其治疗机制予以综述。     

间充质干细胞源外泌体在神经系统疾病中的研究进展

间充质干细胞（MSCs）是一种多能干细胞。近来研究发现,MSCs分泌的外泌体具有促进神经细胞再 生、调节免疫反应、促进血管生成等多种功能。本文主要综述MSCs源外泌体在神经系统疾病中的研究进 展,以期探讨出其在神经系统疾病的治疗方面发挥的重要作用。     

人脐带间充质干细胞来源外体提取方法的比较

目的比较蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取的脐带间充质干细胞来源外体(hucMSC-Ex)在高丰度蛋白质含量和纯度上的差异。方法分别用蔗糖密度梯度离心法和差速离心法提取hucMSC-Ex,透射电镜下观察两法提取的外体的形态结构,SDS-PAGE分析二者的蛋白质组分,western blot检测二者的表面标志蛋白CD9和CD81,免疫荧光法检测二者内化至靶细胞EA.hy926的数量。结果两种方法提取的hucMSC-Ex均为直径约30~100 nm的圆形或椭圆形膜性囊泡结构;在相同蛋白质总量下,差速离心法提取的hucMSC-Ex高丰度蛋白质含量明显低于蔗糖密度梯度离心法,但其表面标志蛋白CD9和CD81的表达量却明显高于蔗糖密度梯度离心法;在相同蛋白质浓度下,差速离心法提取的hucMSC-Ex被靶细胞EA.hy926细胞内化的数量更多。结论两种方法均能成功提取hucMSC-Ex,差速离心法提取的hucMSC-Ex纯度更高,而高丰度蛋白质含量明显降低。     

人角膜基质间充质干细胞外泌体的分离制备及鉴定

目的 制备人角膜基质间充质干细胞(human corneal stromal mesenchymal stem cells,HC-MSCs)外泌体并进行生物学鉴定.方法 采用组织块培养技术获得HC-MSCs,利用超速离心法从HC-MSCs培养上清中分离制备外泌体,通过蛋白免疫印迹、透射电镜、纳米颗粒跟踪分析法进行鉴定....     

干细胞来源的外泌体对骨形成作用的研究进展

临床上对于骨形成有着较大的需求,如骨质疏松,骨折,颅骨缺损等。虽然已经出现了生物材料和自体或异体骨移植等治疗途径,但仍存在一些应用限制及并发症。而近几年,细胞外囊泡特别是外泌体的发现,为骨形成提供了新的思路。特别是源自干细胞的外泌体已显示出促进成骨的巨大潜力。本文主要讨论了外泌体的基本概念,其主要分离和鉴定技术以及干细胞来源的外泌体在骨形成作用中研究进展和潜在临床应用。     

间充质干细胞外泌体对MPTP诱导急性帕金森小鼠模型的治疗作用

目的：本文探讨间充质干细胞外泌体（MSCs-Exo）对小鼠帕金森疾病（PD）模型的治疗作用,为帕金森的治疗以及MSC-Exo的应用提供实验依据。方法：超速离心法提取MSC-Exo。将45只C57BL/6小鼠分为3组,分别为Sham组、PD组和PD+MSC-Exo组,每组15只,Sham组在造模时给予生理盐水,PD组腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP） 诱导小鼠急性PD模型,PD+MSC-Exo组在PD造模后尾静脉注射给予MSC-Exo。在第4、14和30天通过旋转实验评价小鼠的行为学变化,第30天通过尼氏染色观察神经元的损失情况,第4天通过免疫印迹检测酪氨酸羟化酶（TH）、NFE2相关因子2（Nrf2）、Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1（keap1）、肿瘤坏死因子α（TNFα）、白细胞介素1β（IL-1β）等的表达,分析MSC-Exo对炎症的调控作用。结果：在4、14和30天时,PD+MSC-Exo组转圈数显著少于PD组（P<0.01）;在第4天时,与Sham组相比,PD组的尼氏阳性细胞数显著减少,而PD+MSC-Exo组相比PD组尼氏细胞显著增多;免疫印迹结果显示,相比Sham组,PD组的TH表达显著减少,Nrf2、keap1、TNFα、IL-1β表达显著增加（P<0.01）,而PD+MSC-Exo组的TH相较于PD组明显增加,Nrf2、keap1、TNFα、IL-1β则显著降低（P<0.01）。结论：MSC-Exo能够保护神经元,减少PD模型中的神经元失去,减少炎症的发生,对PD模型具有良好的治疗作用。     

骨髓间充质干细胞来源外泌体的微小RNA-22-3p参与抑制环磷酰胺诱导卵巢颗粒细胞损伤的机制研究

目的 分析骨髓间充质干细胞来源的外泌体微小RNA-22-3p(miR-22-3p)对卵巢早衰的影响。方法 选取接受体外受精或者第二代试管婴儿治疗的卵巢早衰患者以及接受同样治疗的因男性因素不孕的正常志愿者提供卵泡液;通过差速离心法分离骨髓间充质干细胞来源外泌体;分离外泌体的形态学、粒子大小以及标志蛋白通过透射电子显微镜、NanoSight LM10分析仪以及蛋白免疫印迹方法进行分析。将颗粒细胞经环磷酰胺(CTX)、外泌体、miR-22-3p模拟物以及相应对照处理,分为CTX组、Control组、外泌体孵育组、PBS处理组、CTX+miR-22-3p组、CTX+miR-NC组、CTX+Exosomes组以及CTX+PBS组;采用蛋白免疫印迹法和定量实时聚合酶链反应(qRT-PCR)检测基因表达水平;利用二苯基四氮唑溴盐(MTT)试剂以及流式分析仪检测细胞活力和凋亡。结果 提取的外泌体具有典型的杯状囊泡,外泌体标志蛋白簇状分化抗原63(CD63)和簇状分化抗原9(CD9)表达在所提取的细胞上清外泌体中,外泌体粒子大小为80～150 nm; miR-22-3p在卵巢早衰患者和CTX诱导的卵巢颗...     

树突状细胞外泌体诱导间充质干细胞向成骨细胞分化

本研究观察人树突状细胞（dendriticcells,DC）来源的外泌体（DC—derivedexosome,DCex）对人骨髓间充质干细胞（mesenchymalstemcells,MSC）成骨分化的影响。采用超速离心法从树突状细胞培养上清中获取DCex,应用电子显微镜观察DCex形态并通过流式细胞术检测和鉴定其细胞来源。取第3代MSC,设3组培养诱导体系：①对照组：d—MEM基础培养液组;②实验组：d—MEM基础培养液＋DCex（10μg/m1）组;③α-MEM基础培养液＋标准诱导剂组。采用荧光实时定量PCR、琼脂糖凝胶电泳检测各组成骨分化转录因子Runx2mRNA的表达情况,并进行碱性磷酸酶（ALP）活性检测。另外,荧光染料DiI标记DCex,应用共聚焦显微镜观察DCex进入MSC的过程。结果显示,在电子显微镜下DCex呈典型的圆形或椭圆形膜层结构,直径为40—100nm,并表达DC细胞的标志物CD83,CD86,CD80和HLA—DR。在DCex处理MSC后6h时,可在共聚焦显微镜下观察到进入到MSC胞质内的DCex,随着作用时间延长,细胞荧光强度增加。按组培养第7天,DCex实验组Runx2表达较对照组增高,差异有统计学显著性（P〈0．05）;MSC培养第14天,DCex组ALP含量OD值与对应蛋白比为2．22±0．27,显著高于阴性对照组（1．20±0．21）（P〈0．01）,但低于标准诱导组（3．22±0．24）（P〈0．05）。结论：DCex可以促进MSC向成骨细胞分化,其且体机制仍需讲一步研穷证实．