自发性高血压大鼠TGFβ1/ Smad7通路与心室纤维化的关系

 [目的]探讨自发性高血压大鼠心室纤维化过程中TGFβ1和其下游分子smad7蛋白的表达规律。[方法]雄性自发性高血压大鼠（SHR）14只随机分为2组，SHR 22周龄组和SHR 14周龄组，另14只WKY大鼠也分为WKY大鼠22周龄组和WKY大鼠14周龄组。在实验动物14周龄和22周龄时，分别测定血压、心室质量指数；以氯胺T法测定心肌羟脯氨酸的含量，免疫组化测定Ⅰ型和Ⅲ型胶原在心肌组织中的表达水平；RT-PCR和Western-blot测定心肌中TGFβ1和其下游分子smad7的表达。[结果]自发性高血压大鼠在14周龄和22周龄时收缩压都显著高于同龄的WKY大鼠（P<0.001），同时22周龄SHR的收缩压也比14周龄明显升高(P<0.001)。与SHR14周龄组相比，SHR22周龄组的心室质量指数、心肌羟脯氨酸的含量、Ⅰ型和Ⅲ型胶原均明显增加（P<0.01）；在mRNA 水平或蛋白水平，心肌中的TGFβ1的表达上调，smad7的表达下调。[结论]在一定的时间窗内，自发性高血压大鼠血压的升高及心肌纤维化随着病程的进展而发展，同时伴随着TGFβ1的表达上调，smad7的表达下调。     

胃癌中TGFβ1和Smad7 mRNA的表达及临床意义

目的:研究转化生长因子β1(TGFβ1)和Smad7 mRNA在胃癌组织中的表达及临床病理意义。方法:收集胃癌组织标本60例,正常胃组织20例作为对照组,实时聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测TGFβ1,Smad7在正常胃组织及胃癌组织中的mRNA水平。结果:在胃癌组织中,TGFβ1和Smad7mRNA水平明显高于正常胃组织(P<0.05)。低分化胃癌组织中TGFβ1和Smad7 mRNA水平明显高于高中分化胃癌组织(P<0.05)。结论:正常胃组织和胃癌组织中比较TGFβ1和Smad7 mRNA的表达差异有显著性,且TGFβ1和Smad7 mRNA的表达与胃癌的分化程度有关。     

TGFβ1对转染Smad4／Smad7基因的大鼠系膜细胞Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响

目的　探讨Smad4 /Smad7信号蛋白在转化生长因子β1(TGFβ1)作用下对大鼠系膜细胞 (MsC)Ⅰ、Ⅳ型胶原表达的影响。方法　经脂质体介导分别将Smad4 /Smad7基因瞬时转染体外培养的大鼠MsC ,并用免疫荧光、RT PCR和Westernblot法检测其转染成功与否 ;再用Westernblot法分别观察转基因MsC及其在TGFβ1作用下 ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达的改变。结果　与转染空载体的MsC相比较 ,转染Smad4基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别增强 1.2和 1.8倍 ,经TGFβ1作用后升高 1.8和 3.3倍 (P <0 .0 1) ;而转染Smad7基因的MsC ,其Ⅰ、Ⅳ型胶原蛋白表达分别下降 1.4和 1.9倍 ,经TGFβ1作用后则降低 1.7和 2 .4倍 (P <0 .0 1)。 结论　TGFβ1/Smad信号通路可从正反两方面调节MsCⅠ、Ⅳ型胶原蛋白的合成而影响肾小球硬化的进展     

抗纤Ⅱ号对肝纤维化大鼠TGF-β1,Smad3表达的影响

目的在过去实践的基础上,欲探讨复方抗纤Ⅱ号抗肝纤维化的治疗机制。方法雄性Wistar大鼠分成5组,除正常对照外,余4组大鼠肝纤维化造模均采用腹腔注射猪血清(0.5mL/次,2次/周)。抗纤Ⅱ号早期治疗组在第3周给予中药灌胃,1g/100g每天1次。抗纤Ⅱ号晚期治疗组在造模第9周给予中药灌胃,1g/100g每天1次。γ-干扰素治疗组在造模第9周每天皮下注射10万单位的干扰素。模型组和正常对照组给等量的生理盐水灌胃。在12周杀大鼠,HE和Masson染色观察肝纤维化的形成,RT-PCR检测肝组织中TGF-β1和Smad3mRNA的表达,免疫组化观察TGF-β1和Smad3蛋白的表达。结果病理学观察,抗纤Ⅱ号早期治疗组显著逆转了猪血清诱导的肝纤维化,与模型组比较,经HE和Masson染色抗纤Ⅱ号治疗组能明显降解纤维化大鼠肝中的胶原(P<0.05)。PT-PCR分析TGF-β1和Smad3mRNA的表达在抗纤Ⅱ号治疗组均明显减少。同时分析表明TGF-β1和Smad3蛋白的表达在抗纤Ⅱ号治疗组均明显减少。结论抗纤Ⅱ号能逆转免疫引起的肝纤维化,这是由于能促进肝脏胶原的降解作用和抑制调节与纤维化有关的细胞因子TGF-β1及下游信号Smad3的表达,最终导致肝纤维化的逆转.肝纤维化的早期治疗用药优于后期的治疗。     

小柴胡汤通过TGF-β1/Smad通路改善大鼠肝纤维化

目的 研究小柴胡汤通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路改善大鼠肝纤维化的作用及机制.方法 雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、中药+SRI组,采用四氯化碳皮下注射的方式建立大鼠肝纤维化模型,给与小柴胡汤灌胃及Smad2/3激活剂SRI-011381腹腔注射干预.比较各组大鼠肝脏病理改变、血清天门...     

阿利吉仑对大鼠肾纤维化TGF-β1/Smad信号通路的影响

目的探讨阿利吉仑对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的作用及机制。方法 24只雌性SD大鼠随机分为3组,Sham组、UUO组及aliskiren组,除Sham组外,UUO组及aliskiren组均行左侧输尿管结扎术。aliskiren组术前1 d开始灌胃给药,阿利吉伦50 mg/(kg·d),每日1次,连续2周。术后第14天处死大鼠,留取梗阻侧肾组织行HE染色和Masson染色,光镜下观察各组大鼠肾组织病理变化,免疫组化和Western印迹检测肾组织TGF-β1、Smad2和Smad7蛋白表达水平。结果阿利吉仑可明显减轻大鼠肾间质炎性细胞浸润、纤维组织增生及肾小管扩张和萎缩。免疫组化和Western印迹结果均显示:与Sham组相比,UUO组TGF-β1、Smad2表达明显上升,而Smad7表达明显下降(均P<0.05);与UUO组相比,aliskiren组TGF-β1、Smad2表达明显下降,Smad7表达明显上升(均P<0.05)。结论 TGF-β1/Smad信号通路与肾间质纤维化有关,阿利吉仑可抑制肾间质纤维化,其机制可能与下调TGF-β1、Smad2的表达和上调Smad7的表达有关。     

小柴胡汤通过TGF-β1/Smad通路改善大鼠肝纤维化

目的研究小柴胡汤通过转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路改善大鼠肝纤维化的作用及机制。方法雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、中药+SRI组,采用四氯化碳皮下注射的方式建立大鼠肝纤维化模型,给与小柴胡汤灌胃及Smad2/3激活剂SRI-011381腹腔注射干预。比较各组大鼠肝脏病理改变、血清天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、白蛋白(ALB)、透明质酸(HA)、层粘蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)含量,以及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3表达的差异。结果与对照组比较,模型组大鼠出现了典型的肝纤维化病理改变,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加;与模型组比较,中药组大鼠肝纤维化的病理改变减轻,血清中ALB的含量增加,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平降低;与中药组比较,中药+SRI组大鼠肝纤维化的病理改变加重,血清中ALB的含量降低,血清中ALT、AST、HA、LN、PCⅢ的含量及肝脏中TGF-β1、Smad2、Smad3的表达水平增加。结论小柴胡汤能够改善大鼠的肝纤维化,抑制TGF-β1/Smad通路是介导这一改善作用可能的分子机制。     

miRNA-10a对小鼠肝纤维化细胞增殖及TGFβ1/Smads信号转导通路表达的影响

目的 通过观察肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)小鼠肝组织TGFβ1/Smads信号转导通路的表达与HF进展的关系,探讨微小RNA(microRNA,miRNA)-10a对于HF的作用机制.方法 选用9周龄健康雄性小鼠(C57 BL6/J) 40只,按照数字表法随机分为对照组和HF模型组(观察组),对照组生理盐水5μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周;观察组10％ CCL4橄榄油5 μl/g腹腔注射,每周2次,注射8周,制作小鼠HF模型.RT-PCR法检测HF细胞中miRNA-10a表达后,将观察组HF细胞进行培养及miRNA-10a模拟物转染(转染组),CCK-8法检测HF细胞增殖能力,Western blotting检测HF细胞中TGFβ1、Smad7的表达水平.结果 与对照组比较,观察组miRNA-10a表达水平明显增加(P＜0.05);与对照组比较,转染组肝细胞miRNA-10a表达水平明显降低(P＜0.05);与对照组相比,低表达miRNA-10a明显降低观察组TGFβ1的表达水平,提高Smad7的表达水平(均P＜0.05).结论 小鼠HF细胞中低表达miRNA-10a,转染miRNA-10a模拟物可明显促进小鼠HF细胞增殖,其作用机制是通过miRNA-10a调控TGFβ1/Smads信号转导通路促进小鼠HF.     

TGF-β1与自发性高血压大鼠肾脏功能关系的研究

探讨自发性高血压 (SHR)大鼠肾脏功能与转化生长因子 - β1的关系。方法 :研究组为SHR大鼠10只 ;同龄的WKY大鼠 7只为对照组。用ELISA法分别测定大鼠血清中TGF - β1的浓度 ;运用逆转录一聚合酶链反应 (RT -PCR)观察TGF -DmRNA在二组肾脏的表达 ;同时分别检测肾脏功能 (包括NAG酶 ,血肌酐 ,肌酐清除率 )。结果 :两组血清TGF - β1浓度的差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;SHR大鼠肾组织TGF - β1mR NA、尿NAG酶、血肌酐明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,肌酐清除率明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,肌酐清除率与肾脏局部的TGF - β1,mRNA的表达呈负相关 (P <0 .0 0 1) ;肾脏功能的改变与血清TGF - β1浓度高低无关。结论 :血压高低与血清TGF - β1浓度无关 ;肾脏局部TGF - β1mRNA的表达增高可能是引起高血压肾脏功能损害的重要因素。     

中医药干预肝纤维化TGFβ1和(或)Smad信号通路研究进展

肝纤维化(hepatic fibrosis, HF)的发生是由于细胞外基质(ECM)的合成与降解的失衡.ECM主要来源于肝星形细胞(HSC),HSC激活并转化为肌成纤维细胞(myofibroblasts, MFB),后者可大量合成ECM,而ECM的大量沉积最终导致了HF形成.转化生长因子β(TGFβ)是一类调节细胞生长和分化的多肽,具有活化HSC,促进肝脏胶原基因表达,促进ECM合成等作用,是目前公认的最重要的致HF的细胞因子之一[1-2].     

TGF-β1/Smad信号传导通路与肝纤维化

肝病为我国高发病,肝纤维化是各种损伤引发慢性肝病、肝硬化、肝癌的共同病理基础和必经阶段[1],其病理学特征为肝脏细胞外基质(extra cellular matrix,ECM)的过度沉积.肝星状细胞(hepatic stellate cells,HSCs)的活化、增殖是其发生的主要细胞学基础[2],HSCs活化后可分泌大量ECM沉积于肝脏.     

Smad7和组织器官纤维化

转化生长因子β(TGF-β)在组织器官纤维化发生过程中起关键作用.Smad7是TGF-β信号转导途径的主要抑制性蛋白,其异常表达可影响TGF-β活性,进而改变纤维化进程.调控Smad7的表达可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段.     

Smad7和组织器官纤维化

转化生长因子β(TGF-β)在组织器官纤维化发生过程中起关键作用。Smad7是TGF—β信号转导途径的主要抑制性蛋白,其异常表达可影响TGF—β活性,进而改变纤维化进程。调控Smad7的表达可能提供一种纤维化疾病的新治疗手段。     

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化及TGF-β1／Smad3信号通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法 SD雄性大鼠结扎冠脉左前降支,建立急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)模型,4周后根据心脏超声结果随机分为模型组和芪苈强心组,另设假手术组,分别给予1 g/(kg·d)芪苈强心及等体积蒸馏水灌胃。4周后超声心动图检测大鼠心脏功能,取梗死周围心肌组织采用HE及Masson染色观察心肌病理形态改变,免疫组织化学方法检测心肌α-SMA表达,Western blotting方法检测心肌α-SMA、胶原Ⅰ(collagenⅠ)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组左心室短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF)明显降低(P0.05),左心室收缩末期内径(LVIDs)和收缩末期容量(ESV)显著升高(P0.05),心肌纤维化明显(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达增加(P0.05)。与模型组比较,芪苈强心组EF和FS明显升高(P0.05),LVIDs和ESV明显降低(P0.05),心肌纤维化程度减轻(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达明显降低(P0.05)。结论芪苈强心胶囊能够降低心肌梗死大鼠心肌纤维化程度,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TGF-β_1/Smad3信号通路相关蛋白有关。     

Influence of Exogenous TGFβ1 on the Expression of Smad2 and Smad3 in Rat Bone Marrow-derived Mesenchymal Stem Cells

Summary The expression of Smad2 and Smad3 and the influence of exogenous transforming growth factorβ₁ (TGFβ₁) on them in rat bone marrow-derived mesenchymal stem cells (MSCs) cultured in vitro were investigated. The effects of different concentrations of TGFβ₁ on cell proliferation and ALP activity were detected by MTT and PNPP in, MSCs respectively. The expression of Smad2 and Smad3 and the influence of exogenous TGFβ₁ on them were also examined by immunocytochemistry and Western blot assays. The exogenous TGFβ₁ induced a dose-dependent decrease in cell proliferation and a dose-dependent increase, in ALP activity, which plateaued at 5 ng/ml. Smad2 and Smad3 proteins were detected only in the cytoplasm in the absence of TGFβ₁ and TGFβ₁ could stimulate the translocation of them from the cytoplasm to the nucleus. The total amount of Smad2 protein remained unchanged before and after TGFβ₁ treatment (P>0.05). The expression levels of Smad3 remained unchanged after 3 h and 6 h treatment (P>0.05), but decreased markedly after 24 h treatment (P<0.05). It was concluded that TGFβ₁ is a latent osteoinductive factor involved in osteoblastic differentiation. Both Samd2 and Samd3 mediate TGFβ₁ signaling as downstream mediators in MSCs. The biological output of TGFβ₁ triggering the osteoblastic differentiation could be entirely determined by Smad3 in MSCs. WANG Yuntao, male, born in 1972, M. D., Ph.D. This project was supported by a grant from the National Natural Science Foundation of China (No. 30170270).     

外源性转化生长因子β1与小鼠肝细胞Smad7 mRNA及蛋白表达的关系

目的 探讨外源性转化生长因子β1(TGFβ1)对鼠肝细胞株BRL细胞生长及其胞内信号传导抑制Smad7蛋白和mRNA表达的影响。方法 按照细胞与TGFβ1共同孵育的时间将实验分为TGFβ1刺激0min组、90min组和24h组;用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Westem blot和免疫组化技术分别检测Smad7 mRNA、蛋白的表达及其在细胞中的定位。结果 TGFβ1刺激0min组、90min组,24h组的鼠肝细胞生长和形态学变化差异无显著意义;然而,3组间的Smad7 mRNA和蛋白质表达水平存在明显差异,90min组强于24h组,24h组又强于0min组;Smad7免疫反应阳性信号主要在细胞浆。结论 FGFβ1在90min至24h内无诱导BRL细胞生长停滞作用,其诱导细胞产生的Smad7水平与其刺激有一种短时效关系。     

缬沙坦对自发性高血压大鼠肾间质纤维化及转化生长因子-β_1表达的影响

目的:观察转化生长因子-β1(TGF-β1)在自发性高血压大鼠(SHR)肾间质的表达,探讨血管紧张素Ⅱ受体(AT1)拮抗剂缬沙坦(Valsartan)对肾间质纤维化的作用。方法:20只12周龄雄性SHR大鼠随机分为阳性对照组(SHR组)和缬沙坦组(VAL组)各10只,VAL组每只大鼠予以缬沙坦30mg/(kg·d)灌胃,共12周。取10只12周龄雄性WKY大鼠测量不同时期(12周,24周)大鼠尾动脉收缩压(SBP)、尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿β2-微球蛋白(β2-MG)的变化情况;免疫组织化学方法检测TGF-β1、Ⅲ型胶原的蛋白表达,RT-PCR方法检测TGF-β1 mRNA在肾间质的表达水平。结果:①同WKY组、VAL组同期相比,SHR组的SBP、尿β2-MG均显著增高(P<0.05,P<0.01)。②免疫组化显示TGF-β1、Ⅲ型胶原在24周SHR组肾间质的表达明显增多(P<0.05);与SHR组相比,VAL组TGF-β1、Ⅲ型胶原明显减少(P<0.05);PCR显示TGF-β1mRNA在24周SHR组肾间质中的表达较同期WKY组明显增强。结论:TGF-β1是参与高血压肾间质纤维化的重要细胞因子之一;缬沙坦能抑制TGF-β1在SHR肾脏的表达,显著减少尿蛋白,具有抑制肾间质纤维化的作用。     

白蒺藜有效组分对自发性高血压大鼠心肌纤维化及TGFβ1/CTGF表达的影响

目的 观察白蒺藜有效组分对自发性高血压大鼠(SHR)心肌纤维化以及相关细胞因子表达的影响,探讨白蒺藜有效组分改善心室重构、抑制高血压靶器官损伤的可能作用机制.方法 32只14周龄雄性自发性高血压大鼠随机分为模型组、卡托普利组、白蒺藜组、联用组,每组8只,同周龄雄性Wistar大鼠8只作为正常对照.卡托普利组采用卡托普利...