精囊蛋白Semenogelin Ⅰ小分子片段的功能

Semenogelin Ⅰ及其被前列腺特异性抗原水解后的小片段肽具有多种生物学活性,其中抑制精子活力的关键小片段肽备受争议。本文主要对其抑制精子活性、抗菌活性等进行综述,并就目前争议较大之处提出猜想进行解释。深入研究这些肽的作用机制有助于改进人工受精筛选精子的方法,也可能为治疗弱精子症及泌尿系感染提供新的方向。     

精囊凝胶蛋白Semenogelin Ⅰ的研究进展

精液的凝固和液化过程亦是精子获能的过程,是精子取得前向运动所必需的。射精后的人类精液最初呈凝固状态,主要是由于精囊特异性分泌的精液凝胶蛋白SemenogelinⅠ(SgⅠ)的作用,在随后精液液化过程中被前列腺分泌的前列腺特异性抗原(PSA)水解,产生许多相对分子质量较小的具有各种生物学活性的肽段,这些肽段被发现存在于精子的表面或被精子利用,调控精子获能和向前运动的能力。文中对SgⅠ的生理功能研究进展进行了综述。     

精液凝固蛋白Semenogelin对精子运动抑制机制的研究进展

精液的液化和精子的获能是精子取得向前运动的关键,精液凝固蛋白Semenogelin(Sg)在这个过程中起着至关重要的作用,它们直接参与了精液凝胶的形成,并协同其他一些来源于男性生殖道的蛋白酶类和金属离子等,与精子细胞表面发生作用,参与调控精液液化和精子获能,最终使精子取得向前运动。本文综述了当前Sg对精子活动抑制机制的研究进展。     

人类精子表面附睾蛋白激酶抑制剂Eppin和精囊凝固蛋白Semenogelin的相互作用研究

目的:探讨人类精子表面一种附睾蛋白激酶抑制剂Epp in和精囊凝固蛋白Sem enogelin(Sg)的相互关系。方法:①用抗Epp in的抗体与精子和精浆中Epp in蛋白进行免疫沉淀反应;②免疫荧光法在精浆和精子表面共同显色定位;③重组Epp in(rEpp in)和重组精囊凝固蛋白Sg(rSg)共同孵育,用抗Epp in抗体或抗Sg抗体进行免疫共沉淀;④W estern印迹检测rEpp in和rSg相互作用;⑤放射性125I-rSg与rEpp in结合达饱和后,用未标记的rSg竞争性结合分析;⑥放射性125I-rSg直接与印迹膜上的rEpp in行放射性自显影。结果:人精子表面蛋白Epp in与精囊蛋白Sg发生特异性结合,Sg分子结构中的半胱氨酸残基Cys-239是唯一的结合位点,Cys-239的还原及羧甲基化将阻碍125I-rEpp in与rSg的结合。结论:Epp in与Sg的结合是靠分子结构中二硫化键的参与。在人类射精后的精子表面,精囊蛋白Sg结合在精子表面的Epp in上。     

重组人类精囊蛋白的制备及功能研究

目的 制备重组精囊蛋白(semenogelin,Sg),研究其对精子活动的影响.方法设计特异性的引物,用分子克隆技术从精囊cDNA文库中扩增精囊蛋白Sg,再将DNA插入质粒载体PET100,筛选序列正确的阳性克隆,转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人类Sg蛋白,用500g/L Ni-NTA纯化重组蛋白,用正常人的通过上游法筛选出的活动精子行抑制分析,研究重组Sg在4种不同浓度0,1 ng/μL、5 ng/μL、10 ng/μL下对精子活动的影响.结果 重组Sg在5 ng//μL、10 ng/μL浓度下明显抑制精子的运动(P<0.001).结论 sg分子明显抑制精子运动,精液液化过程中,必须清除Sg中具有抑制功能的片段,精子才能前向运动.     

精子蛋白Ropporin的研究进展

Ropporin一直以来被认为是精子细胞特异性蛋白,在睾丸组织中特异性表达,并参与精子的运动、获能、顶体反应等生理活动。然而,新的研究表明Ropporin在正常的非睾丸组织也有微弱表达,而且作为一种新的肿瘤睾丸抗原(CT抗原)在恶性血液病的肿瘤细胞中高表达。Ropporin在哺乳动物中的表达具有高度保守性,说明它对生命的重要性。本文就Ropporin的特性、表达与分布、生理学功能及临床研究的新进展进行了综述。     

重组人睾丸精子结合蛋白对人精子运动参数的影响

目的:探讨重组人睾丸精子结合蛋白(TSBP)对体外培养人精子运动参数的影响。方法:将22例生育男性的精液经Percoll密度梯度离心后,分别与0.01mg/ml及0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外共同孵育1h或3h,同时设立对照组,Western印迹检测重组His6-TSBP与精子膜的结合情况,计算机辅助精液分析(CASA)系统测定重组His6-TSBP对精子运动参数的影响。将12例弱精子症患者的精液按同样方法处理,检测重组His6-TSBP对弱精子症患者精子运动参数的影响。结果:0.1mg/ml重组His6-TSBP与生育男性精子作用1h可以提高体外培养精子的前向运动百分率(a+b级精子百分率),培养3h后前向运动百分率和活率均有所提高,差异具有显著性(P<0.05);0.01mg/ml重组His6-TSBP对检测各指标均无显著性影响。0.1mg/ml重组His6-TSBP与弱精子症患者精子作用3h可以提高精子前向运动百分率(P<0.05),但对活率无显著影响。结论:0.1mg/ml的重组His6-TSBP在体外可以提高生育男性精子的前向运动百分率和活率及弱精子症患者精子的前向运动百分率。     

精子的生育相关抗原研究进展

精子的生育相关抗原研究进展沙国柱综述黄宇烽武建国审校关键词精子，精子抗原，生育相关抗原中图法分类号Ｒ３２１．１精子抗原的研究是生殖免疫、生殖生理、免疫不育（ｉｍｍｕｎｏｉｎｆｅｒｔｉｌｉｔｙ）以及免疫避孕（ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｔｒａｃｅｐｔｉｏｎ）的重...     

重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定

目的：用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原（PSA）重组蛋白，并对其活性进行鉴定。方法：用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSAcDNA，再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶NdeⅠ和BamHⅠ消化，然后用T4连接酶将两者连接，序列正确的阳性克隆转染B121（DE3）大肠埃希菌，诱导表达重组人PSA蛋白，从细菌包涵体中纯化PSA蛋白，再用小剂量胰岛素激活PSA活性，观察活化的PSA是否分解其变色底物S-2586和天然底物精囊蛋白Semenogelin（Sg）。结果：利用原核表达技术得到了重组人PSA，在胰岛素作用下PSA被激活，活性PSA水解其天然底物Sg和变色底物S-2586。结论：用基因克隆方法体外获得的重组人PSA蛋白可表现与天然PSA同样的丝氨酸蛋白酶活性和功能。     

精浆中的氧自由基对精子活动的影响

氧自由基（OFR或ROS）是一种具有多种生物学功能且有双重作用的介质。生理量的氧自由基可以维持正常的精子活动功能，超过生理量就会对精子产生毒性作用，降低其活动力和活动率，导致男性生育能力低下甚至不育。     

Effect of LH, Prolactin and Spermine on ATPase Activity of Human Spermatozoa

The effect of Prolactin and LH on the activity of spermatozoal ATPase was studied. Both the hormones activated the enzyme activity suggesting that these hormones, as they are present in the seminal fluid may influence the energy metabolism of spermatozoa. The spermine, a polyamine present in large concentration in the semen, had significantly enhanced the ATPase activity of the spermatozoa in a dose related manner.     

外周致密纤维1在人精子中的表达差异及其意义

目的:比较外周致密纤维1(ODF1)在健康男性和弱精子症患者精子中的表达差异。方法:根据WHO标准,收集正常男性和弱精子症患者的精液标本各20份,Percoll非连续梯度离心法分离精子,收集95%Percoll以下和57%与76%Percoll层之间的精子,以排除生精细胞和白细胞的污染;采用逆转录-多聚酶链式反应(RT-PCR)和Western印迹方法,从mRNA和蛋白水平检测ODF1的表达。结果:RT-PCR结果表明,与正常男性组相比,ODF1在弱精子症患者精子中的mRNA表达水平显著降低(2.79±0.28vs1.35±0.25,P<0.05);免疫印迹与RT-PCR结果一致,与正常男性组相比,弱精子症患者精子中的ODF1蛋白的表达亦显著降低(3.64±0.34vs1.44±0.26,P<0.05)。结论:ODF1在弱精子症患者精子中的表达显著降低,提示其可能与精子活动力低下有关。     

Percoll优选对形态正常精子百分率和顶体酶活性的影响

目的 :了解形态正常精子百分率和顶体酶活性在Percoll优选前后的变化。　方法 :30例不育男性精液标本 ,应用计算机精液分析仪进行精子形态分析 ,分光光度比色法检测顶体酶活性。　结果 :Percoll优选后形态正常精子百分率和精子顶体酶活性均明显高于Percoll优选前 (P均 <0 .0 0 1)。　结论 :Percoll法优选精子后形态正常精子百分率和顶体酶活性增加。     

人精子在附睾中的成熟

精子在人附睾内转运过程中获得使卵子受精的主要功能。这些功能包括 :相对活率、一致的形态、结合透明带的能力、发生顶体反应的能力、与卵黄和致密染色质融合的能力、体内和体外使卵子受精的能力、维持正常胚胎发育的能力等。已经鉴定了许多附睾分泌的糖蛋白 ,它们与特定的精子膜区域结合。这些蛋白可能与促进精 卵作用有关。作为辅助生殖技术的结果 ,取自附睾近端的“未成熟”精子或睾丸生殖细胞启动胚胎发育的能力依赖于精子在附睾内的转运、在女性生殖道中存活、输送直至被卵子包围。     

Volumetric Analysis of Human Spermatozoa

In 29 semen samples of men participating in an in vitro fertilization (IVF)-program the spermatozoan volume was determined on an electronic particle analyzer and a routine semen analysis was performed including the estimation of semen volume, sperm concentration, motility and morphology. Twenty three of the 29 semen samples were able to fertilize human oocytes in the IVF-procedure. There was no statistically significant difference noted between the spermatozoan volume of the fertile (16.25 +/- 0.43 cu microns) and the infertile samples (16.9 +/- 0.57 cu microns). Logistic regression analysis indicated that spermatozoan volume was not a significant predictor of fertility. Furthermore, none of the standard sperm parameters appear to be closely related to the mean spermatozoan volume.     

Extraction and Estimation of ATP from Human Spermatozoa

Summary:  This study attempts to provide guidelines for the extraction and estimation of ATP from spermatozoa. The conditions of extraction of ATP from spermatozoa using trichloroacetic acid were optimized. The efficiency of this extraction procedure was compared to that using boiling Tris buffer. Three commercially available kits which use the firefly luciferase assay for ATP and two luminometers were evaluated for the measurement of the spermatozoa extracts. Elevated levels of Mg²⁺ and/or Ca²⁺ did not interfere with the extration of ATP by trichloroacetic acid or with the subsequent estimation of the nu-cleotide.
Extraktion und Bestimmung von ATP in menschlichen Spermatozoen
Zusammenfassung:  Die vorliegende Untersuchung versucht Richtlinien aufzustellen für die Extraktion und Bestimmung von ATP in menschlichen Spermatozoen. Die Extrak-tionsbedingungen für ATP wurden unter Verwendung von Trichloressigsäure optimiert. Die Effizienz des Extraktionsverfahrens wurde mit einem Verfahren verglichen, bei wel-chem siedender Tris-Puffer Verwendung fand. Es wurden drei handelsübliche Kits, welche den Leuchtkäfer-Luciferase-Assay für ATP und zwei Luminometer benutzen, für die Mes-sung der Spermatozoenextrakte bewertet. Die erhöhten Werte von Mg²⁺ und/oder Ca²⁺ interferiersen nicht mit der Extraktion von ATP mittels Trichloressigsäure oder mit der nachträglichen Bestimmung des Nukleotids.     

Vitality and Morphology of Human Spermatozoa Studies on the Resistance to Storage and Centrifugation and on the Removal of Dead Spermatozoa

Vitalität und Morphologie rnenschlicher Sperrnatozoen
Die Auswirkung der Lagerung menschlicher Spermatozoen bei Raumtemperatur und im Kühlschrank wurde untersucht. Der Vitalitätsverlust wurde linear ermittelt. Die Vitalität nahm pro Stunde um 0,9% ab. Die Verlustrate zeigte keine nennenswerte Variation. Die Morphologie der Spermatozoen und der vitalen Spermapopulation wurde getrennt untersucht. Sie wurde durch die Lagerung nur leicht beeinträchtigt.
Ebenfalls untersucht wurde die Auswirkung von Zentrifugation und Resuspension der Spermatozoen. Die Vitalität nahm bei einer Gravitation von 800 g über 20 Minuten ab. Dabei wurde bei diesem Vorgehen keine Beeinträchtigung auf die Morphologie fest-gestellt. Eine Gravitation von 600 g und darunter zeigte keinen signifikanten Einfluß auf die Spermatozoen.
Zwei Trennungsmethoden von Spermatozoen besserer Motilität und Morphologie von dem überstand der Samenprobe wurden untersucht:

• 1. 

  Filtration durch eine Lage von Glasperlen
• 2. 

  Spermatozoenanstieg nach Zentrifugation bei niedriger Gravitation.

Die klinische Relevanz dieser Verfahren ist wahrscheinlich auf ausgewählte Fälle be-grenzt.