大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞自噬的影响

目的 基于cGAS/STING信号通路研究大黄素对人类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞(MH7A)自噬的潜在作用。方法 采用CCK-8法检测MH7A细胞增殖的结果,并根据细胞存活率筛选出药物的浓度,并加入自噬抑制剂3-MA进一步验证大黄素对自噬的影响;采用MDC法检测MH7A细胞自噬情况;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测cGAS、STING、p-STING、LC3-I、LC3-II、P62和Beclin-1的蛋白表达水平。结果 MDC染色结果提示,大黄素能够增强MH7A细胞自噬;Western blot结果提示,大黄素可降低MH7A细胞自噬相关蛋白cGAS、STING、p-STING和P62的表达,增加LC3-II和Beclin-1的表达。加入自噬抑制剂3-MA后,MH7A细胞P62蛋白表达升高,LC3-II和Beclin-1蛋白表达降低。结论 大黄素可能通过下调cGAS/STING信号通路加速自噬,抑制MH7A细胞增殖。     

α-生育酚通过抑制mTOR激活小鼠海马神经元细胞自噬

目的 探究α-生育酚对小鼠海马神经元细胞自噬的影响及分子机制.方法 分别以自噬抑制剂Compound C、α-生育酚处理小鼠海马神经元细胞,采用AO染色法检测不同处理后神经元内自噬泡的数量;利用透射电镜观察自噬小体;通过免疫蛋白质印记法检测自噬相关蛋白LC3-II、P62以及上游调控蛋白mTOR、AMPK和ULK1表达水平.结果 Compound C显著抑制LC3-II水平并且上调P62的表达,减少自噬泡及自噬小体的数量;加用α-生育酚处理后LC3-II表达提高,P62和mTOR水平均被抑制,且自噬泡和自噬小体数量提高.结论 α-生育酚能够诱导细胞发生自噬,这一作用可能与抑制mTOR信号通路相关.     

氯喹对卵巢癌细胞增殖、迁移和自噬的影响

目的：探讨氯喹对卵巢癌A2780细胞和SKOV3细胞增殖、迁移和自噬的影响。方法：采用CCK8法检测不同浓度氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞后的增殖能力;克隆形成实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞克隆形成的影响;划痕实验和Transwell实验检测氯喹对A2780细胞和SKOV3细胞的迁移能力的影响;红绿双荧光mRFP-eGFP-LC3自噬双标质粒转染A2780细胞和SKOV3细胞,荧光显微镜观察氯喹处理48 h后自噬小体的形成和自噬流的变化;Western Blot检测氯喹处理A2780细胞和SKOV3细胞48 h后自噬标志蛋白LC3的表达及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白的表达。结果：氯喹显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖能力和迁移能力,另外,氯喹处理能显著抑制卵巢癌细胞的自噬水平。A2780细胞和SKOV3细胞经氯喹处理后LC3Ⅱ、PI3K、p-AKT和mTOR蛋白表达水平显著增高,而AKT、p-mTOR蛋白表达水平显著降低。结论：氯喹能显著抑制A2780细胞和SKOV3细胞增殖和迁移能力,并可能通过激活PI3K/Akt/mTOR通路抑制细胞自噬。     

Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶通路的影响

目的探讨Adropin对脂肪细胞自噬及磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(PI3K/AKT)通路的影响。方法将小鼠胚胎成纤维前脂肪细胞3T3-L1诱导分化为成熟脂肪细胞,随机分为对照组、Adropin组、自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组。对照组细胞不予特殊处理,Adropin组细胞加入Adropin (终浓度为1 000 nmol·L-1),自噬激动剂组加入西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),Adropin+自噬激动剂组细胞加入Adropin(终浓度为1 000 nmol·L-1)和西罗莫司(终浓度为100 nmol·L-1),继续培养2 h;采用单丹磺酰尸胺染色检测各组细胞中自噬空泡情况,细胞免疫荧光染色法检测各组细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)表达,采用Western blot法检测各组细胞自噬相关蛋白Beclin-1、LC3-Ⅱ、p62及PI3K/AKT通路蛋白PI3K、磷酸化PI3K(p-PI3K)、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)的表达。结果与对照组比较,Adropin组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。与对照组比较,自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。Adropin+自噬激动剂组与对照组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1、p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。与Adropin组比较,自噬激动剂组、Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05)。与自噬激动剂组比较,Adropin+自噬激动剂组细胞中自噬空泡相对含量、LC3阳性细胞比例及LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白相对表达量显著降低(P <0. 05),p62、p-PI3K、p-AKT蛋白相对表达量显著升高(P <0. 05)。4组细胞中PI3K、AKT蛋白相对表达量两两比较差异均无统计学意义(P> 0. 05)。结论 Adropin可抑制脂肪细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT通路而实现。     

丹参多糖促进自噬抑制脂多糖诱导的心肌细胞凋亡的实验研究

目的 探究丹参多糖(SMP)调控脂多糖(LPS)诱导的心肌细胞凋亡的机制。方法 不同浓度(0.0.5、1、2mg/mL)SMP预处理乳鼠心肌细胞12h后,1μg/mL LPS刺激乳鼠心肌细胞24h,以LPS单独处理构建心肌细胞损伤模型,对照组加入等量生理盐水,四唑盐比色法(MTT)观察细胞存活率改变,流式细胞仪检测细胞凋亡比率改变,免疫印迹(Western blot)检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3变化;SMP联合自噬抑制剂氯喹(CQ)或自噬激活剂雷帕霉素靶蛋白抑制剂(Torin1)处理LPS处理的心肌细胞,MTT观察细胞存活率改变,流式细胞仪(FACS)检测细胞凋亡比率改变,Western blot检测各组细胞自噬相关蛋白LC3、Beclin1及凋亡相关蛋白Bax、Caspase3变化。结果 相比于对照组,LPS 处理乳鼠心肌细胞24h,细胞活力显著下降,凋亡细胞比例升高,凋亡相关蛋白Bax、cleaved-Caspase3表达增多,自噬相关蛋白Beclin1和LC3II表达增多。相比于LPS组,丹参多糖处理组细胞活力升高,凋亡细胞比例下降,Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达减少, LC3-II 、Beclin1蛋白表达增多;相比于丹参多糖处理组,CQ抑制细胞活力,增加细胞凋亡数,促进Bax、cleaved-Caspase3和LC3II蛋白表达,抑制Beclin1蛋白表达,Torin1上调细胞活力,减少细胞凋亡数,促进LC3-II 、Beclin1蛋白表达,抑制Bax、cleaved-Caspase3蛋白表达。结论 SMP促进自噬抑制LPS诱导的心肌细胞自噬凋亡。     

丹参酮ⅡA通过PI3K/Akt/mTOR信号通路调控自噬抗内皮细胞氧化应激损伤研究

目的基于PI3K/Akt/mTOR自噬信号通路探讨丹参酮ⅡA对氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,ox-LDL)诱导内皮细胞氧化应激损伤的保护作用及机制。方法体外培养EA.hy926细胞,随机分为正常组、模型组、丹参酮ⅡA组、LY294002组、ox-LDL加丹参酮ⅡA组、oxLDL加丹参酮ⅡA加LY294002组。用比色法检测细胞氧化应激损伤丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活力,利用倒置荧光显微镜及Naolive 3D cell explorer实时无标记3D显微成像系统检测自噬发生,同时应用免疫印迹(Western Blotting)检测自噬相关蛋白以及PI3K/Akt/mTOR通路蛋白的表达情况。结果与正常组相比,模型组MDA含量增高,SOD活力降低,微管相关蛋白1轻链3(LC3)I/II蛋白含量增多(P0.01);丹参酮ⅡA干预后细胞中MDA含量降低,SOD活力增高,LC3-I/LC3-II蛋白含量增多(P0.01)。与正常组相比,模型组PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平明显减少(P0.05或P0.01);与模型组相比,丹参酮ⅡA干预后细胞中PI3K、p-Akt、pmTOR蛋白表达水平明显减少(P0.05或P0.01);与ox-LDL加丹参酮ⅡA组相比,加入PI3K的抑制剂LY294002后细胞中的LC3-I/LC3-II蛋白含量减少,自噬水平减少(P0.01)。结论丹参酮ⅡA可能通过调控PI3K/Akt/mTOR信号通路促进自噬,对ox-LDL诱导的EA.Hy926细胞氧化应激损伤起到保护作用,进而防治动脉粥样硬化。     

槲皮素对过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞AKT/mTOR信号通路及自噬的影响

目的：分析槲皮素对人脐静脉内皮细胞自噬和增殖的影响,探讨其与AKT/mTOR信号通路调控的关系及机制。方法：培养人脐静脉内皮细胞,MTT法检测细胞活力,MDC染色法检测自噬泡水平,Western印迹检测自噬相关蛋白水平,运用3-MA研究槲皮素对自噬和细胞增殖的影响。结果：槲皮素能增加人脐静脉内皮细胞活力(P<0.01),上调细胞中MDC染色标记的荧光颗粒,并伴随浓度的上调明显增加(P<0.01),能促进脐静脉内皮细胞中自噬蛋白LC3Ⅱ/LC3Ⅰ水平表达(P<0.01),降低p-AKT/AKT、p-mTOR/mTOR水平(P<0.01)。与槲皮素组比较,槲皮素+3-MA组细胞活力和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ均明显降低(P<0.05),p-mTOR/mTOR明显增加(P<0.05)。结论：槲皮素可通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导细胞自噬来调控脐静脉内皮细胞增殖。     

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)抗流感病毒分子机制的研究

【目的】 流感病毒感染是严重威胁人类健康的传染性疾病,抗病毒药物的研究已成为人们关注的焦点。前期研究发现EGCG可显著降低流感病毒感染后细胞氧化应激水平及流感病毒感染后细胞自噬水平。因此,我们推测EGCG的抗病毒机制与药物自身抗氧化特性及与宿主细胞调控作用存在一定相关性。本研究通过体外流感病毒感染模型,进一步揭示EGCG抗流感病毒的分子机制。 【方法】 (1)通过MTS法评价EGCG、天然抗氧化剂、氧化应激激活剂的细胞毒性。(2)蛋白质印迹法检测流感病毒感染时ERK等通路的激活与转录因子NF-κB、重要促炎因子上调的关系;以ERK特异性抑制剂为对照,以细胞p-ERK1/2磷酸化水平、病毒滴度等为指标,研究药物对流感病毒感染后细胞ERK通路的影响。(3)选择天然抗氧化剂与活性氧激活剂,通过MTS法、实时定量PCR等方法评价其对EGCG的抗流感病毒作用,并通过流式细胞术和共聚焦显微镜检测细胞内活性氧水平。(4)用激光共聚焦显微镜、FCM检测药物对流感病毒感染后的EGFP-LC3质粒转染细胞表达的影响,病毒感染与药物处理前后自噬小体的水平,蛋白质印迹法检测自噬蛋白LC3等的表达,自噬标记物-NBR1和p62水平。 【结果】 (1)EGCG可显著降低宿主细胞内氧化应激的水平(54%),与病毒对照组相比较有统计学差异(P<0.05)。(2)给予不同浓度EGCG处理后的病毒感染细胞,蛋白质印迹法检测发现ERK2表达受到了明显抑制。(3)天然抗氧化剂能加强EGCG对甲型流感病毒的抑制作用,并降低宿主细胞内氧化应激水平的程度,这一作用与抗氧化剂的类型相关。(4)氧化应激激活剂对EGCG的抗病毒作用、降低氧化应激水平程度起拮抗作用。(5)甲型流感病毒感染A549细胞导致自噬蛋白LC3-II上调,而EGCG可显著降低细胞自噬水平。 【结论】 EGCG可通过抗氧化作用调控氧化应激,降低细胞自噬水平,从而抑制流感病毒导致的细胞凋亡,发挥抗病毒作用。     

Bcl-2抑制剂S1诱导的卵巢癌细胞凋亡对自噬影响的实验研究

【目的】 凋亡与自噬密切相关,但二者之间的关系尚需进一步探究。本研究利用Bcl-2抑制剂S1建立卵巢癌细胞(SKOV3)凋亡模型,初步探究S1诱导的SKOV3细胞中凋亡对自噬的影响。 【方法】 培养SKOV3细胞。用MTT法检测S1对细胞生存率的影响。用流式细胞术检测细胞凋亡率。用蛋白质印迹方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3和自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。用免疫荧光技术检测Beclin1及LC3蛋白的表达情况。在S1作用的基础上,应用广谱caspase抑制剂Z-VAD抑制caspase后,检测SKOV3细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。 【结果】 S1能够降低SKOV3细胞的生存率;增加SKOV3细胞的凋亡率。与对照组(0 h)相比,S1组(2、4、8、12、24、48 h)中的Bcl-2蛋白表达持续降低,Bax及caspase3蛋白表达持续增高,呈现出明显的时间依赖性;S1组(2、4、8、12、24、48 h)中自噬的发生也呈时间依赖性,但自噬并不是持续增强的,在12 h时,自噬相关蛋白Beclin1和LC3蛋白表达水平最高,12 h后则呈下降趋势,Beclin1和LC3的荧光结果也表现出一致的现象。与S1单独作用(8、24 h)相比较,给予广谱caspase抑制剂Z-VAD,8 h结果显示 Beclin1及LC3蛋白的表达水平基本无变化,而24 h结果显示Beclin1及LC3蛋白的表达水平显著增高,同时荧光实验也显示出同样的结果。 【结论】 在SKOV3细胞中,S1通过抑制Bcl-2、促进Bax释放,诱导细胞发生凋亡,并呈时间依赖性增强。同时S1通过抑制Bcl-2,释放自噬起始基因Beclin1,诱导自噬发生。但是自噬并未始终呈时间依赖性增强,自噬水平在S1长时间作用下反而出现下降的趋势。据此推测,随着S1诱导凋亡的不断增强,大量活化的caspase可能通过裂解自噬起始基因Beclin1,从而抑制Beclin1诱导的自噬。     

白杨素联合氯喹抑制卵巢癌细胞增殖促进凋亡的研究

目的 探究白杨素联合氯喹对卵巢癌细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法 选取手术切除后卵巢癌标本和正常卵巢标本,使用免疫组化法检测卵巢癌和正常卵巢组织自噬相关蛋白LC3的表达水平。使用CCK-8法检测卵巢癌细胞SKOV3的增殖。使用Western blot和免疫荧光法检测SKOV3细胞中LC3的表达。使用电镜检测SKOV3细胞中自噬小体的数目。使用流式细胞术检测SKOV3细胞凋亡情况。结果 LC3在卵巢癌中的表达量高于其在正常卵巢组织中的表达。分别用0、20、40、60、80、100μmol/L浓度的白杨素处理SKOV3细胞24 h,随着浓度增加,细胞增殖能力降低。40μmol/L白杨素处理SKOV3细胞24 h后,与对照组相比,白杨素上调了LC3的表达(P<0.05)。与对照组比较,白杨素处理24 h的SKOV3细胞后,透射电镜下可以观察到其中间出现较多的自噬小体(P<0.05),在对照组则未观察到自噬小体的存在。当白杨素与CQ联合使用24 h后,联合处理组的LC3蛋白表达量高于白杨素和氯喹单独处理组(P<0.05)。白杨素可以诱导SKOV3细胞的凋亡,且白杨素+氯喹组凋...     

消癥抑癌方对卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移的影响

目的 探讨消癥抑癌方对人卵巢癌细胞SKOV3增殖和迁移的影响及潜在作用机制。方法 利用网络药理学分析消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分和核心靶点,并通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析筛选其相关生物学过程和通路。制备消癥抑癌方含药血清,用含药血清处理卵巢癌SKOV3细胞。采用CCK-8法和EdU染色法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞增殖的影响;采用划痕实验和Transwell迁移实验检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞迁移的影响;采用Western blotting法检测消癥抑癌方含药血清对SKOV3细胞自噬蛋白(P62)、自噬相关蛋白3(ATG3)、微管相关蛋白1轻链3 B(LC3B)及腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/蛋白激酶B(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路相关蛋白的影响。结果 网络药理学研究显示,消癥抑癌方抗卵巢癌的关键活性成分是槲皮素、山柰酚、木犀草素、汉黄芩素、柚皮素等,核心靶点是MAPK3、AKT1、SRC、MAPK1、TP53等。KEGG富集分析共得到171条通路(P<0.01),其中Degree值排名较靠前且与...     

二甲双胍抑制赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1介导的卵巢癌细胞增殖和迁移

目的: 探讨二甲双胍抑制卵巢癌细胞增殖和迁移的可能分子机制。方法: 用不同浓度二甲双胍(0、5、10和20 mmol/L)处理卵巢癌HO8910和SKOV3细胞,EdU和迁移实验检测细胞增殖和迁移能力;免疫印迹和qRT-PCR检测细胞内赖氨酸特异性组蛋白去甲基化酶1(lysine specific demethylase 1,LSD1)蛋白及mRNA表达水平;免疫印迹检测PI3K/AKT信号通路蛋白表达水平。建立诱导型稳定敲低LSD1的卵巢癌HO8910和SKOV3细胞株,经10 mmol/L二甲双胍处理,通过EdU和迁移实验检测各组细胞增殖和迁移能力。结果： 与对照组相比,不同浓度二甲双胍处理组细胞增殖和迁移能力明显降低(P均＜0.01),LSD1蛋白表达水平明显降低,LSD1特异性底物H3K4me2蛋白表达水平明显升高(P均＜0.01);PI3K/AKT信号通路蛋白PI3K和p AKT表达水平明显降低(P均＜0.01)。二甲双胍处理和敲低LSD1后,细胞增殖和迁移能力均显著降低（P<0.05)。结论： 二甲双胍可能通过抑制PI3K/AKT通路下调LSD1蛋白表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖与迁移。     

杨梅素对人卵巢癌SKOV3细胞自噬的诱导作用及线粒体分裂的促进作用

目的：观察杨梅素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后细胞自噬的发生和线粒体分裂程度,探讨杨梅素对其线粒体分裂的影响及自噬的诱导作用。方法：体外培养SKOV3细胞,杨梅素给药剂量按0、20、40和60 g·L^-1分为对照组和低、中、高剂量杨梅素组,均作用12 h。流式细胞术检测各组细胞线粒体膜电位变化,MitoTracker Red荧光探针特异性标记线粒体观察其形态,Western blotting法检测动力相关蛋白1（Drp1）、线粒体分裂蛋白1（Fis1）和自噬相关蛋白LC3-Ⅰ及LC3-Ⅱ蛋白表达水平,采用间接免疫荧光法检测自噬相关蛋白LC3表达强度。结果：与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞线粒体膜电位下降比例明显升高（t=3.27,t=6.85,t=5.49,P<0.05）。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中线粒体数目增加,且线粒体砂砾感增强。与对照组比较,各剂量杨梅素组细胞中Drp1（t=4.35,t=3.28,t=6.17,P<0.05）和Fis1（t=8.32,t=6.74,t=9.27,P<0.05）蛋白表达水平明显升高,中和高剂量杨梅素组细胞中LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高（t=3.28,t=4.21,P<0.05）。间接免疫荧光检测,与对照组比较,随着杨梅素给药剂量增加,LC3表达强度逐渐增强。结论：杨梅素能够诱导人卵巢癌SKOV3细胞发生自噬,并对线粒体动分裂有明显促进作用。     

IL-17A/IL-17RA通过上调自噬降低卵巢癌SKOV3细胞对顺铂敏感性

目的 探讨白细胞介素（IL）17A通过调控细胞自噬对卵巢癌细胞顺铂（DDP）化疗敏感性的影响。方法 体外培养卵巢癌SKOV3细胞并分别用不同浓度DDP（1、2、4、6、8、10、15、20 μg/mL）处理,MTT法测定细胞增殖活性以及IL-17A（100 ng/mL,处理24 h）对DDP 诱导SKOV3细胞凋亡的影响;流式细胞术检测人卵巢癌细胞SKOV3中IL-17A受体（IL-17RA）的表达水平;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测细胞早期凋亡情况;IL-17RA 中和抗体（IL-17RA mAb）进行IL-17RA阻断实验;合成针对IL-17RA基因的siRNA片段（siRNA-IL-17RA）,转染SKOV3细胞,沉默IL-17RA表达;3-甲基腺嘌呤（3-MA）抑制细胞自噬水平;Western blot检测细胞凋亡相关蛋白（Bcl2、Bax、Cleaved Caspase3）、自噬相关蛋白（P62、Beclin-1）表达。结果 DDP可以增加卵巢癌SKOV3细胞IL-17RA表达水平;IL-17A降低SKOV3细胞对DDP的敏感性（P<0.05）;DDP诱导SKOV3细胞内自噬相关蛋白Beclin-表达增强,自噬降解底物P62蛋白减少;IL-17A/IL-17RA增强了DDP自噬诱导作用（P<0.05）;3-MA 阻断自噬后,SKOV3细胞凋亡率较干扰前明显升高,细胞抗凋亡蛋白Bcl2表达水平降低、凋亡蛋白Bax表达水平升高,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 IL-17A/IL-17RA可能通过上调DDP诱导的自噬水平降低人卵巢癌SKOV3细胞化疗敏感性。     

异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究

目的：观察异甘草素（ISL）对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用;吖啶橙／溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化;流式细胞术AnnexinⅤ‐FITC／PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响;Westernblot检测凋亡相关蛋白Bcl‐2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;荧光染色后可见细胞核变圆,碎裂,染色质浓缩;流式细胞仪检测ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率明显高于ISL0μg／mL组,差异具有统计学意义（P＜0．05）;Westernblot结果显示ISL（5、10、20μg／mL）作用于SKOV3细胞48h后Bcl‐2蛋白的表达下调,Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。     

Insulin enhances apoptosis induced by cisplatin in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells related to inhibition of autophagy

Background Chemoresistance is common among patients with esophageal squamous cell carcinoma （ESCC）.We investigated the effect and mechanism of insulin on enhancing anticancer functions of cisplatin in human esophageal cancer cell line EC9706.Methods The viability of EC9706 cells exposed to cisplatin was assessed using MTT assay.The times T1,when the number of living cells reached a plateau and T2,when the number of living cells reached a new plateau after the addition of insulin were found.T1 and T2 plateau cells were stained by Annexin V-FITC/PI and monodansylcadaverin （MDC）.Fluorescent microscopy was used to observe the expression of apoptosis and autophagy intuitively.Apoptotic ratio and fluorescent intensity were analysed by flow cytometry （FCM） quantitatively.Western blotting analysis was used to estimate the protein expression levels of AKT,mTOR,PI3K,PTEN,autophage related indicator LC3-Ⅱ and autophage related protein Beclin1 changes that occurred in the course of treatment.Results A larger number of typical autophagosomes were detected in EC9706 cells exposed to cisplatin.Insulin can increase the apoptosis induced by cisplatin.Apoptotic ratio of T1 plateau cells （（32.6±4.3）％） is significantly less than T2 plateau （（47.5±5.6）％）.MDC fluorescent intensity at T1 plateau （104.9±13.2） was significantly higher than intensity at T2 plateau （82.6±10.3）.After cotreatment with insulin,the expression level of LC3-Ⅱ,Beclin1 and PTEN in T2 plateau cells were significantly downregulated,but AKT,mTOR and PI3K expressions significantly upregulated compared with T1 plateau.Conclusions Insulin could enhance cisplatin-induced apoptosis in human esophageal squamous cell carcinoma EC9706 cells related to inhibition of autophagy.The activation of PI3K/Akt/mTOR signaling pathway induced by insulin resulted in the suppression of autophagy in EC9706 cells,which may be attributed to the anticancer effects of cisplatin.     

20（R）-人参皂苷Rg 3对人乳腺癌细胞自噬作用的影响

目的：观察20(R)-人参皂苷Rg3对人乳腺癌细胞（MCF-7）自噬作用的影响,并探讨20(R)-人参皂苷Rg3诱导MCF-7自噬作用的最佳剂量。方法人乳腺癌细胞株分为20(R)-人参皂苷Rg3实验组及空白对照组。采用MTT法观察20(R)-人参皂苷Rg3对MCF-7细胞生长的抑制作用,并依据计算出的IC50值确定20(R)-人参皂苷Rg3的有效浓度。结果当20(R)-人参皂苷Rg3浓度在37.5～600.0mg/L时,MCF-7细胞的生长抑制率最高,并随其浓度的增加而增大,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。在荧光显微镜下观察到细胞所含自噬泡明显增多,说明20(R)-人参皂苷Rg 3可诱导乳腺癌细胞自噬。蛋白质印迹法检测结果显示：LC 3蛋白,特别是LC 3-I 的表达量与细胞自噬程度呈正相关,随着20(R)-人参皂苷Rg 3干预浓度的增大,LC3-I和LC3-I蛋白表达量亦明显升高,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论20(R)-人参皂苷Rg3能显著抑制MCF-7细胞的增殖,且呈现良好的剂量、时间依赖性;20(R)-人参皂苷Rg 3有诱导MCF-7细胞自噬作用。     

MicroRNA-210对卵巢癌细胞生长及放射敏感性的影响

目的：探讨MicroRNA-210（miR-210）在卵巢癌细胞生长过程中的作用及其与放射治疗敏感性的关系,阐明miR-210对卵巢癌发展和治疗的影响及可能的分子机制。方法：体外培养人卵巢癌细胞株OVCAR3和SKOV3,应用细胞转染法分别将miR-210 mimic和抗miR-210抑制剂转染至OVCAR3和SKOV3细胞中,并利用Real-time PCR法进行鉴定,得到miR-210过表达和低表达卵巢癌细胞模型。将2种细胞分别分为对照组、miR-210过表达组和miR-210低表达组,采用MTT法检测各组细胞增殖活性;采用不同剂量（30、50和100 Gy）电离辐射照射对照组和miR-210过表达组细胞,采用MTT法检测各组细胞增殖活性;采用Western blotting法检测50Gy照射剂量组卵巢癌细胞中凋亡相关蛋白表达水平。所有实验细胞培养采用3复孔,并重复3次。结果：与对照组比较,miR-210过表达组细胞增殖活性升高,miR-210低表达组细胞增殖活性降低（P<0.05）;在给予电离辐射照射后,与对照组比较,miR-210过表达组细胞增殖活性升高（P<0.05）;且凋亡相关蛋白BAX在2株细胞中表达水平均明显下降,而BCL-2表达水平均明显升高。结论：miR-210可促进卵巢癌细胞的生长,同时通过抑制凋亡作用降低卵巢癌细胞对放射治疗的敏感性。     

雷帕霉素联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞株凋亡和周期的影响

目的:探讨雷帕霉素单独及联合顺铂对卵巢癌SKOV3细胞凋亡、周期的影响及可能的分子机制。方法:体外培养卵巢癌SKOV3细胞,流式细胞术检测雷帕霉素单独及联合顺铂对细胞凋亡及周期分布的影响;实时RT-PCR检测对哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)mRNA表达的影响。结果:雷帕霉素单独作用可抑制细胞生长增殖,引起G1期阻滞,S期及G2-M期细胞明显减少,使得大部分细胞处于有丝分裂间期,进而促进细胞凋亡,呈现明显的时间依从性,72 h效果最明显;联合顺铂凋亡率明显高于单独用药组(P0.01)。实时RT-PCR结果显示,雷帕霉素作用24 h可引起mTOR mRNA表达下调,72 h抑制表达低于24 h(P0.05)。结论:雷帕霉素作用于PI3K/AKT/mTOR信号传导通路的mTOR位点,阻滞细胞周期,诱导细胞凋亡,与传统化疗药顺铂有协同效应,可增强肿瘤细胞对于顺铂的化疗敏感性。     

飞燕草素通过AKT/mTOR通路诱导HER-2+乳腺癌细胞自噬

目的：研究飞燕草素对HER-2+乳腺癌细胞MDA-MB-453自噬的诱导作用及其分子机制。方法：以不同浓 度飞燕草素处理MDA-MB-453细胞,CCK-8检测细胞增殖情况;TdT介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TdT-mediated dUTP nick end labeling,TUNEL)和Western印迹检测细胞凋亡和与凋亡相关蛋白的表达;荧光斑点、免疫荧光和Western 印迹检测自噬的诱导情况和诱导机制。 结果：飞燕草素抑制MDA-MB-453细胞增殖,增加TUNEL阳性细胞数,下调 caspase-3 和caspase-9蛋白活性,上调裂解的caspase-3和裂解的caspase-9蛋白活性。飞燕草素增加GFP-LC3荧光斑点数、 LC3免疫荧光斑点数、LC3-II和ATG5蛋白表达。飞燕草素下调mTOR通路蛋白AKT,mTOR,eIF4E和p70s6k蛋白活 性。结论：飞燕草素诱导HER-2+乳腺癌细胞MDA-MB-453凋亡的同时通过抑制AKT/mTOR通路诱导细胞自噬。