肝源性肝干细胞及对肝癌治疗的研究应用

肝干细胞是具有自我更新、高度增殖和多向分化潜能的肝内成体干细胞,与肝脏发育和再生修复密切相关。肝干细胞所具有的无限自我更新与双向分化能力使它成为治疗终末期肝病及制备生物人工肝最理想的细胞来源。从肝脏中存在干细胞样细胞的提出,到动物体内卵圆细胞的分离成功,再到人成体肝源性干细胞的发现,人们对肝干细胞的认识在不断深入,尤其是人成体肝源性肝干细胞的发现,为肝干细胞的临床应用提供了更广阔的空间,并可能为肝癌靶向治疗提供新的靶点,具有重要的临床意义。     

干细胞在肝损伤中的机制研究

<正>常的肝细胞和胆管上皮细胞(胆管上皮细胞)处于静态状态。但是肝脏在面对大规模的实质细胞损失时是一个具有高度再生能力的器官。在肝损伤及肝功能受损时,成熟肝细胞分化增殖是恢复动态平衡的第一道防线。尽管肝脏功能较正常肝脏时降低,但肝移植的研究表明,移植的肝细胞有生存优势,在增殖中占主导地位。但是肝移植患者数目的增加,肝源匹配困难等问题的凸显迫使我们不得不采用新的治疗手段刺激肝脏再生,延长终末期肝病患者的生存期。最近研究证实,在终末期肝病患者和肝病模型中,干细胞在肝损伤修复中有重要作用,干细胞移植被看作为一个潜在的替代移植技术。然而,我们对肝脏干细胞、骨髓间充质干细胞的理解目前仍处于起步阶段。一方面,不断有文献证实肝脏干细胞可以成为肝星状细胞和肌成纤维细胞论证。另一方面,干细胞研究的不断深入,应用的更加谨慎也因为它可能显示出肝脏细胞癌的细胞特性。本篇综述将阐述在肝脏损伤后干细胞肝向分化的作用机制,重点阐述相关信号通路,以促进未来靶向治疗研究。     

脐血干细胞移植治疗肝硬化的护理

<正>肝硬化是由于各种原因引起的肝脏损害导致肝脏细胞坏死从而导致的肝纤维组织增生,产生肝脏假小叶和再生结节形成为特征的慢性肝病。干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞,干细胞是一种为充分分化尚不成熟的细胞     

人胚胎干细胞诱导分化的肝样细胞质量评价研究

肝细胞、肝组织或器官移植是目前不可逆失代偿性肝病的主要治疗手段,而由人胚胎干细胞诱导分化来源的肝样细胞(human embryonic stem cells-derived hepatocyte-like cells,hESC-HLCs)能为移植提供数量充足、质量可控、来源稳定的细胞.为满足临床应用研究的需要,hESC...     

自体骨髓干细胞移植治疗肝硬化研究进展

目的干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞,骨髓干细胞(BMSCs)直接来源于成人的骨髓,具有极强的可塑性,自体BMSCs在活体肝脏内可分化为有功能的肝细胞和胆管细胞。BMSCs经分离纯化后移植到肝脏,可以在肝脏内逐渐分化为有功能的肝细胞,逐渐改善肝脏功能,为中、晚期肝硬化治疗提供新途径。本文综述了BMSCs与肝脏的关系、BMSCs在肝脏内分化的条件和机制、BMSCs移植治疗肝硬化的临床前及临床研究,以期为从事肝病研究的临床医生提供肝硬化治疗的新方法和参考依据。     

间充质干细胞免疫调节在肝纤维化中的治疗作用

肝纤维化是各种病因引起的一种肝内慢性损伤修复反应,细胞外基质的产生和降解失衡是肝纤维化发生、发展的病理生理基础。目前,肝纤维化的发病机制及其治疗仍是研究的热点。间充质干细胞是一类具有高度自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,具有一定的免疫调节功能,其通过调节肝细胞再生,下调免疫介导的肝损伤,从而发挥对肝病的治疗作用。本文就间充质干细胞在肝纤维化治疗中的免疫调节作用作一综述。     

大鼠神经干细胞的分离培养和分化鉴定

目的建立神经干细胞分离、培养和分化鉴定技术。观察神经干细胞生长、增殖特点。方法利用无血清培养,从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代观察。采用荧光免疫细胞化学检测技术,观察鉴定神经干细胞及其分化结果。结果从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有巢蛋白(nestin)表达阳性细胞,显微镜下观察见典型的干细胞特征。分化为3种神经细胞类型:神经元、胶质细胞、少突胶质细胞。结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,通过鉴定确为神经干细胞,并经过分化鉴定确认。     

示踪法自体骨髓干细胞移植实验研究

目的：研究大鼠骨髓干细胞移植后的定位与分化状态。方法：以荧光染料DiI为示踪剂对移植的骨髓干细胞进行标记,并通过门静脉移植入大鼠肝脏,分别于7、14、21、28d采集移植鼠的肝组织进行荧光检测。结果：荧光剂DiI标记的干细胞在移植鼠肝组织中定位,并且分化增殖。其亮红色荧光随时间的推移略有减弱,但并不消失。结论：DiI荧光剂为可靠的干细胞示踪剂,可应用于移植细胞的标记,骨髓干细胞可在受损肝组织中定位并分化增殖。     

人胚胎神经干细胞体外培养及其增殖与分化的研究

目的 建立神经干细胞分离、培养及分化的鉴定技术，观察神经干细胞增殖、分化的特点。方法 从人胚胎海马区分离神经干细胞，采用无血清培养基，进行体外扩增培养、传代。采用免疫细胞化学法鉴定神经干细胞和分化的神经细胞；利用流式细胞仪和细胞生长曲线检测神经干细胞的增殖能力。结果 从人胚胎脑海马区分离的细胞具有增殖和多向分化潜能，可进行传代培养，获得的细胞团中大部分为nestin表达阳性细胞。贴壁分化后可以出现NSE、GFAP表达阳性的细胞。结论 用上述方法分离培养的细胞能表达nestin蛋白，具有自我更新和增殖能力，并具有向神经元、星形胶质细胞分化的潜能，具备神经干细胞的特征，可用于细胞移植等相关研究。     

大鼠脂肪间充质干细胞体外诱导成骨分化的实验性研究

目的探讨大鼠脂肪间充质干细胞体外分离培养和成骨诱导分化的可行性。方法取6周龄大鼠双侧腹股沟处脂肪，酶鹪法分离培养原代脂肪间充质干细胞，成骨诱导培养18d，检测细胞成骨表型转化：碱性磷酸酶、骨钙素的表达以及细胞矿化细胞外基质的能力。结果大鼠脂肪中能分离培养出一定量的脂肪间充质干细胞，在成骨诱导培养液作用下，可特异性表达成骨分化的标志：碱性磷酸酶、骨钙素，同时也具有矿化细胞外基质的能力。结论大鼠脂肪间充质干细胞可能是一种理想的骨组织工程种子细胞的来源。     

星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响实验研究

目的研究星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响。方法随机在我院动物实验中心选取3只大鼠为研究对象,将本次实验均分为普通星形胶质细胞的培养的对照组以及星形胶质细胞与神经干细胞互不接触状态下共同培养的实验组。对比两组星形胶质细胞对神经干细胞分化的影响效果。结果实验组的纯化星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白抗体标记为阳性,其细胞纯度高到96%,且在神经元特异性烯醇化酶阳性细胞与酪氨酸羟化酶阳性细胞均比对照组多。结论星形胶质细胞不仅可以加快神经干细胞向神经元细胞的分化以及向多巴胺神经元细胞的分化,而且可以延长神经元存活时间,降低神经元凋亡率。     

神经鞘糖脂生物合成抑制剂D-PDMP对神经干细胞增殖、分化能力的影响

目的探讨神经鞘糖脂生物合成抑制剂DPDMP对神经干细胞增殖和分化能力的影响。方法用不同浓度的DPDMP处理体外培养的神经干细胞,通过神经球直径大小和数量、细胞计数、MTT分析和诱导分化实验,评价其对神经干细胞增殖和分化能力的影响。结果经DPDMP处理后培养的神经球减小,细胞计数和MTT分析都表明细胞增殖能力明显受到抑制,较高DPDMP浓度可导致神经干细胞死亡;神经干细胞的诱导分化能力也明显减弱,分化的细胞数较少,但仍可诱导成神经元和星形胶质细胞。结论神经鞘糖脂生物合成抑制剂DPDMP能抑制体外培养的神经干细胞增殖,甚至导致细胞死亡,并可减弱神经干细胞的诱导分化能力。     

人胚胎干细胞在药物毒性风险评估中的研究进展

人胚胎干细胞（hESCs）是来源于胚胎发育早期内细胞团的一类未分化的多能干细胞,具有自我更新和多向分化的生物学特性,在发育生物学、再生医学以及细胞治疗领域等方面已开展了广泛的研究。与常规药物毒性评估所采用的癌细胞或原代细胞不同,干细胞不仅能满足基础毒性评估,由于其多向分化的特点,可经诱导产生各种正常人体器官或组织细胞,为药物临床前评估提供多方面数据。与动物实验模型相比,hESCs不仅避免了种属差异,还具备高通量、低成本的优势,在预测药物毒性效应方面具有广阔的前景。对目前hESCs在药物毒性风险评估中的研究进展进行总结,为体外药物毒性筛选试验提供新思路。     

去分化肌肉干细胞神经分化潜能的探讨

目的探讨去分化肌肉干细胞经条件培养诱导,具有神经干细胞性质并分化为终末神经细胞的潜能。方法依次用神经干细胞增殖及神经细胞分化条件培养基,对去分化肌肉干细胞进行体外诱导,促使其向神经干细胞转变以及向终末神经细胞分化,并通过形态学、免疫细胞化学、RT-PCR等实验手段研究其性质并加以鉴定。结果 (1)去分化肌肉干细胞在神经干细胞增殖条件培养基诱导下,可形成神经球,EdU标记阳性,抗Nestin、Neurofilament-m(NFm)、GFAP、CNPase阳性;Myogenin表达水平下调,而Nestin、Sca-1表达上调;(2)经神经细胞分化条件培养基诱导,神经球细胞可分化为形态学上典型的、抗NFm阳性神经元,以及抗GFAP、CNPase阳性神经胶质细胞。结论去分化肌肉干细胞具有神经系的多分化潜能。     

抗骨质疏松药物作用靶位分子水平研究进展

1成骨细胞上的药物作用靶位多功能骨髓基质干细胞或多功能骨髓间充质干细胞(p luripotent mesenchymal stem cell,MSC)分化形成纤维样系统细胞,包括前成骨细胞、成骨细胞、成软骨细胞、成纤维细胞和网织细胞。来源于MSC的骨髓基质成纤维样系统细胞的前体细胞,在成年的哺乳动物体内分为2种:定向成骨前体细胞和可诱导成骨前体细胞。不论是MSC,还是已形成的前体细胞都可在一定条件下继续分化或被诱导分化为成熟的成骨细胞。     

K562细胞模拟骨髓造血多能干细胞的实验应用

K5 6 2细胞具有骨髓造血多能干细胞的特性 ,既能在一般培养条件下分裂增殖 ,又能在不同培养条件下向红系、粒系、巨核细胞系分化成熟 ,因此可将它作为原始造血干细胞模型 ,用于指导分离促造血药物的有效组分。以3 H TdR掺入法或MTT法测定K5 6 2细胞增殖率 ,确定促造血有效组分的取舍。此法比应用骨髓培养细胞进行试验简便、灵活、可比性强     

成年大鼠嗅球神经干细胞的培养和鉴定

目的建立成年大鼠嗅球神经干细胞分离培养和鉴定方法,探索新的成年神经干细胞种子来源。方法用无血清方法分离培养成年大鼠嗅球来源的神经干细胞;用克隆培养、BrdU整合的方法检验培养细胞的干细胞特性;用免疫荧光细胞化学的方法检测BrdU、神经干细胞标记物Nestin和SOX2,分化的细胞标记物Tuj1、GFAP、NG2的表达。结果从成年大鼠嗅球能够分离、培养出具有自我更新、增殖的神经球,构成神经球的细胞呈Nestin和SOX2阳性,它们分化后产生Tuj1阳性的神经元、GFAP阳性的星形胶质细胞、NG2阳性的少突胶质细胞。结论成年大鼠嗅球存在神经干细胞,能够在体外进行培养、增殖、分化,是神经干细胞的新的种子来源。     

骨髓间充质干细胞改善肝纤维化机制的研究进展

肝纤维化以肝脏组织瘢痕为特征,是慢性肝脏疾病发展为肝癌的中间病理过程,发生机制涉及多种信号通路,其逆转性是目前的研究热点。骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)是一种具有多向分化潜能的成体干细胞,在体内和体外均具备分化为肝样细胞,发挥正常肝细胞功能的能力。现代药理实验研究表明,单独使用BMSCs或联合活性因子、中药或中药单体、基因修饰等方式可以促进其增殖、分化、迁移,提高治疗效果,发挥改善肝纤维化的作用。通过归纳总结现有文献,从肝纤维化发病机制、肝纤维化改善机制、BMSCs生物学特性及其改善机制等方面对BMSCs改善肝纤维化疗效机制进行综述,为后期发展BMSCs细胞疗法提供参考。     

透明质酸应用于干细胞培养的研究进展

透明质酸是一种广泛存在于细胞基质中的大分子酸性黏多糖,是一种重要的细胞外基质成分,具有良好的生物相容性和力学特性,体内可自行降解,同时通过与细胞表面受体结合,直接影响组织构建,促进细胞迁移以及胞外基质重构。研究表明透明质酸具有影响体外培养干细胞的黏附、迁移、增殖、老化及分化的能力。本文对透明质酸用于干细胞培养的最新研究进展进行综述。     

转基因脑肿瘤小鼠模型中成体神经干细胞与脑肿瘤干细胞的克隆与鉴定

目的 从Tet-on转基因脑肿瘤小鼠模犁中分离鉴定成体神经干细胞和脑肿瘤干细胞.方法 分别从转基因小鼠肿瘤和室管膜下区取材,将细胞培养于含生长因子的无或含血清培养基.光镜下观察病理,相差显微镜和电镜下分别观察细胞形态及超微结构,流式细胞术榆测Hoechst33342阴性的SP细胞、染色体倍体和细胞周期,免疫荧光染色检测细胞球体及分化细胞表面标志物.结果 无血清培养条件下,肿瘤细胞和室管膜下区细胞均呈悬浮球状生长,含血清培养条件下贴壁分化.成体神经干细胞球细胞较小,形态相对较规则.电镜下两者均表现核质比高、细胞器不发达、具干细胞特征,但存细胞器发育上有所差异.肿瘤细胞球中异倍体细胞为26.77%.而神经球中细胞均为二倍体.免疫荧光染色两种细胞球中大部分细胞表达干细胞标志物Nestin,少数细胞表达分化标志物GFAP和NSE.贴壁后两者的大部分细胞表达分化标志物,且部分细胞共表达前体细胞标志.结论 Tet-on转基因脑肿瘤小鼠中存在具有自我更新和多向分化潜能的脑肿瘤干细胞和神经干细胞.