组织蛋白酶S表达降低致肝癌细胞凋亡的机制研究

目的:探讨组织蛋白酶S(Cathepsin S,Cat S)表达降低后对肝癌细胞凋亡的影响及其机制。方法:选择2种肝癌细胞系MHCC97-H、Bel-7402,将肝癌细胞分为对照组、Con sh RNA组、Cat S sh RNA组。慢病毒介导的Cat S sh RNA转染肝癌细胞48 h后,Western blot检测Cat S表达变化;Annexin V/PI双染流式测细胞凋亡;Western blot检测内源性凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达变化;Western blot检测外源性凋亡相关蛋白Fas、Fas-L表达变化。结果:在肝癌细胞MHCC97-H、Bel-7402中,Cat S sh RNA可显著降低肝癌细胞中Cat S表达(P0.01);Cat S表达降低后,凋亡细胞显著增多(P0.01);内源性促凋亡蛋白Bax表达升高(P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表达降低(P0.01);外源性促凋亡蛋白Fas-L表达明显增强(P0.01),Fas表达无明显变化(P0.05)。结论:Cat S可同时通过内源性及外源性凋亡途径对肝癌细胞的凋亡进行调控。     

DNA甲基转移酶1、3b基因共下调对人胆管癌细胞生长的抑制效应

目的观察联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因真核表达载体对人胆管癌细胞QBC-939生长的影响。初步探讨DNMT1、DNMT3b基因在胆管癌发生中的作用。方法分别构建反义DNMT1基因和反义DNMT3b基因真核表达载体,脂质体介导法将两者联合转入人胆管癌细胞QBC-939,Western blot检测转染前后相应蛋白的表达变化,噻唑蓝(MTT)比色法观察各组细胞生长曲线,流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化,裸鼠皮下种植细胞观察成瘤大小。结果(1)Western blot检测证实转染反义基因能使相应蛋白表达水平降低；(2)联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的生长曲线,使细胞增殖减慢,其中以前者为甚；(3)联合转染反义DNMT1、DNMT3b基因和单独转染反义DNMT1能影响QBC-939的细胞周期,使之阻滞于G_1期,使细胞凋亡率从(1．63±0．27)%分别增加到(18．47±1．46)%和(6．19±0．78)％；(4)联合转染反义DNMTl、DNMT3b基因和单独转染反义DNMTl能使裸鼠皮下种植成瘤体积减小。生长延缓,前者效果更为明显；(5)在上述效应检测中,联合转染空质粒和单独转染反义DNMT3b基因实验组对QBC-939细胞的生长无明显影响。结论(1)通过联合转染反义DNMT1和DNMT3b基因真核表达载体,可同时下调DNMT1和DNMT3b在QBC-939细胞中的表达,并能在体内外抑制胆管癌细胞的生长,促进凋亡的发生,其效果明显优于单独转染DN—MT1反义基因。(2)在DNA甲基化的过程中,DNMT1起着主要的作用,DNMT3b扮演着协同的角色,两者可能通过甲基化途径与胆管癌的发生有关。     

转染肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体对膀胱癌细胞的抑制作用

目的探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对膀胱癌细胞的抑制作用。方法构建TRAIL融合增强绿色荧光蛋白（EGFP）真核表达载体，脂质体法转染膀胱癌细胞株玎细胞。荧光显微镜下计算转染率。分别采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测TRAIL的表达。采用流式细胞仪检测细胞凋亡，噻唑蓝（MTT）法、细胞倍增时间和集落形成率观察TRAIL的抑制作用。结果48h观察重组载体转染率为38．4％，空载体转染率为35．3％（P〉0．05）．RT-PCR和Western blot证实转染后EJ细胞中TRAIL的表达明显增加；凋亡率明显高于转染空白载体和未转染组（P〈0．01）；EJ细胞增殖受到明显抑制（P〈0．01）。结论TRAIL具有诱导膀胱癌细胞凋亡、抑制增殖的作用，有望成为治疗膀胱癌的新方法。     

RNAi技术沉默Bcl-2基因对人膀胱癌细胞株T24增殖影响的研究

目的探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Bcl-2基因表达对人膀胱癌细胞株T24增殖的影响。方法针对Bcl-2 mRNA序列设计合成3对编码小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,转染T24细胞。采用Western blot检测重组质粒对Bcl-2蛋白表达的影响,MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用,Annexin-V-PI双染法流式细胞术(FCM)检测转染重组质粒后细胞的凋亡状况。结果成功构建了pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒,并成功转染T24细胞。重组质粒抑制Bcl-2基因的表达接近70%;转染重组质粒后,T24细胞的活力降低为(66.9±5.6)%;重组质粒组的T24细胞凋亡率为34.55%～45.39%。结论pGenesil-1-Bcl-2 siRNA重组质粒明显下调Bcl-2在膀胱癌细胞中的表达,并抑制肿瘤细胞生长,促进其凋亡。     

CARMA3在胆管癌细胞中的表达及功能

目的:探讨接头蛋白CARMA3在胆管癌细胞中的表达及功能。方法:用qRT-PCR技术检测胆管癌HUCCT1细胞与RBE细胞以及正常胆管细胞HIBEC中CARMA3的mRNA表达。用siRNA技术沉默HUCCT1细胞与RBE细胞中CARMA3的表达后,分别通过CCK-8法、流式细胞术、Transwell实验检测细胞增殖、凋亡、细胞周期以及转移和侵袭能力的变化。结果:两种胆管癌细胞中CARMA3的mRNA表达水平均明显高于正常胆管细胞HIBEC(HUCCT1 vs.HIBEC:t=5.321,P=0.011;RBE vs.HIBEC:t=5.932,P=0.008)。沉默CARMA3的表达后,两种胆管癌细胞的增殖、转移和细胞侵袭能力被明显抑制,G_1期阻滞明显增加,细胞凋亡率明显升高(均P0.05)。结论:CARMA3在胆管癌细胞中表达上调,其作用可能与促进细胞增殖、侵袭、转移并抑制细胞凋亡。     

冬凌草甲素和survivin反义核苷酸对前列腺癌细胞作用的研究

目的探讨冬凌草甲素联合survivin反义核苷酸(反义链)对前列腺癌PC-3细胞株增殖和凋亡以及survivin m RNA和蛋白的影响。方法常规培养PC-3细胞,用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测survivin反义链联合冬凌草甲素对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪(FCM)检测PC-3细胞凋亡率;以Calcu Syn药效学软件计算联合指数(CI)评价survivin反义链联合凌草甲素对PC-3细胞的联合效应,并通过荧光定量PCR和Western blot方法检测PC-3细胞survivin基因和蛋白表达变化。结果 survivin反义链转染PC-3细胞后,可以显著抑制PC-3细胞增殖,且能诱导PC-3细胞凋亡;冬凌草甲素联合survivin反义链对PC-3细胞增殖抑制率较两者单用组明显增强,显示出协同效应(Fa0.8);冬凌草甲素和survivin反义链联用对PC-3细胞凋亡诱导作用更为显著(P0.01);荧光定量PCR及Western blot显示反义链和冬凌草甲素均使survivin m RNA和蛋白表达下降,两者联合使survivin m RNA和蛋白表达下降更明显(P0.01)。结论 survivin基因反义链和冬凌草甲素均能明显抑制PC-3增殖、诱导细胞凋亡和下调survivin基因和蛋白表达;两者联合作用有协同效应。     

热休克蛋白70-2基因沉默诱导大鼠精原细胞凋亡及其机制

目的 探讨热休克蛋白(HSP)70-2基因沉默对精原细胞的影响及其机制.方法 构建HSP70-2特异的短发夹RNA(shRNA)质粒载体,并转染大鼠精原细胞;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测HSP70-2 mRNA表达,Western blot检测HSP70-2、Cyclin DI、bcl-2和box蛋白表达,应用流式细胞术分析细胞周期和凋亡.结果 HSP70-2基因沉默组的HSP70-2蛋白表达量为0.93±0.13,明显低于阴性对照组1.31±0.10(P<0.01);流式细胞术检测结果显示,与转染Scrambled的阴性对照组比较,转染pGenesil-1-HSP70-2重组质粒组的PC3细胞在G1期出现明显细胞周期阻滞和细胞凋亡,G1期阻滞细胞比例为(80.09±2.37)%,凋亡率为(7.44±2.41)%,而阴性对照组分别为(61.85±2.31)%和(1.09±0.57)%(P<0.05).与阴性对照组比较,转染后细胞bcl-2、Cyclin D1表达水平显著降低,而bax表达水平升高.结论 HSP70-2基因沉默能诱导精原细胞凋亡,其机制可能是通过Cyclin D1蛋白调节细胞周期并通过上调box蛋白表达促进细胞凋亡.     

奥曲肽诱导人结肠癌细胞凋亡与细胞周期的影响及机制

目的:探讨奥曲肽诱导人结肠癌细胞凋亡与细胞周期的影响及机制。方法:奥曲肽、GSK-3β抑制剂Li Cl单独或联合作用于人结肠癌SW480细胞后,用流式细胞术检测SW480细胞的凋亡与细胞周期,以及用DNA凝胶电泳实验进一步验证细胞凋亡;Western blot检测SW480细胞中GSK-3β、p-GSK3-β(Tyr216)及p-GSK-3β(Ser9)蛋白表达。结果:与未处理的空白对照组SW480比较,奥曲肽处理SW480细胞后,细胞凋亡率与G0/G1细胞明显升高,凝胶电泳出现典型的"梯形"DNA条带,总GSK-3β蛋白与p-GSK3β(Tyr216)表达明显上调,而p-GSK3β(Ser9)蛋白表达明显下降(均P<0.05);Li Cl单独作用对SW480细胞的凋亡与细胞周期无明显影响(均P>0.05),但与奥曲肽联合作用能明显削弱奥曲肽对SW480的促凋亡与细胞周期阻滞作用(均P<0.05)。结论:奥曲肽能有效诱导SW480细胞凋亡与细胞周期阻滞,该作用可能与其上调GSK-3β蛋白的表达,并调节GSK-3β蛋白的磷酸化水平有关。     

c-Met基因慢病毒载体的构建及其配体肝细胞生长因子对SW480细胞侵袭能力的影响

目的观察慢病毒介导的RNA干扰c-Met基因后肝细胞生长因子(HGF)对结肠癌细胞株SW480侵袭能力的影响。方法实验分为3组,正常对照组(NC组):正常目的细胞加sh RNA阴性对照病毒感染细胞(NC组又分为NC-20和NC-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染sh RNA阴性对照病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/m L的HGF);c-Met基因敲除组(KD组):正常目的细胞加RNA干扰靶点病毒感染细胞(KD组又分为KD-20和KD-40 2个亚组,分别代表正常目的细胞感染目的基因sh RNA-c-Met病毒后在Transwell外室中分别加入浓度为20和40 ng/m L的HGF;KD1、KD2、KD3和KD4组分别表示针对目的基因不同的RNA干扰靶点,以挑选其中最有效的干扰靶点);空白对照组(CON组):正常目的细胞加未感染任何病毒的细胞。构建sh RNA-c-Met慢病毒表达载体,实时定量PCR(RT-PCR)筛选阳性克隆并测序鉴定;经慢病毒质粒包装后转染SW480细胞,转染48 h后,RT-PCR法检测SW480细胞中c-Met m RNA表达,Western blot法检测SW480细胞中c-Met蛋白表达水平;转染72 h后,采用流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell侵袭实验检测细胞的侵袭能力。结果 sh RNA-c-Met慢病毒表达载体构建成功;sh RNA-c-Met显著下调了SW480细胞中c-Met m RNA的表达,并且RNA干扰靶点病毒感染细胞第4靶点时的基因敲减效率最高(81.4%),为最有效靶点。Western blot检测结果显示,KD组SW480细胞中c-Met蛋白表达明显低于NC组(P=0.015)和CON组(P=0.010),KD组SW480细胞凋亡率明显高于NC组(P0.001)和CON组(P0.001)。细胞转移率在KD组、KD-20组和KD-40组均分别明显低于NC组(P0.001)、NC-20组(P=0.015)及NC-40组(P=0.017);与NC组比较,NC-20组和NC-40组的细胞转移率明显升高(P0.001、P0.001),且NC-40组的细胞转移率明显高于NC-20组(P=0.005);同样,与KD组比较,KD-20组和KD-40组的细胞转移率均明显升高(P0.001、P0.001),KD-40组的细胞转移率明显高于KD-20组(P=0.014)。结论以c-Met为靶点的RNA干扰能明显下调结肠癌细胞株SW480中c-Met的表达,c-Met的表达下调能明显增加细胞凋亡且能降低HGF对SW480细胞侵袭能力的影响。     

罗格列酮对舒尼替尼耐药肾癌细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨罗格列酮(RG)对舒尼替尼(SU)耐药肾癌(RCC)细胞增殖和凋亡的影响及作用机制。方法采用递增SU浓度法(1、3、5、10、15 μmol/L)培养建立耐药RCC细胞株(786-O/SR和A498/SR), 转染短发夹RNA(shRNA)静默过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达。实验分为空白组(不加药物), sh(-)组(未转染shRNA)、shPPARγ组(转染shPPARγ)和shNC组(转染阴性对照), 后3组给予30 μmol/L RG。使用5-乙炔基-2’脱氧尿苷(EdU)染色、Transwell小室法和划痕实验分别检测RG对耐药细胞增殖、侵袭、迁移能力的影响。流式细胞术分析RG对细胞周期和细胞凋亡的影响, 蛋白质印迹法(Western blot)检测视网膜母细胞瘤蛋白(pRb)、细胞周期素D1(Cyclin D1)、周期蛋白依赖激酶4和6(CDK4、CDK6)、周期蛋白依赖激酶抑制因子21和27(p21、p27)的表达。组间比较采用单因素方差分析。结果 786-O/SR和A498/SR细胞sh(-)组、shPPARγ组、shNC组的EdU细胞阳性率[(2...     

shRNA 介导的NGF-β下调对人胆管癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨shRNA介导的神经生长因子β(NGF-β)下调对人胆管癌细胞系QBC939体外增殖与凋亡的影响.方法:构建稳定转染NGF-β shRNA的QBC939细胞系,将细胞分为干扰组(转染NGF-β shRNA组)和对照组(转染空质粒组).以Western blot方法检测细胞转染效果;细胞增殖实验(CCK-8实验)检测细胞增殖能力,单克隆形成实验检测细胞克隆形成能力;流式细胞术检测细胞周期及细胞凋亡.结果:干扰组细胞较之对照组的细胞增殖、克隆形成能力明显降低,S期细胞明显减少(P＜0.05),凋亡率明显增加(P＜0.05).结论:抑制NGF-β能降低QBC939细胞系的增殖和克隆形成能力,该作用与其阻滞细胞进入S期,促进细胞凋亡有关.     

反义调控DNA甲基转移酶3b基因对人胆管癌细胞QBC939生长的影响

目的观察转染反义DNMT3b基因真核表达质粒对人胆管癌细胞QBC939生长的影响，初步探讨DNMT3b基因在胆管癌发生中的作用。方法构建反义DNMT3b基因真核表达质粒，用脂质体介导法将其转人人胆管癌细胞株QBC939；Western blot检测转染前后DNMT3b蛋白表达的变化；MTT法和软琼脂克隆形成试验观察细胞的生长增殖能力；流式细胞术观察细胞生长周期及凋亡率的变化。结果转染反义基因能使DNMT3b蛋白表达水平降低；转染反义DNMT3b基因不能抑制QBC939的生长曲线，对其软琼脂克隆形成率亦无影响（P=0．717）；转染反义DNMT3b基因不能改变QBC939的细胞周期和促进细胞凋亡（P=0．089）。结论转染反义DNMT3b基因真核表达质粒可下调DNMT3b在QBC939细胞中的表达水平，但对QBC939的生长和增殖无影响，也不能改变QBC939的细胞周期和促进细胞凋亡的发生。     

microRNA-25高表达与直肠癌细胞的侵袭和迁移的关系

目的:探讨micro RNA-25(mi R-25)在直肠癌细胞中的表达及作用。方法:检测多种不同直肠癌细胞中mi R-25的表达,并检测直肠癌细胞转染mi R-25前体(pre-mi R-25)上调mi R-25的表达或转染mi R-25抑制剂(anti-mi R-25)下调mi R-25的表达后生物学行为的变化。结果:与正常直肠黏膜组织比较,不同的直肠癌细胞中mi R-25的表达均不同程度的明显升高(均P0.05)。在mi R-25表达水平相对较低的直肠癌HR-834细胞中转染pre-mi R-25,在mi R-25高表达的直肠癌SW-837细胞中转染anti-mi R-25后,两种细胞的增殖、细胞周期、凋亡无明改变(均P0.05),但侵袭及迁移能力在HR-834细胞的明显增强,SW-837细胞减弱(均P0.05)。结论:mi R-25在直肠癌细胞中的表达升高,且其升高程度与细胞的侵袭和迁移能力密切相关。     

二甲双胍对人胆管癌RBE细胞的作用及其机制

目的：探讨二甲双胍对人肝胆管癌细胞的增殖、凋亡和细胞周期的影响及机制。 方法：将人肝胆管癌RBE细胞分别用二甲双胍、Compound C（AMPK抑制剂）、二甲双胍+ Compound C处理,以未处理的RBE细胞作为空白对照,分别用MTT法检测细胞增殖、流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期、Western blot检测细胞AMPK/mTOR通路蛋白的表达。 结果：与空白对照组比较,二甲双胍作用后的RBE细胞存活率降低;细胞凋亡率升高;G0/G1期比例增加,而S期比例减少;磷酸化AMPK（p-AMPK）蛋白表达上调,而磷酸化mTOR（p-mTOR）蛋白表达明显下调,差异均有统计学意义（均P<0.05）。二甲双胍与Compound C联合作用RBE细胞后,二甲双胍的上述作用均被取消,各项指标与空白对照组差异均无统计学意义（均P>0.05）。单独的Compound C作用RBE细胞后,各项指标未见明显改变,与空白对照组差异均无统计学意义（均P>0.05）。 结论：二甲双胍能抑制人胆管癌RBE细胞的增殖、促进凋亡和细胞周期阻滞,该作用可能其与激活AMPK从而抑制mTOR下游效应分子有关。

     

长链非编码RNA BCAR4对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响及机制

目的:探讨长链非编码RNA BCAR4(LncRNA BCAR4)在胰腺癌细胞中的表达以及对胰腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:用qRT-PCR检测胰腺癌细胞系(AsPC-1、HPAC、BxPC-3、Panc-1)和正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7中LncRNA BCAR4的表达。将胰腺癌AsPC-1细胞分别转染BCAR4 siRNA序列和阴性对照siRNA序列,以无转染的AsPC-1细胞为空白对照,用CCK-8和流式细胞术检测细胞的增殖和凋亡,Western blot检测细胞中mTOR与P70S6K及磷酸化mTOR(p-mTOR)与磷酸化P70S6K(p-P70S6K)蛋白的表达。结果:LncRNA BCAR4在各胰腺癌细胞系中的相对表达量均明显高于正常胰腺导管上皮细胞系HPDE6-C7(均P0.05);AsPC-1细胞转染BCAR4 siRNA后表现为增殖能力明显降低、凋亡率明显升高、p-mTOR及p-P70S6K蛋白相对表达量明显降低(均P0.05)。结论:LncRNA BCAR4在胰腺癌细胞中表达升高,LncRNA BCAR4的高表达可促进胰腺癌细胞增殖抑制凋亡,机制可能与LncRNA BCAR4上调mTOR/P70S6K通路的磷酸化水平有关。     

Devazepide suppresses cell proliferation and migration,and induces apoptosis in bladder carcinoma

BackgroundThis study aimed to examine the effects of devazepide on the proliferation, migration, and apoptosis of human bladder cancer (BC) 5637 cells, and its mechanism.MethodsA cell counting kit-8 (CCK-8) for cell viability assays, a colony formation assay, and immunofluorescence were applied to detect the effects of devazepide on the proliferation of 5637 cells. Cell cycle assay, cell apoptosis assay and wound healing assay were performed to detect the effects of devazepide on the cell cycle, apoptosis, and migration of 5637 cells. The protein expression of CyclinD1, Bcl-2-associated X protein (Bax), poly ADP-ribose polymerase 1 (PARP1), and Cleaved Caspase-3 in 5637 cells was detected by a western blot assay.ResultsThe proliferation of 5637 cells was significantly inhibited (P<0.001) after incubation with 12, 25, and 50 µM devazepide for 48 and 72 h. A treatment of 25 µM devazepide for 48 h induced G1–S cell cycle arrest and apoptosis (P<0.01), and inhibited cell migration (P<0.05). By western blot assay, we found that devazepide can down-regulate CyclinD1 expression, and up-regulate Bax, PARP1, and Cleaved Caspase-3 expression.ConclusionsDevazepide inhibits the migration and proliferation of human BC 5637 cells by arresting the G1–S cell cycle, and induces cell apoptosis.     

靶向CTNNB1的shRNA抑制结肠癌SW480细胞增殖的研究

目的探讨靶向CTNNB1的shRNA对人结肠癌SW480细胞的基因下调效应和细胞增殖的抑制作用.方法构建靶向CTNNB1的shRNA载体质粒,然后转染入结肠癌SW480细胞.用RT-PCR和Western blotting方法检测CTNNB1的mRNA和蛋白的表达情况.MTT实验评价转染后各组细胞的增殖情况,并用流式细胞仪检测各组细胞的周期分布和凋亡情况.结果靶向CTNNB1的shRNA能够明显下调CTNNB1 mRNA和蛋白质表达（P＜0.05）,其抑制率分别是43.87%和45.16%.MTT实验提示CTN组细胞在转染后呈现随着时间延长而进行性增殖抑制的现象.在转染后72 h,CTN组的细胞存活率为46.4%,与空白对照组相比有显著性降低（P＜0.05）.而流式细胞仪显示CTN组细胞有明显G0/G1周期阻滞和凋亡率增高（P＜0.05）.结论靶向CTNNB1的特异性shRNA对结肠癌SW480细胞具有下调CTNNB1基因表达,促进细胞凋亡并且显著抑制细胞增殖的效应.     

Survivin基因干扰RNA对骨肉瘤MG-63细胞系增殖和凋亡的影响

[目的]观察Survivin基因siRNA表达载体对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的影响。[方法]体外构建Survivin shRNA表达载体pSilence2．1-neo-Survivin，转染骨肉瘤细胞系MG-63，筛选稳定表达的克隆，倒置显微镜观察各组细胞形态学变化，RT-PCR、Weston-blot方法检测转染后Survivin mRNA及蛋白的表达，噻唑蓝（MTT）法、克隆形成实验检测细胞的增殖情况，吖啶橙荧光染色法观察细胞凋亡情况。[结果]转染后MG-63细胞Survivin基因mRNA水平和蛋白表达显著下降，其抑制率分别为85．08％和81．14％；细胞增殖受到显著抑制，培养48h后与空白组比较，抑制率达63．4l％；吖啶橙染色显示转染组细胞出现明显核碎裂等凋亡改变，转染组凋亡率为24．54％。[结论]靶向Survivin基因的siRNA表达载体可以显著抑制骨肉瘤细胞增殖，促进细胞凋亡。     

血管内皮细胞生长因子促进肝内胆管细胞癌生长的机制研究

目的探究血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体对肝内胆管细胞癌（ICC）细胞生长调控的作用机制。 方法Western blotting检测VEGF在12例ICC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达水平。采用外源性重组人源VEGF（rhVEGF）处理ICC细胞株Huh28后,采用细胞计数检测细胞生长情况,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blotting检测rhVEGF处理后Huh28细胞中VEGF受体VEGFR1及VEGFR2的表达情况。使用特异性抗体分别阻断VEGFR1及VEGFR2,通过ELISA法检测细胞的凋亡水平。采用慢病毒shRNA构建稳定敲低VEGFR2的ICC细胞株Huh28-shVEGFR2（实验组）和对照细胞株Huh28-shNC（对照组）。采用Huh28-shVEGFR2及Huh28-shNC细胞在10只裸鼠中构建皮下瘤模型,观察肿瘤的生长情况。 结果VEGF在ICC肿瘤组织中蛋白表达水平上调,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）。外源性rhVEGF可以促进Huh28细胞生长,抑制细胞凋亡,而对细胞增殖能力无明显影响。rhVEGF处理后Huh28细胞中磷酸化的VEGFR1及VEGFR2表达水平升高（P<0.05）。VEGFR2抗体可以显著逆转rhVEGF介导的抗凋亡作用（P<0.05）,而VEGFR1抗体则无明显效果。皮下瘤模型结果显示,与对照组相比,肿瘤生长在实验组中受到显著抑制,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论VEGF是通过VEGFR2依赖的信号通路抑制ICC细胞凋亡,从而促进ICC细胞生长。