模拟飞船应急返回时+Gx暴露后大鼠脑神经元的形态学改变

目的: 探讨模拟飞船应急返回时高 Gx作用对大鼠脑神经元形态学的影响.方法: 40只雄性SD大鼠随机分为4组,即对照组、 15 Gx组、7 d模拟失重组、7 d模拟失重后再 15 Gx组,每组10只.大鼠在动物离心机上承受 Gx作用后,解剖取材,经光镜、电镜观察大鼠顶叶皮层和海马区神经元形态学变化.结果: 15 Gx暴露后即刻大鼠脑神经元形态无明显变化,暴露后1 d可见脑神经元形态学轻度变化,在暴露后3 d形态学改变明显,缺血性改变的神经元数目增多.7 d模拟失重后即刻和1 d可见脑神经元损伤和超微结构改变,在暴露后3 d脑神经元的损伤减轻.模拟失重后再超重组在暴露后即刻和1 d出现一定数量的变性神经元及超微结构变化,在暴露后3 d损伤最重,变性神经元明显增多.结论: 15 Gx /180 s暴露可引起大鼠脑神经元损伤;7 d模拟失重可加重 Gx过载对大鼠脑组织的形态学改变.     

婴儿空肠肌间神经丛及神经节细胞的形态学观察

目的：用镀银染色铺片法对婴儿空肠肌间神经丛进行了形态学观察,为空肠的ENS发生以及生理、病理学研究提供形态学依据。方法：大体解剖新鲜婴尸,取空肠应用镀银染色铺片法观察。结果：婴儿空肠肌间神经丛由神经纤维束和神经节组成,呈与肠管共同始终的连续网格状结构,神经节细胞形态呈高度的异质性,神经细胞平均密度为878个／cm^2。结论：婴儿空肠肌间神经元数低于成人和其他实验动物。婴儿空肠肌间神经丛的形态和其他实验动物及成人基本相似。但从神经细胞的形态来看,则存在明显的异质性,空肠粘膜内神经元是ENS中粘膜神经丛的一部分。     

GDNF基因转染诱导神经干细胞向神经元分化的作用

目的探索转染GDNF基因到大鼠神经干细胞(neural stemcell,NSC)的方法,并研究其诱导大鼠神经干细胞向神经元和多巴胺能神经元分化的作用。方法体外扩增GDNF基因,并构建带有绿色荧光蛋白(GFP)的表达载体PcDNA3-GDNF-GFP质粒。悬浮培养大鼠胚胎神经干细胞,脂质体介导PcDNA3-GDNF-GFP质粒转染神经干细胞,荧光显微镜观察转染及表达情况;免疫细胞化学鉴定β-微管蛋白Ⅲ(β-Tubulin III)和酪氨酸羟化酶(tyrosinehydroxylase,TH),以确定神经干细胞的分化为神经元和多巴胺能神经元情况。结果转染后72 h,荧光蛋白大量表达。脂质体介导PcDNA3-GDNF-GFP质粒转染神经干细胞后,神经干细胞分化为神经元和多巴胺神经元的比例明显增高。结论脂质体介导GDNF基因转染神经干细胞的方法简单、有效,是一较为理想的基因转染方法。GDNF基因能明显促进神经干细胞分化为神经元和多巴胺神经元的比例。     

缺氧诱导因子-1α与绿色荧光蛋白在神经干细胞中的共表达

目的:以携带缺氧诱导因子-1α(Hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)及绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)基因的腺病毒转染大鼠神经干细胞(Neural stem cells,NSCs),观察HIF-1α和GFP在NSCs中的表达以及对NSCs生物学特性的影响,为HIF-1α基因转染的NSCs移植治疗缺血性脑血管病提供物质基础.方法:利用携带HIF-1α和GFP基因的重组腺病毒转染NSCs,相差显微镜下观察NSCs的形态及在荧光显微镜下观察NSCs及其诱导分化后的GFP表达情况;观察HIF-1α基因在NSCs中的表达;并检测NSCs的细胞活性.应用免疫荧光技术检测神经干细胞及其诱导后分化细胞的特异性蛋白巢蛋白(Nestin)、神经微丝蛋白(Neurofilament protein)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP).结果:重组腺病毒转染NSCs后外源性基因及绿色荧光蛋白有持续稳定表达;转染后的NSCs的形态学、细胞活性和分化能力等与未转染的NSCs无明显差异(P＞0.05);检测神经元标志物神经微丝蛋白和胶质细胞标志物胶质纤维酸性蛋白,证实转染后的NSCs仍然具有多向分化潜能.结论:NSCs转染携带HIF-1α和GFP基因的重组腺病毒后能够持续、稳定地表达HIF-1α和GFP,生物学特征正常.     

体外培养新生大鼠海马神经元突起的形态学

目的研究体外培养过程中，神经元的形态学。方法用扫描电镜观察体外培养的新生大鼠海马神经元在体外发育过程中，神经突起的形态学。结果培养海马神经元呈现梭形、三角形、锥体形等多种形态；神经突起随着培养时间延长，逐渐出现长度增加，突起分支增多；扫描电镜下，突起上显示串珠样膨大的膨体样结构，垂直分出呈鼓槌状的树突棘，突起来梢有矛头样和泪滴状生长锥，并见突起之间有连接存在。结论体外培养的海马神经元，在形态学上经历了与在体相似的变化，并且具有执行神经元功能的基本形态学基础。     

增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞株的表达

目的:研究重组腺相关病毒载体介导的增强型绿色荧光蛋白基因在永生化大鼠神经前体细胞的转染效率及其表达情况. 方法:携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺相关病毒转染永生化大鼠神经前体细胞,持续观察转基因神经前体细胞绿色荧光蛋白的表达情况,并计算转染效率. 应用巢蛋白抗体和抗猿肾病毒40大T抗原抗体进行细胞鉴定,50 mL/L胎牛血清诱导细胞分化后,应用神经元和星形胶质细胞特异性标志物抗体检测其分化能力. 结果:荧光显微镜观察显示转染后24 h神经前体细胞即有绿色荧光蛋白表达,转染后72 h,大部分细胞表达绿色荧光蛋白,转染效率可达90%. 经传代培养8 wk后,表达绿色荧光蛋白的阳性细胞仍可高达70%～75%. 免疫细胞化学结果显示转绿色荧光蛋白神经前体细胞巢蛋白和抗猿肾病毒40大T抗原抗体染色均为阳性,50 mL/L胎牛血清可诱导其分化为神经元和星形胶质细胞. 结论:携带增强型绿色荧光蛋白基因的重组腺相关病毒可高效转染永生化大鼠神经前体细胞,并可在细胞中长期稳定地表达,绿色荧光蛋白作为良好的示踪剂可应用于神经前体细胞的体内移植.     

人单纯疱疹病毒BDNF转基因重组体的构建表达及活性检测

目的构建人单纯疱疹病毒(HSV)脑源性神经营养因子(BDNF)转基因重组体(HSV-BDNF),转染大鼠皮质神经元后并检测其表达及生物活性。方法用RT-PCR方法扩增人BDNF基因,克隆并构建HSV-BDNF转基因重组体。构建成功后将其转染培养大鼠皮质神经元,观察其对皮质神经元存活的影响;用ELISA、免疫组化检测皮质神经元中BDNF的表达水平。结果成功构建了HSV-BDNF转基因重组体,皮质神经元转染HSV-BDNF后BDNF表达水平明显上调(P<0.05),且明显促进皮质神经元生长(P<0.05)。结论成功构建了HSV-BDNF,能有效转染大鼠皮质神经元并促进BDNF高表达,且具有生物活性。     

Ephrin B2基因在维甲酸诱导神经干细胞分化过程中的表达

目的　研究EphrinB2基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞的分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法　用 1μmol/L的维甲酸诱导人胚胎神经干细胞 ,诱导 7d后 ,做NSE免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。于ATRA诱导前、诱导 3d和诱导 7d ,提取细胞的总RNA。用半定量RT PCR法检测EphrinB2基因的表达情况。结果　与对照组相比 ,全反式维甲酸能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1)。EphrinB 2基因在维甲酸诱导后明显上调 (P <0 .0 0 1)。结论　EphrinB2基因在全反式维甲酸诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起正调控作用 ,EphrinB2基因与神经元的分化关系密切。     

扩大经鼻蝶入路鞍旁的显微解剖研究

目的 通过对扩大经鼻蝶入路鞍旁的显微解剖学研究为临床应用提供形态学基础.方法 在15具动脉灌注染料的成人尸头上,模拟扩大经鼻蝶手术入路进行解剖,测量鞍旁重要结构的距离.结果 经蝶鞍旁神经血管关系与经颅不同,由前至后可分为视柱三角、上三角区、上四边形区和下四边形区.结论 鞍旁相关神经血管间形态特征可为内镜下行扩大经鼻蝶入路手术提供解剖形态学标志.     

Notch1基因在神经干细胞分化过程中的表达

目的　研究Notch1基因在全反式维甲酸 (all trans retinoic acid ,ATRA)诱导人胚胎神经干细胞分化为神经元过程中的表达及其发挥的作用。方法　用 1 μmol/L的ATRA在体外诱导人胚胎神经干细胞 ,诱导 7d后 ,做神经元特异性烯醇化酶 (neuronspecificendase,NSE)免疫荧光染色 ,计数分化为神经元的比例。于诱导前、诱导 3d和诱导 7d ,提取细胞的总RNA。用半定量RT PCR法检测Notch1基因的表达。结果　与对照组相比 ,ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 (P <0 .0 1 )。Notch1基因在ATRA诱导后明显下调 (P <0 .0 0 1 )。结论　ATRA能显著提高人胚胎神经干细胞分化为神经元的比例 ,Notch1基因在人胚胎神经干细胞分化为神经元的过程中起负调控作用。     

动脉粥样硬化兔弓状核NPY免疫反应阳性神经元的形态学变化

目的观察动脉粥样硬化兔下丘脑弓状核NPY免疫反应阳性神经元的形态变化,为研究神经体液因素在动脉粥样硬化形成中的作用提供形态学依据.方法采用免疫组织化学ABC法和计算机图像分析技术.结果实验组下丘脑弓状核NPY免疫反应阳性神经元体积、数目及积分光密度出现明显改变(P＜0.05).结论下丘脑弓状核NPY免疫反应阳性神经元的形态变化与动脉粥样硬化的形成有关.     

大鼠瘦素基因重组腺相关病毒的构建及在原代神经元细胞中的表达

目的 构建携带大鼠瘦素(Leptin)基因的重组腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV),并鉴定其在原代鼠神经元细胞中介导的瘦素过表达,为肥胖症基因治疗研究奠定实验基础。 方法 提取大鼠脂肪组织总RNA,利用RT-PCR技术,获取目的基因瘦素 cDNA,通过重组DNA技术,得到瘦素 cDNA与pGEM-T载体的重组质粒,阳性重组子用PCR及测序分析鉴定。用SpeⅠ和EcoRⅤ双酶切将pGEM-Leptin中的瘦素基因片段切出,再克隆到AAV2表达质粒pTR-UF22中,构建瘦素重组AAV2载体pAAV2-CBA-Leptin。以pDG作为辅助质粒用HEK293细胞包装AAV2-CBA-Leptin,并用一步重力流柱法纯化病毒,由荧光定量PCR测定病毒基因组DNA的拷贝数即为病毒滴度。然后将AAV2-CBA-Leptin 及对照病毒AAV2-CBA-EGFP感染大鼠原代神经元细胞,分别用免疫染色和Western blotting鉴定外源基因在神经元的表达。 结果 测序证实瘦素基因与GenBank 提供的原始序列完全一致。 重组载体经酶切鉴定与预期结果完全一致,HEK293细胞包装病毒效果良好,得到滴度为1.5x1012 vg/ml纯化的重组瘦素病毒AAV2-CBA--Leptin。Western blotting检测显示AAV2-CBA-Leptin能介导瘦素在大鼠神经元细胞中过表达,并随着病毒量的增加而增强。AAV2-CBA-EGFP 感染鼠神经元细胞5天后95%左右的细胞有明显的绿色荧光,免疫染色和DAPI核酸染色显示荧光细胞均为神经元而神经胶质细胞无荧光。 结论 成功构建并包装了瘦素重组AAV2病毒并可介导瘦素在神经元细胞中高效、特异表达,从而为研究瘦素在中枢神经系统控制体重和糖尿病等方面的功能及基因治疗研究打下基础。     

应激大鼠室旁核神经元c-fos的表达

目的：为下丘脑室旁核参与应激反应提供形态学资料。方法：对铃声刺激大鼠为应激动物模型用免疫组织化学ABC法显示下丘脑室旁核神经元即早基因c-fos的表达。结果：铃声刺激使鼠室旁核神经元。尤其是小细胞亚核神经元c-fos表达显著增加。结论：下丘脑室旁核神经元在铃声刺激下处于活动状态。参与应激反应。     

感觉神经末梢形态学研究方法及其在躯干和四肢软组织中的研究进展

感觉神经末梢(SNE)在躯干和四肢软组织疼痛、压痛、感觉异常等神经功能障碍中的作用,备受临床和基础研究者的重视,其手段部分程度上依赖于神经形态学的研究方法。神经形态学的研究始于中枢神经系统,并得到了迅速发展,建立在中枢神经系统上的银染法、免疫组化法和神经顺行示踪法等同样适用于针对SNE的研究。目前,研究SNE形态学的观察方法、躯体某些部位或解剖层次SNE的研究情况未见系统总结。现通过对不同方法的介绍,探讨SNE形态学在躯干和四肢中的研究情况。     

rhEPO通过调节PI3K/AKT信号通路改善大鼠脑出血后神经元损伤

目的 研究重组人促红细胞生成素(rhEPO)是否可以通过调节PI3K/AKT信号通路来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。方法SD大鼠构建脑出血(ICH)模型,并给予rhEPO药物治疗,采用TUNEL法和试剂盒检测神经细胞凋亡及凋亡蛋白Caspase 9表达;采用Real-Time PCR法和Western blot法检测PI3K、AKT的基因和蛋白磷酸化水平的表达。结果与ICH非治疗组相比,rhEPO治疗组中神经元凋亡细胞数和Caspase 9活性表达明显降低(P<0.05); rhEPO治疗组PI3K和AKT的蛋白磷酸化水平表达和mRNA表达显著升高 (P<0.05)。结论重组人促红细胞生成素rhEPO具有神经保护作用,可以通过调节PI3K/AKT信号来改善大鼠脑出血后的神经元损伤。     

HSV-1载体对体外培养神经元感染作用的研究

目的利用重组有lacZ基因的HSV-1假型病毒载体感染体外培养的人胚神经元,(以β-gal组织化学染色来检测报告基因lacZ在神经元中的表达),并观察该载体的细胞毒性及病毒的水平传播情况。方法用重组有lacZ基因的HSV-1扩增子质粒pHSVlac包装成复制缺陷的假型病毒载体,并在Vero细胞中传代增殖,产生高滴度的病毒载体,用其感染体外原代培养的神经元,以β-gal染色观察报告基因lacZ在神经元中的表达及该载体的细胞毒性。结果pHSVlac质粒与HSV-1 17 ts K可在Vero细胞中包装成复制缺陷的HSV-1假型病毒载体,经传代其滴度可达1×108PFU/mL。该载体在37℃时能感染体外原代培养的人胚神经元,并在其中表达LacZ基因,未发现细胞毒性改变。结论HSV-1载体能够高效靶向地将外源基因导入非分裂的神经元,HSV-1载体介导的基因转移系统的建立为进一步开展神经机能及神经系统疾病的基因治疗的研究奠定了基础。     

构建和鉴定PTEN基因的shRNA重组腺病毒表达载体

目的构建PTEN特异性shRNA重组腺病毒表达载体,为应用基因沉默技术进行缺血性脑损伤的基因治疗奠定基础。方法将前期构建的PTENshRNA特异性真核表达载体pGenesil-1-shRNA的表达启动子U6连同shRNA亚克隆至穿梭质粒pAdTrack,酶切及DNA测序鉴定后,将含PTEN基因的重组穿梭质粒pAdTrack-U6-shRNA经PmeI线性化后转化入pAdEasy-1感受态细菌。pAd-U6-shRNA质粒经PacI线性化后转染293细胞,包装重组腺病毒Ad-U6-shRNA,并进行PCR鉴定、病毒滴度测定及Westernblotting检测受感染海马神经元细胞内PTEN蛋白的表达。结果证实pAdTrack-U6-shRNA及pAd-U6-shRNA质粒构建正确,收获病毒后PCR及DNA测序结果证明Ad-U6-shRNA包被成功,受腺病毒感染海马神经元细胞内PTEN蛋白表达明显降低。结论成功构建了PTEN基因的shRNA重组腺病毒载体Ad-U6-shRNA,为应用基因沉默技术研究PTEN对缺血性脑损伤后的神经保护作用奠定了基础。     

缝匠肌和股直肌肌内神经分布研究及其临床意义

目的:研究入缝匠肌和股直肌的肌内神经分支分布、肌梭密度和测定神经入肌点,为临床外科提供肌形态学资料.方法:大体解剖法观察20具尸体缝匠肌和股直肌的形态学特点,并以髂前上棘为标志定位缝匠肌和股直肌神经入肌点;H·E染色法研究5具尸体缝匠肌和股直肌肌梭分布;Sihler's肌内神经染色法探讨10具尸体缝匠肌和股直肌肌内神经...     

AhR基因缺陷与野生型小鼠下丘脑室旁核催产素能神经元的不同形态特征

目的　阐明下丘脑室旁核催产素能神经元与免疫功能之间的联系 .方法　用免疫组织化学方法 ,对具有免疫功能缺陷的芳香烃受体 (Ah R)基因缺陷小鼠下丘脑室旁核催产素能神经元的形态特征进行观察 .结果　 Ah R基因缺陷小鼠与野生型小鼠相比 ,催产素能神经元突起增多、增粗 ,许多粗大的纤维穿行至第三脑室室管膜下 .基因缺陷小鼠的下丘脑垂体束与野生型小鼠相比更加密集 ,纤维增粗 .结论　 Ah R基因缺陷小鼠下丘脑催产素能神经元发生了塑性变化 ,提示催产素能神经元在神经免疫调节中可能具有重要作用     

混合培养神经元和星形胶质细胞对活性氧的应激性

目的 研究混合培养脑神经元与星形神经胶质细胞对活性氧叔丁基脂氢过氧化物（ｔｂＯＯＨ）的应激性,以探讨神经元与星形神经胶质细胞的相互作用。方法 采用ＭＴＴ比色法测定单独培养的大鼠大脑皮层神经元与星形神经胶质细胞在分别遭受ｔｂＯＯＨ攻击后的细胞存活率,及用形态学方法评估二者混合培养时遭受ｔｂＯＯＨ攻击时的细胞形态变化。结果 单独培养进遭受ｔｂＯＯＨ攻击后的细胞存活率无显著性差异（Ｐ〉０．０５）,但二乾混合培养时,神经元比星形神经胶质细胞损伤、死亡严重。结论 神经元和星形神经胶质细胞共同存在时,星形神经胶质细胞较神经元对活性氧有较强的抵抗力。