CD86在大鼠角膜移植排斥反应中的表达及意义

目的 观察大鼠角膜组织中共刺激分子CD86(B7-2)的原位表达，以了解共刺激分子在大鼠角膜移植排斥反应中的作用和意义。方法 制作大鼠角膜移植模型，观察角膜透明度、新生血管。采用免疫组化法检测CD86在角膜、脾脏组织中的表达。结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管，角膜水肿、混浊，基质增厚。CD86在正常的角膜组织中无阳性表达；在移植后出现急性排斥反应的角膜上皮层中有大量阳性细胞表达。在脾脏的阳性细胞表达与文献报道的一致。结论 共刺激分子CD86在移植后发生排斥的角膜组织中的阳性表达，可能与免疫排斥反应有关。     

树突状细胞在大鼠穿透性角膜移植排斥反应中的作用

目的 观察大鼠角膜组织中树突状细胞的分布,以了解树突状细胞在穿透性角膜移植排斥反应中的作用.方法 制作大鼠穿透性角膜移植模型,观察角膜透明度、新生血管.采用免疫组织化学方法检测OX-62 树突状细胞在角膜的分布.结果 术后角膜植片均出现不同程度的新生血管、角膜水肿、混浊、基质增厚.排斥反应发生率100%.正常角膜组织中未见OX-62 树突状细胞分布,在发生急性排斥反应的角膜上皮层中有阳性细胞表达.脾脏阳性细胞表达与文献报道一致.结论 OX-62 树突状细胞出现在移植后发生排斥的角膜组织中,角膜组织中的树突状细胞可能参与角膜移植后的免疫反应.     

白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

目的 观察白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1ra)抑制大鼠高危角膜移植后免疫排斥反应、促进植片存活的作用。方法 对40只SD大鼠(40眼)用缝线法诱导角膜新生血管增生,选取其中的30只大鼠(30眼)并随机分为实验Ⅰ、Ⅱ组及对照组Ⅲ组,每组均接受同种异系(Wistar大鼠)供体角膜,行穿透性角膜移植术。实验组于术后第1日起分别滴用50 μg/ml的IL-1ra滴眼液(Ⅰ组)和1%的CsA滴眼液(Ⅱ组),每日3次。受试动物术后均每日滴用典必殊滴眼液及托品卡胺滴眼液3次,连续14 d。术后比较各组大鼠免疫排斥反应发生的时间,对角膜植片存活情况进行评分,观察其效果。结果 两实验组角膜植片平均存活时间分别为(12.00±1.50) d和(10.44±1.13) d,明显高于对照组(8.00±1.25) d,差异有显著性(P<0 01);两实验组间比较,差异亦有显著性(P<0 01)。结论 IL-1ra可抑制高危角膜移植后的免疫排斥反应,减少新生血管的生成,减轻免疫性炎性反应,延长角膜植片的存活时间。     

CD1分子在高危角膜移植免疫排斥反应中的表达

目的:探讨高危角膜移植免疫排斥反应中CD1分子表达。方法:选用SD大鼠作供体,Wistar大鼠作受体,建立大鼠高危角膜移植动物模型。术后观察植片的存活情况。分别在植片急性排斥期和排斥后应用免疫组化的方法对植片中CD1分子的表达进行研究。结果:正常大鼠角膜组织中,在上皮细胞层可见CD1分子的表达,基质层和内皮层未见明显CD1分子的表达。角膜移植术后10 d,在发生排斥的植片上皮层和基质层有CD1分子的强表达,内皮层未见CD1分子的表达。基质中CD1分子的表达随免疫排斥反应的增强而增加;在角膜移植术后30 d,CD1分子的表达有所下降。结论:CD1分子在高危角膜移植免疫排斥反应的发生发展中发挥重要作用,选择性阻断CD1分子的表达可能会延长植片的存活时间。     

1,25-二羟维生素D3对高危角膜移植急性排斥反应及角膜新生血管的影响

目的 研究药物1,25-二羟基维生素D₃(二羟维D₃)在高危角膜移植模型中对免疫排斥反应及新生血管生长情况的影响,揭示1,25-二羟维D₃作为免疫抑制剂在角膜移植中的治疗作用及机制。方法 建立大鼠高危角膜移植模型,按不同浓度的1,25-二羟维D₃(1×10^-5和1×10^-7mol/L)及环孢霉素A(CsA)分组,连续用药2周,观察移植物排斥情况并于术后4、7、14d取材行原位杂交等实验,分析各组细胞因子白介素1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平的变化情况。结果 在1,25-二羟维D₃作用下,高危角膜移植物的存活时间明显延长;新生血管生长受抑制;合用CsA后效果更明显。原位杂交实验证实1,25-二羟维D₃能显著抑制植片IL-1α、TNF-αmRNA表达(P<0.01);对VEGF表达无直接影响。结论 1,25-二羟维D₃能有效地抑制新生血管生长及角膜移植急排期的免疫排斥反应,机制可能包括对前炎症因子(IL-1α、TNF-α)生成的抑制作用,而对VEGF无明显直接作用。     

角膜移植患者外周血T细胞及其亚群CD69分子表达研究

目的观察角膜移植患者外周血T细胞CD69分子的表达及意义。方法应用流式细胞仪于术前第1天,术后第1,2,3,8周检测23例角膜移植患者外周血T细胞CD69表达变化。结果角膜高血管化植床组患者术后外周血T细胞CD69分子表达比角膜无血管化植床组患者明显增高,也比术前明显增高(P<0.01),6例发生排斥反应的患者均在高血管化植床组,早期外周血中以CD4 细胞为主。结论外周血T细胞CD69表达与角膜移植排斥反应密切相关,测定外周血中CD69分子表达可更早预见排斥反应的发生。     

大鼠骨髓源干细胞在损伤脑组织中的分化趋势

目的 探讨迁移至损伤脑组织的骨髓源干细胞(BMDSCs)的分化趋势。方法 将雌性SD大鼠脑损伤模型在制作好24h后经尾静脉植入GFP标记的雄性SD大鼠的BMDSCs。在植入后2周、4周和8周分批取脑,分别用CD11b和GFAP荧光免疫组织化学方法检测GFP阳性细胞的性质。结果 在移植GFP标记的BMDSCs后1周,植入的GFP阳性BMDSCs占外周血白细胞总数的3.53%;移植BMDSCs后4周和8周的脑损伤病灶周围有集中分布的GFP阳性细胞,分别表达小胶质细胞的细胞表面标记CD11b和胶质纤维酸性蛋白GFAP。结论 GFP标记的BMDSCs能迁移至脑损伤病灶周围并有向小胶质细胞和星形胶质细胞分化的趋势。     

骨髓间质干细胞移植后大鼠缺血心肌的超微结构观察

目的 观察骨髓间质干细胞(MSCs)移植后大鼠缺血心肌组织的超微结构改变。方法 体外培养、纯化SD大鼠的骨髓MSCs,4’6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记,经尾静脉注射移植治疗大鼠急性心肌缺血,移植后1周和8周荧光显微镜下检测心肌组织中DAPI阳性细胞,透射电镜观察心肌组织的超微结构改变。结果 MSCs经传代培养至第3代后,均一性好。细胞移植后1周和8周,移植组的心肌组织中可见呈蓝色细胞核的DAPI阳性细胞,而对照组未发现阳性细胞。移植后1周,心肌组织的超微结构观察发现移植组的心肌梗死周边区域可见少量细胞,其形态类似于体外培养的骨髓MSCs;移植后8周,移植组梗死周边可见大量的毛细血管,其内皮细胞细胞“芽生”分割管腔开始形成新的血管,还可见少量“不成熟”的心肌细胞。结论 骨髓MSCs通过血液循环可向缺血心肌组织归巢并促进血管和心肌组织的再生。     

角膜移植免疫排斥反应防治研究进展

同种异体角膜移植是角膜病致盲患者复明的终末治疗手段,但移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的首要原因,尤其在高危角膜移植(新生血管、多次角膜移植及活动性炎症)免疫排斥反应高达50%以上。因此,预防角膜移植排斥反应发生是角膜移植成功的关键。本文针对角膜移植排斥反应发生机制,对目前防治角膜移植免疫排斥反应等研究热点进行综述。     

选择性COX-2抑制剂对角膜移植术后新生血管形成的抑制作用

目的：探讨选择性环氧化酶-2（COX-2）抑制剂在角膜移植术后新生血管形成中的抑制作用。方法：SD大鼠及Wistar大鼠各20只,在SD大鼠与Wistar大鼠之间建立角膜移植动物模型,分为选择性环氧化酶-1（COX-1）抑制剂小剂量阿司匹林给药组、选择性COX-2抑制剂西乐葆给药组、非选择性COX抑制剂消炎痛给药组及生理盐水阴性对照组。对角膜移植术后角膜混浊、水肿、新生血管形成情况评分得出角膜排斥反应指数（RV）,对角膜移植术后新生血管形态计算得出新生血管反应区域。并进行角膜病理切片检查。结果：选择性COX-1抑制剂组及阴性对照组大鼠在7 d时RV值＞5,排斥反应已经发生,选择性COX-2抑制剂组及非选择性COX抑制剂组未发生排斥反应。裂隙灯检查及角膜病理切片检查可见选择性COX-2抑制剂组及非选择性COX抑制剂组术后7d出现植床周围少许新生血管。选择性COX-1抑制剂组及阴性对照组术后7 d时新生血管接近创口。选择性COX-2抑制剂组及非选择COX抑制剂组角膜新生血管反应区域及RV值均少于选择性COX-1抑制剂组及阴性对照组。结论：COX-2选择性抑制剂可抑制角膜移植术后新生血管的产生。     

TLR2在大鼠穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用

目的 通过采用实时荧光定量PCR技术(RT-PCR)动态检测大鼠角膜组织TLR2 mRNA的表达,研究TLR2在穿透性角膜移植术后免疫排斥反应中的作用.方法 实验分四组:正常对照组(N)、同种同体角膜移植组(A)、同种异体角膜移植组03)和同种异体角膜移植激素抗排斥组(C),A、B、C三组大鼠给予穿透性角膜移植术,术后裂隙灯下观察角膜透明度、新生血管并用排斥反应指数评分;分别于术后第5、7、9天取材,行组织病理学检查和荧光实时定量PCR检测,动态观察角膜组织TLR2 mRNA的表达.结果 术后随时间变化角膜植片均出现不同程度的水肿、混浊、新生血管生长.B组大鼠角膜排斥反应指数平均在术后第7天符合排斥反应的诊断并获病理学支持:A组和C组大鼠角膜的排斥反应指数计分未达到诊断标准.正常的角膜组织可见TLR2 mRNA表达;三个手术干预组TLR2 mRNA表达差异倍数均明显高于正常对照组,同种异体角膜移植组角膜TLR2 mRNA的表达较同种同体角膜移植组显著增加,激素抗排斥组角膜TLR2 mRNA表达较同种异体角膜移植组显著降低(P<0.05).结论 TLR2可能作为天然免疫识别受体识别移植抗原,参与角膜移植术后免疫排斥反应.

Abstract：

Objective To gain insight into the role of Toll-like receptor 2 (TLR2) in graft rejection following penetrating keratoplasty, and investigate the expression of TLR2 mRNA in the corneal graft. Methods Penetrating keratoplasty was performed in 3 groups of rats for orthotopic autologous corneal transplantation (group A), allograft corneal transplantation (group B), or allograft corneal transplantation with hormone treatment (C). The transparency and neovascularization of the cornea were observed using a slit-lamp microscope and scored according to the rejection index, with normal cornea serving as the control. The corneal tissues were sampled at 5, 7, and 9 days after the transplantation for histopathological examination and detection of TLR2 mRNA expression using RT-PCR. Results With the passage of time, edema, opacities and neovascularization of the comeal graft occurred after the operation in all the groups. Seven days after the operation, the rejection index of group B, but not that of groups A and C, met the diagnostic criteria for graft rejection with also support by histopathological evidence. The expression of TLR2 mRNA was detected in normal corneas and augmented in the corneal grafts in the 3 transplantation groups. TLR2 mRNA expression in group B was significantly higher than that of group A, and the expression in group C decreased significantly in comparison with that in group B (P<0.05). Conclusion As the recognition receptors of native immune system, TLR2 in the rejected corneal grafts may recognize the allograft antigen and play a role in acute graft rejection after penetrating keratoplasty.     

基质细胞衍生因子-1与趋化因子受体4在大鼠角膜移植排斥反应中的作用

目的探讨基质细胞衍生因子-1（SDF-1）与基质细胞衍生因子-1（CXCR4）在大鼠角膜组织中的表达及其在角膜移植术后 免疫排斥反应中的作用。方法取15只Wistar大鼠作为正常对照组;取22只Wistar大鼠行自体角膜移植术作为自体组;取22只 SD大鼠与44只Wistar大鼠,以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体行穿透性角膜移植,术后随机抽取22只归入典必殊组,术眼滴 典必殊眼液（每日2次）,剩余22只归入异体组,术眼滴同等量生理盐水,共一个月。参照Larkin法对各组角膜植片进行临床评 估;分别于术后第5、9天取术眼角膜植片,行组织病理学观察、免疫组化检查、实时荧光定量PCR检测。结果自体组不发生排 斥反应,典必殊组角膜存活时间为24±0.32 d,远高于异体组10±0.36 d（P<0.001）。组织病理学检查发现异体组角膜有大量炎 性细胞浸润以及新生血管形成。SDF-1和CXCR4 mRNA在异体组角膜组织中表达水平明显升高（第5天P<0.001,第9天P< 0.01）,典必殊组较异体组明显降低。免疫组化检查发现SDF-1/CXCR4主要表达在角膜植片的上皮层与基质层,异体组角膜组 织SDF-1和CXCR4含量明显升高。结论SDF-1/CXCR4可能参与了大鼠角膜移植术后早期的排斥反应,其机制可能为SDF-1 特异性诱导CXCR4+细胞成熟和朝着排斥部位趋化,并促进角膜新生血管形成。     

穿透性角膜移植术后免疫排斥反应高危因素分析

目的 分析穿透性角膜移植术后免疫排斥反应的高危因素。寻找角膜移植术后免疫排斥反应的有效防治方法。方法 对穿透性角膜移植术后发生免疲排斥反应的31例，从角膜盲原因、植床新生血管程度、合并症、移植片直径、联合手术等5大高危因素进行回顾性分析。结果 血管化角膜、大植片移植、植床术前的活动性炎症、偏中心移植、多次移植、联合手术等应视为穿透性角膜移植术后免疲排斥反应的高危因素，而移植片上皮反复脱落、眼压高、旧病复发、术眼再次手术、缝线松解与拆线等可能是诱导排斥反应发生的促发因素。结论 尽量减轻角膜血管化，掌握适当的手术时机，强调病人的及时复诊和治疗，术后坚持局部使用免疲抑制剂半年，排斥发生时及时足量地全身及局部使用激素和免疲抑制剂，均可以在一定程度上帮助控制免疲排斥反应。     

CD25单克隆抗体对大鼠角膜移植术后房水中细胞因子表达的影响

目的 研究CD25单克隆抗体对大鼠角膜的毒性以及对同种异体大鼠角膜移植后房水中细胞因子的影响.探讨其对大鼠角膜移植免疫排斥反应的防治效果.方法 ①将12只SD大鼠随机分为生理盐水对照组、50μg CD25单克隆抗体结膜下注射组、100μg CD25单克隆抗体结膜下注射组、200μg CD25单克隆抗体结膜下注射组,每组3只.各组大鼠均右眼用药.分别于0、2、4、6、8d结膜下注射生理盐水及不同剂量的CD25单克隆抗体,共5次.每日行裂隙灯显微镜检查.观察角膜有无水肿、混浊发生.并于第9天取右眼角膜行病理及透射电镜观察角膜各层的变化.②以Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体建立角膜移植实验模型.将93只SD大鼠随机分为五组,A组:正常组;B组:角膜移植对照组;C组:CD25单克隆抗体治疗组;D组:CD25单克隆抗体联合地塞米松治疗组;E组:地塞米松治疗组.B组术后给予生理盐水;C组术后给予CD25单克隆抗体100 μg;D组术后给予CD25单克隆抗体100μg联合地塞米松50 μg治疗;E组术后给予地塞米松100μg;各共用5次,分别于术后0、2、4、6、8 d经球结膜下注射给药.用裂隙灯观察移植排斥情况.利用逆转录-多聚酶链反应检测植片内IFN-γmRNA的表达,酶联免疫吸附法检测房水中IFN-γ和IL-4的浓度.结果 ①50μgCD25单克隆抗体和100μgCD25单克隆抗体对角膜基本无影响;200μg的CD25单克隆抗体组透射电镜检查发现角膜基质细胞及内皮细胞有不同程度的肿胀.②C、D、E组发生排斥反应时间分别为(13.167±1.169),(17.333±2.160),(16.417±1.379)d较B组发生排斥反应时间(10.583±1.084)a明显延迟,差异有统计学意义(p＜0.05).正常角膜无IFN-γmRNA的表达,术后11天.B组移植角膜植片内IFN-γmRNA的表达较C、D、E组明显增强(p＜0.05).C、D、E组术后6 d及11 d房水巧N叫的含量明显低于同期的B组(p＜0.05);同C组相比,术后11d D、E组房水IFN-γ的含量明显降低(P＜0.05).术后6 d和11 d,与B组相比,同期C组IL-4含量明显升高(P＜0.05),而同期D、E组IL-4含量明显降低(P＜0.05);术后6 d和11 d,与C组相比,同期D、E组IL-4含量明显降低(P＜0.05).结论 50μg CD25单克隆抗体和100 μgCD25单克隆抗体对角膜基本无影响.IFN-γ和IL-4在角膜移植免疫排斥反应过程中发挥重要的作用.CD25单克隆抗体通过抑制Th1因子(IFN-γ)、促进Th2因子(IL-4)表达降低角膜移植免疫排斥反应的发生率,从而延长角膜植片存活时间;而CD25单克隆抗体联合地塞米松治疗通过同时抑制Th1因子(IFN-γ)、Th2因子(IL-4)表达,却更能延长角膜植片的存活时间,具有重要的临床应用价值.     

60例穿透性角膜移植疗效分析

目的：观察穿透性角膜移植的疗效和并发症．方法：对60例(60眼)穿透性角膜移植进行回顾性总结．结果：统计分析表明：角膜植片透明54例(90．00％)，视力≤0．0422例(36．67％)．0．05～0．227例(45．00％),≥0．311例(18．33％)．主要并发症：角膜植片免疫排斥反应17例(28.33％)，继发性青光眼2例(3．33％)．结论：穿透性角膜移植可使角膜盲患复明，但防治术后免疫排斥反应是成功关键。     

Effects of 1alpha, 25-dihydroxyvitamin D3 on the acute immune rejection and corneal neovascularization in high-risk penetrating keratoplasty in rats]

OBJECTIVE: To investigate the effects of 1,25-dihydroxyvitamin D(3) (1,25(OH)(2)D(3)), a hormone that has immunosuppressive properties, on acute rejection and corneal neovascularization in rat keratoplasty model, so as to assess the therapeutic effects and explore the mechanism of 1,25(OH)(2)D(3) as an immunosuppressant in corneal transplantation. METHODS: High risk corneal transplantation was performed orthotopically in SD rat models of high risk penetrating keratoplasty established by placing three 10-0 nylon sutures in the central corneas for two weeks, with the Wistar rats as the donors. The SD rat models were randomly assigned into 5 groups and treated with 1,25(OH)(2)D(3) at varied concentrations and cyclosporine A (CsA). The expressions of interleukin (IL)-1alpha, tumor necrosis factor (TNF)-alpha, and vascular endothelial growth factor (VEGF) mRNA were detected by in situ hybridization (ISH). RESULTS: 1,25(OH)(2)D(3) significantly suppressed acute graft rejection and inhibited corneal neovascularization as compared with saline. 1,25(OH)(2)D(3) showed better immunomodulatory effects when administered along with CsA in rat corneal allotransplants. ISH study demonstrated that 1,25(OH)(2)D(3) strongly suppressed mRNA and protein expressions of the cytokines IL-1alpha and TNF-but not those of VEGF. CONCLUSION: Topical administration of 1,25(OH)(2)D(3) can be effective in suppressing acute corneal graft rejection by inhibiting the expression of proinflammatory cytokines (IL-1alpha and TNF-alpha).     

Immunological studies on the cellular phenotype involved in corneal allograft rejection

ｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｅｌｕｌａｒｐｈｅｎｏｔｙｐｅｉｎｖｏｌｖｅｄｉｎｃｏｒｎｅａｌａｌｏｇｒａｆｔｒｅｊｅｃｔｉｏｎｕｓｉｎｇｗｈｏｌｅｍｏｕｎｔｓａｎａｌｙｓｉｓ．ＭｅｔｈｏｄｓＣｏｒｎｅａｌｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔ...     

白细胞介素-1受体拮抗剂抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究

OBJECTIVE: To observe the roles of subconjunctival administration of interleukin-1 receptor antagonist (IL-1ra) promoting corneal graft survival in rat models of high-risk penetrating keratoplasty. METHODS: Corneal vascularization was induced in 40 Sprague-Dawley rats (40 eyes) by passing 10-0 silk suture through the corneal stroma, and 30 of these rats received corneal grafts from Wistar rats to establish high-risk keratoplasty models and were divided into 3 groups to receive their respective treatment with IL-1ra eye drops (50 microg/ml), 1% CsA eye drops, administered 3 times a day, or no treatment. All the rats were treated by Tobra Dex eye drops and Tropicamid eye drops, 3 times a day for 14 consecutive days after the operation. During the 30-day observation, the survival of the grafts was recorded, and all the grafts were evaluated for signs of rejection. RESULTS: The mean survival times (MST) of the grafts of the treatment groups with IL-1ra and CsA were 12.00+/-1.50 d and 10.44+/-1.13 d respectively, significantly longer than that in the untreated model group (8.00+/-1.25 d, t=0.00, P<0.01), and the difference in the MST between the 2 treatment groups was also significant (t=0.00, P<0.01). CONCLUSION: Treatment with IL-1ra may significantly prolong high-risk corneal allograft survival.