鼻咽癌患者血清EGF和EGFR的检测及临床意义

目的 研究鼻咽癌患者血清中表皮生长因子(EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达水平及临床应用价值.方法 采用ELISA法测定血清中EGF和EGFR的含量.结果 鼻咽癌患者血清中EGF水平(3.93±1.21)μg/L,EGFR水平(1 144.3±213.7)pmol/L明显高于慢性咽炎患者血清中EGF水平(2.21±0.91)μg/L、EGFR(841.6±149.1)pmol/L和健康人血清中EGF水平(2.13±0.74)μg/L和EGFR水平(739.3±144.2)pmol/L,差异有统计学意义(P<0.01),且患者血清中EGF和EGFR中的含量与临床分期呈高度的正相关(rEGF=0.609,rEGFR=0.679);有淋巴结转移患者血清中EGF水平(4.25±1.36)μg/L和EGFR水平(1 248.1±236.4)pmol/L明显高于无转移患者血清中EGF水平(3.11±0.91)μg/L和EGFR水平(1 125.9±202.7)pmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);治疗有效者治疗后血清中EGF水平(2.36±1.07)μg/L、EGFR水平(887.7±178.1)pmol/L明显低于治疗前EGF水平(3.74±1.20)μg/L、EGFR水平(1 116.4±215.6)pmol/L,差异有统计学意义(P<0.01);复发后血清中EGF水平(4.35±1.57)μg/L和EGFR水平(1 243.5±250.4)pmol/L明显高于复发前EGF水平(2.41±1.03)μg/L和EGFR水平(919.6±211.2)pmol/L,差异有统计学意义(P<0.01).结论 血清中EGF和EGFR含量的测定可作为鼻咽癌早期诊断和临床分期、放化疗敏感性、疗效、是否复发及预后判断的较理想的血清生物学标志物.     

2种方法检测非小细胞肺癌EGFR基因突变的比较

目的比较测序法和Taqman实时荧光PCR法检测表皮生长因子受体(EGFR)基因19、21外显子基因突变的一致性,为寻找适宜临床应用的EGFR基因突变检测方法提供实验依据。方法收集60例非小细胞肺癌患者肿瘤组织,应用测序法和Taqman实时荧光PCR法分别检测EGFR基因19、21外显子基因突变,比较两种方法的有效性。结果两法检测EGFR基因19、21外显子突变结果符合率分别为96.7%(58/60)和98.3%(59/60),差异无统计学意义(P>0.05)。结论 2种方法均可用于EGFR基因19、21外显子突变检测,测序法更适合指导临床分子靶向治疗。     

表皮生长因子受体与糖尿病创面难愈

表皮生长因子受体(EGFR)是一种170-kDa跨膜受体酪氨酸激酶。其配体,如:表皮生长因子(EGF)、转化生长因子-α(TGF-α),和受体胞外结构域结合可引发受体二聚化和聚集,继而导致受体胞内部分的酪氨酸激酶激活。这种激活的、聚集的受体可使聚集的其他受体磷酸化,产生可供带有SH2结构域的胞内蛋白结合的位点,引发其下游一系列信号转导途径的激活。EGFR是一个多效应的信息传递者,其激活后能促进有丝分裂或诱导细胞凋亡;增加细胞活性、蛋白质分泌;诱导细胞分化或细胞去分化。人类皮肤中对EGF/TGF-α的反应决定于EGFR的数量和位置,并受影响结合力、内吞、受体酪氨酸激酶活性等过程的调节。EGFR在组织中的分布与该组织的生长活性相一致。链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病(STZ-DM)小鼠肝细胞中高亲和力位点的EGFR完全缺失,低亲和力位点下降到50000。糖尿病患者组织中EGFR的性质发生了改变,受体后自磷酸化程度下降。目前还不清楚这种改变与疾病发生的因果关系。     

表皮生长因子受体活化与胰腺癌细胞解离关系的实验研究

目的 明确表皮生长因子受体(EGFR)活化参与胰腺癌细胞解离调节的分子机制.方法 通过免疫荧光法检测仓鼠高转移株(PC-1.0)和低转移株(PC-1)胰腺癌细胞中EGFR、活化(磷酸化)EGFR (p-EGFR)、活化(磷酸化)丝裂原活化蛋白激酶激酶2 (p-MEK1/2)及活化(磷酸化)细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)的表达变化及其与胰腺癌细胞解离状态变化的关系.结果 胰腺癌细胞解离因子(DF)明显诱导低转移株胰腺癌细胞(PC-1)中EGFR、p-EGFR、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达,同时诱导其细胞克隆解离.相反,AG1478(EGFR活化抑制剂)明显抑制高转移株胰腺癌细胞(PC-1.0)中EGFR、p-EGFR、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达,同时诱导PC-1.0细胞聚集成细胞克隆.结论 表皮生长因子受体活化后激活MEK/ERK信号通路,从而参与胰腺癌细胞解离的调节.     

表皮生长因子受体在黑色素瘤紫杉醇耐药性中的机制研究

目的探究紫杉醇对黑色素瘤的作用机制及表皮生长因子受体（EGFR）信号通路在调节黑色素瘤侵袭与转移中的作用,揭示该信号通路与紫杉醇耐药的关系及相关机制。 方法以EGFR高表达的恶性黑色素瘤A375细胞为研究对象,采用流式细胞术、细胞迁移实验、MTT法和蛋白质印迹法,研究紫杉醇及表皮生长因子（EGF）通过EGFR信号通路对A375细胞凋亡、增殖和迁移的影响。 结果（1）细胞凋亡：紫杉醇诱导的A375细胞凋亡随浓度升高而增强（P＜0.001）,同时紫杉醇（0.1 μmol/L）抑制Bcl-2并增加了Bax的表达（P＜0.01）;EGFR抑制剂AG1478可明显增加A375细胞凋亡并增强紫杉醇的诱导效果及对Bcl-2和Bax的影响（P＜0.001）;EGF单独处理对A375细胞凋亡无明显影响,但其可抑制紫杉醇诱导的细胞凋亡（P＜0.05）及对Bcl-2和Bax的影响（P＜0.001）。（2）细胞增殖：紫杉醇（0.1 μmol/L）可显著抑制A375细胞增殖（P＜0.001）且该作用可被AG1478进一步增强但被EGF减弱（P＜0.001）。（3）细胞迁移：紫杉醇（0.1 μmol/L）可显著抑制A375细胞的迁移（P＜0.001）,该抑制作用可被AG1478进一步增强但被EGF减弱（P＜0.001）。 结论紫杉醇能够降低Bcl-2并增加Bax表达,从而诱导黑色素瘤A375细胞的凋亡并抑制其增殖和迁移,而这些抑制作用可被EGF激活的EGFR通路减弱。     

表皮生长因子受体与糖尿病创面难愈

表皮生长因子受体(EGFR)是一种170-KDa跨膜受体酪氨酸激酶。其配体，如：表皮生长因子(EGF)、转化生长因子—α(TGF—α)，和受体胞外结构域结合可引发受体二聚化和聚集，继而导致受体胞内部分的酪氨酸激酶激活。这种激活的、聚集的受体可使聚集的其他受体磷酸化，产生可供带有SH2结构域的胞内蛋白结合的位点，引发其下游一系列信号转导途径的激活。EGFP是一个多效应的信息传递者，其激活后能促进有丝分裂或诱导细胞凋亡；增加细胞活性、蛋白质分泌；诱导细胞分化或细胞去分化。人类皮肤中对ECF／TGF—α的反应决定于EGFR的数量和位置，井受影响结合力、内吞、受体酪氨酸激酶活性等过程的调节。EGFH在组织中约分布与该组织的生长活性相一致。链脲佐菌素（Streptozotocin,STZ))诱导的糖尿病(STZ—DM)小鼠肝细胞中高亲和力位点的EGFR完全缺失，低亲和力位点下降到50000。糖尿病患者组织中ECFR的性质发生了改变。受体后自磷酸化程度下降。目前还不清楚这种改变与疾病发生的因果关系。     

壳聚糖对胃溃疡大鼠部分生长因子表达的影响

目的:观察壳聚糖对大鼠消化性渍疡愈合的影响,进而阐明其抗溃疡的可能机制.方法:采用冰乙酸胃窦部浆膜下注射法制备大鼠消化性溃疡模型.70只实验大鼠被随机分成7组,分别为假手术对照组、模型对照组、泮托拉唑治疗组、硫糖铝混悬液治疗组及3个不同剂量(0.25、0.5、1.0/kg)壳聚糖治疗组.按Guth标准记分判定溃疡指数并计算溃疡抑制率;HE染色观察组织结构.用ELISA法测血清表皮生长因子(EGF);采用免疫组织化学检测鼠胃黏膜表皮生长因子受体(EGFR)及碱性成纤维生长因子(bFGF)的含量.结果:壳聚糖治疗组与模型对照组比较溃疡指数明显降低,溃疡抑制率升高(P<0.01);胃黏膜EGFR及bFGF表达较模型对照组及假手术对照组明显增加(10D值P<0.05).0.25/kg壳聚糖治疗组血清EGF含量最高,与模型对照组、假手术对照组及其他治疗组比较差异均有显著性(P<0.01).结论:壳聚糖可促进冰乙酸溃疡大鼠的溃疡愈合,并呈一定的量效关系.其促进溃疡愈合作用可能与提高胃溃疡大鼠血清EGF的含量及胃黏膜EGFR及bFGF的表达有关.     

非小细胞肺癌EGFR基因突变与扩增的比较及其与血清CEA水平的关系

目的 比较分析非小细胞肺癌(NSCLC)表皮生长因子受体(EGFR)基因突变与扩增的关系,并探讨其与血清癌胚抗原(CEA)水平有无相关性. 方法 对270例确诊非小细胞肺癌的肺组织标本(包括手术切除及经纤支镜活检取得)用实时荧光定量PCR法技术检测EGFR基因突变状态,用荧光原位杂交技术检测EGFR基因的扩增情况.治疗前抽取患者静脉血,用化学发光法检测血清CEA水平. 结果 270例NSCLC中EGFR基因突变率为31.11％,EGFR基因扩增率为20％,基因突变并扩增的占10.74％.基因突变组、基因扩增组、基因突变并扩增组和基因无突变无扩增组血清CEA平均水平分别为[3.03(1.68-6.22)] ng/mL、[3.19(1.8-17.17)]ng/mL、[3.39(1.85-20.87)] ng/mL和[2.54(1.5-4.62)] ng/mL.基因突变组与基因扩增组、基因突变组与基因无突变无扩增组血清CEA比较无显著性差异(P＞0.05).基因扩增组与基因无突变无扩增组、基因突变并扩增组与基因无突变无扩增组血清CEA比较有显著性差异(P＜0.05).EGFR基因突变、基因扩增及基因突变并扩增与血清CEA水平有明显相关性. 结论 在NSCLC中EGFR基因突变率大于扩增率,其机制有待进一步阐明.EGFR基因与血清CEA水平有明显相关性.血清CEA水平有可能成为指导非小细胞肺癌EGFR靶向治疗的指标.     

RNA干扰表皮生长因子受体对骨肉瘤细胞凋亡的影响

目的:探讨小发夹RNA载体介导抑制骨肉瘤细胞中表皮生长因子受体(EGFR)的表达和对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法:构建pSilencer-EGFR短发夹状小干扰RNA(siRNA)真核基因表达载体,采用脂质体介导的方法将其转染到骨肉瘤细胞中,用Western印迹法、RT-PCR检测EGFR基因在骨肉瘤细胞中的表达;通过原位末端标记 (TUNEL)法,DNA片段化检测观察其对骨肉瘤细胞凋亡的影响.结果:成功构建pSilencer-EGFR短发夹状siRNA真核基因表达载体,转染特异性小发夹RNA质粒表达载体的骨肉瘤细胞中EGFR基因表达显著抑制(60%).与对照组比较,pSilencer-EGFR转染组骨肉瘤细胞培养 48 h后,DNA片段化检测出"DNA ladder"和TUNEL法显示细胞典型凋亡特征.结论:EGFR小发夹RNA质粒载体可显著抑制骨肉瘤细胞中EGFR基因的表达,促进骨肉瘤细胞凋亡,EGFR基因具有抑制凋亡的作用.     

EGFR和PDGFR在慢性前列腺炎中的表达及其意义

目的检测Wistar大鼠慢性前列腺炎动物模型的表皮生长因子受体（EGFR）和血小板衍生的生长因子受体（PDGFRl的表达,为慢性前列腺芡和前列腺癌的的关联性提供理论依据。方法实验组和对照组各采用50只Wistar大鼠慢性细菌性前列腺炎组织和正常前列腺组织．应用免疫组化方法分别检测两组大鼠前列腺组织的EGFR和PDGFR的表达情况。结果实验组大鼠慢性前列腺炎组织EGFR和PDGFR表达均较对照组明显增加,差异均有统计学意义（u分别=3．35、9．05,P均〈0．05）。结论慢性细菌性前列腺炎组织中EGFR和PDGFR的表达高于正常组织,可能与前列腺癌存在一定关联。     

非小细胞肺癌的EGFR表达与EGFR基因突变的比较

目的探讨非小细胞肺癌（NSCLC）表皮生长因子受体（EGFR）免疫组化表达与EGFR基因突变的关系及其临床意义。方法对130例手术切除的非小细胞肺癌组织应用免疫组化方法检测EGFR表达,同时应用基因测序方法检测EGFR基因突变,研究EGFR表达与EGFR基因突变的关系。结果130例NSCLC中有38例EGFR基因突变,突变率为29．2％。EGFR阳性率为67．7％。EGFR表达与基因突变无关（P〉0．05）,结论EGFR免疫组化表达与EGFR基因突变无关,不能作为筛选EGFR酪氨酸激酶抑制剂（TKI）治疗NSCLC的指标。     

EGFR mutations and EGFR tyrosine kinase inhibition in non-small cell lung cancer

OBJECTIVES: To discuss selected molecular targets and new clinical variables that can serve as both predictive and prognostic markers for outcome in patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) treated with EGFR-TKIs. DATA SOURCES: Research and journal articles. CONCLUSION: In the near future, treatment for NSCLC will rely ever increasingly on molecular targets rather than empirically chosen cytotoxic chemotherapy for some patients. This will improve outcomes for patients with NSCLC. IMPLICATIONS FOR NURSING PRACTICE: An understanding of the molecular targets and clinical variables that are predictive and prognostic of outcome in NSCLC will help nurses better care for these patients.     

The EGFR T790M mutation in acquired resistance to an irreversible second-generation EGFR inhibitor

Molecular target therapies using first-generation, reversible epidermal growth factor receptor (EGFR) tyrosine kinase inhibitors (TKI), such as gefitinib or erlotinib, have been shown to be effective for patients with non-small cell lung cancer (NSCLC) who harbor activating mutations in EGFR. However, these patients eventually develop resistance to the reversible TKIs, and this has led to the development of second-generation, irreversible EGFR inhibitors. Currently, the mechanism of acquired resistance to irreversible EGFR inhibitors is not clear. Using an in vitro cell culture system, we modeled the acquired resistance to first-line treatment with second-generation EGFR-TKIs using an EGFR-mutant NSCLC cell line. Here, we report a mechanism of resistance involving T790M secondary mutation as well as a corresponding clinical case. The results of these findings suggest that inhibition of EGFR by currently available second-generation EGFR-TKIs may not be sufficient to physiologically prevent the emergence of cells that are still dependent on EGFR signaling. This finding bears important implications on the limitations of currently available second-generation EGFR-TKIs.     

表皮生长因子受体抑制剂吉非替尼诱导人表皮角质细胞凋亡的研究

目的:探讨表皮因子受体抑制剂吉非替尼对分离培养的人表皮角质细胞的生长抑制及其诱导凋亡的作用机制,为探寻其对皮肤的毒副作用机制奠定基础.方法:采用分散酶分离表皮细胞,无血清培养法进行表皮细胞的培养,MTT法检测吉非替尼对角质细胞生长的影响,Annexin V-FITC/7-AAD双染流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blotting检测Bcl-2、bim的变化,采用caspase-3 试剂盒检测caspase-3活性的变化.结果:以分散酶分离法成功得到8例人角质细胞,吉非替尼对人角质细胞生长有显著的抑制作用,并能显著诱导细胞发生凋亡,其作用呈明显的量效依赖性.吉非替尼能明显提高bim表达水平,促进caspase-3的活性.结论:吉非替尼通过调节Bcl-2家族蛋白及激活caspase-3诱导人角质细胞凋亡,抑制角质细胞增殖,这可能是其皮肤毒性的分子生物学基础.     

Prokaryotic expression and refolding of EGFR extracellular domain and generation of phage display human scFv against EGFR

The epidermal growth factor receptor (EGFR), overexpressed in many epithelial tumors, is emerging as an attractive target for cancer therapy. Antibodies to the extracellular region of EGFR play a key role in the development of a mechanistic understanding and cancer therapy. In the present study, we demonstrated for the first time that EGFR-truncated extracellular domain (EGFR-tED), which was expressed in Escherichia coli BL21 (DE3) cells in the form of inclusion bodies, could be purified and renatured. The EGFR-tED protein was purified by gel filtration and Ni-NTA affinity chromatography with high purity (> 90%) and refolded by a urea gradient size-exclusion chromatography, which could bind its ligand EGF in a concentration-dependent manner. The renatured EGFR was used for biopanning anti-EGFR scFvs from a human synthetic antibody phage display library. Combined with an additional cell-based ELISA screen, a novel scFv, E10, was obtained with two-fold more potent on the binding to EGFR-bearing tumor cells (the epidermoid carcinoma cell line A431) and the inhibition of A431 cells proliferation than scFv 11F8, suggesting that the E10 has the potential to be developed as therapeutic agents to solid tumors associated with EGFR overexpression.     

Targeting EGFR with metabolically biotinylated fiber-mosaic adenovirus

Adenovirus (Ad)-based vectors are useful gene delivery vehicles for a variety of applications. Despite their attractive properties, many in vivo applications require modulation of the viral tropism. Targeting approaches applied to adenoviral vectors included genetic modification of the viral capsid, controlled expression of the transgene and combinatorial approaches that combine two or more targeting elements in single vectors. Most of these studies confirmed successful retargeting in cell cultures, however, in vivo gains of targeted adenoviral vectors have not been widely demonstrated. We have developed a combinatorial retargeting approach utilizing metabolically biotinylated Ad, where the biotin acceptor peptide was incorporated in one of the fibers in a dual fiber viral particle resulting in metabolically biotinylated fiber-mosaic Ad (mBfMAd). We have utilized this vector in complex with epidermal growth factor (EGF)-Streptavidin to retarget fiber-mosaic virus to EGF receptor (EGFR) expressing cells in vitro and confirmed an increased infectivity of the retargeting complex. Most importantly, the utility of this strategy was demonstrated in vivo in two distinct animal models. In both models tested, retargeted mBfMAd demonstrated an increased ratio of gene expression in target tissues compared to the liver expression profile. Thus, metabolically biotinylated fiber-mosaic virus in combination with appropriate adapters can be successfully exploited for adenoviral retargeting strategies.