利用细菌荧光素酶建立酶联免疫吸附试验检测抗-HBs的研究

目的利用细菌荧光素酶作为示踪物,建立一种灵敏度高、特异性强、性能稳定、操作简便、无环境污染的生物发光酶酶联免疫检测技术(Bioluminescent enzyme linked immunosorbent assay BELISA)。方法用戊二醛作为交联剂,将细菌荧光素酶标记到乙型肝炎表面抗原上,使酶标记物具有酶和抗原的双重活性,采用双抗原夹心法检测。结果最适的标记条件为:细菌荧光素酶与乙型肝炎表面抗原的比例2:1,pH值7.0,反应温度室温(22℃),反应时间2小时,0.1％戊二醛用量50μl/ml标记物。所建立的生物发光酶酶联免疫试验检测抗-HBs灵敏度2.5mIU/ml,变异系数(CV)<15％。与抗-HAV·IgM阳性血清、抗-HCV阳性血清无交叉反应,阻断试验成立。对200份抗-HBs阴性血清(RIA-、ELISA-)进行BELISA检测,确定抗-HBs阴性血清光量子数为50MV/20s。对98份抗-HBs阳性血清(RIA+)进行BELISA和ELISA检测,BELISA检出98份阳性,与RIA符合率100％,而ELISA与RIA的符合率为89.9％,可见BELISA灵敏度与RIA相同。结论用细菌荧光素酶为示踪物建立的生物发光检测技术灵敏度高,特异性强,可取代放射免疫分析和以辣根过氧化物酶为示踪物建立的酶联免疫检测技术。     

抗-HBs单克隆抗体细胞系与酶联免疫吸附试验“一步法”检测HBsAg

本文利用杂交瘤技术,经脾内直接注射免疫BALB/c小鼠,与骨髓瘤细胞(Sp 2/0)进行融合,建立了6株抗HEsMcAb,其中5株已能稳定地分泌单克隆抗体,并已得到腹水;5据中4株为抗a,1株为抗d,利用其中2株分别作为包被、酶标抗体,建立了酶联免疫吸附试验(ELISA)“一步法”检测HBsAg技术,经验证,该方法简便、快速、灵敏、特异、稳定。     

胶体金法联合酶联免疫吸附测定检测血清乙肝表面抗原

目的：分析胶体金法（GIA）与酶联免疫吸附测定（ELISA）联合用于血清乙肝表面抗原（HBsAg）检测中的价值。方法选取血清标本12576份,均行胶体金法和酶联免疫法检测HBsAg,对结果进行分析。结果胶体金法检测HBsAg阳性率为2.03%（255/12576）,ELISA法检测HBsAg阳性率为2.09%(263/12576)。2例血标本胶体金法检测为阳性,ELISA法检测为阴性;10例血标本胶体金法检测为阴性,ELISA检测为阳性。12例标本中11例经中和确认或HBV-DNA检测后确定为阳性。结论胶体金法与酶联免疫法检测血清HBsAg均有较高的特异性,二者联合应用可进一步提高阳性率。     

酶联免疫吸附试验一步法检测抗-HBc有关问题探讨

酶联免疫吸附试验(ELISA)是检测抗-HBc的常用方法,根据反应模式可分为一步法和二步法.一步法是将待测样品和酶标记物同时加入到反应孔中进行反应,从而达到简便、快速的目的;二步法是先将样品加入到反应孔中,待反应结束后再加入酶标记物,从而使待测样品的"捕获反应"和酶标记物的"酶联反应"分开进行,因而反应更加稳定,重复性也更好,但反应时间比一步法长.     

酶联免疫吸附法检测结核抗体的临床意义

为探讨血清结核抗体的辅助诊断价值,采用酶联免疫吸附试验法,对２０５例各型肺结核患者,５２例非结核感染患者,１０２例正常人进行了血清特异性结核抗体检测。结果表明,结核组结核抗体阳性１８８例,非结核组２ ,正常人组３例,提示酶联免疫吸附法测定结核抗敏感性高,且简单,快速,便于基层推广。     

酶联免疫吸附法和免疫印迹法检测抗核小体抗体的对比分析

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)和免疫印迹法(WB)检测抗核小体抗体(AnuA)的差异,为临床工作寻找合适的检测方法。方法 收集818例临床血标本,其中系统性红斑狼疮(SLE)360例,其他自身免疫性疾病458例,同时采用ELISA和WB两种方法检测样本血清中AnuA,计算每种方法的敏感度、特异度、ROC曲线,并运用SPSS 17.0进行统计学分析。结果 ELISA与WB检测AnuA的阳性率分别为35.1%和31.1%,两者差异有统计学意义(<0.05)。准确度、敏感度和特异度无差异。结论 ELISA与WB检测AnuA的总一致率高,对SLE诊断的准确度较高,敏感度和特异度均较好。提示临床监测时,可应用WB进行AnuA检测的初筛,需要时应用ELISA进行复检,可以提高6.4%的AnuA检测阳性率,为临床提供更好的SLE诊断及疾病活动度的信息。     

酶联免疫吸附法检测IgM抗乙型肝炎核心抗原的方法学研究

对酶联免疫吸附法检测IgM抗乙型肝炎核心抗原(HBc)的影响因素进行了研究。实验结果指出:稀释液中兔血清含量是诸因素中最重要的因素。本文还对中性去污剂Tween20在阻断蛋白质非特异性吸附于反应板上的效果以及底物的最佳配方作了初步探讨。     

酶联免疫吸附法检测结核抗体的临床意义

为探讨血清结核抗体的辅助诊断价值,采用酶联免疫吸附试验（ Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ） 法,对２０５ 例各型肺结核患者,５２ 例非结核感染患者,１０２ 例正常人进行了血清特异性结核抗体检测。结果表明,结核组结核抗体阳性１８８ 例（９２ ．０ ％ ） ,非结核组２ 例（４ ．６ ％ ） ,正常人组３ 例（３ ．６ ％ ） 。提示酶联免疫吸附法测定结核抗体敏感性高,且简单、快速,便于基层推广。     

酶联免疫吸附法测乙肝两对半的注意事项

乙肝病毒表面抗原（HBsAg）为乙肝病毒感染的最主要的病原标志和直接证据之一。酶联免疫吸附试验（EuSA）是临床进行乙型肝炎病毒（HBV）诊断的主要方法之一，因其试验灵敏度高，特异性好的特点在临床上得到了广泛的应用。但操作中的各个环节对试验的检测结果影响较大，如标本留取与处理、加样、孵育、洗板、显色、终止、比色及结果判读，如不注意可能导致假阳性或假阴性的结果。     

两种酶联免疫吸附法检测乙肝表面抗原的结果比较

目的:比较酶联免疫吸附试验一步法和二步法检测乙肝表面抗原的结果,探讨一步法中钩状效应对乙肝表面抗原检测结果的影响,分析二步法对乙肝表面抗原检测的应用价值。方法:采用酶联免疫吸附试验一步法和二步法分别对1100名无偿献血者提供的初检标本进行检测,并对5份怀疑存在钩状效应的标本用一步法进行检测。结果:一步法和二步法分别检测出27份和32份乙肝表面抗原阳性,把由一步法检测出的怀疑存在钩状效应的5份阴性标本分别进行1∶5、1∶10、1∶30、1∶60倍稀释,再用一步法检测后,转为阳性的分别为5份、5份、3份、2份。结论:同时采用一步法或二步法对稀释了一定倍数的标本进行检测,能够明显的克服存在的钩状效应,也大大提高了检测的敏感度。     

酶联免疫吸附法在沙门氏菌检测中临床应用

目的为了探讨酶联免疫吸附法在沙门氏菌检测中临床应用效果。方法本研究于2012年1月～2012年6月对我院接受的临床样本应用沙门氏菌特异性单抗3～47～26建立竞争ELISA法来进行沙门氏菌检测,通过与国标法对样品进行比较检测,分析该方法在沙门氏菌检测中的敏感性、特异性和准确性。结果国标法的检测限为4.9×101CFU/g粪便;C～ELISA为5.0×104CFU/g粪便。ELISA法检测的敏感性为94.4%,特异性为97.7%,准确性为97.1%。结论酶联免疫吸附法在沙门氏菌的临床检测中具有良好的特异性、准确性和敏感性,值得推广使用。     

斑点酶联免疫吸附试验检测抗独特型单克隆抗体

用斑点酶联免疫吸附试验检测抗独特型单克隆抗体,方法简便、快速,敏感性高,特异性强,所需样品量少,点样后至少可保存一个月;用戊二醛处理硝酸纤维素膜可以增强蛋白吸附。     

酶联免疫吸附法检测肌酸激酶B亚基含量

1目的　建立酶联免疫吸附法 (EL ISA)检测肌酸激酶 B亚基含量。 2方法　应用脑肌酸激酶抗原制备单克隆抗体 ,采用对酶活力具有激活或抑制的单克隆抗体配对建立 EL ISA法 ,并应用其检测肌酸激酶 B亚基含量。 3结果　肌酸激酶 B亚基含量在 0 .0 5～ 5 0 .0 0 ng间与 A45 0 nm呈半对数直线关系。 4结论　采用建立的 EL ISA法可测定肌酸激酶 B亚基含量     

酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测效果的比较

目的比较ELISA (enzyme linked immuno-sorbent assay)和CL(chemi-luminescence)两种检测方法对AFP检测的稳定性、敏感性及重复性。方法2012年5月以来,我院对120名患者同时采用酶联免疫法以及化学发光法进行AFP检测,分析两种方法对AFP的敏感性、稳定性以及重复性。结果化学发光法具有较好的重复性以及稳定性,当AFP<400μg/L时,ELISA和CL法检测AFP敏感性相似,当AFP>400μg/L时,CL法敏感性高于ELISA（P<0.05）。结论CL较ELISA稳定性好、敏感性高、重复性好,而ELISA具有经济、在AFP浓度值低于400μg/L时也具有较好的敏感性。     

酶联免疫吸附法和化学发光法对甲胎蛋白检测功效的比较

目的 比较ELISA(enzyme linked immuno-sorbent assay)和CL(chemi-luminescence)两种检测方法 对AFP检测的稳定性、敏感性及重复性.方法 对110名患者血标本同时采用ELISA和CL两种方法 进行AFP检测,对同一标本连续测定20次进行批内变异的比较;同时对标本每天测定1次,连续测定20天进行批间变异比较.采用方差分析比较两种方法 敏感性;并对两种方法 进行线性回归分析,评价两种方法 相关性.结果 CL批内变异系数和批间变异系数均较ELISA小,具有较好的重复性及稳定性;当AFP＜400μg/L时,ELISA和CL法检测AFP敏感性相似,当AFP＞400μg/L时,CL法敏感性高于ELISA(P＜0.05).结论 CL较ELISA稳定性好、敏感性高、重复性好,而ELISA具有经济、在AFP浓度值低于400μg/L时也具有较好的敏感性.     

利用细菌荧光素酶建立酶联免疫吸附试验检测抗—HBs的研究

目的：利用菌荧光毒酶作为示踪物，建立一种灵敏度高，特异性强，性能稳定，操作简便，无环境污染的生物发光酶酶联免疫检测技术（Bioluminescent enzyme linked immunosorbent assay BELISA)。方法：用戊二醛作为交联剂，将细菌荧光素酶标记到乙型肝炎表面抗原上，使酶标记物具有酶和抗原的双重活性。采用双抗原夹心法检测。结果：最后的标记条件为：细菌荧光素酶与乙型肝炎表面抗原的比例2：1，PH值7．0，反应温度室温（22℃），反应时间2小时，0．1％，戊二醛用量50μl／ml标记物。所建立的生物发光酶酶联免疫试验检测抗－HBs灵敏度2.5mIU/ml，变异系数（CV）＜15％，与抗－HAV.IgM阳性血清，抗－HCV阳性血清无效叉反应，阻断试验成立，对200份抗－HBs阴性血清（RIA－、ELISA－）进行BELISA检测，确定抗－HBs阴性血清光量子数为50MV／20s，对98份抗－HBs阳性血清（RIA＋）进行BELISA和ELISA检测，BELISA检出98例份阳，与RIA符合率100％，而ELISA与RIA的符合率为89．9％，可见BELISA灵敏度与RIA相同。结论：用细菌荧光素酶为示踪物建立的生物发光检测技术灵敏度高，特异性强，可取代放射免疫分析和以辣根过氧化物酶为示踪物建立的酶联免疫检测技术。     

操作时差对竞争酶联免疫吸附试验法检测抗-HBc结果的影响

<正>本研究采用操作时差对竞争酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测抗-HBc结果影响的探讨,现将结果报告如下。1材料与方法1.1材料来源:66份血清标本随机采自2006年12月我院住院、门诊患者和健康体检者,干管抽静脉血3～5mL,37℃水     

基于常见影响乙肝五项酶联免疫吸附法检测结果因素讨论

近年来临床免疫学不断发展的同时,使得酶联免疫吸附法(enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)在临床上的应用更加广泛,主要用于测定各种血清免疫学标志物如乙肝血清标志物(俗称乙肝"两对半")、HIV抗体、HCV抗体、梅毒抗体等.该种方法的优点是灵敏度和特异度较高,无需使用特殊设备,可以进行定性分析.但是在实际工作中,一些异常指标可能会因操作不当而出现,试验的检测结果受操作中的每个环节的影响都较大,如果没有按常规步骤进行操作,假阳性和假阴性的情况就可能随之出现.总而言之,检验结果出现偏差可能只是由于一点小小的疏忽、失误造成的,但是却会给患者及其家属带来物质与精神上的损失,给临床医生确诊带来一定的麻烦.     

酶联免疫吸附法检测血清转化生长因子β1

本建立了酶联免疫吸附法（ELISA）测定血清中转化生长因子β1(TGFβ），通过ELI-SA建立TGFβ1浓度的标准工作曲线。对血清中TGFβ1作定量分析。标准TGFβ1浓度在0.10-0.64ng/ml范围内呈线性关系。变异系数小于5%，回收率101.1%，本方法操作简便，迅速，检测精确，灵敏，适合于临床广泛应用。     

微粒子酶免法与酶联免疫吸附法测定血清β-HCG的研究

目的对异位妊娠和葡萄胎等疾病孕妇以及正常孕妇进行微粒子酶免法与酶联免疫吸附法两种测定方法检测血清β-HCG水平并进行比较。方法分别采用微粒子酶免法和酶联免疫吸附法对160例病人进行血清β-HCG水平测定。结果微粒子酶免法与酶联免疫吸附法两种测定方法结果无差异（P〉0．05），但微粒子酶免法更迅速、直接。结论微粒子酶免法比酶联免疫吸附法更迅速、直接，更适用于临床。