抗天疱疮抗体阻断棘层松解的实验研究

目的 研究抗天疱疮抗体对天疱疮抗体棘层松解的阻断作用,探讨天疱疮治疗的新途径。方法 制备出小鼠抗天疱疮抗体,在体外天疱疮器官培养基础上,采用病理学及直接免疫荧光技术,观察不同浓度及时相抗天疱疮抗体对天疱疮抗体致棘层松解的阻断效果。结果 抗天疱疮抗本在体外与天疱疮抗体结合后,能有效地减少天疱疮抗体与角质形成细胞的结合,小剂量时能减轻天疱疮抗体致棘层松解的程度,大剂量时则能基本阻断棘层松解的发生。结论 抗天疱疮抗体与天疱疮抗体结合后能有效地减轻或阻断棘层松解的发生。     

抗hTSH抗独特型抗体的制备：——免疫原的分离纯化及鉴定

本文根据独特型－抗独特型理论探讨Ｇｒａｖｅｓ′病的发病机理，报道了对兔抗ｈＴＳＨＩｇＧ免疫原的分离，纯化及鉴定。首先用饱和硫酸铵粗提兔抗ｈＴＳＨ血清γ－球蛋白，继以葡萄球菌Ａ蛋白琼脂糖凝胶亲和层析柱（ＰｒｏｔｅｉｎＡｓｅｐｈａｒｏｓｅＣＬ４Ｂ）纯化ＩｇＧ，经十二烷基硫酸钠—聚丙烯凝胶电泳（ＳＰＳ－ＰＡＧＥ）鉴定，证实为ＩｇＧ纯品。再经ＴＳＨ偶联的亲和层析柱为免疫吸附剂，进一步分离出抗ＴＳＨＩｇＧ，然后用放射免疫分析（ＲＩＡ）检测证实保持了较高的抗体活性。     

酶联免疫吸附法和间接免疫荧光法检测大疱性类天疱疮抗体的比较

目的 比较酶联免疫吸附法(ELISA)和间接免疫荧光法(IIF)检测大疱性类天疱疮(BP)的临床应用价值.方法 选择89例BP患者(BP组)和同期排除BP的89例对照人群(对照组),采用间接免疫荧光法(IIF)检测抗表皮基底膜抗体,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗BP180和BP230抗体,比较两种检测指标的敏感...     

间日疟原虫抗独特型抗体的制备和鉴定

利用低渗透析-Sephadex G200层析制备电泳纯、并具免疫活性的IgM型抗Pv红内期McAb(6H_6G_(11))免疫家兔,获得抗-6H_7G_(11)独特型抗体(Anti-6H_7G_(11)Id)。经免疫双扩散、ELISA以及竞争性免疫实验和动物实验表明,该Anti-6H_7G_(11) Id具有针对相应独特型决定簇的特异性,为半抗原抑制性Ab_2,并能模拟Pv抗原的作用,为交叉反应独特型。     

抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗桥粒芯糖蛋白1、3抗体（Dsg1、Dsg3）在天疱疮中的诊断价值

目的：分析评价抗表皮棘细胞桥粒抗体、抗桥粒芯糖蛋白1、3抗体（Dsg1、Dsg3）在天疱疮中的诊断价值。方法选择2011年2月-2013年2月在新疆医科大学第一附属医院皮肤科诊治经临床、组织病理及间接免疫荧光确诊为天疱疮的34例患者（试验组）,选择同期排除天疱疮的36例患者为对照组。采用间接免疫荧光法（IIF）检测抗表皮棘细胞桥粒抗体,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测 Dsg1、Dsg3;统计各检测指标的敏感性、特异性、阳性预测值（PPV）、阴性预测值（NPV）和诊断符合率。结果试验组和对照组抗表皮棘细胞桥粒抗体的阳性率分别为73．5％（25/34）、2．8％（1/36）。Dsg1抗体阳性率分别为70．6％（24/34）、0．0％（0/36）,Dsg3抗体阳性率分别为79．4％（27/34）、5．6％（2/36）。在天疱疮患者中,抗表皮棘细胞桥粒抗体试验的敏感度、特异度、PPV、NPV、诊断符合率分别为73．5％、97．2％、96．2％、79．5％、85．7％,Dsg1分别为70．6％、100．0％、100．0％、78．3％、85．7％,Dsg3分别为79．4％、94．4％、93．1％、82．9％、87．1％。3种指标在天疱疮患者中灵敏度和特异度的差异无统计学意义（P＞0．05）。结论同时行血中循环抗体检测与具体靶抗原确认试验检测,能互相补充,减少临床漏诊,提高诊断阳性率。抗天疱疮抗体阳性结果对确诊天疱疮准确性较好,阴性者排除天疱疮的价值较大。     

HFRS病毒单克隆抗体的抗独特型抗体的制备与初步鉴定

抗独特型抗体是由抗体(Ab_1)可变区上的独特型决定簇(Id)诱导产生的一种特殊的抗体(Ab_2)。由于Ab_2的可变区与Ab_1的Id在三维结构上相互补,或在部分一级结构上相类似,因此一部分Ab_2本身所具有的Id可以模拟始动抗原的作用。迄今尚未见到有关肾综合征出血热(HFRS)病毒Ab_2的研究报道。     

具有鼻咽癌相关抗原内影像的抗独特型抗体研究

用抗人鼻咽癌单抗FC2 ,HNL5 (Ab1)分别免疫Balb/C小鼠 ,制备了两株抗独特型抗体 2H4和 5D3(Ab2 )。结果显示 :2H4和 5D3分别与FC2和HNL5特异性结合 ,抑制Ab1与靶细胞的反应 ,诱导产生能与相应Ab1竞争结合靶抗原的抗抗独特型抗体 (Ab3) ;并能诱发特异性迟发型超敏反应 (DTH)和细胞增殖反应。表明 2H4和 5D3具有鼻咽癌相关抗原的内影像 (Ab2 β) ,能模拟鼻咽癌相关抗原诱导体液和细胞免疫反应。     

小儿包虫病IgG及IgG亚类抗体检测诊断的研究

目的：研究小儿包虫病的免疫诊断方法，探索其抗体应答假阴性反应原因。方法：采用间接ELISA和单克隆双抗体夹心ELISA方法，对55例小儿包虫病患者血清的IgG亚类(IgGl、IgG2、IgG3和IgG4)、IgA、IgM、IgE类抗体、抗原和循环免疫复合物进行检测。结果：8种抗体检查方法中IgGl亚型抗体的敏感性和特异性最好，IgGl分别与其它种抗体的1种或2种联合检测，以IgGl IgA IgM检出率最高，为64．3％；15例IgG抗体阴性小儿患者中，有12例分别检测出IgG亚类和／或IgM、IgA、IgE，3例病人血清各种抗体均呈阴性反应，其中IgGl、IgG4及IgA、IgM、IgE的特异性抗体检出率明显高于正常人，分别为42．9％、ll.9％、28．6％、26．2％和21．6％；小儿的IgM水平高于成人，肝包虫病患者的IgG亚类高于肺包虫病患者；IgG阴性小儿患者血清的CAg和CIC阳性率分别为40％及26．67％。结论：抗包虫总IgG抗体表达水平低下，抗体表达各类不同及循环免疫复合物的形成，是造成包虫病患者IgG抗体反应阴性的主要原因。而寄生包虫囊的退行变性也可影响抗体的免疫应答水平。IgGl IgA IgM抗体联合检测可提高包虫病人免疫诊断的敏感性。     

寻常型天疱疮虱一级亲属循环天疱疮抗体的检测分析

目的 探讨与寻常型天疱疮（ｐｅｍｐｈｉｇｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ,ＰＶ）患者可能共享易感基因的亲属中ＰＶ抗体的存在情况。方法 对１２例ＰＶ患者的３０名一级亲属及１０名正常对照者同时应用免疫印迹及间接免疫荧光（ｉｎｄｉｒｅｃｔ ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ,ＩＩＦ）方法,检测其外周血中循环ＰＶ抗体。结果 在３０名亲属中有１９名（６３％）同时用两种方法检出了ＰＶ抗体,抗体滴度〉１：１６,仅有９名     

小鼠甲状腺球蛋白的提取、纯化和鉴定

目的 进行小鼠甲状腺球蛋白的纯化和鉴定。方法 小鼠甲状腺组织匀浆后进行盐析和Sphadex G-200凝胶层析2次纯化,纯化后的蛋白质产物经十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Western免疫印迹鉴定。结果 经纯化的蛋白产物为高纯度的甲状腺球蛋白。结论 Sphadex G-200凝胶层析和Western免疫印迹是进行甲状腺球蛋白纯化和鉴定的一种较好的方法。     

Studies on Purification of Methamidophos Monoclonal Antibodies and Comparative Immunoactivity of Purified Antibodies

Objective To purify Methamidophos (Met) monoclonal antibodies with two methods and compare immune activity of purified antibodies. Method Caprylic acid ammonium sulphate precipition (CAASP) method and Sepharose protein-A (SPA) affinity chromatography method were used to purify Met monoclonal antibodies, UV spectrum scanning was used to determine protein content and recovery of purified antibodies, sodium dodecylsulphate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE) was used to analyze the purity of purified antibodies, and enzyme-linke dimmunosorbent assay (ELISA) was used to determine immune activity of purified antibodies.Results Antibody protein content and recovery rate with CAASP method were 7.62 mg/mL and 8.05% respectively, antibody protein content and recovery rate with SPA method were 6.45 mg/mL and 5.52% respectively. Purity of antibodies purified by SPA method was higher than that by CAASP method. The half-maximal inhibition concentration (IC50) of antibodies purified by SPA to Met was 181.26μg/mL, and the linear working range and the limit of quantification (LOD) were 2.43-3896.01μg/mL and 1.03μg/mL, respectively. The IC50 of antibodies purified by CAASP to Met was 352.82μg/mL, and the linear working range and LOD were 10.91-11412.29μg/mL and 3.42μg/mL,respectively. Conelusion Antibodies purified by SPA method are better than those by CAASP method, and Met monoclonal antibodies purified by SPA method can be used to prepare gold-labelled testing paper for analyzing Met residue in vegetable and drink water.     

抗NGAL抗体的制备、纯化及其鉴定

目的制备出一定纯度、免疫反应性好的抗NGAL抗体。方法采用纯的NGAL蛋白免疫动物,制备抗血清,然后进行硫酸胺沉淀法纯化抗NGAL抗体,最后运用SDS-PAGE、Western blotting分别鉴定抗NGAL抗体的纯度与免疫反应性。结果硫酸胺沉淀法纯化抗NGAL,SDS-PAGE检测分析表明抗NGAL抗体的纯度大于70%,Western blotting检测分析表明抗NGAL抗体的免疫反应性良好。结论最后获得了一定纯度、免疫反应性良好的抗NGAL抗体。     

牛舌粘膜间接免疫荧光法与免疫印迹法检测天疱疮抗体的比较

目的 比较以牛舌粘膜作为底物,间接免疫荧光法与免疫印迹法检测天疱疮抗体的灵敏度和价值。方法 以牛舌粘膜作为底物中心,分别应用间接免疫荧光法和免疫印迹技术检测１６例天疱疮患者血清中ＩｇＧ型自身抗体。结果 间接免疫荧光法１４例（８７．５％）阳性,免疫印迹法１１例（６８．８％）阳性,两法合成总阳性１５例（９３．８％）,结论 间接免疫荧光法适合于常规辅助诊断天疱疮,而免疫印迹法可以作为前者的补充。     

人甲腺球蛋白的提取、纯化和鉴定

甲亢病人术后新鲜甲状腺组织经硫酸铵沉淀和两次SephadexG—200凝胶连续过滤后,可获得纯度高的甲状腺球蛋白,用圆盘电泳鉴定,显示三条带,主带为19S,另两条带为27S和12S成分。     

The cloning, expression, purification and bioactivity identification of recombinant IGF-I]

The fragment containing IGF-I cDNA and cyc1 terminator from PSK-IGF-I plasmid was cloned into PSK43 SB treated by Hind III, Klenow and Cla I, generating a recombinant PSB-IGF-I (DH), which have double Hind III sites. This plasmid was treated by Hind III and Klenow, ligated to give a recombinant plasmid PSB-IGF-I(NH), which has no Hind III site. After analysed by restriction endonucleases and sequencing, the fusion site was verified to be correct. This plasmid was excised and a BamH I-Cla I fragment containing yeast alpha-factor promotor, leader sequence, IGF-I cDNA and cycl terminator was cloned into yeast episomal plasmid vector YEpHC8, generating a recombinant plasmid YEpHC8-IGF-I. Transformed this plasmid into yeast competence cells BJ1990 by using LiAc method. The expressed products were secrected into the medium broth and having the correct molecular weight of 8,100 on SDS-PAGE. The products of IGF-I were raised by using high-cell-density fermentation of Saccharomyces cerevisiae. The cleared supernatant of yeast medium was applied to Bio-Rex 70 resin, eluted with 1 mol/L ammonium acetate, pH8.0. Main peak was pooled and applied to Bio-Gel P10 (200-400 mesh). The second peak was collected and get relatively pure IGF-I proteins. The biological activities of IGF I product was assayed in NIH3T3 cells by using MTT method. The results show that the expressed IGF-I can obviously stimulate NIH3T3 cells to proliferate at the concentration ranging from 10 ng/ml to 50 ng/ml, suggesting that the protein has its biological activities.     

天疱疮患者抗桥粒芯糖蛋白与疾病相关性分析

目的：探讨酶联免疫吸附测定（ELISA ）检测血清桥粒芯糖蛋白（Dsg ）1和Dsg3在天疱疮诊断及治疗中的应用价值。方法选择2014年1～12月在该科确诊为天疱疮的患者47例（观察组）,同期排除天疱疮的患者52例为对照组。间接免疫荧光法（IIF）检测抗表皮棘细胞桥粒抗体,ELISA检测Dsgl、Dsg3;分析其与天疱疮病情的相关性。结果 ELISA法的敏感性为95．74％,特异性为92．31％。IIF法敏感性为93．62％,特异性为86．54％。二者比较差异无统计学意义（P＞0．05）。30例寻常型天疱疮患者16例Dsg1、Dsg3均阳性,8例红斑型和5例落叶型天疱疮患者均只有Dsg1阳性,2例增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3均为阳性。寻常型和增殖型天疱疮Dsg1、Dsg3滴度分别为130．85±86、112．30±85．05,疾病活动性评分（5．10±1．86）分,相关系数分别为 r＝0．476（P＝0．008）、r＝0．816（P＝0．001）。落叶型和红斑型天疱疮Dsg1滴度142．59±78．52,疾病活动评分平均为（2．77±0．92）分,r＝0．800,P＝0．001。结论 ELISA检测Dsg1、Dsg3敏感性、特异性高,有助于天疱疮的诊断及病情严重程度的评价。     

人釉原蛋白的原核表达、纯化及鉴定

目的构建含人釉原蛋白(hAm)成熟肽基因的重组原核表达质粒,在大肠杆菌中表达重组人釉原蛋白,鉴定经纯化获得的融合蛋白。方法利用限制性内切酶EcoRⅠ和SalⅠ将hAm基因插入原核表达载体PGEX4T1,对重组表达质粒PGEX4T1-hAm进行双酶切和测序鉴定。选择测序正确的质粒转化E.coli.RosettaTM,用终浓度0.3 mmol/L的IPTG诱导表达带有亲和标记谷胱甘肽-S-转移酶(GST)的重组hAm。经亲和层析纯化获得融合蛋白GST-hAm,并通过SDS-PAGE和Western blotting鉴定原核表达的重组hAm。结果重组质粒经双酶切和测序鉴定证实插入序列准确无误。在大肠杆菌RosettaTM中经IPTG诱导表达并纯化得到的融合蛋白GST-hAm,经SDS-PAGE鉴定分子量约为46000,主要以包涵体形式存在,与预测一致;Western blotting证实该融合蛋白能被特异性抗hAm多克隆抗体识别。结论成功构建含有hAm成熟肽基因的重组原核表达质粒,表达的融合蛋白GST-hAm可通过纯化获得,经鉴定为hAm。大量纯化的hAm成熟肽的获得为开展其功能研究奠定了基础。