内质网应激在高糖诱导心肌细胞凋亡中的作用

目的探讨内质网应激在高糖诱导大鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法采用混合酶一步消化法分离SD大鼠乳鼠心肌细胞,以高糖诱导的心肌细胞为模型,将培养的心肌细胞分为3组,甘露醇对照组(对照组)、高糖(25 mmol/L)组和高糖加抗氧化剂组(NAC组),分别检测各组心肌细胞中活性氧(ROS)的含量,利用RT-PCR法检测心肌细胞中内质网应激标志分子GRP78、CHOP和Caspase-12的表达情况。结果与对照组比较,高糖组心肌细胞中ROS含量明显增多,细胞凋亡率升高(P<0.01),与高糖组比较,NAC组ROS含量减少(P<0.01),细胞凋亡率降低(P<0.01);与NAC组比较,高糖组内质网应激标志分子的mRNA表达显著上调(P<0.01),抗氧化剂能阻断高糖心肌细胞中内质网应激标志分子mRNA的表达,使其表达明显下调(P<0.01)。结论内质网应激凋亡通路可能参与高糖诱导的心肌细胞凋亡。     

活性氧激活线粒体凋亡通路介导高糖诱导心肌细胞凋亡的研究

目的探讨氧化应激和p53介导的线粒体凋亡通路在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡的作用。方法将培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞随机分为四组：对照组、高糖组（葡萄糖浓度为25mmol/L）、高糖＋抗氧化剂组（抗氧化剂浓度为10mmol/L）和高糖＋p53抑制剂组（p53抑制剂浓度为50μmol/L）。荧光分光光度计检测细胞内的活性氧,分光光度计检测上清液中的超氧化物歧化酶,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot对各组细胞p53和Caspase-9进行半定量分析。结果与对照组相比,高糖组心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显升高（P〈0.01）,上清液中的SOD含量明显降低（P〈0.01）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达增多（P〈0.01）。与高糖组相比,高糖＋抗氧化剂组心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显降低（P〈0.01）,上清液中SOD明显升高（P〈0.01）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达减少（P〈0.01）。与高糖组相比,高糖＋p53抑制剂组的心肌细胞凋亡率（P〈0.01）和ROS明显降低（P〈0.05）,上清液中SOD含量升高（P〈0.05）,Caspase-9（P〈0.01）和线粒体蛋白p53表达减少（P〈0.01）。结论高糖可能通过产生的活性氧介导p53转位到线粒体激活线粒体凋亡通路,引起心肌细胞凋亡。     

葛根素预处理对缺血再灌注心肌内质网应激与细胞凋亡的影响

目的：观察葛根素预处理对缺血再灌注（I/R）大鼠心肌内质网应激（ERS）与细胞凋亡的影响。方法24只SD大鼠随机分为3组（n=8）：假手术组（SH组）;缺血再灌注组（I/R组）;葛根素预处理组（PU组）。RT-PCR检测GRP78、CRT mRNA的表达;免疫组化检测caspase-12、CHOP蛋白表达;TUNEL法检测心肌细胞凋亡情况。结果与SH组比较,其余各组GRP78与CRT mRNA表达、caspase-12与CHOP蛋白表达以及心肌细胞凋亡率均明显增加（P〈0.05）,与I/R组比较,PU组各检测指标均降低（P〈0.05）。结论葛根素预处理可通过调控ERS反应程度,抑制I/R导致的过度ERS,减轻内质网凋亡信号介导的细胞凋亡的发生而产生心肌保护作用。     

白藜芦醇通过内质网应激抑制心肌细胞肥大及凋亡

目的探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）通过内质网应激介导心肌细胞肥大的作用机制。方法利用异丙肾上腺素（isoproterenol,ISO）建立心肌细胞肥大模型,Res干预后通过检测心肌细胞表面积和ANP基因表达评价心肌细胞肥大程度;检测各组心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）活性和丙二醛（MDA）含量变化和心肌细胞凋亡率,Real time-PCR检测心肌细胞ERS相关基因GRP 78和CHOP表达。结果与ISO组比较,Res显著抑制ISO诱导的心肌细胞肥大（P〈0.05）,降低肥大心肌细胞LDH和MDA释放量（P〈0.05）;下调GRP78和CHOP基因表达（P〈0.05）,并抑制心肌细胞凋亡率（P〈0.05）。结论 Res对ISO诱导的心肌细胞肥大和凋亡具有保护作用,其机制是通过抑制内质网应激和CHOP介导的凋亡通路实现的。     

高糖诱导人肾小管上皮细胞凋亡的机制研究

目的探讨高血糖对人肾小管上皮细胞活性氧（ROS）产生及凋亡的影响。方法将人近端肾小管上皮细胞（HKC）分别以不同时间在含有5.5 mM D（右旋）-葡萄糖（正常糖对照组）、25 mMD-葡萄糖（高糖组）和20 mML（左旋）-葡萄糖＋5.5 mMD-葡萄糖（渗透压对照组）的DMEM培养基中培养。用化学发光法特异性检测细胞内H2O2水平。将细胞用荧光染料CM-H2DCFDA标记后用激光共聚焦显微镜检测活细胞中总ROS水平。用荧光染料Hoechst33258对细胞染色后在荧光显微镜下计数细胞凋亡率。用AnnexinV-FITC/碘化丙锭双染后用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率。在高糖组中同时加入30 mM的抗氧化剂牛磺酸,观察其对细胞凋亡的影响。结果化学发光法检测和共聚焦显微镜检测显示高糖可明显促进肾小管上皮细胞内活性氧的产生,与其他两对照组比较有显著差异（P〈0.01）;Hoechst33258染色法检测和流式细胞仪检测分析显示高糖可明显诱导肾小管上皮细胞的凋亡发生,与其他两对照组比较有显著差异（P〈0.01）;流式细胞仪检测分析显示抗氧化剂牛磺酸可明显抑制高糖诱导的肾小管细胞凋亡,与高糖组比较有显著差异（P〈0.01）。结论高糖可通过促进细胞内生成过量ROS而诱导肾小管细胞凋亡发生,抗氧化剂可阻断高糖诱导的肾小管细胞凋亡。     

百草枯致大鼠肺纤维化肺组织内质网相关凋亡基因Caspase-12的表达

目的 观察内质网相关凋亡基因半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12（ Caspase-12） 在百草枯诱导肺纤维化模型大鼠肺组织中的表达。方法 30 只Spragne-Dawley（ SD） 大鼠随机分为对照组、14 d模型组和28 d 模型组。采用百草枯灌胃法复制肺纤维化模型。逆转录-聚合酶链反应（ RT-PCR）检测肺内Caspase-12 mRNA 表达, 免疫组化检测其蛋白表达。HE 和Masson 染色判断肺组织肺泡炎及肺纤维化程度。结果 HE 和Masson 染色结果证实成功复制肺纤维化模型。模型组大鼠肺泡炎和肺纤维化程度较对照组严重（ P 〈0. 01） 。与对照组比较, Caspase-12 表达在14 d 模型组中明显升高（ P 〈0. 01） , 在28 d 模型组中更高（ P 〈 0. 01） 。结论 百草枯中毒大鼠肺内质网相关凋亡基因Caspase-12 表达增高, 提示内质网应激在百草枯中毒引起的肺纤维化中发挥重要作用。     

牛磺酸对大鼠肢体骨骼肌缺血再灌注后内质网应激反应的影响

目的：观察牛磺酸（Tau）预处理对大鼠肢体缺血再灌注（IR）后内质网应激反应的影响。方法：制作大鼠肢体IR损伤动物模型,将大鼠随机分成对照组、IR组和Tau组,测定各组骨骼肌组织湿/干（W/D）、活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、黄嘌呤氧化酶（XOD）、超氧化物歧化酶（SOD）含量,采用Western blot和实时聚合酶链反应法测定骨骼肌内质网应激（ERS）蛋白-葡萄糖调节蛋白94（GRP94）表达水平,分析牛磺酸对肢体IR损伤与ERS的关系。结果：与IR组比较,Tau组大鼠骨骼肌组织ROS、MDA、XOD和W/D均显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,而SOD活性显著增加（P〈0.05）,GRP94在蛋白及mRNA水平表达下调。结论：牛磺酸对肢体IR损伤的保护作用与减轻骨骼肌ERS反应有关。     

内质网应激在高脂血症大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:研究内质网应激是否在高脂血症大鼠诱导心肌细胞凋亡中起作用.方法:通过建立高脂血症大鼠模型,全自动化生化仪检测血清甘油三脂(Triglycercide,TG)及胆固醇(Cholesterol,TC)水平;HE染色观察心肌组织的病理学变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫组化法及RT-PCR技术检测心肌细胞内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)信号通路分子GRP78的表达变化.结果:喂养12周时模型组大鼠血清TC、TG含量明显高于对照组(P<0.01);大鼠模型组较正常组心肌组织排列紊乱、边界不清、心肌纤维断裂、部分细胞核溶解消失;模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显高于正常组(P<0.05);大鼠心肌GRP78mRNA及蛋白的表达量,模型组均较对照组明显升高(P<0.05).结论:ERS途径可能在高脂血症诱导心肌细胞凋亡中起到重要作用.     

丹参酚酸B对间歇性高糖乳鼠雪旺细胞损伤的改善

【摘要】 目的 探讨丹参酚酸B（Sal B）对间歇性高糖诱导的乳鼠雪旺细胞损伤的保护作用及其机制。 方法 不同条件下原代培养的乳鼠雪旺细胞分为6组：正常葡萄糖组(5.6 mmol/L,Con组)、稳定性高糖组(50 mmol/L,HG组)、间歇性高糖组（正常葡萄糖与稳定性高糖交替,IHG组）及间歇性高糖加不同浓度Sal B组(25、50、100 μmol/L,IHG+ Sal B组)。Elisa法检测雪旺细胞培养上清丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶 (SOD）活性,流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）及线粒体膜电位变化,TUNNEL法检测雪旺细胞凋亡,Western blot法检测Bcl-2、Bax、AIF、活化Caspase-9及活化Caspase-3蛋白表达。 结果 与Con组相比,HG组与IHG组可以明显提高雪旺细胞ROS水平、MDA含量及雪旺细胞凋亡率 (P＜0.01),降低SOD活性及线粒体膜电位 (P＜0.01);上调Bax表达 (P＜0.01),下调Bcl-2表达（P＜0.01）,增加活化Caspase-9、活化Caspase-3水平及AIF的核转位 (P＜0.01),以上变化尤以IHG组明显 (P＜0.05,P＜0.01)。不同浓度Sal B可以降低雪旺细胞内ROS水平及MDA含量 (P＜0.01),提高SOD活性及线粒体膜电位 (P＜0.05,P＜0.01),上调Bcl-2表达 (P＜0.05,P＜0.01),下调Bax表达 (P＜0.01),减少Caspase-9、Caspase-3活化及AIF的核转位 (P＜0.05,P＜0.01),抑制雪旺细胞凋亡 (P＜0.05,P＜0.01)。 结论 Sal B可有效降低间歇性高糖导致的雪旺细胞损伤,机制可能与抑制氧化应激及凋亡有关。     

氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的:探讨氧化应激在高糖诱导乳鼠心肌细胞凋亡中的作用。方法:分离培养SD乳鼠心肌细胞,分别用10～50mmol/L终浓度的葡萄糖进行干预,MTT测定各组心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、脱氧核糖核酸转移酶原位缺口末端标记法(TUNEL)和流式细胞术用于观察和检测心肌细胞凋亡;将心肌细胞分为3组:对照组、高糖组和抗氧化剂组,分别检测各组上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的含量以反映心肌细胞的氧化应激水平。结果:MTT结果显示高糖能浓度依赖性地抑制心肌细胞的生长活力;激光共聚焦显微镜、TUNEL染色和流式细胞术均表明高糖能诱导心肌细胞凋亡;与对照组相比,高糖组LDH、MDA含量明显增高,SOD含量显著下降,与高糖组相比,抗氧化剂组LDH,MDA含量明显下降,SOD含量显著升高;流式细胞检测显示高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而抗氧化剂组细胞凋亡率较高糖组则显著下降。结论:氧化应激是高糖诱导心肌细胞凋亡的一个重要机制。     

Caspase抑制剂对缺氧诱导的心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨Caspase-3特异性抑制剂在缺氧诱导的培养乳鼠心肌细胞凋亡中的作用及其相关基因的表达。方法 将SD乳鼠的培养心肌细胞随机分为对照组、缺氧72 h组及Caspase-3抑制剂组（缺氧72 h前加入0.1μmol/L的Z-DEVD-fmk）3组。应用Western blot分析法和RT-PCR技术检测Caspase-3、PARP蛋白及Caspase-3mRNA的表达,同时利用流式细胞仪分析心肌细胞凋亡的变化;借助Caspase-3荧光分析试剂盒,荧光比色法检测心肌细胞凋亡过程中Caspase-3活性的变化。结果 Caspase-3抑制剂组细胞凋亡百分率为（14.93±2.47）%,显著低于缺氧72 h组的（48.43±4.18）%,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。Caspase-3抑制剂组PARP及Caspase-3蛋白表达显著低于缺氧72 h组,差异有高度统计学意义（P〈0.01）。RT-PCR分析显示,Caspase-3抑制剂组Cas-pase-3 mRNA的表达量较缺氧72 h组降低了62.05%,差异有高度统计学意义,Caspase-3活性检测显示,Caspase-3抑制剂组的Caspase-3活性较缺氧72 h组降低了52.85%,差异有高度统计学意义（均P〈0.01）。结论 Caspase-3抑制剂能明显抑制缺氧诱导的心肌细胞凋亡、Caspase-3蛋白和mRNA的表达、Caspase-3蛋白酶活性和PARP的裂解。     

青春期营养性肥胖对大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响

目的探讨营养性肥胖对青春期雄性大鼠睾丸生殖细胞凋亡的影响。方法健康青春期Wistar雄性大鼠20只,按随机化原则分为两组,每组10只,对照组给予普通饲料喂养,高脂组用高脂、高热量饲料喂养建立营养性肥胖大鼠模型,10周末处死大鼠摘取睾丸。全自动生化分析仪（ACA）检测外周血总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）;光镜观察睾丸组织病理学改变;原位缺口末端标记法（TUNEL）检测睾丸组织凋亡细胞;免疫组化法检测Cyt c、Caspase-3蛋白的分布和表达;RT-PCR法检测睾丸组织Cyt c mRNA和Caspase-3 mRNA的表达。结果高脂组TC、TG、LDL-C和HDL-C较对照组明显升高,差异有显著性（P〈0.05）;高脂组生殖细胞凋亡指数明显高于对照组（P〈0.01）,凋亡细胞以精原细胞和精母细胞为主;高脂组Cyt c蛋白和Cyt c mRNA表达明显高于对照组（P〈0.01）;高脂组Caspase-3蛋白和Caspase-3 mRNA表达明显高于对照组（P〈0.01）。结论营养性肥胖诱导大鼠睾丸生殖细胞凋亡增多,其机制可能与Cyt c、Caspase-3蛋白表达升高相关。     

G1对EA.hy926内皮细胞内质网应激的抑制作用

【摘要】目的：观察GPR30受体激动剂G1对高糖诱导的eahy926内皮细胞内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）的影响。方法：选用eahy926内皮细胞为研究对象,分为3组：正常对照组（Con,17.51mmol/L）、高糖组（HG,33.3mmol/L）、高糖 G1组（HG G1,HG 1umol/L G1）,利用流式细胞术检测三组细胞凋亡率,Western blot法检测ERS相关分子BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX、Bcl-2的表达变化,RT-PCR法检测BIP和CHOP的mRNA表达变化。结果：HG组与Con组比较,细胞凋亡率明显升高（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达上调（P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达下调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达上调（P<0.01）,HG G1组与HG组比较,细胞凋亡率明显降低（P<0.01）,BIP、IRE1、PERK及凋亡分子BAX表达下调（P<0.05或P<0.01或P<0.001）,Bcl-2的表达上调（P<0.05）,BIP、CHOP mRNA 表达下调（P<0.01）。结论：GPR30受体激动剂G1可抑制eahy926内皮细胞内质网应激。     

内质网应激介导过氧化氢诱导的心肌细胞凋亡

目的探讨氧化应激诱导心肌细胞凋亡是否与内质网应激(endoplasmic reticulum stress,ERS)的调控机制有关。方法给予乳鼠心肌细胞高低两种浓度(500、100μmol/L)和不同时间(0、4、8、12、24h)过氧化氢(H2O2)刺激。采用流式细胞仪检测各组心肌细胞的凋亡率;苏木精-伊红染色法(HE)观察心肌细胞凋亡的典型形态;通过Western blot检测ERS标志蛋白p-PERK和CHOP的表达变化。进一步采用ERS抑制剂化学伴侣PBA(4-phenylbutyric acid)抑制心肌细胞ERS,Western blot检测p-JNK、p-PERK和CHOP蛋白的表达变化;采用流式细胞仪检测Caspase-12和Caspase-3的活性。结果①低浓度H2O2可显著诱导心肌细胞凋亡,高浓度H2O2则导致心肌细胞发生坏死;100μmol/L H2O2刺激心肌细胞8h时其凋亡率最高。②心肌细胞发生凋亡时ERS标志蛋白p-PERK和CHOP表达显著增高。③ERS抑制剂PBA预处理心肌细胞,可有效抑制H2O2诱导的p-PERK、CHOP表达及Caspase-3、Caspase-12活性的上调,与单纯H2O2处理组相比差异有统计学意义(P<0.01)。结论低浓度H2O2可通过促发ERS整合调控机制介导心肌细胞凋亡。这一结果将从ERS整合调控细胞应激的角度为心血管疾病的防治提供新思路。     

二苯乙烯苷对氧糖剥夺星形胶质细胞凋亡的影响及其机制

目的 观察2,3,5,4＇-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷（TSG）对大鼠大脑皮层星形胶质细胞（AS）缺氧、缺糖损伤所致凋亡的影响,以及内质网应激相关因子Caspase-12 、Caspase-3 的表达变化,探讨TSG脑保护作用的作用机制.方法 原代培养Sprague-Dawley 大鼠大脑皮层AS,建立缺氧、缺糖损伤模型,以流式细胞术检测细胞凋亡率,以透射电镜观察细胞超微结构尤其是凋亡小体的变化,研究缺氧缺糖对各组AS 的影响;以钙离子敏感的荧光探针Fura-2/AM 负载细胞检测细胞内游离钙离子浓度,研究氧糖剥夺（OGD）对不同组AS 的影响;以免疫细胞化学染色方法和反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法观测内质网应激相关因子Caspase-12 和Caspase-3 各组的表达.结果 与正常对照组相比,缺氧缺糖处理后AS 内游离钙离子浓度增高,TSG 预处理可明显降低细胞内游离钙离子,调节钙稳态失衡.免疫细胞化学染色和RT-PCR 结果显示,缺氧缺糖损伤后细胞内Caspase-12 、Caspase-3 表达增加,TSG 预处理可显著抑制两者的表达.结论 TSG 可抑制OGD 诱导的AS 凋亡,其机制可能通过抑制内质网应激发挥作用.     

内质网应激在高脂血症大鼠心肌细胞凋亡中的作用

目的 研究内质网应激是否在高脂血症大鼠诱导心肌细胞凋亡中起作用。方法 通过建立高脂血症大鼠模型,全自动化生化仪检测血清甘油三酯(TG)及胆固醇(TC)水平;HE染色观察心肌组织的病理学变化;TUNEL法检测心肌细胞凋亡;免疫组化法及RT-PCR技术检测心肌细胞内质网应激信号通路分子GRP78的表达变化。结果 研究显示在喂养12 W时模型组大鼠血清TC、TG含量明显高于对照组(P<0.01);大鼠模型组较正常组心肌组织排列紊乱、边界不清、心肌纤维断裂、部分细胞核溶解消失;模型组大鼠心肌细胞凋亡率明显高于正常组(P<0.05);大鼠心肌GRP78mRNA及蛋白的表达量,模型组均较对照组明显升高(P<0.05)。结论 内质网应激途径可能在高脂血症诱导心肌细胞凋亡中起到重要作用。     

丹皮酚对缺糖缺氧再灌诱导的心肌细胞凋亡及相关基因Bcl-2 Bax蛋白表达的影响

目的：探讨丹皮酚（Paeonol Pae）对培养乳鼠心肌细胞缺糖缺氧再灌时心肌细胞凋亡及凋亡相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达的影响。方法：建立原代培养的新生大鼠心肌细胞缺糖缺氧再灌损伤模型,随机分组：对照组;模型组;丹皮酚组;用AnnexinⅤ-FITC/PI双标记法测定细胞凋亡率;以免疫组织化学方法检测心肌细胞Bcl-2、Bax蛋白表达变化。结果：缺糖缺氧再灌后,细胞凋亡率明显高于对照组（P〈0.01）,心肌细胞Bcl-2蛋白阳性表达指数（positive expression index PEI）显著低于对照组（P〈0.01）,Bax蛋白PEI明显的高于对照组（P〈0.01）,Bcl-2/Bax比值明显的低于对照组（P〈0.01）。与缺糖缺氧再灌组比较,Pae干预组细胞凋亡率显著降低（P〈0.01）,Bcl-2蛋白PEI显著升高（P〈0.01）,Bax蛋白PEI显著降低（P〈0.05,P〈0.01）,Bcl-2/Bax比值明显高于缺糖缺氧再灌组（P〈0.01）。结论：Pae可抑制缺糖缺氧再灌损伤心肌细胞凋亡,其作用可能是通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Bax蛋白表达,增加Bcl-2/Bax比值实现的。     

慢性应激对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡和bax、bcl-2表达的影响

目的：探讨慢性应激对心肌梗死模型大鼠心肌细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响。方法：大鼠随机分为4组（每组12只）,正常对照组（A组）,假手术组（B组）,心肌梗死模型组（C组）,心肌梗死后慢性应激组（C组）;用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组织化学法检测bax和bcl-2蛋白表达。结果：（1）与A、B组比较,C、D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞凋亡指数明显增加,P〈0.01;A和B组心肌细胞凋亡指数比较无统计学差别;（2）与A、B组比较,C、D组心肌细胞bax和bcl-2蛋白表达均明显增加,P〈0.01;与C组比较,D组心肌细胞bax蛋白表达明显增加,P〈0.01,而bcl-2蛋白表达明显减少,P〈0.01。结论：慢性应激可促进心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡,其机制可能与上调bax蛋白表达和下调bcl-2的蛋白表达有关。     

淫羊藿苷改善高糖培养乳鼠心肌细胞活性的线粒体相关机制

目的研究淫羊藿苷对抗体外高浓度葡萄糖诱导乳鼠心肌细胞的损伤及其潜在的线粒体相关机制。方法SD乳鼠心肌细胞分别在含5.5mmol／L葡萄糖（正常对照组）、5．5mmol／L葡萄糖＋20.0mmol／L甘露醇（高渗对照组）、25.5mmol／L葡萄糖（高糖损伤组）、25.5mmol／L葡萄糖＋10μmol／L淫羊藿苷（低剂量淫羊藿昔保护组）和25.5mmol／L葡萄糖＋100μmol／L淫羊藿苷（高剂量淫羊藿苷保护组）的培养基中进行原代培养48h后,检测细胞活力、细胞培养上清液乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞活性氧自由基（ROS）生成、超氧化物歧化酶（SOD）活性,同时检测心肌线粒体跨膜电位,并检测线粒体通透性转换孔（MPTP）开放值。结果与正常对照组比较,高糖培养组心肌细胞活性、细胞SOD活性及心肌线粒体跨膜电位水平均显著下降（P〈0．01）,而培养上清液LDH含量、细胞ROS生成及心肌细胞MPTP开放值则明显升高（P〈001）。淫羊藿苷干预减轻了高糖对心肌细胞各项指标的损伤,尤其是高剂量淫羊藿苷保护组的细胞活性、LDH漏出量、ROS生成值、SOD活性、MPTP开放值、线粒体跨膜电位均有明显改善。高渗对照组各项指标与正常对照组相比差异无统计学意义。结论淫羊藿苷对体外高糖培养乳鼠心肌细胞具有保护作用,其作用机制可能通过提高细月旬抗眚化能力．减少ROS诱导的心肌MPTP开放程度．维持线粒体正常跨膜电位而实现的。     

脂联素对高糖环境心肌细胞氧化应激及凋亡的影响

目的通过高糖环境培养人心肌细胞(human cardiac myocytes,HCM)建立心肌细胞氧化应激模型,观察脂联素(ad-iponectin,ADPN)对心肌细胞各氧化应激指标及凋亡的影响,从而揭示脂联素对心肌细胞可能的保护机制。方法将体外培养的人心肌细胞分为3组:对照组、高糖组、高糖+脂联素组,分别干预24、48、72h。在倒置显微镜下观察心肌细胞形态变化,采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)含量。用代巴比妥酸法测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,用荧光定量RT-PCR法测定衔接蛋白(adaptinP66Shc)、血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,Ho-1)在各个时间点上的表达,通过流式细胞术检测心肌细胞的凋亡率。结果与对照组相比,高糖组SOD含量显著下降,MDA含量显著上升(P<0.05),与高糖组相比,脂联素组SOD含量显著上升,MDA含量显著下降(P<0.05),并且呈时间依赖性。与对照组相比,高糖组Ho-1 mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达亦增高(P<0.05)。与对照组相比,高糖组P66Shc mRNA表达增高;脂联素组较高糖组表达降低(P<0.05),呈时间依赖性。高糖组细胞凋亡率较对照组明显增加,而脂联素组细胞凋亡率较高糖组显著下降。结论脂联素可通过减少P66Shc表达、增加Ho-1表达,增加抗氧化能力,减少氧化应激反应,减少细胞凋亡,可能对糖尿病心肌细胞起保护作用。