内毒素肝损伤中FADD mRNA表达及凉血化瘀方的影响

目的研究凋亡调节基因相关死亡区蛋白(FADD)mRNA在内毒素肝损伤中的表达与肝细胞凋亡的关系,以及凉血化瘀方对其的影响.方法腹腔注射内毒素脂多糖于D-氨基半乳糖致敏小鼠造成暴发性肝衰竭模型,用逆转录-聚合酶链反应半定量分析FADD mRNA表达情况,同时观察药物的影响作用.结果造模3h模型组和治疗组肝组织中FADD mRNA表达分别为110%、100%,至6h模型组的表达增加(124%),治疗组表达下调(81%).结论凉血化瘀方抑制肝细胞凋亡的作用,可能与其下调FADD mRNA表达有关.     

连术颗粒治疗急性感染性腹泻(湿热下注证)对血浆内毒素的影响及疗效观察

目的观察连术颗粒对急性感染性腹泻(湿热下注证)的疗效,及其抗内毒素的作用及机制。方法将60例急性感染性腹泻(湿热下注证)患者随机分为2组,每组各30例。治疗组予连术颗粒联合盐酸环丙沙星治疗,对照组予盐酸环丙沙星治疗,疗程为3 d。2组治疗前后分别取患者肘静脉血,检测血白细胞计数、中性粒细胞百分比,血清C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、可溶性白细胞分化抗原14(sCD14)、白细胞介素6(IL-6),血浆内毒素、一氧化氮(NO)、D-乳酸浓度;收集患者粪,进行粪常规镜检白细胞;统计临床疗效。结果 2组显效率及总有效率比较差异均有统计学意义(P0.05),治疗组临床疗效优于对照组(P0.05)。治疗后,2组血白细胞计数、中性粒细胞百分比及血清CRP水平,血浆内毒素、D-乳酸浓度,粪常规镜检白细胞数均较本组治疗前降低(P0.05);治疗组血浆NO含量及血清TNF-α、sCD14、IL-6水平均较本组治疗前降低(P0.05),且治疗组治疗后血清CRP、TNF-α、sCD14及IL-6水平,血浆内毒素、D-乳酸浓度、NO含量均低于对照组(P0.05)。结论连术颗粒能有效治疗急性感染性腹泻,降低D-乳酸浓度,修复受损肠黏膜,减少内毒素吸收;降低NO、TNF-α、sCD14、IL-6水平,从而拮抗内毒素代谢。     

牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤水通道蛋白表达的影响

目的：观察牛珀至宝微丸对内毒素急性肺损伤纤维化水通道蛋白表达的影响。方法：静脉注射内毒素（LPS）、腹腔注射D-氨基半乳糖（D—GalN）造成内毒素休克模型，用牛珀至宝微丸干预处理，HE染色观察肺损伤，Van Gieson法染色检测肺胶原纤维表达，免疫组化染色观察AQP—1和AQP-5表达。结果：内毒素造成严重的急性肺损伤，肺组织胶原纤维染色显著增强，AQP-1和AQP-5表达减弱；牛珀至宝微丸能减轻急性肺损伤及肺组织胶原纤维表达，并能提高AQP-1和AQP-5表达。结论：牛珀至宝微丸能减轻内毒素急性肺损伤和纤维化的机理可能与调节AQP-1和AQP-5表达相关。     

青蒿素对狼疮性肾炎小鼠外周血单个核细胞GRα mRNA、GRβ mRNA及肾组织P300/CBP蛋白表达的影响

目的:探讨青蒿素对狼疮性肾炎小鼠外周血单个核细胞GRαmRNA、GRβmRNA及肾组织P300/CBP蛋白表达的影响。方法:40只雌性B6D2F1代杂交小鼠随机分为正常对照组、模型组、泼尼松组(泼尼松混悬液灌养:6.45 mg/kg)及青蒿素组(青蒿素混悬液灌养:150 mg/kg)。通过诱导方法建立狼疮性肾炎小鼠模型,分别采用RT-PCR及免疫组化(SP)法等检测技术测定外周血单个核细胞GRα mRNA、GRβ mRNA表达及肾组织转录共激活因子P300/CBP蛋白表达情况,观察青蒿素对上述指标的影响。结果:与模型组比较,青蒿素组动物外周血单个核细胞GRαmRNA和肾组织转录共激活因子P300/CBP蛋白表达均有不同程度升高(P0.01),GRβ mRNA表达显著降低(P0.05或P0.01),且青蒿素对GR αmRNA和转录共激活因子P300/CBP蛋白表达的影响明显优于泼尼松组(P0.01)。结论:青蒿素治疗狼疮性肾炎的作用机制可能与调节外周血单个核细胞GRα mRNA、GRβ mR-NA及肾组织P300/CBP蛋白表达有关。     

湿热清对寻常型银屑病外周血单个核细胞Ets-1 mRNA水平的影响

目的 :观察湿热清对寻常型银屑病血热证患者外周血单个核细胞Ets-1 mRNA水平的影响,探讨转录因子Ets-1与寻常型银屑病血热证的相关性,揭示湿热清加味治疗的微观作用机制。方法:采用实时定量PCR法检测28例寻常型银屑病血热证患者与20例健康者外周血单个核细胞中Ets-1 mRNA水平,观察患者经湿热清加味治疗后Ets-1 mRNA水平的变化。结果:寻常型银屑病血热证患者外周血中Ets-1 mRNA水平显著高于健康对照组(P0.01),给予湿热清加味治疗后Ets-1mRNA表达量明显降低(P0.05)。结论:寻常型银屑病血热证患者外周血中Ets-1 mRNA水平明显高于正常人,湿热清加味治疗后明显降低,提示湿热清加味可能通过调节转录因子Ets-1表达量间接影响T淋巴细胞分化,从而对寻常型银屑病血热证患者发挥治疗作用。     

中药复方金三莪对肝硬化患者肠通透性的影响

目的观察中药复方金三莪抗肝硬化的疗效及对肠通透性的影响。方法选取85例乙型肝炎肝硬化患者,随机分为2组。对照组采用护肝、支持和防治并发症等综合处理,中药组在综合治疗基础上加用中药金三莪复方煎剂。观察治疗前后2组患者肝功能指标、Child-Pugh积分、血浆D-乳酸、二胺氧化酶(DAO)及内毒素水平的变化。结果2组患者治疗后肝功能各项指标、Child-Pugh积分、血浆D-乳酸、DAO及内毒素水平均较治疗前有明显的好转(P<0.05),但中药组患者治疗后TBil及PTA 2项指标的好转、Child-Pugh积分、血浆D-乳酸、DAO及内毒素水平的下降均较对照组更为显著(P<0.05)。结论中药复方金三莪有明显的抗肝硬化疗效,同时阻止了肠通透性的增加,减少了肠源性内毒素血症的发生。     

芍药汤对湿热蕴结型溃疡性结肠炎大鼠肠黏膜通透性相关蛋白表达的影响

目的:探究芍药汤对湿热蕴结型溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)大鼠肠黏膜通透性的作用机理。方法:将60只大鼠随机分为空白组、模型组、芍药汤高、中、低剂量组、柳氮磺吡啶(Salicylazosulfa Pyridin,SASP)组(西药组),每组10只,雌雄各半,采用高脂高糖辛辣饮食+免疫复合法+2,4,6-三硝基苯磺酸(Trinitrobenzenesulfonic Acid,TNBS)结合乙醇的方法复制湿热蕴结型UC大鼠模型,用药干预后第21天处死,取大鼠结肠病变部位组织,检测结肠组织中ZO-1、Occludin mRNA及蛋白表达。结果:与空白组比较,模型组中ZO-1、Occludin mRNA表达显著下降(P 0.01);与模型组比较,西药组中ZO-1和Occludin m RNA表达明显升高(P 0.01),芍药汤高、中剂量组ZO-1及Occludin mRNA表达显著提高(P 0.01)。与空白组比较,模型组中ZO-1、Occludin蛋白表达水平显著下降(P 0.01);与模型组比较,西药组、芍药汤各剂量组中ZO-1、Occludin蛋白表达水平明显升高(P 0.01)。结论:芍药汤可以改善湿热蕴结型UC大鼠的肠黏膜通透性,修复肠黏膜屏障功能,达到治疗UC的目的。     

左归丸对化疗致POF模型小鼠卵巢缝隙连接蛋白Cx37及mRNA表达的影响

摘要 目的：通过观察左归丸对化疗致卵巢早衰（POF）模型小鼠卵巢Cx37蛋白、mRNA表达的影响,探讨左归丸治疗POF的作用与机制。方法：将昆明雌性小鼠72只随机分为空白组、模型组、戊酸雌二醇片组、左归丸低、中、高剂量组。除空白组小鼠腹腔注射等量生理盐水外,其余各组小鼠均按30 mg·kg-1剂量腹腔注射环磷酰胺,每天1次,连续注射20 d,复制POF模型;同时从造模第1天开始按剂量要求进行灌胃给药,每天1次,连续给药30天。末次给药2 h后,摘眼球法处死小鼠,随即剖开腹腔,摘取双侧卵巢,剔除周围附着的脂肪组织,一部分卵巢组织液氮保存,采用RT-PCR法检测卵巢Cx37 mRNA表达;一部分卵巢组织进行匀浆后采用western-blot 法检测卵巢Cx37蛋白的表达;一部分卵巢以4%多聚甲醛溶液固定,常规石蜡包埋,切片后采用免疫组化方法检测卵巢组织Cx37蛋白的分布。结果：左归丸可有效增强化疗致POF模型小鼠卵巢Cx37mRNA基因表达（P<0.05,P<0.01）,增强卵巢组织Cx37蛋白表达（P<0.05）,增加Cx37蛋白在卵巢颗粒细胞中的分布（P<0.05）。结论：左归丸可有效增强化疗致POF模型小鼠卵巢组织Cx37mRNA表达,上调Cx37蛋白在卵巢组织中的分布与表达,改善化疗致POF模型小鼠卵巢组织缝隙连接功能,恢复卵巢功能。     

抗痫灵对戊四氮诱导癫痫大鼠海马区Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响

目的:观察中药复方抗痫灵对戊四氮致痫大鼠海马Bcl-2mRNA及其蛋白表达的影响。方法:观察大鼠痫性发作行为;采用免疫组化方法检测大鼠脑组织中海马Bcl-2蛋白的表达;采用实时荧光定量(Real timePCR)方法检测大鼠海马组织Bcl-2mRNA的相对表达。结果:经过中药复方抗痫灵治疗6周后,大鼠痫性发作行为明显减少;海马区抑制凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达均升高。结论:抗痫灵能减少癫痫发作次数,上调海马区抑凋亡基因Bcl-2mRNA及其蛋白表达。     

湿热壅滞型肛瘘术后苦参汤熏洗对热休克蛋白hsp70表达的影响

目的：观察湿热壁滞型肛瘘患者手术后行苦参汤熏洗对热休克蛋白hsp70表达的影响。方法：将80例湿热壅滞型肛瘘患者随机分为治疗组（40例）和对照组（40例）。治疗组术后给予苦参汤坐浴,对照组则给予生理盐水坐浴,分别于治疗前及治疗后3天、7天和14天,以免疫组织化学方法检测、分析两组患者创面组织热休克蛋白hsp70的表达。结果：治疗组治疗后3天、7天和14天热休克蛋白hsp70表达均高于对照组（P＜O．01）。结论：肛瘘术后苦参汤熏洗可能是热休克蛋白hsp70表达的诱导因素之一,能明显增加热休克蛋白hsp70的表达。     

慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与水通道蛋白3基因表达的相关性研究

目的:探讨慢性浅表性胃炎脾胃湿热证与水通道蛋白3(AQP3)基因表达的相关性.方法:随机选取88例慢性浅表性胃炎患者,其中脾胃湿热证75例,脾虚证组13例,另选择健康的本校学生10人作为正常对照组,采用荧光定量PCR法检测患者胃粘膜AQP3表达.结果:正常人与慢性浅表性胃炎患者AQP3阳性表达率差异有显著性(P＜0.01),正常人、脾胃湿热证患者AQP3阳性表达率差异有显著性(P＜0.05),脾胃湿热证、脾虚证患者AQP3阳性表达率差异无显著性(P＞0.05).慢性浅表性胃炎脾胃湿热证中AQP3阳性患者出现口渴少饮、大便溏而不爽的比例要明显高于AQP3阴性患者(P＜0.05或P＜0.01),出现口干口苦、恶心、纳呆、腹胀或痛的比例两组无明显差异(P＞0.05).慢性浅表性胃炎脾胃湿热证中AQP3阳性患者辨证为湿重于热的比例要明显高于AQP3阴性患者(P＜0.05).结论:AQP3与水液代谢关系密切,AQP3在脾胃湿热证发生中起着某种作用.     

灯盏乙素对对乙酰氨基酚和脂多糖致小鼠肝功能损伤和致死率的影响

目的观察灯盏乙素对对乙酰氨基酚和脂多糖致小鼠肝功能损伤和致死率的影响。方法分别给不同模型的小鼠灌胃给予灯盏乙素25~500 mg.kg-1,1次/d。7~14 d后,一次性腹腔注射不同剂量的对乙酰氨基酚和脂多糖,观察小鼠肝功能变化和致死情况。结果小剂量的灯盏乙素不影响对乙酰氨基酚所致小鼠肝功能损伤,但加大剂量后小鼠致死率明显升高;小剂量的灯盏乙素就能显著加重脂多糖所致小鼠肝功能损伤、明显增加脂多糖致小鼠死亡率。结论使用灯盏乙素治疗心或脑血管疾病,当病人遇到感染性疾病时,要注意灯盏乙素的使用剂量,灯盏乙素的不当使用可能会加重脂多糖(内毒素)诱导的肝损伤;使用对乙酰氨基酚治疗各种疾病所致发热时,合用灯盏乙素也要注意灯盏乙素的使用剂量。     

中药对脾胃湿热证患者胃黏膜水通道蛋白3、4基因表达的影响

目的探讨脾胃湿热证与胃黏膜水通道蛋白(AQP)3、4基因表达的关系及中药清热化湿方对其影响。方法选择慢性浅表性胃炎患者68例,属脾胃湿热证者53例(其中湿重于热19例,热重于湿14例,湿热并重20例),脾虚证者15例。脾胃湿热证患者予中药清热化湿方治疗。采用荧光定量PCR方法检测胃黏膜AQP3、4的基因表达。结果脾胃湿热证组患者AQP3基因表达的水平高于健康人组(10名)和脾虚证组,但3者比较,差异无显著性;AQP4基因表达的水平则显著高于健康人组和脾虚证组(P<0．05或P<0．01);脾虚证组与健康人组比较差异无显著性;脾胃湿热证各亚型之间比较呈湿重于热>湿热并重>热重于湿的趋势;治疗后脾胃湿热证患者及湿重于热亚型AQP3、4的基因表达水平显著下降(P<0．01),接近健康人组及脾虚证组水平。结论AQP3、4的异常表达可能是脾胃湿热证的发生机制之一,中药可能通过影响AQP3、4的表达而发挥治疗作用。     

黄芪对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤p38丝裂原活化蛋白激酶表达的影响

目的探讨脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤(ALI)大鼠肺组织磷酸化 p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)表达的变化以及黄芪对其影响。方法静脉注射 LPS 复制大鼠 ALI 模型。随机分成3组,即正常对照组、LPS 刺激组和黄芪干预组。采用蛋白质印迹法检测肺组织磷酸化 p38MAPK 的表达,并观察大鼠动脉血氧分压(PaO_2)、肺湿/干重比(W/D)、支气管肺泡灌洗液(BALF)白蛋白、血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的变化以及肺组织病理学改变。结果 LPS 刺激组大鼠肺组织磷酸化 p38MAPK 的表达较正常对照组显著增加(P<0.01)。与LPS 刺激组比较,黄芪干预组大鼠肺组织磷酸化 p38 MAPK 的表达、W/D、BALF 白蛋白以及血清 TNF-α含量显著下降,PaP_2显著上升(P<0.05),肺组织病理学损伤明显减轻。结论 ALI 时肺组织 p38 MAPK 磷酸化表达增加;黄芪注射液对内毒素性肺损伤有保护作用,其机制可能与抑制磷酸化 p38MAPK 的表达有关。     

湿热环境在湿温发病中的作用机理探讨

探讨湿温发病的机理。比较新西兰白兔在湿热环境处理前后的症状体征、血液中内毒素、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1(IL-1)含量。结果：湿热环境能使新西兰白兔体温升高，血浆内毒素、TNF-α、IL-1浓度升高，并产生倦怠、纳差、大便粘滞等温病湿热证样表现。提示湿热环境是引起湿温病的部分病理机制。     

抗癌方对HepG2人肝癌细胞株P53蛋白表达的影响

目的观察抗癌方对ＨｅｐＧ２人肝癌细胞株Ｐ５３蛋白表达的影响,以探讨其抗癌作用机理。方法采用ＭＴＴ法分析抗癌方对人肝癌细胞株ＨｅｐＧ２细胞生长的影响。结果抗癌方能明显抑制ＨｅｐＧ２的生长,对ＨｅｐＧ２细胞的半数生长的抑制剂量（ＩＣ５０）为１ｍｇ／ｍｌ。ＬＳＡＢ方法观察发现抗癌方能诱导ＨｅｐＧ２细胞株从相当弱到非常强的比较致密的细胞核染色,且低浓度（０．１ｍｇ／ｍｌ）Ｐ５３蛋白表达诱导作用强于高浓度（１ｍｇ／ｍｌ）,几乎将近５０％的细胞出现Ｐ５３蛋白高表达。提示：抗癌方诱导ＨｅｐＧ２Ｐ５３蛋白高达表,可能为其杀伤ＨｅｐＧ２细胞株、诱导其凋亡的机制之一。     

槐定碱对急性肺损伤小鼠肺组织SOD, MDA及TLR4表达的影响

目的:研究槐定碱对内毒素(LPS)致急性肺损伤(ALI)小鼠肺组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量及Toll样受体4(TLR4)表达的影响.方法:采用随机数字法,将60只清洁级昆明种小鼠分成6组:正常组、模型组、预防给药组、槐定碱低剂量组、槐定碱中剂量组、槐定碱高剂量组,每组10只.①正常组、②模型组、④槐定碱低剂量组、⑤槐定碱中剂量组、⑥槐定碱高剂量组:ip生理盐水0.5 mL,连续6d.③预防给药组:ip 5 mg·kg-1槐定碱,连续6d.上述②～⑥组均在末次注射生理盐水或药物后1 h ip脂多糖(LPS)9 mg· kg -1造模,造模2h后④～⑥组分别给槐定碱9,5,2.5 mg·kg-1.6h后检测肺组织匀浆中SOD活性及MDA的含量,取新鲜肺组织裂解后提取RNA,RT-PCR法检测TLR4 mRNA的表达水平.结果:与正常组(86.22 ±8.86) U·mg-1相比,LPS模型组(50.58±10.06) U·mg-1肺组织匀浆SOD活性明显下降;与模型组相比,各给药组SOD[预防给药组(64.71±5.74)U·mg-1,高剂量组(56.34 ±6.88) U·mg-1,中剂量组(75.50 ±13.01)U·mg-1,低剂量组(67.02±10.19)U·mg-1]均明显升高(P＜0.05);而肺组织中MDA含量变化趋势与SOD相反(P＜0.05);TLR4 mRNA的表达灰度值与正常组(0.45±0.20)比较,LPS模型组(0.82±0.20)明显升高;与模型组比较,各用药组[预防给药组(0.60 ±0.32)s,高剂量(0.55 ±0.19),中剂量(0.54 ±0.29),低剂量组(0.61±0.26)]均明显降低(P＜0.05).结论:槐定碱能降低ALI模型小鼠肺组织匀浆中MDA的活性,提高SOD含量,降低TLR4 mRNA的表达.     

加味茵陈蒿汤联合常规治疗对慢性持续期湿热型支气管哮喘患者的临床疗效

目的探讨加味茵陈蒿汤联合常规治疗对慢性持续期湿热型支气管哮喘患者的临床疗效。方法 128例患者随机分为对照组和观察组,每组64例,对照组给予常规治疗(孟鲁司特钠、吸入型β2受体激动剂等),观察组在此基础上加用加味茵陈蒿汤,疗程4周。检测临床疗效、中医证候评分、儿童哮喘控制测试问卷(C-ACT)评分、呼气峰流量(PEF)、辅助性T细胞17(Th17)、调节性T细胞(Treg)、Th17/Treg、白介素-17(IL-17)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、不良反应发生率变化。结果观察组总有效率高于对照组(P<0.05)。治疗后,2组中医证候评分、Th17、Th17/Treg、IL-17降低(P<0.05),C-ACT评分、PEF、Treg、TGF-β1升高(P<0.05),以观察组更明显(P<0.05)。2组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论加味茵陈蒿汤联合常规治疗可有效调控慢性持续期湿热型支气管哮喘患者外周血Th17/Treg细胞平衡,缓解临床症状,改善肺功能,耐受性较好。     

外感清热解毒方对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的：探讨外感清热解毒方对脂多糖（LPS）诱导急性肺损伤（ALI）大鼠的影响及作用机制。方法：20只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、外感清热解毒方组、miR-495抑制剂组。气管滴注LSP（5 mg/kg）成功复制ALI大鼠模型,给予相应干预。定量PCR检测大鼠肺组织miR-495水平;苏木精-伊红（HE）染色观察肺组织病理改变;酶联免疫吸附试验检测肺泡灌洗液（BALF）中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β、IL-18、IL-10炎症介质和髓过氧化物酶（MPO）活性;蛋白质免疫印迹法检测肺组织核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3（NLRP3）、凋亡相关微粒蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1）、GSDMD蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组大鼠肺组织miR-495表达下调（P<0.05）,出现病理损伤,BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量升高,IL-10含量下降,MPO活性增强;肺组织NLRP3、ASC、Caspase-1蛋白表达增加（均P<0.05）。与模型组和miR-495抑制剂组比较,外感清热解毒方组大鼠肺组织miR-495表达上调（P<0.05）,病理损伤减轻,BALF中IL-6、TNF-α、IL-1β、IL-18含量下降,IL-10含量升高,MPO活性减弱;NLRP3、ASC表达下调（均P<0.05）,Caspase-1表达差异无统计学意义（P>0.05）。除对照组外,均可见GSDMD蛋白切割,外感清热解毒方组蛋白切割表达水平明显低于模型组和miR-495抑制剂组。结论：外感清热解毒方对ALI大鼠具有保护作用,其机制可能与调控miR-495/NLRP3/GSDMD信号通路,减轻炎症反应,抑制细胞焦亡有关。     

糖心康对糖尿病大鼠心肌基因Alox 12mRNA表达的影响

观察中药复方糖心康对糖尿病心肌损伤大鼠的作用机理。方法:采用链脲佐菌素(STZ)加高热量饮食建立糖尿病大鼠心肌损伤模型。采用美国Affymetrix Rat2302.0基因表达谱芯片及聚类分析,筛选差异表达基因,采用荧光定量RT-PCR法验证。结果:花生四烯酸12-脂加氧酶mRNA(Alox12 mRNA)是筛选出的差异表达基因。在糖尿病状态下,Alox12 mRNA基因表达上调,经糖心康治疗后表达下调。结论:Alox12 mRNA和糖尿病心肌损伤有重要相关性,糖心康对其有良性调节作用。