5-氮杂-2'-脱氧胞苷序贯顺铂对MDA-MB-231细胞的影响

目的 探讨5-氮杂-2'-脱氧胞苷(DAC)、顺铂(PDD)序贯应用对人三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231体外增殖、周期及凋亡的影响.方法 实验分4组:对照组、DAC组(5μmol/L DAC处理)、PDD组(15 μmol/L PDD处理)、DAC序贯PDD组(2.5μmol/L DAC处理24h,再用8μmol/L PDD处理48 h).分别用MTT法、流式细胞仪测定各组MDA-MB-231细胞的增殖、周期及凋亡,并用金氏公式来评价两药联合效应.结果 DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组增殖抑制率高(P＜0.01).DAC序贯PDD组48 h、72 h的q值分别为1.12、1.17,两药联合有增效作用.DAC序贯PDD组G1、S期细胞减少,G2/M期细胞增多,DAC序贯PDD组较DAC组、PDD组细胞凋亡率高(P＜0.01).结论 低剂量的DAC与PDD序贯应用可以抑制人三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖,促进MDA-MB-231细胞凋亡.     

赖氨匹林对乳腺癌ERK信号通路活性及Bcl-2、Bax表达的影响

目的：探讨非选择性环氧合酶一2抑制剂赖氨匹林对体外培养的MDA—MB-231人乳腺癌细胞ERK信号转导通路活性以及Bcl-2、Bax家族蛋白表达的影响。方法：应用MTT比色法分析细胞生长抑制作用，流式细胞技术测定细胞凋亡率，免疫印迹技术检测赖氨匹林对乳腺癌细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）／磷酸化（p—ERK）、Bcl-2、Bax表达的影响。结果：与对照组相比，（1-10）mmol／L赖氨匹林作用24h、48h、72h明显抑制MDA—MB-231细胞生长，具有剂量、时间依赖性。（1、5和10）mmol／L赖氨匹林作用24h，细胞早期凋亡率分别为5．81％、10．52％、15．63％，对照组为0．27％。赖氨匹林可下调MDA—MB-231细胞P—ERK的表达水平，但不影响总ERK表达，同时上调Bcl-2的表达，下调Bax的表达。结论：赖氨匹林对MDA—MB-231细胞有抑制增殖、诱导凋亡的作用，其作用机制与抑制乳腺癌ERK信号通路、影响Bcl-2、Bax蛋白表达有关。     

4-氨基吡啶对多西紫杉醇抗人乳腺癌细胞作用影响的实验研究

目的：探讨选择性钾离子通道阻断剂4-氨基吡啶（4-AP）对多西紫杉醇（docetaxel，DOC）抗人乳腺癌细胞MDA-MB-43—5S增殖、凋亡和周期的影响。方法：MTT比色法分析DOC、4-AP单独应用以及两药联合应用对MDA—MB-435S增殖的影响；流式细胞术Annexin V—FITC／PI双染法和PI单染法检测两种药物对MDA—MB-435S凋亡和周期的影响。结果：DOC和4-AP单独应用均能抑制MDA—MB-435S的增殖；5mmol／L的4-AP并用25μmol／L的DOC对MDA—MB-435S达最大抑制率的时间明显缩短，DOC和4-AP对MDA—MB-435S的增殖抑制有相加或协同作用，并呈剂量-时间依赖性。2和5μmol／L的DOC单独作用24h，MDA—MB-435S产生凋亡并不明显，当与5mmol／L的4-AP联合应用后，细胞早期凋亡和死亡明显增加。单用DOC可使MDA—MB-435S阻断在G2／M期，单用4-AP可使MDA—MB-435S阻断在G0／G1期，两药联合应用可使MDA—MB-435S阻断在G2／M期。结论：DOC和4-AP分别在G2／M期和G0／G1期抑制MDA—MB-435S的增殖，4-AP通过促进DOC诱导细胞凋亡从而抑制MDA—MB-435S的增殖。     

川楝素对乳腺癌细胞的生长抑制作用

[目的]探讨川楝素对人乳腺癌MDA—MB-453细胞作用及其机制。[方法]取对数生长期的MDA—MB-453细胞,0、6．25、12．50、25．00、50．00、100．00nmol／L川楝素处理,绘制生长曲线。川楝素0、12．5、50nmol／L处理72h后,MTS法检测川楝素对乳腺癌细胞增殖的影响,流式细胞仪检测川楝素对乳腺癌细胞凋亡和细胞周期的影响。[结果]川楝素对乳腺癌细胞有增殖抑制作用．并呈时间剂量依赖性（P〈0．01）。MDA—MB453细胞48h、72h、96h的IC50分别为17．25、22．20和135．69nmol／L。流式细胞分析表明,川楝素诱导乳腺癌细胞的凋亡呈浓度依赖性（P〈0．01）,且阻滞细胞在S期（P〈0．01）,以0、12．50、50．00nmol／L川楝素处理乳腺癌细胞72h后,MDA—MB-453细胞早期凋亡率分别为3．21％、9．64％和20．19％,MDA—MB-453细胞处于细胞周期S期细胞占20．98％、35．92％和45．02％。[结论]川楝素对乳腺癌MDA—MB-453细胞增殖具有抑制作用,其作用机制可能与诱导细胞凋亡和引起S期阻滞有关。     

褪黑素对阿霉素抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA—MB-231作用的影响及其机制

目的探讨生理浓度（10^-9mol／L）褪黑素和药理浓度（10^-5moL／L）褪黑素对阿霉素抑制雌激素受体阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231作用影响及其机制。方法（1）应用四甲基偶氮唑蓝（Mar）法检测经不同浓度褪黑素孵育后阿霉素对MDA—MB-231的抑制率和IC50变化。（2）应用流式细胞学方法观察不同浓度褪黑素、阿霉素以及两药联用时对MDA-MB-231细胞周期分布和凋亡的影响。（3）应用western blot法检测不同浓度褪黑素、阿霉素单药和两药联用对MDA—MB-231细胞p53和bcl-2蛋白表达的影响。结果（1）阿霉素对乳腺癌MDA—MB-231细胞具有明显的抑制作用,且呈剂量时间依赖性。IC50值为（1．00±0．09）μg／ml,经生理浓度和药理浓度褪黑素孵育后IC50分别降为（0．85±0.06）μg／ml和（0．47±0．03）μg／ml,前者与孵育前相比未,差异无统计学意义（P〉0．05）,后者相比差异无统计学意义（P〈0．01）。（2）流式细胞学检测结果显示,阿霉素对细胞MDA．MB-231有凋亡促进作用,随浓度增高凋亡率未见增加（P〉0．05）。生理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度的阿霉素单药相比,凋亡率未见明显增加（P〉0．05）。药理浓度褪黑素联合阿霉素与相应浓度阿霉素单药比较,凋亡率明显提高（P〈0．05）,但联合组随着阿霉素浓度增加凋亡率并未见明显变化（P〉0．05）。（3）MDA-MB-231乳腺癌细胞株中呈p53蛋白低表达、bcl-2蛋白高表达。药理浓度褪黑素可显著增高细胞p53蛋白并降低bcl-2蛋白表达（P〈0．01）。药理浓度褪黑素联合不同浓度阿霉素对两蛋白表达未见显著性差异（P〉0．05）;阿霉素对两种蛋白表达未见明显影响（P〉0．05）。结论（1）生理浓度褪黑素（10^-9mol／L）对阿霉素的抗雌激素受体阴性乳腺癌细胞作用未见明显影响,药理浓度（10^-9mol／L）以上褪黑素表现出对阿霉素明显的增敏作用。（2）阿霉素较低浓度时,凋亡促进作用可能是褪黑素对其增敏机制的一部分,随着阿霉素浓度的提高,褪黑素的细胞毒增敏机制可能占主要地位。（3）药理浓度褪黑素能提高雌激素受体阴性乳腺癌细胞p53蛋白表达并降低bcl-2蛋白表达,并具有剂量依赖性。涉及p53和bcl-2的凋亡通路可能是褪黑素对阿霉素增敏机制的一部分。     

9-顺维甲酸联合细胞毒性药物对SH-SY5Y神经母细胞系增殖及诱导凋亡的影响

目的：探讨9-顺维甲酸联合细胞毒性药物对SH—SY5Y神经母细胞系增殖及诱导凋亡方面的作用，为9-顺式维甲酸治疗神经母细胞瘤可能有效方案的设计提供实验依据．方法：1）采用MTT比色法测定不同单药组和双药组在不同时间及不同浓度下SH—SY5Y细胞的抑制率；2）采用流式细胞仪测定不同单药组和双药组在不同时间及不同浓度下SH—SY5Y细胞的凋亡指数。结果：1）DDP＋RA双药组中，低剂量组在24和48h以及高剂量组在48h细胞抑制率较相应DDP单药组高（P〈0．01）；UP-16＋RA双药组中，低、高剂量组在24h细胞抑制率较相应LIP—16单药组高（P〈0．01）；DDP＋RA和UP—16＋RA双药组（除了低剂量DDP＋RA组在24h）细胞抑制率均高于RA组（500ng／孔）（P〈0．01）.2）单药组和双药组细胞凋亡指数均高于对照组（P〈0．01）；双药组细胞凋亡指数均高于相应单药组（P〈0．01），结论：细胞毒性药物与RA组合用药细胞抑制率和早期细胞凋亡指数较单药高，提示细胞毒性药物与RA在抑制细胞生长和诱导凋亡方面表现很好的协同作用.     

乳腺癌细胞共激活因子SRC-1的表达变化与内分泌治疗的关系

目的：观察三苯氧胺作用前后ERd阳性细胞株T-47D和ERd阴性细胞株MDA—MB-231中共激活因子SRC-1的表达变化,研究共激活因子与内分泌治疗的内在关系。方法：四氮甲唑蓝（M1Tr）观察两细胞的生存状况,以筛选最佳的药物作用浓度和时间。单细胞凝胶电泳法（Comet法）检测细胞凋亡。细胞免疫组化法观察TAM作用前后细胞中ER“和SRC-1的表达情况。Westernblot法检测TAM作用前后细胞中ERd和SRC～1的表达水平变化情况。结果：MTT法测得TAM作用后T-47D和MDA—MB-231的OD值下降,与对照组相比有屁著性差异（P〈0．05）,对T-47D效果更强。0．10mmol／LTAM作用48h后两种细胞的活力均出现最低值。单细胞凝胶电泳法观察到TAM作用后两组绌胞均发生凋亡、染色体断裂现象,尾长、尾DNA％、尾矩、Olive尾矩等指标在给药组与对照组之间有显著性差异,T-47D与MDA—MB-231组相比也有显著性差异（P〈0．05）。细胞免疫组化法检测T-47D细胞在TAM作用后ERα阳性细胞减少,SRC-1在作用前后均为阴性;MDA—MB-231细胞SRC-1表达阳性,TAM作用后,SRC-1阳性细胞比例上调,ERα仍为阴性。Westernblot结果显示TAM作用后,T-47D细胞ER仪表达水平略有下降,SRC-1表达水平未见改变;MDA—MB-231细胞SRC-1表达水平略有升高,ERα表达水平未见改变。结论：在ERα阴性细胞株MDA—MB-231中,共激活因子SRC-1有较高水平表达。0．10mmol／LTAM作用于乳腺癌细胞MDA—MB-23148h后SRC-1表达轻微上调,此变化可不依赖于ERα的表达。     

地西他滨联合柔红霉素对HL-60细胞株凋亡作用的探讨

目的观察小剂量地西他滨（DAC）单用或联合柔红霉素（DNR）对白血病细胞株HL-60的凋亡作用及对抑癌基因PTENmRNA表达的影响。方法以不同浓度的DAC、DNR单药及联合处理HL．60细胞株,应用四甲基偶氮唑蓝（M1Tr）法、流式细胞术检测不同时相药物对细胞的凋亡作用;采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ—PCR）技术检测不同浓度组中HL-60细胞PTENmRNA表达。结果DAC、DNR单药对HL-60细胞的生长抑制作用呈剂量、时间依赖性,联合用药组的抑制作用则更为明显[72h抑制率为（80．23±1．71）％,P〈0．001];5．0μmol／LDAC联合1．0μmol／LDNR作用72h细胞凋亡率最高,抑制作用均较DAC和DNR单药组明显（F=30．199,P〈0．001）;不同浓度DAC与DNR联用后,细胞PTENmRNA表达量增加,呈浓度依赖性,明显高于对照组及DNR单药组（F=578．218,P〈0．001）。结论DAC能显著抑制HL-60细胞的增殖并诱导其凋亡,与DNR联合对HL-60细胞增殖抑制作用有协同效应,其机制可能与DAC的去甲基化作用使PTENmRNA的表达量增加有关。     

转基因溶瘤性单纯疱疹病毒对人类乳腺癌的治疗作用

目的通过观察溶瘤性单纯疱疹病毒（HSV）载体G47A对人类乳腺癌细胞系SK—BR-3、MDA—MB-453和MDA—MB-231的细胞毒效应,探讨其对人乳腺癌的治疗作用。方法体外培养人乳腺癌细胞SK—BR-3、MDA—MB-453和MDA—MB-231,将G47A按不同滴度（MOI）加入培养液中,每天观察细胞的生长状态。G47△含有LacZ基因,其在被感染细胞中的表达可用X-gal染色检测。结果较低MOI（0．01）的G47△对SK—BR-3和MDA—M13-453具有较高的毒性,但对MDA—MB-231没有杀伤作用。在MOI=0．01的实验组,感染病毒后第5天,超过90％的SK—BR-3和MDA—MB-453细胞已被杀灭;但在MOI=0．01组及MOI=0．10组,MDA—MB-231感染G47△后细胞数量与对照组相比均无差异。采用X—gal染色证实了病毒在癌细胞中复制和传播。结论近期构建的HSV载体-G47△可有效杀灭人乳腺癌细胞SK—BR-3和MDA—MB-453,但未显示出对MDA-MB-231的影响。G47△的有效性及缺陷为新型溶瘤性单纯疱疹病毒G47△用于乳腺癌治疗的临床试验提供有力依据,但其应用尚需进一步研究。     

伊班膦酸钠对人乳腺癌细胞系MDA-MB-231、MDA-MB-453的体外生长抑制作用

目的：研究伊班膦酸钠（IBN）对体外培养的人乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA—MB-453细胞生长增殖的影响及其潜在的作用机制。方法：采用MTT法检测不同浓度的IBN、及相同浓度不同作用时间的IBN对MDA—MB-231、MDA—MB-453两类不同的人乳腺癌细胞系生长增殖的影响；应用流式细胞仪检测不同浓度IBN作用下，MDA—MB-231、MDA—MB-453细胞细胞周期的变化。结果：在（10～100）μg／ml的浓度范围内，IBN对MDA—MB-231、MDA—MB-453细胞生长增殖均有抑制作用（P〈0．01），抑制效果与IBN浓度呈剂量依赖性，与其作用时间呈时间依赖性；IBN可使细胞明显阻滞于S期，G2／M期细胞比例则明显减少，且呈剂量依赖趋势。结论：在（10～100）μg／ml的浓度范围内，IBN对体外生长的人乳腺癌细胞MDA—MB-231、MDA—MB-453产生剂量、时间依赖性的抑制作用，其机制可能与其将细胞阻滞在DNA合成的S期，阻碍肿瘤细胞分裂增殖有关。     

地西他滨联合三氧化二砷对NB4细胞凋亡作用的研究

 目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作目的　研究去甲基化制剂地西他滨（DAC）单用或联合三氧化二砷（As2O3）对NB4细胞凋亡的作用机制。方法　将不同浓度的DAC、As2O3以及两药联合作用于NB4细胞,不加药为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测细胞增殖抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡。结果　DAC与As2O3单药对NB4细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性（DAC 1 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别为12.18 %、22.72 %、35.54 %;DAC 2 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为22.14 %、31.18 %、45.21 %;As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别21.09 %、32.43 %、44.93 %;As2O3 1.0 μmol／L作用24、48、72 h的抑制率分别增高为31.69 %、41.12 %及54.27 %）,两药联合抑制作用较单药明显（DAC 1 μmol／L+As2O3 0.5 μmol／L作用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。用24、48、72 h抑制率分别为42.10 %、48.75 %、60.78 %）（P＜0.05）,各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（P值均＜0.05）;As2O3 1 μmol／L作用于NB4细胞株48 h可见5.8 %的细胞凋亡,联合组增高为17.3 %。结论　DAC能显著抑制NB4细胞的增殖并诱导其凋亡,DAC联合As2O3对NB4细胞增殖抑制及诱导凋亡有协同作用。     

低剂量地西他滨联合伊马替尼对K562细胞的增殖抑制作用

 目的　研究低剂量地西他滨（DAC）联合伊马替尼（IM）对K562细胞株的增殖抑制作用及对bcr-abl表达的影响。方法　单药及两药联合后,通过四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察药物对K562细胞株的增殖抑制作用,流式细胞术检测药物对K562细胞株早期凋亡率及细胞周期,巢式反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）半定量检测药物对K562细胞株bcr-abl mRNA表达。结果　DAC与IM单药对K562细胞的抑制作用呈浓度时间依赖性。两药联合用药抑制作用较单药组明显（F＝43.947、165.580、321.193、296.101,均P＜0.05）,24、 48、72 h各浓度组与对照组比较差异均有统计学意义（F＝202.759、168.457、417.538,均P＜0.05）。DAC及IM单药作用药物对K562细胞株均使G1期细胞明显增多,IM 0.2 μmol／L作用于K562细胞株48 h可见6.7 %早期凋亡细胞,IM 0.2 μmol／L联合DAC 4 μmol／L早期凋亡细胞增加至8.4 %。bcr-abl mRNA表达水平降低,DAC 4 μmol／L作用48 h后可降低K562细胞中bcr-abl mRNA表达（约14 %）,IM 0.2 μmol／L降低约40 %,联合用药表达量明显降低（约60 %）。联合用药组与单药组比较差异有统计学意义（F＝71.981,P＜0.05）。结论　DAC 对K562细胞的增殖抑制作用与细胞周期阻滞、诱导凋亡及降低bcr-abl mRNA表达有关,两药联合可显著抑制K562细胞增殖。     

吉非替尼联合紫杉醇对食管癌细胞体内外生长抑制实验研究

目的：探讨吉非替尼联合紫杉醇对人食管癌细胞株Eta-109在体内外生长的影响及其可能机制。方法：按两因素析因设计试验,并应用MTT法观察单用吉非替尼、紫杉醇及联合应用对Eca-109细胞增殖的抑制作用,流式细胞术检测细胞周期和凋亡。按单因素影响设计,建立裸鼠人食管癌皮下移植瘤模型,并分为4组各10只,分别为对照组、紫杉醇组、吉非替尼组及吉非替尼＋紫杉醇联合组。经过不同处理4周后,切除瘤灶,称瘤质量,计算抑瘤率。结果：MTT法结果显示,药物干预72h后,各用药组与对照组比较,吸光度A值均减小,吉非替尼作用72h的半数抑制浓度为（1．72±0．27）μmol／L,紫杉醇的半数抑制浓度为（5．27±0．88）μmol／L。流式细胞术检测结果显示,4组G0／G1、S和G2／M期细胞比较差异均有统计学意义,P〈0．05;对照组Eca-109细胞的凋亡率为（9．69±1．42）％,紫杉醇组为（12．41±2．75）％,吉非替尼组为（22．0±4．26）％,吉非替尼＋紫杉醇联合组为（33．1±3．78）％,差异有统计学意义,P〈0．001。对照组肿瘤体积为（1．56±0．16）cm3,紫杉醇组为（0．81±0．15）cm3,吉非替尼组为（1．35±0．08）cm3,紫杉醇＋吉非替尼联合组为（O．54±0．11）cm3,差异有统计学意义,P＜0．05。结论：吉非替尼与紫杉醇合用对体内外食管癌Eta-109细胞具有显著的抑制作用,且强于药物单一作用。     

金雀异黄素诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的研究

目的 探讨金雀异黄素（genistein,GEN）诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的分子机制.方法 用0、5、10、20 μmol/L GEN处理MDA-MB-231 细胞24 h.采用CCK-8、Hoechst 33342染色和流式细胞仪测定不同浓度GEN对 MDA-MB-231细胞增殖和凋亡的影响.采用Western blotting检测不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas相关死亡域蛋白（FADD）、活性半胱天冬酶8（cleaved caspase-8）、Fas、FasL蛋白表达水平.采用实时RT-PCR分析不同浓度GEN处理前后MDA-MB-231细胞中Fas、FasL基因表达水平.多组均数比较采用方差齐性检验后进行单因素方差分析.结果 在GEN作用24 h后,0、5、10和20 μmol/L组对MDA-MB-231细胞增殖的抑制率分别为（3.00±1.41）%、（14.02±1.57）%、（27.5±1.52）%、（48.90±1.44）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=528.119,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.0、5、10和20 μmol/L组诱导MDA-MB-231细胞的早期凋亡率分别为（3.40±0.40）%、（9.34±1.34）%、（19.26±0.93）%、（27.41±1.12）%.与0 μmol/L组相比,5、10和20 μmol/L组呈浓度依赖性增加（F=379.573,P=0.000）.两两比较显示：各浓度组之间差异均有统计学意义（P〈0.05）.Western blotting结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FADD、cleaved caspase-8、FasL蛋白表达升高（F=368.621、456.744、419.129,P均=0.000）,Fas蛋白表达差异无统计学意义（F=0.800,P=0.528）;与10（μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL蛋白表达降低有统计学意义（F=92.235,P=0.001）.实时RT-PCR结果显示,与0 μmol/L组相比,其他浓度组经GEN处理的MDA-MB-231细胞FasL mRNA表达升高（F=646.983,P=0.000）,Fas mRNA表达差异无统计学意义（F=1.556,P=0.274）;与10 μmol/L组相比,20 μmol/L组FasL mRNA表达降低有统计学意义（F=52.562,P=0.020）.结论 GEN通过上调Fas/FasL途径中FasL基因表达诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡.     

SAHA对人卵巢癌SKOV3细胞转移潜能影响及其机制探讨

目的：观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂辛二酰苯胺异羟肟酸（suberoylan．1idehydroxamicacid,SAHA）体外对人卵巢癌SKOV3细胞转移潜能的影响,并探讨其可能机制。方法：体外应用SAHA作用于人卵巢癌SKOV3细胞,实验分为对照组、4μmol／LSAHA组、8／μmol／LSAHA组和12μmol／LSAHA组,划痕实验检测SKOV3细胞迁移能力,Tran—swell侵袭实验检测SKOV3细胞侵袭能力。蛋白质印迹法检测SKOV3细胞内组蛋白H4乙酰化水平,实时定量PCR方法检测SKOV3细胞uPA和uPAR基因ITIRNA表达。结果：经sAHA作用48h后,对照组以及4、8和12μmol／L组细胞Ac—H4表达量分别为0．10±0．04、0．21±0．05、0．40±0．05和0．72±0．04,Ac—H4表达量随sAHA剂量浓度增加而增加,P〈0．001;各组细胞划痕愈合率分别为（68．27±2．98）0A、（35．19±2．97）％、（18．82±2．96）％和（10．24±2．98）％,划痕愈合率随sAHA剂量浓度增加而降低,P〈0．001;各组细胞穿过Transwell滤膜的细胞数量分别为58．89±4．35、37．66±4．27、21．15±4．32和10．75±4．30,穿过Transwell滤膜的细胞数量随sAHA剂量浓度增加而减少,P〈0．001;各组细胞uPArnRNA表达分别为22．48±1．05、15．40±1．02、8．62±1．05和5．274±1．08,随着sAHA剂量浓度增加而降低,P〈O．001;各组细胞uPAR基因mRNA表达量分别为18．22±12、12．37±1．14、7．64±1．10和3．55±1．12,随SAHA剂量浓度增加而降低,P〈0．001。结论：SAHA可抑制人卵巢癌SKOV3细胞迁移和侵袭能力,提高组蛋白乙酰化水平,降低uPA和uPAR基因表达可能是其作用机制。     

PSCA表达及其单抗对PC-3M细胞生长与凋亡影响的观察

目的：观察前列腺干细胞抗原（prostate stem cell antigen,PscA）在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞的表达状况以及PSCA特异性单克隆抗体（PSCA—mAb）对PC-3M细胞生长和凋亡的影响。方法：采用细胞免疫化学方法检测PSCA在PC-3M的表达;以O～1．0／tg／mL浓度的PSCA—mAb作用PC-3M细胞0～96h,采用细胞生长曲线、四甲基噻唑氮蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术（flow cytometry,FCM）分析P＆3M细胞生长及凋亡的变化。结果：PSCA在PC-3M细胞膜和细胞质呈阳性表达;0．1／μg／mLPSCA—mAb作用时的细胞生长抑制率为（11．3±2．2）％,0．2／μg／mL为（27．5±3．4）％,0．4／μg／mL为（39．4±5．8）％,0．6μg／mL为（47．7±7．4）％,0．8μg／mL为（69．3±8．2）％,l.0〉g／mL为（70．8±9．3）％,细胞凋亡率为0．1／μg／mL为（8．7±1．4）％,0．2μg／mL为（12．3±2．8）％,0．4μg／mL为（21．6±3．2）％,0．6〉g／mL为（33．6±4．9）％,0．8g／mL为（41．4土5．8）％,1．0μg／mL为（42．3土6．1）％,均显著高于相应对照组细胞生长抑制率和凋亡率,P均〈0．01;PSCA-mAb作用PC-3M细胞24h的生长抑制率为（47．8士6．4）％,48h为（59．4±7．3）％,72h为（70．3±7．9）％,96h为（71．1±9．0）％,细胞凋亡率24h为（33．6±4．3）％,48h为（36．3±5．1）％,72h为（42．7±5．7）％,96h为（43．4±6．3）％,均高于相应的对照组细胞生长抑制率和凋亡率,P均〈O．01。MTT及FCM分析结果表明,PSCA-mAb在0．6μg／mL作用72h时,细胞生长抑审l率为（71．5±6．2）％,凋亡率为（44．4±5．5）％,均达到最大。结论：PSCA在人雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M细胞呈阳性表达;PSCA-mAb能够时间一剂量依赖性地抑制PC一3M生长和诱导其凋亡。     

氯化锂对卵巢癌细胞增殖凋亡影响及其机制探讨

目的：观察氯化锂（1ithiumchloride,LiCl）对卵巢癌sKOV3细胞增殖活性及凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法：使用20（A组）、40（B组）和60（C组）mmol／LLiCl处理sKOV3细胞,正常对照组用等体积的细胞培养基培养。采用CCK8法观察LiCl对卵巢癌SKOV3细胞增殖活性的影响;流式细胞仪检测LiCl作用后细胞周期变化及凋亡情况。蛋白质印迹法检测细胞糖原合成酶激酶-3β（glycogensynthasekinase317,GSK-3β）、磷酸化糖原合成酶激酶-317（phos—phorglation—glycogensynthasekinase3β,p-GSK-3β）及有丝分裂阻滞缺陷蛋白2（mitoticarrestdeficient2,MAD2）蛋白表达的变化。结果：不同浓度LiCl分别作用于SKOV3细胞48h后,A组细胞增殖活性为（80．64±1．06）％,与B组（57．18±1．56）％比较,差异有统计学意义,P=0．001;与C组（43．18±6．12）％比较,差异有统计学意义,P〈0．001。B组作用24h细胞增殖活性为（75．12±9．35）％,48h为（57．18±1．56）％,72h为（35．36±1．00）％,与24h组相比,48h组（P=0．158）和72h组（P=0．036）细胞增殖活性降低。LiCl能有效抑制SKOV3细胞增殖,呈时间与剂量依赖性。不同浓度LiCl作用96h后SKOV3细胞的凋亡率相对于对照组升高,A组为（7．82±0．87）％,P=0．037;B组为（21．09±1．57）％,P〈O．001;C组为（27．83士0．47）%,P〈O．001,差异均有统计学意义。不同浓度LiCl作用48h后,细胞出现了明显的G2／M期阻滞,G2／M期的比例由对照组的（10．23±1．50）％依次升高,A组为（19．9±4．16）％,P=0．352;B组为（30．29±0．51）％,P=0．045;C组为（39．32±1．11）％,P=0．009,差异有统计学意义。蛋白质印迹法检测结果显示,LiCl浓度升高,p-GSK-3β蛋白相对表达量升高,A组为（54．39±2．75）％,P=0．019;B组为（72．39土2．89）％,P=0．009;C组为（86．57±2．52）％,P=0．005,差并有统计学意义。LiCl浓度升高,MAD2蛋白相对表达量升高,A组为（52．29土1．34）％,P=0．041;B组为（58．35±1．36）％,P=0．030;C组为（72．07±2．93）%,4,P=0．006,差异有统计学意义。结论：LiCl能有效抑制卵巢癌SKOV3细胞的增殖,并诱导其凋亡;上调MAD2增强有丝分裂检测点功能,最终导致细胞G2／M期阻滞可能是LiCl抑制增殖促进凋亡的机制。     

辛伐他汀联合阿糖胞苷对K562细胞增殖与凋亡的影响

 目的　探讨辛伐他汀（SV）联合阿糖胞苷（Ara-C）对K562 细胞增殖与凋亡的影响。方法　不同浓度SV和Ara-C单用或者联合处理K562细胞,对照组为K562细胞。药物作用24、48、72 h后收集细胞,分别观察各组细胞形态,采用MTT法检测不同组别细胞的生长抑制率,采用流式细胞术检测细胞早期凋亡率、细胞坏死比例。结果　SV联合Ara-C组与单药组相比细胞形态明显有核固缩现象,且可见凋亡小体形成,并且随着处理时间的增加,抑制率也增大。其中15 μmol／L SV联合20 μmol／L Ara-C的细胞抑制作用最为显著,72 h细胞抑制率为（72±1）%,明显高于15 μmol／L SV组的（45±2）%和20 μmol／L Ara-C组的（44±0）%（P＜0.01）,表现为协同抑制作用（24、48 h金氏Q值为1.24和1.19）。流式细胞术检测发现20、15和 10 μmol／L SV组K562细胞早期凋亡率AnnexinV明显高于对照K562细胞（P＜0.01）,而且随着时间延长和剂量的增大早期凋亡率也增加（P＜0.05）。20和15 μmol／L SV组早期凋亡率均高于10 μmol／L SV组,而前两者之间差异无统计学意义（P＞0.05）。晚期凋亡细胞率（PI）各组中差异均无统计学意义（P＞0.05）。结论　SV 体外抑制K562细胞增殖及诱导细胞凋亡,SV 与Ara-C具有协同作用,增加了K562细胞对化疗药物的敏感性。15 μmol／L 可能为SV体外最佳作用浓度。