精子脱尾温育降低小鼠卵胞浆内单精子显微注射的受精率

目的 脱尾的精子头注射是小鼠显微授精的一种常用方法,脱尾对精子造成的膜损伤是否影响卵胞浆内单精子显微注射(ICSI)的受精率和卵裂率尚不清楚,该研究拟初步探索精子的机械脱尾等膜损伤以及不同温育条件对ICSI的受精率和卵裂率的影响.方法 首先,用机械吹打法处理小鼠精子悬液,使得部分精子脱尾,于不同温度下孵育,观察孵育温度对ICSI的受精率和卵裂率的影响;然后比较精子化学破膜与吹打脱尾处理后温育一定时间对显微授精的受精率、卵裂率的影响.结果 相对于对照组,对小鼠精子进行吹打脱尾,经37℃下温育12h后的显微授精双原核形成率和卵裂率显著下降(75.6％ vs 15.1％,P＜0.01;91.1％ vs 18.9％,P＜0.01),而4℃下温育12h的结果未见正常受精率和卵裂率受显著影响.用Triton-100精子进行化学破膜后温育,尽管其没有机械脱尾法效果显著,也同样明显降低了受精率和卵裂率(P＜0.01).结论 该研究初步提示,精子脱尾等破膜损伤在经37℃较长时间温育后会降低小鼠ICSI的受精率,常规小鼠ICSI操作中小鼠精子批量脱尾处理后不宜在37℃下放置过久.     

精子 DNA 完整率和精子顶体完整率及反应率对卵胞浆内单精子注射术结局的影响

目的：研究精子 DNA 完整率和精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率对卵胞浆内单精子注射术（ICSI）结局的影响。方法分析行 ICSI 治疗的102对不孕不育夫妇,观察精子 DNA 完整率[用精子 DNA 断裂指数（DFI）表示]、精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率对 ICSI 结局的影响。结果DFI、精子顶体完整率及反应率与 ICSI 受精率、卵裂率、优胚率均无相关性（P ＞0.05）;妊娠患者 DFI 低于未妊娠患者,差异有统计学意义（P ＜0.05）;妊娠患者精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率均高于未妊娠患者,差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论精子 DNA 完整率高（即 DFI 低）、精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率高有利于提高行 ICSI的临床妊娠率。     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

目的 为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。 方法 我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的DNA混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，48 h后收集II细胞期胚胎细胞。结果 (1) 精子可转染上外源DNA，转染率达53%；(2) 转染有外源DNA的精子可使II细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为11.5%。结论 小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源DNA转染并可作为载体将此外源DNA带入早期胚胎。     

脂质体介导外源基因体外转染精子的研究

为探索精子作为外源基因的载体建立转基因小鼠的可行性。方法我们从性成熟小鼠的输精管及部分附睾管中取出精子，与阳离子脂质体包裹的ＤＮＡ混合孵育之后将其注入超排卵小鼠的阴道内，４８ｈ后收集Ⅱ细胞胚胎细胞。结果（１）精子可转染上外源ＤＮＡ，转染率达５３％；（２）转染有外源ＤＮＡ的精子可使Ⅱ细胞期胚胎携带上外源基因，携带率为１１．５％。结论小鼠输精管及附睾管内的精子可被脂质体包裹的外源ＤＮＡ转染并可作为载体     

小鼠2种和人4种精子抗原免疫对小鼠妊娠的影响

目的:观察用小鼠和人不同的精子抗原免疫雌小鼠对妊娠影响.方法:用小鼠2种和人4种精子抗原免疫雌小鼠,采用酶标法检测血清抗精子抗体(AsAb),观察各组小鼠妊娠率及胎仔数.结果:随着主动免疫的进行,小鼠血清AsAb显著升高( P <0.01).精子抗原免疫小鼠8周后,小鼠精子混合抗原免疫小鼠效果最好,妊娠率为零,DTT提取的人精子膜抗原和人全精子抗原免疫小鼠效果较好,妊娠率为16.7%,显著低于正常对照组的63.6%( P <0.01或 P <0.05).结论:在人精子抗原中,DTT提取的人精子膜抗原和人全精子抗原免疫雌小鼠效果最好.在小鼠精子抗原中,DTT、NP-40、Triton-100提取的小鼠精子膜混合抗原免疫雌小鼠效果最好.     

睾丸与附睾精子 DNA 完整率及行 ICSI 结局的对比研究

目的：对比分析睾丸与附睾精子行卵胞浆内单精子注射术(ICSI)的结局及精子 DNA 完整率(用精子 DNA 断裂指数 DFI 表示)的差异。方法对来该院生殖中心就诊的183例梗阻性无精子症患者行 ICSI,将患者根据取精途径的不同分为两组,其中经皮附睾穿刺抽吸术(PESA)取精80个周期,经睾丸穿刺抽吸术(TESA)取精103个周期,对比两组精子 DNA 完整率及行 ICSI 的结局。结果两种方法精子 DNA 完整率和行 ICSI 时受精率、卵裂率、优胚率、妊娠率比较,差异无统计学意义(P >0.05)。结论睾丸及附睾精子的 DNA 完整率及行 ICSI 结局无显著差异,临床医生可根据个人经验或患者意愿选取精子行 ICSI助孕。     

PAMAM-D对异种移植用外源基因转染猪精子细胞的安全性研究

目的 研究应用PAMAM-D对异种移植用外源基因hDAF转染猪精子细胞的安全性.方法 制备PAMAM-D/hDAFcDNA复合物,将PAMAM-D及复合物与处理后猪精子细胞共孵育,经精子质量检测工作站检测孵育后的精子活力和精子畸形率.结果 经精子质量检测工作站检测,PAMAM-D和PAMAM-D/DNA复合物对猪精子细胞活力和精子细胞畸形率没有明显影响.结论 PAMAM-D及其复合物对猪精子细胞没有明显毒性,应用PAMAM-D制备异种移植用转基因动物是一种安全的方法.     

胞内精子注射法制备转基因爪蟾的研究

目的；研究爪蟾胞内精子注射法（intracytoplasmic sperm injection,ICSI)转基因技术的可行性。方法：取成熟雄蛙的睾丸分离纯化精子，用毛地黄皂甙（digitonin)崩解精细胞膜并制备精子浓缩液，然后与线性化报告基因载体pCMV-EGFP-N1共处理，最后将处理后的精子注射入从雌性爪蟾体内取出的未受精卵中，培养并观察，结果：制备的精子质量较高，稀释的精子注射入未受精卵后，卵的受精率为10％，受精卵活过神经胚的化率为20％，但都略微有点畸形。其中，绿色荧光报告基因EGFP的整合率为81％，但镜下未见绿色荧光蛋白的表达，结论：ICSI法是制备转基因爪蟾的简便可行的新途径。     

供精者冷冻精液参数对精子宫颈黏液穿透功能的影响

目的：通过检测冷冻精液相关参数,探讨影响精子宫颈黏液穿透功能的相关因素。方法选取41例准入合格的志愿供精者冷冻精液标本,按冷冻精子宫颈黏液穿透功能结果好、中、差不同分3组,对每组复苏后的供精者冷冻精液标本进行精液参数综合评估,包括精液常规、精子形态、精子的存活率（伊红Y染色）、精子膜功能、精子DNA完整性、精子顶体酶活性、酶活力指数等。采用方差分析以及3组之间两两比较进行统计分析。结果供精者冷冻精液解冻后前向运动精子百分率、精子膜结构与功能完整性在3组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。3组之间精子DNA完整性和精子顶体酶活性差异无统计学意义（P＞0.05）。结论供精者冷冻精液解冻后前向运动精子百分率、精子膜结构与功能完整性是影响精子宫颈黏液穿透功能的主要因素。精子DNA完整性和精子顶体酶活性对精子宫颈黏液穿透功能并不构成影响。     

精子脱氧核糖核酸损伤对辅助生殖技术治疗结局的影响

目的 探讨男性精子脱氧核糖核酸(DNA)损伤对常规体外受精(IVF)和卵胞浆内单精子注射(ICSI)治疗结局的影响.方法 选择235 对夫妇的154 个IVF 和88个ICSI周期,男方分别在女方获卵前和获卵日2次获取精液行精液常规检查和精子DNA 损伤(SDF)检测,统计IVF 和ICSI的受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率和临床妊娠结局.结果 获卵前和获卵日SDF 与IVF和ICSI周期的受精率、卵裂率、优质胚胎率、种植率均无显著的线性相关关系(P＞0.05).IVF 和ICSI周期临床妊娠和非临床妊娠的获卵前和获卵日SDF 水平差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 SDF与IVF 和ICSI 的胚胎结局无相关性,也不能预测IVF 和ICSI的妊娠结局.     

睾丸穿刺取精行卵胞浆内单精子注射的临床结局

目的:观察卵胞浆内单精子注射(ICSI)使用经皮睾丸穿刺取精(PTSA)、PTSA后冷冻精子及体外射出精子的临床结局.方法:对2009年2-12月接受ICSI治疗的168个周期进行回顾性分析.168个周期分为3组,体外射精组95个周期,PTSA组41个周期,PTSA后冷冻精子组32个周期.对这3组的受精、胚胎、妊娠情况...     

附睾、睾丸精子胞浆内单精子注射治疗无精症的研究

目的：评价附睾或睾丸精子抽吸胞浆内单精子注射治疗无精症的疗效。方法：对26例无精症患者配偶进行超排卵治疗30个周期，获卵当日从患者附睾或睾丸穿刺取精，进行胞浆内单精子注射（ICSI）。结果：共获卵325个，受精136个，受精率为53.1%，临床妊娠率为36.7%。结论：应用附睾、睾丸精子抽吸进行ICSI，为无精症患者提供生育机会。     

大鼠精子冷冻保存和卵胞浆内精子注射研究进展

许多哺乳类动物精子冷冻保存技术均已成功建立。然而,成功建立一套啮齿类动物精子冷冻保存程序还具有一定的挑战性。尤其是大鼠,因为其较长的精子尾巴,使得它的精子冷冻保存相当困难,并且大鼠的卵胞浆内精子注射(ICSI)技术也没有小鼠那样成熟。国内尚未见关于大鼠精子冷冻保存和ICSI的报道,国际上关于这方面的报道也较少。本文就这两方面的研究进展做一简要综述。     

大鼠精子冷冻保存和卯胞浆内精子注射研究进展

许多哺乳类动物精子冷冻保存技术均已成功建立。然而，成功建立一套啮齿类动物精子冷冻保存程序还具有一定的挑战性。尤其是大鼠，因为其较长的精子尾巴，使得它的精子冷冻保存相当困难，并且大鼠的卵胞浆内精子注射（ICSI）技术也没有小鼠那样成熟。国内尚未见关于大鼠精子冷冻保存和ICSI的报道，国际上关于这方面的报道也较少。本文就这两方面的研究进展做一简要综述。     

Intracytoplasmic Sperm Injection Fertilization Rate Does Not Depend on the Proportion of Round-headed Sperm,Small-acrosomal Sperm,or Morphologically Normal Sperm in Patients with Partial Globozoospermia

Background:

Generally, intracytoplasmic sperm injection (ICSI) may be the preferable method to treat partial globozoospermia, but whether there exist some correlations between ICSI fertilization rate and the proportion of round-headed sperm or morphologically normal sperm remains open. This study was to explore the correlation between ICSI fertilization rate and the sperm morphology in patients with partial globozoospermia.

Methods:

Thirty-four patients diagnosed with partial globozoospermia accepted the following assisted fertilization treatments – 2 cases accepted in-vitro fertilization (IVF) alone, 26 cases accepted ICSI alone, and 6 accepted split IVF/ICSI. Detailed morphological characteristics were described using Diff-Quik rapid staining. Sixty cases accepting IVF or ICSI treatment in our reproductive center were considered as the control group after being matched by relevant criteria. Fertilization rate, embryo quality, embryo implantation rate and clinical pregnancy rate were calculated.

Results:

Besides very high proportion of round-headed sperm, partial globozoospermia also showed very high proportion of small-acrosomal sperm and very low proportion of morphologically normal sperm. Fertilization rate of IVF (IVF alone plus split IVF) was very low in partial globozoospermia (25.4% ± 17.4%), but ICSI (ICSI alone plus split ICSI) achieved satisfying fertilization rate compared with the control group (66.2% ± 22.5% vs. 68.8% ± 29.4%, P > 0.05). In patients with partial globozoospermia, there were no correlations between ICSI fertilization rate and the proportion of round-headed sperm, small-acrosomal sperm, or morphologically normal sperm.

Conclusions:

There was high proportion of small-acrosomal sperm in partial globozoospermia. For patients with partial globozoospermia, ICSI is more preferable than IVF. ICSI fertilization rate does not depend on the proportion of round-headed sperm, small-acrosomal sperm, or morphologically normal sperm.     

过氧化苯甲酰对大鼠精子数量和功能的影响

目的:探讨过氧化苯甲酰对大鼠精子数量和功能的影响。方法:将40只雄性大鼠随机分为4组,其中1组为对照组,其余3组分别为过氧化苯甲酰低、中、高剂量组。16周后检测大鼠精子活动率、精子计数和精子畸形率等指标。结果:对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组的精子活力构成有差别(P<0.01),高剂量组精子活力最弱。对照组的精子活动率和精子计数均高于中、高剂量组(P<0.01),而对照组的精子畸形率低于中剂量组(P<0.05)、高剂量组(P<0.01),对照组无定形畸形发生率低于中、高剂量组(P<0.01)。结论:过氧化苯甲酰可能降低大鼠精子活动率和精子计数,增加精子畸形率。     

乙醇对实验小鼠精子DNA完整性与精子动态参数的相关影响

目的 探讨不同剂量乙醇对实验小鼠精子DNA完整性及精子动态参数的相关影响.方法 将60只SPF级昆明种雄性小白鼠随机分为4组,其中对照组给予5g/(kg·d)蒸馏水灌胃,低、中、高剂量组分别给予无水酒精(0.5 g/(kg·d)、2.5 g/(kg·d)、5 g/(kg·d)灌胃,连续20周.测定各组实验小鼠精子DNA完整性及精子动态参数的变化情况.结果 与对照组相比较,各剂量酒精组的精子DNA完整性明显高于对照组,精子动态参数均明显减弱,具有显著性差异(P＜0.01或P＜0.05).结论 长期摄入酒精可以造成精子DNA的损伤及精子动态参数出现不同程度异常,从而影响其生育能力.     

精子冷冻保存技术及研究进展

精子冷冻是辅助生殖技术的基础,能够有效的保存有价值的基因资源。文章回顾了近些年来国内外精子冷冻保存的重要研究成果,分析了精子的来源、冷冻预处理、冷冻和解冻方法、防冻剂的选择及其加入去除方式的选择等因素对精子冷冻效果的影响。文章还总结了精子冷冻效果的评价方法,展望精子冷冻技术的发展方向和应用前景。     

73例不育男性患者的精液及精子活力特点分析

目的：探讨不育男性中弱精子症患者精液及精子活力特点。方法：73例因不育前来检验精液的男性（年龄24～46岁）作为观察对象。检验过程参照临床检验操作规程，采用国产SQIAS－2000精子质量图文分析系统检测。结果：（1）精子活力特点：弱精子症48例（66％），精子活力正常20例（28％），无精子5例（6％）（2）液化情况：不液化12例（16％），不完全液化17例（23％），完全液化44例（61％）。其中弱精子症48例标本中有22例液化不全或不液化（45％）（3）其它：检出5例白细胞异常（6．8％），未检出红细胞异常标本。结论：本调查分析表明男性不育患者中弱精子患者占一半以上比例，精液液化情况，精液中的红细胞、白细胞对精子活力没有明显影响。     

睾丸抽吸取精术结合 ICSI 治疗无精子症的研究

目的:通过观察睾丸抽吸取精结合胞浆内单精子注射技术( TESA - ICSI)治疗无精子症的临床妊娠率,并与传统IVF、ICSI方法对比,以提高治疗无精子症的疗效.方法:选取不育症患者451例,将所有患者以助孕方法分为IVF、ICSI、无精子症三组,以睾丸体积和血清FSH将80例无精子患者分为三组(A组睾丸体积正常、血清FSH值正常;B组睾丸体积偏小,血清FSH值正常;C组睾丸体积小于正常,血清FSH值明显增高),三组患者均采用睾丸穿刺取精,并对获取精子者行TESA - ICSI助孕.结果:80例无精子症患者中,总共有42例成功获取精子,成功率为52.5％,其中A、B、C三组成功率分别为88.57％、47.37％、7.70％;其中29例成功妊娠,临床妊娠成功率为72.50％.IVF、ICSI组临床妊娠成功率分别为42.51％、47.62％,经x2检验分析,无精子症患者组临床妊娠率明显高于常规IVF组和ICSI组,差异有显著意义.结论:睾丸抽吸取精术结合ICSI技术是治疗无精子症的有效方法.