牙髓干细胞体外三维培养及生物学特性的研究

目的建立大鼠牙髓干细胞（DPSC）体外培养体系及分析研究细胞因子骨形成蛋白（BMP-2）对其生物学特性的影响。方法利用一步离心法形成细胞团块或聚集物建立DISC三维球状培养体系,观察细胞在培养过程中形态和细胞基质合成的变化,并分析研究细胞因子BMP-2对于三维培养DPSC增殖和分化的影响。结果三维培养的DPSC数目无明显增加,细胞基质沉积,ALP的含量增加,活性增高;在三维培养体系中,BMP能够增加ALP含量,且呈浓度依赖性。结论三维培养体系中形成的细胞外基质作为天然的支架,由BMP-2持续释放和保留,对今后的龋齿和牙髓治疗的临床应用有一定价值。     

牙髓干细胞修复周围神经损伤的研究进展

周围神经损伤(peripheral nerve injury,PNI)严重影响患者的生命质量及身心健康,并且损伤后的修复在临床上仍面临巨大挑战,PNI与再生修复研究是当今各相关学科研究的热点问题。细胞疗法在组织再生与修复中具有不可替代的作用。施万细胞是周围神经修复的理想细胞,但来源有限等缺点限制了其临床应用。牙髓干细胞来源于神经嵴,为神经再生提供了新的细胞来源。本文就牙髓干细胞修复PNI的研究现状进行综述。     

牙髓干细胞修复周围神经损伤的研究进展

周围神经损伤(peripheral nerve injury,PNI)严重影响患者的生命质量及身心健康,并且损伤后的修复在临床上仍面临巨大挑战,PNI与再生修复研究是当今各相关学科研究的热点问题。细胞疗法在组织再生与修复中具有不可替代的作用。施万细胞是周围神经修复的理想细胞,但来源有限等缺点限制了其临床应用。牙髓干细胞来源于神经嵴,为神经再生提供了新的细胞来源。本文就牙髓干细胞修复PNI的研究现状进行综述。     

牙髓干细胞对面神经损伤修复研究进展

面神经损伤严重影响患者的身心健康,近些年,利用干细胞治疗神经损伤受到广泛关注。牙髓干细胞因其具有多种优势,在神经损伤的修复治疗中显示出巨大的优势,为面神经损伤的治疗提供了新的思路。本文将概述牙髓干细胞对面神经损伤修复的研究进展和应用前景。     

生物治疗在牙髓损伤修复中的应用研究

安全有效的活髓保存治疗方法一直是牙体牙髓病学研究的热点,但现有的治疗方法都存在许多不足.生物治疗近年来发展迅速,其中基因治疗和干细胞治疗能有效促进组织的修复与再生,在牙髓损伤修复中已有不少应用研究,本文就这方面的研究进展作一综述.     

生物治疗在牙髓损伤修复中的应用研究

安全有效的活髓保存治疗方法一直是牙体牙髓病学研究的热点,但现有的治疗方法都存在许多不足。生物治疗近年来发展迅速,其中基因治疗和干细胞治疗能有效促进组织的修复与再生,在牙髓损伤修复中已有不少应用研究,本文就这方面的研究进展作一综述。     

脱落乳牙牙髓干细胞聚合体再生牙髓实验研究

目的    利用动物实验模型证明使用小型猪脱落乳牙牙髓干细胞（stem cells from minipig exfoliated deciduous teeth, SPED）聚合体进行原位牙髓再生的可行性。方法    分离和培养SPED,检测和分析其细胞生物学行为,进而诱导制备SPED聚合体;建立年轻恒牙牙髓坏死的小型猪动物模型,设置SPED聚合体再生组和传统根尖诱导成形治疗组;术后4个月进行常规组织学取材,利用HE、免疫荧光染色等方法观察牙髓再生和牙根尖形成情况。结果    SPED聚合体再生组受试牙齿组织学HE染色检测发现,牙根继续发育并形成正常的根尖形态,此外全长根管内可见类牙髓结构的再生组织,免疫荧光染色可见组织中CGRP、TRPV1、TRPM8表达阳性细胞的规则分布;而传统根尖诱导成形治疗组受试牙齿仅在根管内形成不规则的钙化组织,未见牙髓组织形成。结论    SPED聚合体在小型猪体内可以实现牙髓再生,同时再生牙髓具有正常组织学形态,而且具有牙本质形成和诱导根尖形成的生理功能。     

人牙髓干细胞无血清培养方法的研究进展

人牙髓干细胞是再生医学中的主要细胞来源之一,具有多向分化潜能,已经被应用于治疗多种疾病,包括Ⅰ型糖尿病、神经系统疾病等。为满足临床需求,牙髓干细胞需进行体外扩增。常规的牙髓干细胞体外扩增方法需要运用添加胎牛血清的培养基,但近些年来由于胎牛血清存在伦理和安全两方面的问题,推荐使用无血清培养方法。本文对无血清培养基培养人牙髓干细胞的组成及方法,及其培育出的细胞的特性和其他相关应用进行综述。     

牙髓干细胞的可塑性研究

牙髓干细胞的可塑性是将其应用于临床的基础.下面就牙髓干细胞的可塑性和影响可塑性的因素以及牙髓干细胞可塑性的应用和前景作一综述.     

促丝裂原激活蛋白激酶在牙髓干细胞向成牙本质细胞分化和牙髓损伤修复中的作用

通过诱导牙髓干细胞（DPSC）向成牙本质细胞方向分化,龋源性牙髓炎的治疗将不再局限于根管治疗这一临床选择,修复治疗也不再成为缺失牙治疗的唯一方案。促丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）,尤其是P38MAPK通过直接或间接磷酸化特定的转录因子,将细胞外刺激信号转导至细胞及其核内,从而引起一系列细胞生物学反应,如细胞增殖、分化、转化和程序性死亡。骨形态发生蛋白-2、矿物三氧化物聚合体和Biodentine皆可诱导DPSC向成牙本质细胞分化,而三者正是通过MAPK信号转导通路发挥作用的。在组织工程支架诱导DPSC分化过程中,支架材料通过激活P38MAPK信号转导通路促进了DPSC的分化。此外,MAPK信号转导通路参与牙髓损伤修复中DPSC的迁移、黏附和分化,参与牙髓损伤修复中牙本质的形成。由于MAPK信号转导通路在细胞增殖、分化和生存等过程中都起着十分关键的作用,因此,深入研究其反应分子、作用底物和作用机制有着重要的理论和临床意义。     

人牙髓干细胞的体外分离、培养及鉴定

目的 :体外分离、培养人牙髓干细胞 ,从不同角度对其进行鉴定。方法 :采用胶原酶和Dispase酶联合消化法培养人牙髓干细胞 ,有限稀释法分离纯化 ,将克隆形成的细胞通过透射电镜观察其超微结构、流式细胞仪细胞周期分析及抗波形丝蛋白 (Vimentin)、CD44、骨粘素 (ON)、牙本质涎蛋白 (DSP)免疫组化染色方法进行鉴定。结果 :通过有限稀释法获得了人牙髓干细胞克隆 ,透射电镜下观察这种克隆形成细胞具有干细胞典型的超微结构特点 ,大多数细胞处于G0 /G1期 ,为细胞周期的静止期 ,并具有牙源性未分化间充质细胞的表型特点。结论 :克隆化培养是人牙髓干细胞较为有效的分离纯化方法 ,该方法分离的人牙髓干细胞具有干细胞的结构、细胞周期及表型特点。     

大鼠牙髓干细胞的培养和鉴定

目的：分离培养大鼠牙髓干细胞并对其进行生物学鉴定。方法：采用单细胞克隆的方法进行大鼠牙髓干细胞的分离培养,并将达到一定数量级的牙髓干细胞与HA—TCP支架材料进行复合,移植入裸鼠背部皮下,8周后取材进行组织学鉴定。取鉴定成功的细胞株复苏进行细胞生物学特性研究,同时进行成牙本质细胞诱导并进行DsP、DMP1免疫组织化学染色一结果：单细胞来源的细胞克隆(RDPSC282)移植物组织切片可见牙本质牙髓复合体样结构。复苏细胞形态为梭形,细胞密集时形态多样,为卵圆形或多角形,细胞群体倍增时间为58．3h,克隆形成率为1．33％,免疫组化染色DSP、DMPl均为15月性,经矿化液诱导后部分细胞胞浆DsP及DMP1出现阳性染色。结论：首次成功分离培养出一株大鼠牙髓干细胞。     

体外成牙环境对牙髓干细胞和外胚间充质干细胞分化的影响

目的利用牙胚细胞（TGC）作为诱导成牙环境,将牙髓干细胞（DPSC）、外胚间充质干细胞（EMSC）分别与其共培养,观察DPSC和EMSC的分化能力。方法利用出生后4 d的大鼠TGC作为诱导成牙环境,将培养的DPSC、EMSC使用BrdU标记及鉴定后与其共培养,免疫荧光双标检测标记细胞表面抗原牙本质涎蛋白（DSP）的表达和碱性磷酸酶（ALP）活性的变化,免疫组化染色鉴定及图像分析DPSC、EMSC在成牙环境中的分化能力。结果共培养7 d后,EMSC共培养组DSP阳性细胞的转化率高于DPSC共培养组（P<0.05）。免疫组化染色图像分析结果表明共培养7 d后,共培养组与TGC单独培养组差异显著（P<0.05）。共培养组3、7 d后ALP活性明显增高,EMSC共培养组较DPSC共培养组ALP活性高。结论混合培养的TGC作为诱导细胞分化的微环境与DPSC、EMSC共培养后,能够诱导细胞向成牙本质细胞分化,EMSC分化能力高于DPSC。     

牙髓干细胞在牙髓组织中分布的研究

目的:通过特异性标志物研究牙髓干细胞(DPSC)在牙髓组织中的分布.方法:利用间充质干细胞特异性标志物STRO-1,外胚间充质干细胞(EMSC)标志物HNK-1,通过激光共聚焦技术,对DPSC在牙髓组织中的分布进行研究.结果:STRO-1抗原阳性细胞在牙髓组织中散在分布,在血管周围较为密集分布,成牙本质细胞层无分布;HNK-1抗原阳性细胞较密集分布在血管周围,成牙本质细胞层也有表达:在血管周围有二者共表达的细胞.结论:DPSC可位于血管周围,且在牙髓组织中有散在分布,与牙髓组织中残留的未分化间充质细胞分布相似,这些血管周围细胞标志物的表达揭示血管周壁可能是DPSC的微环境.     

牙髓干细胞分化的研究进展

牙髓干细胞(DPSC)是一种具有高度增生、自我更新能力和多相分化潜能的成体干细胞,在一定条件下可向特定的细胞类型分化,在牙髓修复和牙齿再生中发挥着重要的作用。本文主要就DPSC成骨向分化、成牙本质向分化的研究进展作一综述。     

大鼠牙髓干细胞可塑性研究

目的:研究大鼠牙髓干细胞向脂肪、神经、肌肉三个方向的横向分化能力。方法:采用地塞米松、IBMX、牛胰岛素和indomethacin对大鼠牙髓干细胞进行程序诱导,RT-PCR和油红O染色方法进行检测;采用bFGF和RDPSCs对大鼠牙髓干细胞进行诱导,RT-PCR方法进行检测;采用5-azacytidine对大鼠牙髓干细胞进行诱导,免疫组织化学染色和RT-PCR的方法进行检测。结果:经脂肪细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞出现脂肪细胞特异性PPARg阳性表达,油红O染色出现阳性脂滴颗粒;经神经细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞未出现预期的神经细胞特异性nestin表达;经肌细胞系诱导后,大鼠牙髓干细胞未出现预期的肌细胞特异性MHC表达,免疫组织化学染色肌动蛋白表达阴性。结论:大鼠牙髓干细胞经过一定的诱导后,可以向脂肪细胞方向分化,具有一定的可塑性;在常规诱导条件下,大鼠牙髓干细胞不能向神经、肌肉方向分化。