siRNA靶向抑制MACC_1对结直肠癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:采用小干扰RNA(siRNA)靶向抑制结直肠癌细胞中MACC_1的表达,观察其对肿瘤细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:Real time-PCR检测MACC_1在结直肠癌组织和细胞株中的表达水平;利用Lipofectmin2000将MACC_1特异性siRNA转染进入结直肠癌细胞株LoVo和SW620;利用Real time-PCR和Western blot法明确细胞中MACC_1在mRNA和蛋白水平上的表达变化;通过CCK-8法检测肿瘤细胞增殖水平的变化,并利用Transwell系统检测肿瘤细胞体外迁移和侵袭能力的变化。结果:MACC_1在结直肠癌中表达较正常肠黏膜显著升高;与阴性对照比较,MACC_1siRNA能够特异性抑制LoVo和SW620细胞中MACC_1基因的表达,并引起肿瘤细胞的增殖水平降低,迁移和侵袭能力减弱。结论:利用siRNA特异性抑制MACC_1的表达,可以降低结直肠癌细胞的增殖水平和侵袭能力。MACC_1是抗肿瘤转移治疗的重要潜在靶点。     

ZNF750在结直肠癌细胞增殖中的作用和分子机制研究

目的 探讨锌指蛋白750(ZNF750)在结直肠癌细胞增殖中的作用和分子机制。方法 用干扰siRNA转染结直肠癌细胞株SW620和LoVo,沉默ZNF750的表达;运用MTT实验和平板克隆实验检测ZNF750沉默成功的实验组细胞和对照组细胞增殖能力的差别;运用荧光定量PCR检测实验组细胞株中Kruppel样因子4(KLF4)的表达水平与对照组的差异。结果 MTT实验和平板克隆实验显示ZNF750沉默后,结直肠癌细胞的增殖能力较对照组明显增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。荧光定量PCR显示结直肠癌细胞株ZNF750沉默后,KLF4的表达水平下降,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 ZNF750抑制结直肠癌细胞的增殖,可能通过调控KLF4的表达参与结直肠癌的发生发展。     

稳定干扰长链非编码RNA LINC01224结直肠癌细胞株的建立及其对细胞凋亡的影响

目的 建立稳定干扰长链非编码RNA(lncRNA) LINC01224表达的结直肠癌LoVo和SW620细胞株,并探讨下调LINC01224表达对结直肠癌细胞凋亡的影响。方法 使用GEPIA2数据库分析LINC01224在结直肠癌组织中的表达情况;qPCR法检测LINC01224在10种人结直肠癌细胞中的表达水平。3种不同的LINC01224 siRNA分别转染人结直肠癌LoVo细胞,取抑制LINC01224表达效果最显著的siRNA序列构建LINC01224 shRNA慢病毒载体。在HEK293T细胞内包装成重组慢病毒颗粒,再感染LoVo和SW620细胞,经嘌呤霉素筛选后以有限稀释法获得稳定干扰LINC01224的单克隆细胞。MTS法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 LINC01224在结直肠癌组织中的表达高于正常结直肠组织,其在10种结直肠癌细胞中的表达也高于正常结直肠上皮细胞HCOEPic。siRNA-3对LoVo细胞内LINC01224表达的抑制率高于siRNA-1和siRNA-2。故选择siRNA-3设计LINC01224 shRNA。与对照组(sh-NC组)...     

结直肠癌中miR-106b增强肿瘤细胞放疗抵抗作用机制的初步分析

目的探讨结直肠癌中mi R-106b增强肿瘤细胞放疗抵抗作用机制。方法采用RT-PCR技术检测结直肠癌细胞株当中的mi R-106b的表达,分析其对放疗抵抗的影响。结果检测SW620细胞放疗敏感性,mi R-106b过表达之后SW620细胞的生存分数显著高于对照组(P0.05);检测mi R-106b抑制表达的SW480细胞放疗敏感性,mi R-106b稳定干扰之后SW480细胞的生存分数要显著低于对照组(P0.05);平板克隆实验结果表明,SW620/pl VTHM/mi R-106b细胞增殖能力显著强于SW620/pl VTHM细胞(P0.05)。结论 mi R-106b可以强化细胞抵抗射线导致的DNA损伤,提高细胞修复DNA的能力,最终强化结直肠癌细胞放疗抵抗作用。     

沉默CCL19对结直肠癌增殖、迁移、侵袭和促血管形成的影响

目的研究趋化因子CCL19在结直肠肿瘤中的作用。方法采用Real—TimePCR和Westernblotting技术筛选高表达CCL19的细胞株SW620细胞作为研究对象,并用siRNA沉默SW620中的CCL19基因。分别采用细胞增殖实验、Transwell迁移、侵袭实验和小管形成实验来检测SW620细胞的增殖、迁移、侵袭和促血管形成能力的变化。结果Westernblotting和Real—TimePCR证实SW620中CCL19相对其他细胞株高表达。经siRNA-CCL19干扰后,SW620细胞在48～120h内细胞增殖能力显著上升（P〈0．05）,细胞迁移、侵袭能力亦明显上升（P〈0．05）,促血管形成能力明显增强。结论SW620是相对高表达CCL19的细胞株,沉默CCL19基因后可以明显促进SW620细胞在体外的增殖、迁移、侵袭和促血管形成能力,因此认为CCL19在结直肠癌发展中起着抑制作用,并有应用于抗癌药物研究的前景。     

长链非编码RNAH19促进结直肠癌细胞株增殖的研究

目的 研究长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA) 家族分子母源性印迹基因19 转录因子(H19 )在结直肠癌组织及细胞株中的表达情况及其对人结直肠癌SW620细胞增殖的影响。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测20例结直肠癌组织及其癌旁组织,以及结直肠癌细胞株SW480、HCT116、SW620和正常结直肠上皮NCM460细胞中H19的表达。结直肠癌SW620细胞分别转染H19 siRNA(si-H19 组) 和阴性对照序列(si-NC组) ,分别采用流式细胞技术、细胞克隆形成实验和CCK8检测两组细胞的增殖情况。qRT-PCR和Western blot检测两组细胞G₁/S-特异性周期蛋白-D1(CyclinD1)和细胞周期素依赖激酶（cyclin dependent kinase 4, CDK4）的表达情况。结果 与癌旁组织和正常结直肠上皮NCM460细胞相比较,结直肠癌组织和细胞株中H19的表达水平升高（ P＜0.05);si-H19组细胞H19表达水平低于si-NC组,且细胞活力和细胞克隆数均低于si-NC组,以上差异均有统计学意义（ P＜0.05);同时,相较于si-NC组,si-H19组CyclinD1和CDK4基因和蛋白的表达受到了明显抑制（ P＜0.05)。结论 结直肠癌组织及细胞株中H19 呈高表达,沉默H19 表达能明显抑制结直肠癌细胞的增殖能力,为结直肠癌的靶向治疗提供了潜在策略。     

长链非编码RNA-ROR对结直肠癌SW620细胞增殖的影响

目的了解长链非编码RNA-ROR（LncRNA-ROR）在结直肠癌SW620细胞增殖中的作用。方法选择40例结直肠癌组织及相应正常组织（距肿瘤切缘5cm以外）,首先采用qRT-PCR技术检测LncRNA-ROR在结直肠癌组织中的表达情况,并分析其表达与病人临床病理因素的相关性。构建慢病毒载体LV5-ROR、LV5-Vector转染到结直肠癌细胞SW620中,验证LncRNA-ROR的表达,分析LncRNA-ROR过表达对结直肠癌细胞CCK-8功能及SW620平板克隆形成的影响。结果与正常组织比较,LncRNA-ROR在结直肠癌组织中低表达（P < 0.01）,其表达水平与TNM分期具有相关性（P < 0.05）。经转染筛选后,qRT-PCR检测证实SW620中的LncRNA-ROR表达增加,其高表达导致SW620增殖能力的下降（P < 0.01）。结论LncRNA-ROR的过表达抑制了结直肠癌细胞SW620的增殖。     

Lnczc3h7a对结直肠癌细胞增殖和迁移的影响及其机制

目的 分析Lnczc3h7a在结直肠癌细胞中的表达及其对结肠癌细胞增殖和迁移的影响,并探讨其潜在的作用机制.方法 选择6种结直肠癌细胞株SW620、SW480、HCT116、DLD-1、Caco-2、HT-29与正常结直肠上皮细胞株FHC,采用RT-PCR法检测Lnczc3h7a在结直肠癌细胞株及正常结直肠上皮细胞株中...     

手术切除的结直肠癌组织中的肿瘤干细胞的培养及鉴定

目的获得结直肠癌患者手术切除癌组织的肿瘤干细胞（CSC）,培养并鉴定其干细胞特性。方法通过原代培养手术切除 结直肠癌组织获得结直肠癌细胞,再通过有限稀释法和无血清培养法筛选结直肠癌CSC,软琼脂集落实验检测CSC和对照组人 结直肠癌细胞株SW480 的增殖能力;用低数量级细胞裸鼠皮下成瘤实验,检测结直肠癌CSC和SW480 的成瘤能力;并运用 Western blot及免疫荧光方法,检测CSC和SW480的免疫表型。结果临床结直肠癌标本原代培养的CSC,加入血清培养可使 CSC分化。软琼脂集落形成实验结果显示,原代培养的CSC克隆形成率为56.64%和54.45%,对照组人结直肠癌细胞株SW480 的克隆形成率为4.41%,CSC与SW480集落形成率的差异具有统计学意义（P<0.01）。裸鼠皮下成瘤实验中,原代培养的CSC 皮下注射500 个细胞可形成皮下瘤,而SW480 皮下注射500 个细胞不形成皮下瘤。CSC 表达CD133、CD44,不表达CK7; SW480细胞不表达CD133、CD44,表达CK7。结论原代培养的手术切除结直肠癌组织标本获得的肿瘤细胞,再行无血清培养 可形成CSC,鉴定具有CSC的自我更新及分化能力。     

普鲁卡因对结肠癌细胞中孕酮及脂联素受体3 甲基化的影响

目的 研究孕酮及脂联素受体3（PAQR3）在结肠癌细胞中的表达水平及甲基化状态,检测普鲁 卡因逆转PAQR3 甲基化的作用。方法 通过RT-PCR 检测PAQR3 在结肠癌细胞株（SW620、COLO205 及SW480）中的表达水平;甲基化特异性聚合酶链反应检测PAQR3 在结直肠癌细胞中的甲基化状态及药 物处理后的甲基化状态;Western blotting 检测不同浓度普鲁卡因处理SW480 细胞中PAQR3 蛋白的表达。 结果 PAQR3 在SW620 结肠癌细胞中的表达量高于COLO205 和SW480（P <0.05）。3 种结肠癌细胞株可 见PAQR3 基因甲基化特异性扩增产物条带,且甲基化百分比比较,差异有统计学意义（P <0.05）。SW620 细胞较SW480 和COLO205 细胞中PAQR3 甲基化百分比高（P <0.05）;普鲁卡因处理后3 种结肠癌细胞 株可见甲基化特异性扩增产物条带和非甲基化特异性扩增条带,且3 种细胞中PAQR3 甲基化百分比降低 （P <0.05）。对照组与实验组PAQR3 蛋白相对表达量比较,差异有统计学意义（P <0.05）。与对照组比较,实 验组PAQR3 蛋白相对表达量升高（P <0.05）。结论 PAQR3 在结直肠癌中低表达,可能与其发生启动子甲 基化有关。普鲁卡因可部分逆转结直肠癌细胞中PAQR3 甲基化状态,上调PAQR3 蛋白表达量。     

麻疹的双相移位研究进展

近年新生儿、婴儿、成人麻疹患者逐年增加,临床表现一般仍较典型,成年人麻疹患者全身中毒症状较重。麻疹抗体检测结果阳性是主要的诊断依据。麻疹发病的双相移位的机理可能是,免疫保护力不足,婴儿出生时麻疹抗体力低。孕期母传胎的麻疹抗体减弱,母经乳汁传给婴儿的抗体减弱,成人麻疹抗体水平逐年下降。预防措施是怀孕前给予育龄妇女麻疹疫苗接种,鼓励母乳喂养,麻疹疫苗计划免疫适当提前,在成人追加麻疹疫苗的免疫,加强病毒变异的研究等。     

正常增殖期子宫内膜细胞增生状态的定量观察

以＾３氢－胸腺嘧啶核苷放射自显影法及ＨＥ染色，观察并分别测定了１８例正常子宫内膜增殖中期，１５例增殖晚期的腺上皮细胞或间质细胞的标记指数、分裂指数。结果显示：子宫内膜增殖晚期腺上皮细胞或间质细胞之ＬＩ均明显高于增殖中期。同时，增殖晚间质细胞之ＭＩ也明显高于增殖中期，即此两种细胞在增殖晚期中增生明显，其增生状态初步获得了定位定量测定的正常值。     

尿微量白蛋白检测在继发性肾脏疾病中的临床意义

目的探讨尿微量白蛋白（m-Alb）检测在继发性肾脏疾病中的临床意义。方法采用Beckman Immage全自动特种蛋白分析仪对糖尿病组、高血压组、心脏病组患者进行了m-Alb测定,同时与健康组结果作对比。结果m-Alb检测糖尿病组为3.7±5.26mg/dl,高血压组为7.5±8.18mg/dl,心脏病组为7.8±3.76mg/dl,健康组为0.66±0.48mg/dl,各试验组m-Alb增高百分率为糖尿病组48.9%,高血压组37.5%,心脏病组26.9%。结论尿蛋白阴性的糖尿病、高血压、心脏病患者进行m-Alb检测,可以监测病程的进展。     

人工全髋关节置换术的手术配合

目的：介绍人工全髋关节置换术的手术配合做法;方法：主要在手术配合的六个方面,解决防感染、防栓塞等问题。结果：30例人工全髋关节置换术均获成功,结论：手术配合是护士责任心和基本功的全面体现,对提高手术效果有至关重要的影响。     

尿液pH值对红细胞检验影响的探讨

[目的 ]通过尿液 pH值对红细胞检验影响的观察 ,更加科学、准确地诊断血尿和血红蛋白尿。[方法 ]采用干化学分析仪检测和尿液显微镜红细胞计数 ,观察 180例正常人尿标本加入正常人血标本后 ,不同 pH值 ,不同时间内 ,观察红细胞溶解情况。 [结果 ]pH <5 .5以下时 ,随着时间的延长 ,红细胞溶解现象明显。 1h后观察有显著性差异 (P <0 .0 5 ) ;2h后有非常显著性差异 (P <0 .0 1)。[结论 ]pH <5 .5时对红细胞计数影响较大 ,易致红细胞发生溶解现象 ,出现假性血红蛋白尿 ,对血尿和血红蛋白尿很难区分 ,给临床诊断造成不便 ,更易引起漏诊和误诊。     

喉癌主癌灶手术切缘的临床特点分析

目的探讨研究喉癌主癌灶手术的安全切缘在临床上的特点。方法回顾性分析2007年6月—2011年3月已经确诊喉癌的患者100例,随机分成A、B两组,A组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取镜下观察分析;B组为观察组50例,主要采取手术切缘后,然后采取肉眼观察分析,将结果进行临床特点分析比较。结果早期的喉癌患者和晚期的喉癌患者的阳性切缘例数,差异无统计学意义（P〉0.05）;晚期的阳性切缘发生次数高于早期的阳性切缘发生次数,差异有统计学意义（P〈0.05）。声门上区[SG]2、3和5、10mm;跨声门型[TG]2、3mm和5、10mm的切缘对比,差异有统计学意义（P〈0.05）。SG、G、TG、IG的2mm和3mm,5mm和10mm对,差异无统计学意义（P〉0.05）。肉眼阳性切缘观察39个,镜下阳性切缘观察43,两者差异无统计学意义（P〉0.05）。结论依据原发不同部位、不同分期和不同范围选取适合的切线,就可以有效地减少阳性切缘的发生。     

儿童腹痛328例病因诊断及分析

目的：根据儿童急性腹痛的特点,诊断儿童腹痛应综合临床及相关检查提供的依据,做出准确诊断,给予适当治疗。方法：对临床328例腹痛患儿进行选择性辅助检查和分析。结果：小儿腹痛病因复杂,腹腔内疾病占64．63％,共17种病因;腹腔外疾病占35．37％,共6种病因。结论：仔细询问病史、认真体格检查、密切观察病情、针对性地选择辅助检查,在儿童腹痛的诊断上具有重要的意义。