抑制剂鱼藤素联合吡柔比星对膀胱癌T-24细胞的增殖抑制作用

目的 探讨Akt抑制剂鱼藤素联合吡柔比星(pirarubicin,THP)对膀胱癌T-24细胞株的增殖抑制作用及其机制.方法 将实验分成鱼藤素组、THP组和联合用药组,用MTT法检测鱼藤素、THP单独以及两者间不同浓度联合给药对T-24细胞的抑制作用,流式细胞术(FCM)检测细胞周期的改变.结果 MTT法显示与对照组比较,各组药物均可显著抑制T-24细胞的增殖,联合用药抑制效应增强.FCM检测发现,与对照组比较,鱼藤素、THP使细胞主要阻滞在G0/G1期,而联合用药使G0/G1期所占比例增加,S期比例减少.结论 Akt抑制剂鱼藤素能抑制T-24细胞的增殖,并增加THP对膀胱癌的化疗敏感性,这可能与联合用药能够将细胞周期阻滞在G0/G1期相关.     

蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖的抑制作用

目的 探讨蜂毒素对人膀胱癌T24细胞体外增殖抑制作用及机制,为蜂毒素用于膀胱癌的临床应用提供依据.方法 体外培养T24细胞,分别用0、2.5、5.0、7.5、10.0、12.5和15.0 μg/mL蜂毒素处理,采用四甲基偶氮(MTT)法检测细胞增殖的抑制率;倒置显微镜观察细胞形态;TUNEL染色检测凋亡率和RT-PCR检测Bax和Bcl-2的mRNA的表达.结果 蜂毒素处理后,T24细胞生长明显受到抑制,呈剂量依赖性;细胞出现典型的凋亡形态学改变;凋亡率随剂量升高以及Bax的表达升高而Bcl-2表达下降.结论 蜂毒素在体外能抑制人膀胱癌T24细胞的增殖,机制可能为诱导其细胞凋亡.     

nm23-H1基因转染对膀胱癌T-24细胞转移能力及化疗敏感性的影响

目的 探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力及化疗敏感性的影响.方法 将nm23-H1真核表达质粒通过电击穿孔转染技术导入人膀胱癌细胞株T-24, G418筛选阳性克隆,免疫组织化学方法检测nm23-H1基因的表达情况.Transwell小室和冲刷实验观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化.MTT法检测T-24细胞转染前后对化疗药物敏感性的变化.结果 以电穿孔技术将nm23-H1基因转入T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学结果显示T-24细胞株在nm23-H1基因转染前后其表达水平有明显差异;转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低.转染后T-24细胞对顺铂(CDDP)明显增敏.结论 nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用.nm23-H1基因能增强T24细胞对顺铂的化疗敏感性.     

不同能量等级钬激光照射对膀胱癌细胞株T-24增殖活性与凋亡的影响

目的观察不同能量等级钬激光照射人膀胱癌细胞株对膀胱肿瘤细胞增殖活性的影响与诱导肿瘤细胞凋亡中的作用。方法人膀胱癌细胞株T-24细胞以不同等级低剂量钬激光直接照射48h后,应用MTT法观察细胞增殖受抑制情况以及光镜下观察细胞形态学的改变;并根据结果选择适宜的钬激光能量值照射T-24细胞后,采用免疫荧光分析钬激光照射肿瘤细胞株后对肿瘤细胞增殖的抑制情况以及对细胞凋亡情况的影响。结果随着钬激光辐射能量的增大,细胞增殖抑制率上升,呈现出一定的剂量依赖关系。根据预试验结果选取钬激光能量值为800mJ辐射细胞株干预后48h采用普通光镜及荧光显微镜观察细胞形态均提示实验组细胞生长密度降低,与对照组细胞在形态学上差异明显,符合细胞凋亡的改变。结论体外细胞试验结果表明,采用钬激光照射人膀胱癌细胞株T-24,能够抑制肿瘤细胞增殖活性并诱发肿瘤细胞凋亡。     

鱼藤素抑制MCF-7、H1299增殖及下调微小染色体维系蛋白3、CDC45表达

目的 探究鱼藤素对MCF-7及H1299细胞的增殖作用,并从mRNA水平研究了鱼藤素对微小染色体维系蛋白3(MCM3)和CDC45在MCF-7及H1299细胞中的影响.方法 利用MTT法研究不同浓度的鱼藤素分别处理MCF-7和H1299细胞48、72、96 h后的抑制增殖作用;利用显微镜观察MCF-7和H1299细胞的生长状态;荧光定量PCR探究鱼藤素对MCF-7和H1299细胞中MCM3-CDC45表达的变化.结果 0.25、0.5、1、5、10、30、50μmol/L的鱼藤素作用MCF-7细胞48、72、96 h后,能明显抑制其增殖,且呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用MCF-748、72、96 h的IC50分别为9、3、2μmol/L;0.5、1、5、10、30、50、100μmol/L的鱼藤素作用H1299细胞48、72、96 h,抑制率呈浓度时间依赖性,鱼藤素作用H1299细胞96 h的IC50为2μmol/L.光学显微镜下,观察到药物处理组中,细胞数目减少,形态皱缩明显.鱼藤素干预MCF-7及H1299细胞,MCM3-CDC45的表达量减少.结论 鱼藤素可抑制MCF-7、H1299细胞增殖,并可下调细胞中MCM3和CDC45的表达.     

survivin 靶向siRNA 对膀胱癌细胞增殖和凋亡作用的体外研究

目的 观察靶向survivin的siRNA对膀胱癌细胞T-24增殖和凋亡的影响.方法 使用lipofectamineTM2000将靶向survivin的siRNA真核表达载体转染至膀胱癌细胞T-24,半定量RT-PCR检测T-24细胞survivin基因表达的变化;MTT法检测对T-24细胞增殖的影响;膜联蛋白V-PI(annexinV-PI)染色及流式细胞技术检测诱导凋亡的影响.结果 靶向survivin的序列特异性siRNA可以高效率抑制T-24细胞survivin基因在基因水平的表达,mRNA抑制率为61.73%;细胞重新接种24、48h后,其增殖抑制率分别为32.42%和37.48%;转染24h后可以诱导细胞凋亡16.76%.结论 利用RNA干扰技术沉默survivin基因表达可以显著抑制T-24细胞增殖,并在一定程度上诱导其自发凋亡,靶向survivin的RNA干扰技术在膀胱癌的基因治疗中具有一定价值.     

nm23-H1基因对 T-24细胞株侵袭、粘附和趋化性影响的实验研究

目的 探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达,观察nm23-H1对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力的影响。方法 ①采用已经通过基因工程技术构建的nm23-H1基因的真核表达载体,利用电穿孔基因转染技术将nm23-H1基因导入人膀胱癌T-24细胞,利用G418筛选、免疫组织化学、流式细胞方法检测nm23-H1基因的转录和表达情况。②利用Transwell小室和冲刷实验,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。结果以电穿孔转染技术将nm23-H1基因转染T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学和流式细胞结果显示T-24细胞株nm23-H1基因的传染前后表达水平有明显差异;发现转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低。结论 nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。     

鱼藤素对人骨髓瘤细胞 RPMI-8226 增殖和凋亡的影响

目的 观察鱼藤素对人多发性骨髓瘤细胞株 RPMI-8226 细胞增殖和凋亡的影响及其对核受体共激活因子-3 (SRC-3) 的调控作用,研究鱼藤素诱导凋亡作用与其调节 SRC-3 的相互关系。方法 采用 MTT 法检测细胞增殖活性,Annexin-V FITC/PI 双标法及 Hoechst 33258 染色法分析细胞凋亡的改变,RT-PCR 法检测鱼藤素对 RPMI-8226 细胞内 SRC-3 基因表达的影响;免疫组化法检测鱼藤素对 RPMI-8226 细胞 SRC-3 蛋白的影响和分布情况。结果 鱼藤素能明显抑制 RPMI-8226 细胞的增殖,其抑制作用呈时间、 剂量依赖性,其作用 24 h 的 IC５０为 (54.55±0.40) nmol/L。此外,鱼藤素具有较强的诱导 RPMI-8226 细胞凋亡的效应,25 nmol/L即能诱导(17.04±0.73)% 的 RPMI-8226 细胞发生凋亡;当药物浓度达到 100 nmol/L 时,总凋亡率达 (63.57±1.36)%。在 RPMI-8226 细胞中 SRC-3 高表达,且主要分布于细胞核,经鱼藤素干预后,SRC-3 的 mRNA 和蛋白表达水平明显下降。结论 鱼藤素能明显抑制 RPMI-8226 细胞的增殖,并诱导其凋亡。而鱼藤素诱导的 SRC-3 表达量的下调可能参与了其诱导凋亡作用。     

鱼藤素对U937细胞细胞周期及核孔蛋白Nup98和Nup88的调控作用

为探讨鱼藤素对人类白血病细胞株U937细胞体外抗癌作用的分子机制，采用MTT法检测细胞增殖活性，流式细胞术检测细胞周期分布，激光共聚焦显微镜检测Nup98和Nup88蛋白表达变化，免疫电镜和流式细胞术观测鱼藤素对Nup98和Nup88的调控，Western blot检测鱼藤素对U937细胞Nup98和Nup88蛋白表达的影响。     

T-2毒素对人肝癌HepG2细胞的增殖抑制作用及促凋亡作用

目的：探讨T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖的抑制作用和促凋亡作用。方法：选取对数生长期的人肝癌HepG2细胞,分为对照组（未给予T-2毒素）和实验组（给予0.25、2.50、25.00、250.00和2 500.00 μg·L^-1T-2毒素）。24 h后倒置显微镜下观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率,Hoechest 33258染色法观察HepG2细胞凋亡形态表现,检测各组HepG2细胞中caspase-3的活性。结果：T-2毒素作用HepG2细胞24 h后,倒置显微镜下观察,与对照组比较,实验组细胞数量明显减少,细胞皱缩变形。MTT法检测,与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率升高（P<0.01）。流式细胞术检测,与对照组比较,实验组SubG₁期细胞比例明显升高,细胞凋亡率明显升高。Hoechest 33258染色法检测,实验组细胞出现染色质固缩,细胞核呈致密浓染色的凋亡形态。实验组细胞中caspase-3活性明显高于对照组（P<0.01）。结论：T-2毒素对人肝癌HepG2细胞增殖具有明显的抑制作用,并能促进细胞凋亡。