rTNFα、rIL-1及rIL-1ra对人脐静脉内皮细胞释放IL-1的影响

用体外原代培养的人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）观察ｒＴＮＦα、ｒＩＬ－１对ＨＵＶＥＣ产生ＩＬ－１的诱导效应及重组ＩＬ－１受体拮抗剂（ｒＩＬ－１ｒａ）的抑制效应。结果表明，ｒＴＮＦα以剂量依赖的方式促进ＨＵＶＥＣ释放ＩＬ－１；刺激８ｈＩＬ－１的释放活性显著提高，２４ｈ达峰值。ｒＩＬ－１也可促进ＨＵＶＥＣ释放ＩＬ－１，随ｒＩＬ－１浓度的增加，ＩＬ－１的释放活性也增加，刺激４ｈ，ＩＬ－１的释放活性即可明显提高（Ｐ＜０．０１）。ｒＩＬ－１ｒａ可抑制由ｒＩＬ－１引起的ＩＬ－１释放，提高ｒＩＬ－１ｒａ的浓度，上清液中ＩＬ－１活性相应减低，当ｒＩＬ－１ｒａ浓度达１０ｍｇ／Ｌ时，ＩＬ－１的释放活性可完全抑制     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导肺上皮细胞分泌IL-8

目的 探讨蛋白酶激活受体（PAR）-2激动剂对人上皮细胞白细胞介素-8（IL-8）分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内。并分别用不同浓度的PAR-2激动剂，反PAR-2激动剂进行刺激。刺激时间为2h、8h和16h。用ELISA方法检测上清液中IL-8的分泌水平。结果 经过16h的培养。PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性IL-8的释放增加，tc-LIGRLO引起的最大IL-8释放量达基础分泌量的6倍。反PAR-2激动剂对IL-8释放的影响较小。时间相关曲线表明。PAR-2激动剂的作用从2h开始，16h达高峰。结论 PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞IL-8的促分泌剂。其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的探讨蛋白酶激活受体1（PAR1）激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介索-8（IL-8）分泌的影响。方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内，并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和／或凝血酶抑制剂水蛭索进行刺激，刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果经过16h的培养，SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加，增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍，RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放．凝血酶在浓度1kU／L时就可引起IL-8释放量增加，10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰，为基础分泌量的7．5倍。水蛭索可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明，PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加，16h达高峰。结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8，PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

TNF-α和IL-1β对人脐静脉内皮细胞 蛋白C受体mRNA表达的影响

目的：观察肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素 1β（IL-1β）对人脐静脉内皮细胞 （ECV304）蛋白C受体（EPCR）mRNA表达的影响。方法：通过体外培养ECV304细胞,分别以含 TNF-α和IL-1β的培养基孵育ECV304细胞,行剂量和时间依赖性实验。采用实时定量聚合酶链反 应（quantitative real-time PCR ）技术测定 ECV304 细胞 EPCR mRNA 的表达。结果：TNF-α和 IL-1β均能显著下调 ECV304 EPCR mRNA 的表达,并呈剂量和时间依赖性（P<0.05）。结论： TNF-α和IL-1β可能通过显著下调ECV304上EPCR mRNA的表达而成为损伤内皮细胞功能的一 个新作用机制。     

rTNFα,rIL—1及rIL—1ra及人脐静脉内皮细胞释放IL—1的影响

用体外原代培养的人脐静脉内皮细胞观察ｒＴＩＮＦα，ｒＩＬ－１对ＨＵＶＥＣ产生ＩＬ－１的诱导效应及重组ＩＬ１受体拮抗剂的抑制效应。结果表明，ｒＴＮＦα以剂是依赖的方式促进ＨＵＶＥＣ释放ＩＬ－１；刺激８ｈ，ＩＬ－１的释放活性显著提高，２４ｈ达峰值。     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌白细胞介素-8

目的 探讨蛋白酶激活受体1(PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞白细胞介素-8(IL-8)分泌的影响。方法 人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2和16h。用ELISA方法检测上清液中的IL-8水平。结果 经过16h的培养,SFLLR可引起浓度相关性IL-8的释放增加,增加到300μmol/L时诱导IL-8的释放量比基础分泌量增加了近16倍,RLLFS不能引起IL-8的释放增加。凝血酶也可引起浓度相关性IL-8释放,凝血酶在浓度1kU/L时就可引起IL-8释放量增加,10kU/L时诱导IL-8释放量达高峰,为基础分泌量的7.5倍。水蛭素可以抑制凝血酶对IL-8的释放作用。时间相关曲线表明,PAR1介导的IL-8释放从2h起即可引起增加,16h达高峰。结论 PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌IL-8,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用。     

蛋白酶激活受体-2激动剂对人皮肤和扁桃体肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶的影响

目的:研究蛋白酶激活受体-2(PAR-2)激动剂对人皮肤和扁桃体肥大细胞释放组胺和类胰蛋白酶的影响.方法:用PAR-2激动剂激发经酶悬浮的人皮肤和扁桃体肥大细胞,并分别测量类胰蛋白酶和组胺的释放量.结果:PAR-2激动剂丝-亮-异亮-甘-赖-缬(SLIGKV)可引起皮肤肥大细胞组胺释放,但对类胰蛋白酶释放无影响.相反,SLIGKV可引起扁桃体肥大细胞的类胰蛋白酶,而不是组胺释放.另外一种PAR-2激动剂反肉桂酰-亮-异亮-甘-精-亮-鸟-[酰胺](te-LIG-RLO-NH2)比SLIGKV-NH2诱导类胰蛋白酶和组胺释放的作用弱.结论:我们首次报道了皮肤和扁桃体肥大细胞具有在体外释放类胰蛋白酶的特性.皮肤和扁桃体肥大细胞释放类胰蛋白酶和组胺的差别揭示了一种新的肥大细胞对刺激产生反应的异质性的类型,提示人类肥大细胞至少有2种脱颗粒信号的自我放大机制.     

原代人脐静脉内皮细胞分泌IL-1的研究

为探讨内皮细胞作为抗原提呈细胞（APCs）的功能，培养原代人脐静脉内皮细胞（HUVEC），观察了其在某些因素影响下，分泌白细胞介素1（IL-1）的情况。结果表明，细菌脂多糖（LPS）可诱导HUVEC释放IL－1，增加LPS的浓度或延长其诱导时间，可提高IL-1的释放活性。γ干扰素（IFNγ）可协同LPS促进HUVEC释放IL－1。协同诱导的动力学表明：IFNγ对LPS诱导HUVEC释放IL－18h之前无明显效应，24h后，协同促进效应明显提高。     

胰蛋白酶对内皮细胞释放IL-10、IL-12和INF-γ的影响

目的研究胰蛋白酶对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）释放IL-10、IL-12和INF-γ释放的影响。方法分离、培养HUVECs,倒置显微镜观察原代细胞形态变化,免疫荧光染色检测蛋白酶激活受体2（PAR2）表达,ELISA法检测HUVECs培养上清中IL-10、IL-12和INF-γ水平。结果贴壁后的原代HUVECs经历呈圆形或类圆形、梭性和多角形的形态变化。HUVECs表达PAR2,荧光分布于细胞周边。胰蛋白酶诱导HUVECs上清中的IL-10和IL-12水平显著升高,INF-γ水平几乎未被检出。蛋白酶激活受体-2抑制剂能够降低胰蛋白酶诱导的IL-10和IL-12水平。结论胰蛋白酶可能通过PAR2激活促进内皮细胞释放IL-10和IL-12。     

外感寒湿对小鼠胰蛋白酶及蛋白酶激活受体2的影响

目的模拟中医病因学条件观察内外感寒湿对小鼠胰蛋白酶及蛋白酶活性受体2的影响。方法 SPF级昆明小鼠60只,随机分为正常对照组、寒湿组、湿邪组、药物组。每组15只。放入人工气候箱,连续7d后取材。应用免疫组化方法检测胰蛋白酶(Trypsin)水平,Western blot检测蛋白酶激活受体2(PAR-2)。结果与正常对照组比较,外感寒湿组小肠组织胰蛋白酶及蛋白酶激活受体2表达明显增高。结论外感寒湿能加重胰蛋白酶和蛋白酶活性受体2的表达。     

蛋白酶激活受体-2与哮喘

蛋白酶激活受体-2为一种细胞膜表面受体,属于G蛋白耦联受体家族,广泛分布于肺组织,具有较特异的激活方式.该受体与哮喘的关系正倍受关注,本文综述了其在哮喘发生与发展过程中所发挥的作用,显示在哮喘方面潜在的应用价值.     

类胰蛋白酶对微血管内皮细胞中IL-6和TNF-α表达的影响

目的研究肥大细胞类胰蛋白酶（tryptase）对小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd-3表达白细胞介素-6（IL-6）和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的影响以及可能的信号途径。方法bEnd-3细胞与不同浓度的类胰蛋白酶共同培养后,用RT-PCR和放射免疫的方法检测细胞及其上清液中IL-6、TNF-α mRNA和蛋白的表达量以及蛋白酶激活受体2（PAR-2）对其表达的影响。结果类胰蛋白酶上调bEnd-3 IL-6和TNF-α mRNA的表达和分泌,并呈时间和剂量依赖性,这一作用可能是通过激活细胞膜上的PAR-2而发挥的。结论肥大细胞类胰蛋白酶参与bend-3微血管内皮细胞的致炎性反应。     

蛋白酶激活受体-2与胃肠道运动和感知的研究进展

蛋白酶激活受体-2（proteinase-activated receptor,PAR）是G蛋白耦联受体家族成员之一,遍布整个胃肠道上皮细胞表面,易暴露于能使其激活的蛋白酶中,是体内许多消化道腺体外分泌的直接调控者,直接影响胃肠道动力。目前,蛋白酶激活受体独特的激活方式及其在消化系统中的广泛分布和复杂多样的生理作用,特别是蛋白酶激活受体-2与胃肠运动和感知的关系正受到广泛关注。     

内皮抑素抑制人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的实验研究

目的 :研究内皮抑素对体外培养的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)分泌白细胞介素 6 (IL 6 )和白细胞介素 8(IL 8)的抑制作用。　方法 :在建立HUVEC体外培养模型的基础上 ,将细胞分为自然分泌组和内皮抑素组进行培养 ,收集 1～ 9天的培养上清液 ,离心。采用双抗体夹心ELISA法对上清液中IL 6和IL 8进行定量测定。　结果 :在自然分泌组HUVEC培养上清液中检测出IL 6和IL 8,证实了在自然状态下内皮细胞能产生一定量的IL 6和IL 8,而且随着内皮细胞培养天数的增加 ,IL 6和IL 8的分泌量也随之增加。当细胞进入对数增长期后 ,IL 6和IL 8的分泌量接近峰值 ,分别为 (2 979.32± 19 6 5 )pg/ml和 (6 0 18.87± 5 6 .74)pg/ml。内皮抑素组较自然分泌组HUVEC培养上清液中的IL 6和IL 8水平存在显著差异。　结论 :内皮抑素能够很好地抑制内皮细胞的生长和增殖 ,降低内皮细胞的生物活性。     

内皮抑素抑制人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的实验研究

目的研究内皮抑素对体外培养的人脐静脉内皮细胞分泌IL-6和IL-8的抑制作用。方法将人脐静脉内皮细胞分为自然分泌组和实验组进行体外培养,收集第1~9天的培养上清液,采用双抗夹心ELISA法对上清液中IL-6和IL-进行定量测定。结果在自然分泌组人脐静脉内皮细胞培养上清液中检测出IL-6和IL-8,证实了在自然状态下内皮细胞能产生一定量的IL-6和IL-8,且随着内皮细胞培养天数的增加,IL-6和IL-8的分泌量也随之增加,当细胞进入对数增长期后,IL-6和IL-8接近分泌峰值,分别为(2979.32±19.65)pg/ml和(6018.87±56.74)pg/ml。加入内皮抑素的实验组培养上清液中的IL-6和IL-8水平较自然分泌组差异显著(P<0.01)。结论内皮抑素能够很好地抑制内皮细胞的生长和增殖并降低内皮细胞生物活性。     

蛋白酶激活受体2激动剂诱导上皮细胞分泌MCP-1

目的:探讨蛋白酶激活受体(PAR)-2激动剂对人上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)分泌的影响.方法:人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR-2激动剂,反PAR-2激动剂进行刺激.刺激时间为2,8和16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果:经过16 h的培养,PAR-2激动剂SLIGKV和tc-LIGRLO均可引起浓度相关性MCP-1释放增加,tc-LIGRLO引起的最大MCP-1释放量达基础分泌量的13倍.反PAR-2激动剂对MCP-1释放的影响较小.时间相关曲线表明,PAR-2激动剂的作用从2 h开始,16 h达高峰.结论:PAR-2激动剂是高效的人肺上皮细胞MCP-1的促分泌剂.其拮抗剂有可能具有抑制呼吸道炎症的作用.     

蛋白酶激活受体1介导人肺上皮细胞分泌MCP-1

目的探讨蛋白酶激活受体1(protease-activated receptors1,PAR1)激动肽和凝血酶对人肺上皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)分泌的影响.方法人肺上皮细胞系A549细胞分别接种于12孔培养板各孔内,并分别用不同浓度的PAR1激动肽SFLLR和反PAR1激动肽RLLFS以及不同浓度的凝血酶和/或凝血酶抑制剂水蛭素进行刺激,刺激时间为2、16 h.用ELISA方法检测上清液中的MCP-1水平.结果经过16 h的培养,PAR1激动剂SFLLR可引起浓度相关性MCP-1的释放增加,增加到300μmol/L时诱导MCP-1的释放量比基础分泌量增加了近12倍,反PAR1激动剂RLLFS不能引起MCP-1的释放增加.凝血酶也可引起浓度相关性MCP-1释放,凝血酶在浓度3 000 U/L时就可引起MCP-1释放量增加,10 000 U/L时诱导MCP-1的释放量达高峰,为基础分泌量的5倍.凝血酶抑制剂水蛭素可以抑制凝血酶对MCP-1的释放作用.时间相关曲线表明,从2 h起即可引起PAR1介导的MCP-1释放增加,16 h达高峰.结论PAR1激动肽和凝血酶可促进人肺上皮细胞分泌MCP-1,PAR1拮抗剂和凝血酶抑制剂可能具有抗炎作用.     

凝血酶蛋白酶激活受体-1作为转移性黑色素瘤治疗潜在靶点的研究进展

黑色素瘤由于转移性强,成为皮肤癌中死亡率最高的恶性肿瘤之一,目前没有有效的治疗方法。凝血酶蛋白酶激活受体-1（PAR-1）在黑色素瘤的发病过程中起到重要作用,PAR-1通过激活肿瘤细胞黏附和侵袭以及新生血管因子生成促进黑色素瘤转移。PAR-1有望成为治疗转移性黑色素瘤药物新靶点。     

急性肺损伤大鼠蛋白酶激活受体-1表达及其机制

目的 探讨肺损伤后蛋白酶激活受体1(protease-activated receptor-1,PAR-1)的表达情况及其与炎症因子之间的关系.方法 腹腔注射内毒素的方法复制大鼠肺损伤的模型,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测PAR-Ⅰ mRNA表达,HE染色观察肺组织病理变化,酶联免疫吸附(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测炎性因子的改变.结果 内毒素肺损伤时,PAR-1 mRNA随着脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)干预时间的延长表达逐渐增加.肺内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、金属基质蛋白酶-12(matrix metalloproteinase-12,MMP-12)升高与PAR-1的水平密切相关.结论 PAR-1的表达与TNF-α,MMP-12相关,PAR-1的抑制剂减少了肺组织MMP-12和TNF-α的释放,可能具有抗炎作用.