渗透压选择性裂解法在MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性标本中的应用

摘要：目的?采用渗透压选择性裂解法联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接鉴定阳性血培养瓶中病原菌，为临床早期诊断和治疗提供可靠依据。方法?收集2018年12月至2019年3月杭州迪安医学检验中心微生物室送检的阳性血培养瓶179例，采用渗透压选择性裂解法直接进行MALDI-TOF MS检测。结果?血培养阳性标本经裂解离心、甲酸萃取后得到的谱峰丰度最高，鉴定分值最优；174份单种菌血培养的种、属水平鉴定的符合率分别是67.8%(118/174)、85.1%(148/174)。革兰阴性杆菌的种、属水平鉴定的符合率是74.7%(62/83)、91.6%(76/83)，革兰阳性球菌的种、属水平的鉴定符合率是69.4%(50/72)、80.6%(58/72)，革兰阳性杆菌鉴定种水平的准确率显著低于革兰阴性杆菌(P<0.05)和革兰阳性球菌(P<0.05)。结论?MALDI-TOF MS采用渗透压裂解法对血培养阳性标本直接鉴定，具有简单、快速的优点，但其对菌种鉴定的准确性以及前处理步骤优化方面仍然需要进一步研究。     

MALDI-TOF MS直接鉴定血培养阳性病原的临床应用

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)直接快速检测血培养报阳样本的可行性.方法 收集同济大学附属同济医院报阳血培养样本682例,从血培养瓶直接抽取血液至分离胶采血管离心富集细菌后,采用MALDI-TOF MS进行直接鉴定(快速质谱法).同时对报阳血培养标本进行涂片镜检及转种培养后,分别采...     

革兰染色与MALDI-TOF MS在快速鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的应用

目的 分析革兰染色与基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）在快速鉴定儿童阳性血培养病原菌种类中的应用价值,为儿童血流感染诊断提供快速、准确的实验室依据。方法 收集2019年2月—2020年10月首都医科大学附属北京儿童医院临床送检的儿童阳性血培养瓶,同时进行革兰染色镜检、MALDI-TOF MS快速鉴定和转种培养,以转种培养后的鉴定结果为标准,对革兰染色镜检和MALDI-TOF MS快速鉴定结果进行比较。结果 共收集166例儿童阳性血培养样本,其中单一菌样本占97.6%(162/166),2种菌样本占2.4%(4/166)。以转种培养后的鉴定结果为标准,162例单一菌样本革兰染色镜检结果符合率为97.5%(158/162),其中革兰阳性菌符合率为97.9%(93/95),革兰阴性菌符合率为96.8%(61/63),酵母样真菌符合率为100.0%(4/4);MALDI-TOF MS快速鉴定结果符合率为85.2%(138/162),其中革兰阳性菌符合率为81.1%(77/95),革兰阴性菌符合率为92.1%(58/63),酵母样真菌符合率为75.0%(3/4)。4例2...     

MALDI-TOF MS在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值

目的 了解基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)联合HB&L微生物培养系统(简称HB&L系统)在人工关节置换术后病原菌快速鉴定中的价值.方法 收集104例人工关节置换术后患者关节液样本,分别接种于血培养瓶及常规培养琼脂平板,将阳性培养物分别进行2种直接MALDI-TOF MS鉴定、常规MALDI-...     

MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的应用进展

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)已经发展成为微生物实验室鉴定菌种的常规工具。MALDI-TOF MS在微生物学耐药性检测中的应用尚处于研究阶段。该文就MALDI-TOF MS在细菌耐药性检测中的方法及其适用病原体的研究现状做一综述。     

MALDI-TOF MS直接涂靶法快速鉴定丝状真菌的临床应用

目的评价基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱直接涂靶法（质谱直涂法）快速鉴定丝状真菌的临床应用价值。方法对2010年1月至2017年12月首都医科大学附属北京同仁医院临床标本中分离的133株丝状真菌分别进行形态学、基因序列分析及质谱直涂法鉴定，并将鉴定结果进行分析比较。 采用SPSS 16.0软件进行统计分析，计数资料采用χ2检验。结果以基因序列分析结合形态学鉴定的结果为标准，将133株丝状真菌鉴定到种、复合群和属的鉴定率:质谱直涂法分别为64.66%、79.70%和96.24%，基因序列分析则分别为69.17%、83.46%和99.25%，而形态学鉴定分别为68.42%、84.21%和93.23%。 质谱直涂法与另外两种方法的种、复合群和属的鉴定率的差异无统计学意义（χ2值分别为0.611、0.625、2.728和0.516、0.915、1.206，P值均＞0.05）。 质谱直涂法将77株曲霉属中61.04%、88.31%和98.70%的菌株分别鉴定到种、复合群和属，将14株青霉属中64.29%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属，还将42株其他丝状真菌中的71.43%和92.86%的菌株分别鉴定到种和属；因数据库中真菌种类不足，致3.76%（5/133）的真菌无效鉴定。结论MALDI-TOF MS直接涂靶法鉴定丝状真菌的能力可与形态学鉴定和基因序列分析相媲美，因其快速且操作简便，临床应用值得推广。     

优化差速离心法在血培养报警瓶MALDI-TOF MS细菌鉴定中的应用

目的评价用于血培养报警瓶基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(matrix assisted laser desorptionionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)细菌直接鉴定的前处理方法。方法建立优化差速离心法流程。收集首都医科大学附属北京同仁医院2015年10月至12月外周血培养报警标本100例(均为单一菌),以转种培养后菌落MALDI-TOF MS鉴定为金标准,对比差速离心法优化前后、BRUKER SEPSITYPER试剂盒(简称试剂盒法)鉴定结果,评价优化差速离心法的准确率。收集2016年1月至10月外周血及体液培养报警标本516例(经革兰染色确认为细菌),对优化差速离心法进行大样本应用研究。结果优化的差速离心法、试剂盒法及优化前的差速离心法鉴定准确率分别为97%、94%及92%,差异无统计学意义;优化的差速离心法鉴定分值2.0的例数则多于其他两种方法,与优化前相比差异具有统计学意义(χ~2=3.916,P=0.048)。516例样本单一菌486例,混合菌30例。优化的差速离心法鉴定准确率为92.2%(476/516)。外周血及其他体液样本鉴定准确率分别为96.5%(179/289)、86.8%(197/227),差异有统计学意义(χ~2=16.92,P0.01)。单一菌鉴定准确率为97.1%(472/486),其中革兰阳性球菌和阴性杆菌分别为96.9%、99.1%,均明显高于阳性杆菌(55.6%),差异有统计学意义(χ~2=25.329,P0.01;χ~2=48.526,P0.01)。混合菌鉴定准确率为13.3%(4/30)。体液样本混合菌比例为11%(25/227),显著高于外周血[1.7%(5/289),χ~2=20.008,P0.01]。结论优化差速离心法鉴定率高、成本低、易操作,优于试剂盒法,对单一细菌MALDI-TOF MS血培养报警直接鉴定更具临床应用价值。     

SDS和SAP前处理联合MALDI-TOF MS在报阳血培养样本快速病原菌鉴定中的价值

目的 评估十二烷基硫酸钠(SDS)和皂甙(SAP)前处理联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)对报阳血培养样本进行快速病原菌鉴定的应用价值.方法 收集2018年4月—2019年4月上海交通大学医学院附属新华医院阳性血培养样本296例,分别采用SDS和SAP对阳性血培养样本进行前处理,获取菌体沉...     

分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS快速检测血培养阳性瓶中细菌的探讨

目的建立一种使用分离胶促凝管联合基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)的方法直接检测血培养中阳性菌的方法。方法收集阳性血培养标本318例,利用分离胶促凝管直接从血培养瓶中富集并提纯菌体,采用MALDI-TOF MS对革兰阴性菌进行菌种鉴定,同时分离纯菌落用Phoenix-100全自动微生物分析系统进行鉴定。结果 292例单菌株感染血培养瓶中,两种方法对菌株的种、属鉴定符合率分别为82.4%和22.7%。在26例复合菌感染中,两种方法鉴定出其中一种细菌的种、属鉴定率分别为79.3%和10.3%。结论本研究建立了采用分离胶促凝管联合MALDI-TOF MS法直接检测血培养中阳性菌的方法,与传统的培养鉴定方法相比,对血流感染具有更高灵敏度,适合在临床微生物实验室中推广应用。     

MALDI-TOF MS在药物基因组学检测中的应用及展望

药物基因组学是临床基因检测的新兴领域,是个体化医学模式的重要组成部分。药物基因组学检测的结果能够在安全、合理用药中发挥指导作用,这使得越来越多的研究者更加关注遗传信息多态性与个体药物反应差异之间的关系。诞生于上世纪80年代的基质辅助激光解吸飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)已成为临床领域进行基因检测的主流技术之一。对于药物基因组学检测中常见的单核苷酸多态性(SNP)、拷贝数变异(CNV)、插入/缺失(In/Del)等分子标记,MALDI-TOF MS均能实现准确检出,同时以其检测的多重性、精准性、简便性、经济性得到越来越多的关注和应用。本文介绍了MALDI-TOF MS的技术原理并总结了MALDI-TOF MS在药物基因组学检测中的多个研究案例,旨在推广该技术在药物基因组研究中的应用,并加深研究者对该技术平台的认识,通过该技术平台的推广促进药物基因组学在临床的转化应用。     

MALDI-TOF MS在临床微生物检验中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)是一种软电离质谱,适用于分析蛋白质等生物大分子物质,可用来绘制微生物的蛋白质图谱,达到鉴定的目的。基于MALDI-TOF MS的蛋白质谱技术具有快速、准确、敏感性高、高通量等特点,目前已应用于细菌和真菌的鉴定,其在微生物耐药性分析、分型和毒力研究等科研领域的应用也初有成效,尚有巨大的发展空间。本文就以MALDI-TOF MS为代表的蛋白质谱技术在微生物检验和科研中的应用作一综述。     

应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱技术鉴定临床常见厌氧菌

目的：应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF MS）技术对临床分离的厌氧菌进行鉴定,与传统Vitek32 ANI鉴定卡及16 S rRNA基因序列法鉴定进行比较,分析MALDI-TOF MS技术用于鉴定临床常见厌氧菌的可行性。方法收集从临床标本培养分离的厌氧菌56株,运用 MALDI-TOF MS 技术对其进行鉴定,同时运用 Vitke32 ANI 鉴定卡及16 S rRNA基因序列法分别进行鉴定,将三者的结果进行比较。结果56株厌氧菌中有41株采用 MALDI-TOF MS技术鉴定至种的水平（分值大于或等于2．0）,11株鉴定至属的水平（分值为1．7～2．0）,4株无可靠结果（分值小于1．7）。MALDI-TOF MS和16S rRNA基因序列法鉴定结果一致的占94．6％（53/56）,不一致的占5．6％（3/56）。MALDI-TOF MS与Vitke32 ANI 鉴定卡的鉴定结果一致的占80．4％（45/56）,不一致的占19．6％（11/56）。结论 MALDI-TOF MS与16S rRNA基因序列法鉴定的符合率高,可应用于临床常见厌氧菌的鉴定。     

MALDI-TOF MS在中段尿样本细菌直接检测中的应用

目的运用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)鉴定系统对中段尿样本中的细菌进行直接快速检测,以建立快速的细菌检测方法便于临床应用。方法 692例中段尿样本接种于固体培养基上,利用MALDI-TOF MS和Vitek 2 Compact全自动微生物分析系统(简称Vitek 2 Compact)对单个菌落进行鉴定;同时对尿液样本进行前处理后直接进行质谱分析。结果 692例中段尿样本中,98例单一菌感染且细菌数104CFU/m L的样本应用MALDI-TOF MS直接检测出74株菌,检出率达75.5%,其中大肠埃希菌39株,检出率达79.6%;粪肠球菌23株,检出率为100.0%;摩根摩根菌5株,检出率为100.0%。64例样本为2种菌混合感染,采用MALDI-TOF MS直接检测出44例样本中的1种优势细菌。质谱直接检测尿液的鉴定结果与单菌落质谱鉴定结果及Vitek 2 Compact鉴定结果完全一致,符合率为100.0%。结论 MALDI-TOF MS可用于直接检测尿液样本中的细菌,检出率高,结果可靠;MALDI-TOF MS对混合菌感染的样本有一定鉴定能力;该方法可比常规尿培养鉴定方法提早42 h报告鉴定结果,是对临床尿液样本细菌鉴定的一大革命性进步。     

MALDI-TOF MS在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌快速筛查中的价值

目的 探讨基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术在耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)快速筛查中的价值.方法 收集30株MRSA和29株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),采用MALDI-TOF MS技术进行菌种鉴定,比较鉴定结果的准确性;采用MALDI Biotyper软件对细菌的蛋白峰...     

血培养阳性标本分离胶促凝管联合SDS 前处理与固体培养基短时培养菌膜应用MALDI-TOF MS 快速鉴定最佳时间探讨

目的　探讨血培养阳性标本分离胶促凝管联合十二烷基硫酸钠（sodium dodecyl sulfate,SDS）前处理与固体培养基短时培养菌膜应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization time of flightmass spectrometry,MALDI-TOF MS）快速鉴定的最佳时间。方法　收集2020 年8 月～ 2021 年1 月来源于咸阳市第一人民医院微生物室的243 瓶血培养阳性（单数菌）样本,采用MALDI-TOF MS 技术对分离胶促凝管联合SDS 前处理标本直接鉴定,同时对固体培养基短时培养（6h 内）菌膜鉴定,以传统培养（24h）方法鉴定结果为金标准,分析MALDI-TOF MS 快速鉴定血培养阳性菌株的最佳方法和时间。结果　243 瓶血培养阳性标本共鉴定出病原菌44 种,分离率前五位的细菌为大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。SDS 前处理法直接鉴定总符合率为75.72%（184/243）,其中革兰阴性菌和革兰阳性菌符合率分别为84.97%（130/153）和60.00%（54/90）;固体培养基生长2h,4h 和6h 的菌膜鉴定总符合率依次为44.44%（108/243）,72.02%（175/243）和90.53%（220/243）,其中革兰阴性菌依次为59.48%（91/153）,83.01%（127/153）和92.81%（142/153）,革兰阳性菌依次为18.89%（17/90）,53.33%（48/90）和86.67%（78/90）。金黄色葡萄球菌SDS 前处理法直接鉴定和2h,4h 生长菌膜鉴定符合率均高于凝固酶阴性葡萄球菌（χ2=4.795,12.083, 9.035,均P ＜ 0.01）。革兰阴性菌SDS 前处理法直接鉴定和2h,4h 生长菌膜鉴定符合率均高于革兰阳性菌（χ2=17.880,37.808,24.758, 均P ＜ 0.01)。结论　MALDI-TOF MS 可对血流感染（bloodstreaminfection,BSI）主要病原菌进行快速直接鉴定,根据革兰染色结果联合固体培养基短时培养菌膜鉴定,可进一步缩短细菌鉴定时间,为临床抗感染治疗提供早期依据。     

MALDI-TOF MS自建数据库对非结核分枝杆菌鉴定的应用价值

目的 构建基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)非结核分枝杆菌(NTM)鉴定数据库并评价其应用价值.方法 收集2018年1月—2021年5月临床分离NTM菌株72株,分别采用直接同源序列比对法和MALDI-TOF MS法进行菌种鉴定,MALDI-TOF MS以"自建数据库+MBT DB5989数据...     

MALDI-TOF MS在临床微生物样本直接检测中的应用

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（ MALDI-TOF MS）是近年来发展起来的一项新兴的微生物鉴定技术,与传统的生化表型鉴定方法和分子生物学方法相比,MALDI-TOF MS具有操作简单、快速、准确和经济的特点。鉴于其对培养出的纯菌落鉴定的准确性和稳定性,MALDI-TOF MS也可被应用于临床样本的直接检测,包括阳性血培养瓶、中段尿、脑脊液等。本文主要就MALDI-TOF MS用于直接检测临床样本的原理、流程、鉴定效能及其研究进展等方面做一综述。