社区及院内感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药及耐消毒剂基因分析

目的了解本地区社区获得性和医院内感染大肠埃希菌产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）的发生率,分析和研究其耐药基因和耐消毒剂基因的携带情况。方法收集从临床标本分离的大肠埃希菌95株,经ESBLs确证试验将其中38株阳性菌株分为医院与社区获得性感染2组,用聚合酶链反应（PCR）检测耐药基因TEM、SHV、CTX-M-1以及耐消毒剂基因qacE△1-sull。结果社区获得性大肠埃希菌ESBLs的检出率为30％,医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率为55％。17株社区获得性感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％,CTX-M-1的检出率为35％,SHV的检出率为6％,耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为53％。21株医院内感染产ESBLs大肠埃希菌耐药基因TEM的检出率为71％,CTX-M-1的检出率为43％,SHV的检出率为14％,耐消毒剂基因qacE△1-sull的检出率为62％。结论本地区医院内感染大肠埃希菌ESBLs的检出率明显高于社区获得性感染大肠埃希菌ESBLs的检出率。社区获得性和医院内感染ESBLs大肠埃希菌耐药基因均以TEM型为主,耐消毒剂基因的携带率2组没有组间差异。     

大肠埃希菌β—内酰胺酶的分类筛检

目的 了解E.coli(大肠埃希菌）所产各种β-内酰胺酶（β-lase)分布情况。方法 采用多底物改良相邻纸片法检测75株E.coli。结果 75株E.coli总β-lase检出率为70．67％，其中产青霉素酶18株（24．00％），产广谱酶8株（10．67％）产ESBLs27株（36．00％）；27株产ESBLs菌株中以头孢他啶、头孢噻肟、氨曲南为底物的均为21株。结论 本组E.coli所产生各种β-lase以青霉素酶、ESBLs为主。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析

目的了解临术分离菌中产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率，分析其耐药表型，探讨其ESBLs基因类别。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的纸片扩散法，对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验，并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证。按照NCCLS文件标准，用Kirby-Bauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验。用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组、TOHO-1组等4种基因。结果（1）大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46．7％和32．4％。（2）产ESBLs菌对青霉素类100％耐药；对第1、2代头孢菌素耐药率达85％～100％；对除头孢他定以外的第3代头孢菌素，产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80％以上，产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65％～75％以上；产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75％～85％；产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80％～90％、庆大霉素耐药率为50％～75％；产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性（80％～90％以上）。（3）产ES-BLs大肠埃希菌中，blaTEM-1、blasSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为93．9％、7．4％和53．4％。51．4％的菌株同时携带2种耐药基因，2．7％的菌株同时携带3种耐药基因。产ESBLs肺炎克雷伯菌中blatTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为50．0％、95．0％和20．0％。同时携带2种耐药基因的菌株占35．0%，同时携带3种耐药基因的菌株占15．0％。两种细菌中均未检出TOHO-1组基因。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高，大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势。产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定，且多数菌株对青霉素类，第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药。大肠埃希菌中以TEM型和CTX-M型基因为主。肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主，同时存在TEM型和CTX-M型基因。     

产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药表型与修饰酶基因研究

目的分析临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对氨基糖苷类抗生素的耐药性,并了解其修饰酶基因携带状况及耐药机制。方法采用纸片扩散法测定临床分离的32株产ESBLs大肠埃希菌对5种氨基糖苷类抗生素的耐药性,用CLSI推荐的酶抑制剂增强纸片扩散法检测产ESBLs菌株,采用PCR法检测氨基糖苷类修饰酶基因aac（3）-Ⅰ,aac（3）-Ⅱ,8aC（6’）-Ⅰ ad,aac（6＇）-Ⅰ b,aac（6＇）-Ⅱ,ant（3＂）-Ⅰ,ant（2＂）-Ⅰ。提取携带单一修饰酶基因临床菌株的质粒并转化入宿主菌BL21中,比较临床分离菌与转化菌对5种氨基糖苷类药物敏感性及产ESBLs情况的区别。结果32株产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率最高（84．3％）,对阿米卡星耐药率最低（25％）。检出氯基糖苷粪修饰酶基因aac（6＇）-Ⅱ,ant（3＂）-Ⅰ,ant（2＂）-Ⅰ,阳性分别为22株（68．8％）,9株（28．1％）,5株（15．6％）,1株（3．1％）。质粒转化菌产ESBLs且同时检出原携带基因,但耐药表型有区别。结论临床分离的产ESBLs大肠埃希菌对庆大霉素耐药率最高,对阿米卡星敏感性最高,氨基糖苷类耐药与氨基糖苷类修饰酶基因表达有关,临床应对此类菌株引起重视。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶及传播方式的检测

目的了解大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pn)产ESBLs和AmpC酶的发生率、耐药性情况及传播方式。方法对临床分离的66株E.coli和38株K.pn,用ESBLs表型确证试验纸片扩散法检测ESBLs,酶提取物三维实验检测AmpC酶,琼脂二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),质粒反式接合实验检测耐药基因的传播。结果E.coli和K.pn产ESBLs/AmpC酶的发生率分别为74.2%(49/66)/10.6%(7/66)和71.0%(27/38)/13.1%(5/38),同时产ESBLs和AmpC酶的E.coli和K.pn分别为7.6%(5/66)和10.5%(4/38)。这些产酶株对三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑全部耐药,对含酶抑制剂复合物敏感性较低,对亚胺培南敏感;产ESBLs菌株的传播绝大部分依赖质粒水平转移,而产AmpC酶菌株的传播只有小部分依赖质粒水平转移。结论临床分离的E.coli和K.pn菌株大部分产ESBLs或AmpC酶,且存在一定比例既产ESBLs又产AmpC酶的菌株,对这些菌株的监测和阻止其传播具有重要意义。     

大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产ESBLs和AmpC酶及传播方式的检测

目的 了解大肠埃希菌(E.coli)和肺炎克雷伯菌(K.pn)产ESBLs和AmpC酶的发生率、耐药性情况及传播方式.方法 对临床分离的66株E.coli和38株K.pn,用ESBLs表型确证试验纸片扩散法检测ESBLs,酶提取物三维实验检测AmpC酶,琼脂二倍稀释法测定最低抑菌浓度(MIC),质粒反式接合实验检测耐药基因的传播.结果 E.coli和K.pn产ESBLs/AmpC酶的发生率分别为74.2%(49/66)/10.6%(7/66)和71.0%(27/38)/13.1%(5/38),同时产ESBLs和AmpC酶的E.coli和K.pn分别为7.6%(5/66)和10.5%(4/38).这些产酶株对三代头孢菌素、氨曲南、头孢美唑全部耐药,对含酶抑制剂复合物敏感性较低,对亚胺培南敏感;产ESBLs菌株的传播绝大部分依赖质粒水平转移,而产AmpC酶菌株的传播只有小部分依赖质粒水平转移.结论 临床分离的E.coli和K.pn菌株大部分产ESBLs或AmpC酶,且存在一定比例既产ESBLs又产AmpC酶的菌株,对这些菌株的监测和阻止其传播具有重要意义.     

珠海地区妇幼保健院大肠埃希菌产ESBLs的基因型研究

目的 了解珠海地区妇幼保健院产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌基因特点.方法 收集珠海地区两家妇幼保健院临床分离的316株大肠埃希菌,用法国生物梅里埃公司VITEK-32全自动微生物分析仪检测其表型,再用双纸片法确定,所有产酶菌株用PCR的方法扩增其TEM,CTX M和SHV基因.结果 316株大肠埃希菌检出138株产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）,占43.7％（138/316）;138株产ESBLs大肠埃希菌PCR检测的结果为TEM型阳性的有72株,CTX M型阳性的有59株,SHV型阳性的有7株,检出率分别为52.2％（72/138）,42.8％（59/138）和5.1％（7/138）;同时携带TEM型和CTX M型的共23株,占16.6％（23/138）.结论 珠海地区妇幼保健院的大肠埃希菌产ESBLs的阳性率高,其基因型别主要以TEM型和CTX-M型为主,同一菌株可携带有两种型别的ESBLs.     

产ESBLs尿路感染大肠埃希菌的耐药基因型分析

目的了解尿路感染大肠埃希菌产超广谱B-内酰胺酶（ESBLs）株的耐药情况和主要基因型。方法纸片扩散法（K-B）检测细菌对抗菌药物的敏感性;用表型确证试验确定11名床尿液标本中产ESBLs的大肠埃希菌。应用聚合酶链反应（PCR）扩增菌株的CTx_M、TEM和sHV型ESBLs基因,并对PCR产物经凝胶电泳后进行初步分析。结果大部分产酶菌株对美罗培南、亚胺培南、头孢西丁等耐药性较低,而对氨苄青霉素、哌拉西林和头孢噻肟等耐药性较高。在72株ESBLs阳性菌株中,cTx—M型所占比例为48．6％,TEM型占87．5％,SHV型占0．0％,同时含有CTX-M和TEM两种基因型的占47．2％。结论尿路感染大肠埃希菌产ESBLs株的耐药情况较为严重,CTx-M和TEM是其主要基因型。应加强监控,防止产酶菌株的播散。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析

目的了解临床分离菌中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率,分析其耐药表型,探讨其ESBLs基因类别。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法,对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验,并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证。按照NCCLS文件标准,用KirbyBauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验。用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM1、blaSHV1、CTXM1组、TOHO1组等4种基因。结果(1)大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46.7%和32.4%。(2)产ESBLs菌对青霉素类100%耐药;对第1、2代头孢菌素耐药率达85%～100%;对除头孢他定以外的第3代头孢菌素,产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80%以上,产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65%～75%以上;产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75%～85%;产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80%～90%、庆大霉素耐药率为50%～75%;产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性(80%～90%以上)。(3)产ESBLs大肠埃希菌中,blaTEM1、blaSHV1、CTXM1组等3种基因扩增阳性率分别为93.9%、7.4%和53.4%。51.4%的菌株同时携带2种耐药基因,2.7%的菌株同时携带3种耐药基因。产ESBLs肺炎克雷伯菌中blaTEM1、blaSHV1、CTXM1组等3种基因扩增阳性率分别为50.0%、95.0%和20.0%。同时携带2种耐药基因的菌株占35.0%,同时携带3种耐药基因的菌株占15.0%。两种细菌中均未检出TOHO1组基因。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高,大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势。产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定,且多数菌株对青霉素类,第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药。大肠埃希菌中以TEM型和CTXM型基因为主。肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主,同时存在TEM型和CTXM型基因。     

尿液分离产ESBLs大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及耐药机制研究

目的 探究尿液分离产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对磷霉素耐药的分子流行病学及其耐药机制。方法 收集南京大学医学院附属鼓楼医院2016年1-12月尿液分离大肠埃希菌308株，通过药敏试验筛选产ESBLs及磷霉素耐药菌株；PCR扩增ESBLs基因及磷霉素相关耐药基因；采用多序列位点分型（MLST）对菌株进行遗传相关性分析，采用接合试验验证耐药基因的转移性。结果 308株尿液分离大肠埃希菌中产ESBLs的菌株168株（54.54％）；产ESBLs菌株中检出磷霉素耐药菌株18株（10.71%）。其中，ESBLs耐药基因携带率为blaSHV 88.9%（16/18）、blaCTX-M 77.8%（14/18）、blaTEM-208，5.6%（1/18）；blaTEM-1b 61.1%（11/18）；fosA3基因的携带率为83.3％（15株）。 MLST分型主要为ST131（27.78%），接合试验表明，fosA3阳性菌株的耐药性均具有可转移性。结论 产ESBLs的大肠埃希菌对磷霉素的耐药率仍处于较低的水平，fosA3基因是这些菌株磷霉素耐药的主要机制，该基因位于可接合的质粒上，易于水平传播，需要高度重视。 关键词：大肠埃希菌； 产超光谱β内酰胺酶； 磷霉素； 耐药机制     

多重耐药革兰阴性杆菌耐药谱及其抗消毒剂基因检测

目的了解临床感染标本分离的多重耐药革兰阴性杆菌对临床常用抗菌药物耐药谱及其抗消毒剂基因携带状况。方法采用K-B试验法和聚合酶链反应检测法,对临床分离的多重耐药革兰阴性杆菌进行了药敏试验和qacE△1-sul1基因检测。结果临床分离的252株革兰阴性杆菌对常用抗生素耐药率普遍较高,且耐药谱广。在252株革兰阴性杆菌中,有197株qacE△1-sul1基因检测阳性,总阳性率为78.71%。结论临床感染标本分离的多重耐药革兰阴性杆菌qacE△1-sul1基因携带率比较高,对临床常用抗生素普遍耐药,应加强防范。     

嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明耐药的机制研究

目的：检测 I类整合酶基因（intI 1）及 qacE△1-sul1和 sul2基因在耐复方新诺明的嗜麦芽窄食单胞菌中的分布情况,并探讨基因分布与细菌耐药性的关系。方法收集临床分离的嗜麦芽窄食单胞菌,煮沸法提取总 DNA,采用 PCR法检测 intI 1,qacE△1-sul1和 sul2基因在复方新诺明敏感菌株和耐药菌株中的分布情况。结果28株耐复方新诺明嗜麦芽窄食单胞菌中有25株检出 I类整合酶基因,检出率为89.29％;21株检出 qacE△1-sul1基因,检出率为75％;15株检出sul2基因,检出率为53.57％;18株复方新诺明敏感的嗜麦芽窄食单胞菌中有5株检出 I 类整合酶基因,检出率为27.78％,4株检出 qacE△1-sul1基因,检出率为22.22％,均未检出 sul2基因。结论耐复方新诺明嗜麦芽窄食单胞菌大部分携带有 intI 1,qacE△1-sul1和 sul2基因,嗜麦芽窄食单胞菌对复方新诺明的耐药性与 intI 1,qacE△1-sul1和 sul2的存在有关。     

鲍曼不动杆菌抗药基因检测及对消毒剂抗性研究

目的研究临床分离的鲍曼不动杆菌携带抗药基因qacE△1-sulI情况及对消毒剂抗性水平。方法采用PCR法和肉汤稀释法分别检测临床分离鲍曼不动杆菌qacE△1-sulI基因和对消毒剂抗性变化,并与大肠杆菌标准菌株进行比较。结果临床分离的7株鲍曼不动杆菌中,4株qacE△1-sulI基因阳性,3株阴性。醋酸氯己定对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为2mg/L~4mg/L,MBC值为4mg/L~125mg/L,均高于大肠杆菌标准株。对氯间二甲基苯酚对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为78mg/L~156mg/L;苯扎溴铵对7株鲍曼不动杆菌的MIC值为9.8mg/L~19.5mg/L;聚维酮碘与聚醇醚碘对7株鲍曼不动杆菌的MIC值与标准菌株相同,分别为1000mg/L和500mg/L,均未超过标准菌株。结论鲍曼不动杆菌携带qacE△1-sulI基因携带率较高,抗药基因阳性的菌株对多数消毒剂耐受浓度增加。     

三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因检测及其对碘伏的抗性研究

目的了解临床分离的革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带情况及其对碘伏消毒剂抗性。方法采用基因扩增法和稀释法对临床分离的三种革兰阴性杆菌抗消毒剂基因和抗菌性能进行了检测,并与标准菌株作平行比较检测。结果临床分离的三种21株革兰阴性杆菌中,检出抗消毒剂基因(qacEΔ1-su lⅠ)阳性菌株有13株,阳性率为61.9%;三种菌抗消毒剂基因携带率之间无明显差别,大肠杆菌标准株抗消毒剂基因检测阴性。有1株抗消毒剂基因阳性的铜绿假单胞菌对碘伏的最小抑菌浓度明显高于其标准株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌抗消毒剂基因携带率比较高,但其对碘伏消毒剂的抗性未观察到明显变化。     

携带耐药基因的大肠杆菌对消毒剂抗力研究

目的研究临床分离的大肠杆菌耐消毒剂基因携带情况及其对消毒剂抗力水平。方法采用PCR检测法与肉汤稀释法对临床分离大肠杆菌耐药基因和对消毒剂的最小抑菌浓度进行检测,同时与消毒试验标准菌株作平行比较。结果临床分离的7株大肠杆菌中,有4株耐药基因qacE△1-sulIPCR扩增阳性;该7株大肠杆菌基因qacA/B均为阴性。醋酸氯己定对7株大肠杆菌的最小抑菌浓度为1~2mg/L,对大肠杆菌标准株为2mg/L。对氯间二甲苯酚对7株临床分离大肠杆菌与标准株的最小抑菌浓度均为156mg/L。苯扎溴铵对7株大肠杆菌的最小抑菌浓度为19.5mg/L,与标准菌株相同。聚维酮碘和聚醇醚碘对7株临床分离大肠杆菌的最小抑菌浓度分别为1000mg/L与500mg/L,与标准株相同。结论临床分离大肠杆菌多数存在耐药基因,其对常用消毒剂的抗力与标准菌株相当。     

几种医院感染病原菌抗药基因检测及其对聚维酮碘抗性研究

目的研究几种临床分离病原菌抗药基因携带情况及其对聚维酮碘的抗力水平。方法采用PCR方法和肉汤稀释法,检测几种病原菌qacE△1-sul I基因和最小抑菌浓度。结果检测临床分离的4种30株病原菌,有13株qacE△1-sul I基因阳性,携带率为43.33%。聚维酮碘对7株铜绿假单胞菌的MIC值为500~1000 mg/L,标准菌株为1000 mg/L;对7株大肠杆菌和7株鲍曼不动杆菌的MIC值均与标准菌株相同,均为1000 mg/L;对9株金黄色葡萄球菌的MIC值有5株为1000 mg/L,高于标准菌株的500 mg/L。结论临床分离的30株病原菌抗药基因携带率为43.33%,携带抗药基因的菌株与其对聚维酮碘的抗力关系不明显。     

大肠杆菌耐消毒剂基因检测与消毒剂抗性研究

目的研究临床分离的多重耐药大肠杆菌耐消毒剂基因携带状况及其对消毒剂抗性水平。方法采用聚合酶链反应(PCR)法和体外抗菌试验方法进行实验室检测。结果在检测的8株临床分离的大肠杆菌中,检出3株携带qacE△1基因,检出率37.5%。含氯消毒剂对3株qacE△1基因阳性大肠杆菌的MIC值均高于标准菌株。碘伏消毒剂和戊二醛消毒剂只对1株qacE△1基因阳性大肠杆菌的MIC值高于标准菌株,其他均与标准株相同。结论临床分离的多重耐药大肠杆菌qacE△1基因阳性率较高,携带qacE△1基因阳性的大肠杆菌对含氯消毒剂有产生抗性的倾向。     

三种革兰阴性杆菌耐消毒剂基因检测及对苯扎溴铵抗性研究

目的研究临床分离致病菌抗药基因情况及其对消毒剂的抗性水平。方法采用基因扩增法和肉汤稀释法分别检测了三种21株革兰阴性杆菌的耐消毒剂基因和苯扎溴铵最低抑菌浓度及最低杀菌浓度。结果临床分离的铜绿假单胞菌、大肠杆菌和鲍曼不动杆菌等21株三种革兰阴性杆菌,其中有13株携带耐消毒剂基因,携带率为61.9%。7株铜绿假单胞菌对苯扎溴铵M IC均低于标准菌株,共有7株菌的MBC高于标准菌株。结论临床分离的三种21株革兰阴性杆菌多数携带耐消毒剂基因,有33.3%的菌株对苯扎溴铵的MBC高于标准株,提示其抗力有所增强。     

多重耐药鲍曼不动杆菌中耐消毒剂基因qacE△1的存在现状及其阳性菌株的同源性分析

目的探讨分析多重耐药鲍曼不动杆菌中耐消毒剂基因qacE△1的存在现状及其阳性菌株的同源性。方法对80株多重耐药鲍曼不动杆菌采用聚合酶链反应和序列分析方法分析其耐消毒剂基因qacE△1,然后采用重复序列聚合酶链反应技术分析qacE△1基因阳性菌株的同源性。结果本研究中,80株多重耐药鲍曼不动杆菌检测阳性42株,阳性率为52.5%,其中A型30株,B型5株,C型3株,D型2株,E型2株,可见A型为主要流行类型,所占比例为71.43%。42株阳性多重耐药鲍曼不动杆菌中,心胸外科为8株,约占19%,神经外科7株,约占17%,中心重症监护病房(ICU)6株,约占14%。当最小抑菌浓度(MIC)为300mg/L时,抑制菌株量最多,当MIC为500mg/L时,抑制菌株中阳性菌株所占比例最高,为83.33%。结论多重耐药鲍曼不动杆菌的耐药性增强与耐消毒剂基因qacE△1具有相关性,且在临床上存在5种分型,主要为A型,心胸外科、神经外科和中心ICU应该作为主要感染控制对象。