产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析

目的了解临术分离菌中产超广谱β内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率，分析其耐药表型，探讨其ESBLs基因类别。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会（NCCLS）推荐的纸片扩散法，对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验，并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证。按照NCCLS文件标准，用Kirby-Bauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验。用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组、TOHO-1组等4种基因。结果（1）大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46．7％和32．4％。（2）产ESBLs菌对青霉素类100％耐药；对第1、2代头孢菌素耐药率达85％～100％；对除头孢他定以外的第3代头孢菌素，产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80％以上，产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65％～75％以上；产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75％～85％；产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80％～90％、庆大霉素耐药率为50％～75％；产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性（80％～90％以上）。（3）产ES-BLs大肠埃希菌中，blaTEM-1、blasSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为93．9％、7．4％和53．4％。51．4％的菌株同时携带2种耐药基因，2．7％的菌株同时携带3种耐药基因。产ESBLs肺炎克雷伯菌中blatTEM-1、blaSHV-1、CTX-M-1组等3种基因扩增阳性率分别为50．0％、95．0％和20．0％。同时携带2种耐药基因的菌株占35．0%，同时携带3种耐药基因的菌株占15．0％。两种细菌中均未检出TOHO-1组基因。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高，大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势。产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定，且多数菌株对青霉素类，第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药。大肠埃希菌中以TEM型和CTX-M型基因为主。肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主，同时存在TEM型和CTX-M型基因。     

产ESBLs大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检测及其基因分析

目的了解临床分离菌中产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌发生率,分析其耐药表型,探讨其ESBLs基因类别。方法采用美国国家临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的纸片扩散法,对364株大肠埃希菌和71株肺炎克雷伯菌进行产ESBLs菌株初筛试验,并用双纸片确证试验和双纸片协同试验进行产ESBLs菌株确证。按照NCCLS文件标准,用KirbyBauer纸片扩散法进行产ESBLs株21种抗生素药敏试验。用PCR方法扩增168株ESBLs表型阳性菌中blaTEM1、blaSHV1、CTXM1组、TOHO1组等4种基因。结果(1)大肠埃希菌和克雷伯菌中产ESBLs的检出率分别为46.7%和32.4%。(2)产ESBLs菌对青霉素类100%耐药;对第1、2代头孢菌素耐药率达85%～100%;对除头孢他定以外的第3代头孢菌素,产ESBLs大肠埃希菌耐药率为80%以上,产ESBLs肺炎克雷伯菌耐药率为65%～75%以上;产ESBLs菌对复方新诺明的耐药率为75%～85%;产ESBLs大肠埃希菌对环丙沙星耐药率为80%～90%、庆大霉素耐药率为50%～75%;产ESBLs菌对阿米卡星、头孢替坦、亚胺培南有较好的敏感性(80%～90%以上)。(3)产ESBLs大肠埃希菌中,blaTEM1、blaSHV1、CTXM1组等3种基因扩增阳性率分别为93.9%、7.4%和53.4%。51.4%的菌株同时携带2种耐药基因,2.7%的菌株同时携带3种耐药基因。产ESBLs肺炎克雷伯菌中blaTEM1、blaSHV1、CTXM1组等3种基因扩增阳性率分别为50.0%、95.0%和20.0%。同时携带2种耐药基因的菌株占35.0%,同时携带3种耐药基因的菌株占15.0%。两种细菌中均未检出TOHO1组基因。结论大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌中产ESBLs的检出率较高,大肠埃希菌中产ESBLs菌比例有逐年上升趋势。产ESBLs菌对头孢噻肟的耐药率远高于头孢他定,且多数菌株对青霉素类,第1、2、3代头孢菌素、喹诺酮类、磺胺类、氨基糖甙类等抗生素呈多重耐药。大肠埃希菌中以TEM型和CTXM型基因为主。肺炎克雷伯菌以SHV型基因为主,同时存在TEM型和CTXM型基因。     

产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的对本院1999-2003年产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）细菌进行检测，并对其耐药性进行分析。方法采用纸片扩散法（K—B法）进行药敏试验，标准纸片扩散表型确证试验检测ESBLs。结果1999年阳性率为46．9％，2000年为51．9％，2001年为56．3％，2002年为58．7％，2003年为63．9％。ICU病房、介入病房和神经外科病房检出率分别为79．8％、73．8％和34．8％，明显高于其他科室。结论产超广谱β-内酰胺酶细菌阳性率呈逐年上升趋势，阳性菌对第三代头孢菌素和氨曲南耐药，部分菌株对氨基糖甙类和喹诺酮类耐药。临床对产超广谱β-内酰胺酶细菌治疗以碳青霉烯类最有效，头霉烯类和酶抑制剂复合药部分有效。     

大肠埃希菌和克雷伯菌ESBLs及AmpC酶的检测

近年来,由于β-内酰胺类抗生素,特别是第3代头孢菌素的广泛应用,细菌对这类抗生素产生的耐药问题十分突出,给临床抗感染治疗带来极大困难。革兰阴性杆菌是临床感染的主要病原菌,其中AmpC酶在革兰阴性杆菌耐药机制中的地位日渐突出,特别是质粒型AmpC酶的出现,使AmpC酶获得了与ESBLs相同的进化背景,     

365株大肠埃希菌的耐药性分析

目的了解临床分离的大肠埃希菌的耐药性情况,为临床合理用药提供依据。方法对临床分离的365株大肠埃希菌采用K-B法进行药敏试验。ESBLs确证试验采用临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片扩散法表型确证试验。结果产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌检出率为67.1%。ESBLs阳性菌株对β-内酰胺类抗生素大多耐药,对亚胺培南和部分加酶抑制剂的β内酰胺类抗生素较为敏感,对其他抗生素耐药率也较ESBLs阴性菌株高。结论大肠埃希菌耐药现象严重,应根据临床药敏结果合理选择抗生素,避免多重耐药菌的产生。     

产ESBLs的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的检测及耐药性分析

目的对本院1999~2003年产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)细菌进行检测,并对其耐药性进行分析。方法采用纸片扩散法(K-B法)进行药敏试验,标准纸片扩散表型确证试验检测ES-BLs。结果1999年阳性率为46.9%,2000年为51.9%,2001年为56.3%,2002年为58.7%,2003年为63.9%。ICU病房、介入病房和神经外科病房检出率分别为79.8%、73.8%和34.8%,明显高于其他科室。结论产超广谱β-内酰胺酶细菌阳性率呈逐年上升趋势,阳性菌对第三代头孢菌素和氨曲南耐药,部分菌株对氨基糖甙类和喹诺酮类耐药。临床对产超广谱β-内酰胺酶细菌治疗以碳青霉烯类最有效,头霉烯类和酶抑制剂复合药部分有效。     

大肠埃希菌与克雷伯菌产超广谱β-内酰胺酶的临床耐药分析

目的对大肠埃希菌及克雷伯菌产超广谱p内酰胺酶（ESBLs）与抗菌药物使用间的关系进行分析研究。方法前瞻性监测产ESBLs菌的情况，并对感染者进行临床调查。结果产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌对头孢噻肟钠耐药率为95．3％，对阿莫西林＋棒酸为72．2％，产ESBLS菌感染者头孢第3代的使用率（72％）显著高于非产ESBLs菌感染者（35％）（P〈0．05）；第3代头孢菌素的大量使用诱导ESBLs的产生。结论严重的基础病、高龄、机体免疫力低下、长期住院者是ESBLs菌感染的易感宿主，皮质激素、化疗及介入性疗法是ESBLs感染的高危因素。滥用抗感染药是产生ESBLs的重要因素，合理使用抗感染药是防止ESBLs产生的主要措施。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌对氨基糖甙类药物耐药性及耐药基因研究

目的研究产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌对氨基糖甙类药物的耐药特性及耐药基因表达。方法用琼脂稀释法检测庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素、奈替米星和新霉素6种药物对37株产ESBLs大肠埃希菌的最低抑菌浓度。用PCR法检测5种氨基糖甙类药物修饰酶基因,并使用DNA测序加以证实。结果庆大霉素、阿米卡星、卡那霉素、妥布霉素和奈替米星对37株大肠埃希菌MIC50、MIC90均大于256mg／L,其耐药率分别为78．4％、45．9％、72．9％、83．8％和64．9％,而新霉素仍具有较高的抗菌活性。从37株菌中检出5种修饰酶基因,aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰb、aac（6′）-Ⅱ、ant（2″）-Ⅰ、ant（3″）-Ⅰ阳性率分别为56．8％、27．0％、2．7％、5．4％和13．5％,未发现aac（3）-Ⅰ基因。结论产ESBLs的大肠埃希菌对氨基糖甙类药物的耐药与修饰酶基因的表达有关。     

142株大肠埃希菌耐药性分析

目的监测142株临床分离大肠埃希菌对常用抗生素的耐药性,以指导临床合理选用抗大肠埃希菌药物。方法采用美国DADE公司Walkaway-40自动细菌鉴定仪鉴定菌种及测定抗生素最低抑菌浓度,利用WHONET5．0软件对结果进行统计和分析。结果检出142株大肠埃希菌,大部分菌株耐青霉素类药物;对头孢唑啉、头孢噻吩、头孢噻肟、头孢曲松、头孢吡肟的耐药率较高,均超过50．0％;对亚胺培南耐药的菌株仅占0．7％;对阿米卡星的耐药率仅次于亚胺培南,为4．2％;对哌拉西林／他唑巴坦的耐药率为4．9％;对环丙沙星的耐药率较高,达69．0％。结论在治疗大肠埃希菌引起的感染中,亚胺培南、阿米卡星以及哌拉西林／他唑巴坦的敏感性高。临床医生对抗生素的选用最好依据药敏结果而定。     

大肠埃希菌耐消毒剂基因的检测分析

目的检测临床分离的65株大肠埃希菌耐消毒剂基因qacE-su l1的存在情况。方法采用聚合酶链反应(PCR)技术检测65株大肠埃希菌及1株ATCC 25922的qacE-su l1基因。结果65株大肠埃希菌的qacE-su l1基因的阳性率为58.46%。结论大肠埃希菌耐消毒剂的qacE-su l1基因携带率较高,可能是该菌引起院内感染的重要原因,应引起我国医院消毒界的重视。     

泌尿系感染产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的检测与耐药性分析

目的了解该院尿培养中产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌的发生率和耐药性,为临床合理选择抗生素提供依据。方法对该院临床和门诊送检的1048例尿培养标本进行分析,用CLSI／NCCLs推荐的纸片扩散法进行抗生素敏感试验,双纸片协同筛选试验和纸片扩散法表型确证试验检测产超广谱β-内酰胺酶。结果共分离到大肠埃希菌136株,占阳性标本的42．7％;其中男性48株,占35．3％;女性88株,占64．7％;产ESBLs大肠埃希菌46株,占33．8％;未检出对亚胺培南耐药的大肠埃希菌。这类菌对呋喃妥因、磷霉素和头孢哌酮／舒巴坦有较高的敏感率。结论大肠埃希菌为泌尿系感染的主要病原菌,女性患者明显高于男性（P〈0．05）;产ESBLs菌株对庆大霉素等10种抗生素的耐药性明显高于非产ESBLs菌株（P〈0．05）。亚胺培南、头孢哌酮／舒巴坦、磷霉素、呋喃妥因、阿米卡星是治疗ESBLs菌的较好选择。临床应重视ESBLs的检测,根据药敏试验合理选用抗生素。     

产超广谱β-内酰胺酶菌株检出方法的探讨

目的 提高产超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）细菌的检出率。方法 采用标准纸片扩散法、筛选法、确认法和双纸片协同法进行试验。结果 头孢他啶（ＣＡＺ）、头孢噻肟（ＣＴＸ）、氨曲南（ＡＺＴ）对产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌筛选率分别为１１．２％、１８．５％、１８．５％。ＣＡＺ／克拉维酸（ｃｌａｖ）对产ＥＳＢＬｓ大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌确认率分别为７２．３％（３４／４７）、７５．０％（１２／１６）;     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌耐药性及基因型分析

目的 了解本院超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因在大肠埃希菌中的分布类型及对常用抗菌药物耐药情况,为临床合理用药提供依据.方法 用确证法对54株产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌进行确证,用PCR的方法扩增ESBLs基因片段,用K-B纸片扩散法检测对抗菌药物的敏感性.结果 125株大肠埃希菌中,ESBLs阳性率为43.2%.对青霉素类和第一、二代头孢菌素的耐药率为100%,对头孢噻肟、头孢哌酮和头孢曲松的耐药率在95%以上,对头孢他啶的耐药率为31.5%;对环丙沙星和复方新诺明的耐药率分别为79.6%和83.3%;对β-内酰胺类/酶抑制剂复合制剂仍保持较高的敏感性;未发现耐亚胺培南菌株.含耐药基因型CTX-M 型49株、TEM型33株、SHV型1株,同时含有两种基因型达29株.结论 产ESBLs大肠埃希菌对18种抗菌药物的耐药情况明显高于非产ESBLs大肠埃希菌.基因型主要为CTX-M,其次为TEM,同时含有两种基因型达29株.明确产ESBLs病原菌的基因型及耐药性对临床抗感染治疗及感染控制有较大意义.     

超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的耐药性

目的 了解超广谱β－内酰胺酶（ＥＳＢＬｓ）肺炎克雷伯菌、大肠埃杀菌的耐药性、药特点,指导用药。方法 对应用双纸片 试验法检测６２株产ＥＳＢＬＳ的肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌的体外抗生素耐药性作了初步研究。结果 ＥＳＢＬＳ总阳性率为４０．３５,以重症监护病房为最高（７５．０％）。产ＦＳＢＬＳ菌对头孢他啶、头孢噻肟、头孢曲松的耐药性高达８２．９￣１００．０％,较不产ＥＳＢＬＳ菌高７７．０％￣９４．０％。对     

阴沟肠杆菌染色质ampD基因的研究

目的研究阴沟肠杆菌染色质ampD基因及其高概率突变位点。方法从医院感染患者临床标本中分离阴沟肠杆菌,经头孢西丁初筛试验和头孢西丁三维试验确定是否产AmpCβ-内酰胺酶及其产酶类型,抽提产酶菌株染色质DNA,PCR扩增ampD基因并连接入pMD19-T载体,双链测序后与同种非突变标准菌株的ampD基因序列比对,并得到高概率突变位点。结果大部分产酶阴沟肠杆菌含有ampD基因,其中18株产持续高产型酶菌株的染色质中均扩增出ampD基因;阴沟肠杆菌ampD基因上有62个突变率高于50%的位点。结论产AmpCβ-内酰胺酶的阴沟肠杆菌染色质上均含有ampD基因;阴沟肠杆菌染色质ampD基因的高概率突变位点可能成为致持续高产酶的关键位点。     

广州地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的研究

目的 研究广州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子表型、流行病学和耐药基因环境特征.方法 收集2007-2008年广州地区9家医院临床分离产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌,通过PCR检测ESBLs分子表型;通过接合试验、质粒图谱、PCR分析CTX-M-15型ESBLs的基因环境,肠杆菌科基因间重复序列引物PCR(ERIC-PCR)分析产CTX-M-15型ESBLs菌株的分子同源性.结果 67.3%(243/361)的ESBLs产生株为CTX-M表型,其中CTX-M-1群和CTX-M-9群各占46.9%(114/243)和53.1%(129/243),未发现其他CTX-M亚群.CTX-M-14和CTXM-15是最常见的ESBLs基因型,其中CTX-M-14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别35.4%(64/181)和28.3%(51/180),CTX-M-15在这两种菌的检出率分别为21.5%(39/181)和26.1%(47/180),此外还检出对头孢他啶有水解活性的CTX-M-55、CTX-M-19和CTX-M-27.采用ERIC-PER分析CTX-M-15产生株的同源性,39株大肠埃希菌被分为28个基因型,47株肺炎克雷伯菌被分为30个基因型.67.6%(25/37)和32.4%(12/37)bla_(CTX-M-15)分别位于65 000 bp和90 000 bp的可接合质粒上,65 000 bp质粒除bla_(CTX-M-15)阳性外,未检到bla_(TEM-1)、qnrB、bla_(DHA-1)、bla_(OXA-1),aac(6′)-I6-cr等耐药基因.1株接合菌90 000 bp质粒还存在bla_(OXA-1)和bla_(TEM-1)耐药基因,其余7个90 000 bp质粒所携耐药基因同65 000 bp质粒.所有bla_(CTX-M-15)都位于ISEcp1-like插入序列下游,ISEep1-like末端与blaCTX-M-15间距均为48 bp.结论 广州地区ESBLs主要分子表型为CTX-M型主要流行为CTX-M-14型.以CTX-M-15为代表能水解头孢他啶的CTX-M型ESBLs在本地区检出增多值得关注.     

用琼脂稀释法检测产超广谱β内酰胺酶的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的体外抗菌活性

目的用琼脂稀释法检测大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)菌株与不产ESBLs菌株对13种抗生素的耐药情况。方法以双纸片协同试验对临床分离的29株大肠埃希菌和30株肺炎克雷伯菌检测ESBLs的产生,并以琼脂稀释法对亚胺培南等临床常用的13种抗生素作了最低抑菌浓度(MIC)检测及分析。结果双纸片协同试验对两种菌产ESBLs总得检出率为37.3%。其中大肠埃希菌为46.7%,肺炎克雷伯菌为33.3%。不产ESBLs菌株对各处抗生素的耐药率低于18%,MIC50为0.125至8,MIC90为0.5至64不等(氨曲南、环丙沙星、替卡西林/棒酸除外,耐药率分别为20%至40%不等)。产ESBLs菌株对亚胺培南,头孢美他醇全部敏感,亚胺培南的MIC50为0.25,MIC90为0.5。对头孢派酮/舒巴坦的耐药率低,为18.2%,MIC50为32。对喹诺酮类,氨基糖苷类及其他β-内酰胺类抗生素的耐药率大于50%,MIC50为64至256。对三代头孢菌素,氨曲南的耐药率大于80%,三代头孢菌素MIC50为256,MIC90为256至512。对环丙沙星、替卡西林/棒酸、氨曲南、庆大霉素呈交耐药,产ESBLs菌株,。大肠埃希菌耐药率高达58.3～100%,肺炎克雷伯菌耐药率高达40～60%。结论治疗ESBLs菌引起的感染,应用亚胺培南,头孢美他醇为好。可根据药敏结果合理选用高浓度的含酶抑制剂的复方β-内酰胺类抗     

产超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌耐药株中整合子基因研究

目的 探讨整合子介导的耐药机制在产超广谱β内酰胺酶(ESBLs)大肠埃希菌多重耐药性中的作用。方法 设计整合子特异引物，采用聚合酶链反应(PCR)技术检测耐药菌中的整合子基因，并应用PCR定位(mapping)技术和DNA测序研究整合子内携带的耐药基因。结果 44．4％的产ESBLs的大肠埃希菌整合子检测阳性，发现550，l300，l800bp和2600bp等4种不同大小的整合子结构，其中66．6％的整合子大于550bp。整合子中分别携带二氢叶酸还原酶、核苷转移酶和B内酰胺酶等耐药基因。结论 产ESBLs的大肠埃希菌中的整合子机制参与了多重耐药的形成，因整合子可以携带多种耐药基因，容易引起多重耐药的水平传播，应引起高度的重视。     

广州地区产CTX-M型超广谱β内酰胺酶大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的研究

目的 研究广州地区大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌CTX-M型超广谱β内酰胺酶(ESBLs)的分子表型、流行病学和耐药基因环境特征.方法 收集2007-2008年广州地区9家医院临床分离产ESBLs的181株大肠埃希菌和180株肺炎克雷伯菌,通过PCR检测ESBLs分子表型;通过接合试验、质粒图谱、PCR分析CTX-M-15型ESBLs的基因环境,肠杆菌科基因间重复序列引物PCR(ERIC-PCR)分析产CTX-M-15型ESBLs菌株的分子同源性.结果 67.3%(243/361)的ESBLs产生株为CTX-M表型,其中CTX-M-1群和CTX-M-9群各占46.9%(114/243)和53.1%(129/243),未发现其他CTX-M亚群.CTX-M-14和CTXM-15是最常见的ESBLs基因型,其中CTX-M-14在大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的检出率分别35.4%(64/181)和28.3%(51/180),CTX-M-15在这两种菌的检出率分别为21.5%(39/181)和26.1%(47/180),此外还检出对头孢他啶有水解活性的CTX-M-55、CTX-M-19和CTX-M-27.采用ERIC-PER分析CTX-M-15产生株的同源性,39株大肠埃希菌被分为28个基因型,47株肺炎克雷伯菌被分为30个基因型.67.6%(25/37)和32.4%(12/37)bla相似文献