毛细管电泳在检测大肠癌hMLH1基因突变中的应用

目的:建立应用毛细管电泳(CE)联合激光诱导荧光检测(LIF)技术分析单链构象多态性(SSCP)检测人大肠癌hMLH1基因点突变的方法。方法:以PCR法扩增42例散发性大肠癌病人与20名健康志愿者的外周血基因组DNAhMLH1基因第12外显子,采用CELIF法进行SSCP分析,对异常片段用CE直接测序鉴定;研究不同筛分介质(线性聚丙烯酰胺LPA)浓度、分离温度和分离电压对CE行为的影响。结果:42例散发性大肠癌hMLH1基因第12外显子经CESSCP分析发现4例(9.52%)有突变,CE测序证实为T1151A的杂合子点突变,20名健康志愿者未发现突变。较高浓度的LPA(4%～6%)、较低分离温度(20℃)和较高分离电压(9kV)有助于单链DNA峰分离。结论:调整适宜的LPA浓度、分离温度和分离电压可提高CE分析SSCP的效率。应用CELIF技术SSCP分析检测hMLH1基因点突变过程快速、高效、重复性好,适合临床大样本筛查,有望成为检测基因突变的新方法。     

hMLH1A655G／A多态性与结直肠癌发病的相关性

目的研究错配修复基因hMLH1A655多态性与结直肠癌发病的关系。方法提取135名健康人和115例结直肠癌患者的外周血DNA．聚合酶链反应-变性高效液相色谱（PCR．DHPLC）技术及DNA序列分析检测hMLH1A655多态性,采用病例对照研究统计分析hMLH1A655多态性与结直肠癌发病的关系。结果hMLH1A655G检出率在正常人群和结直肠癌患者中分别为3．0％和11．3％,两组比较差异有统计学意义（P〈0．01）。管状或乳头状腺癌中A655G检出率为8．2％．黏液腺癌中检出率为27．8％,两者比较差异有统计学意义（P〈0．05）。而hMLH1A655G／A多态性与年龄、性别及有无淋巴结转移无明显相关（P〉0．05）。结论hMLH1A655A—G突变可能在结直肠癌的发病过程中具有重要影响．并且hMLH1A655多态性有可能成为结直肠癌患者预后风险评估的一个指标。     

胃癌易感性与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因+49A/G多态性的关系

目的 探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(CTLA-4)基因外显子1区+49A/G位点多态性在中国人群中的分布及其与胃癌易感性的关系.方法 应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)方法检测205例胃癌患者和262例正常对照者CTLA-4基因+49A/G多态位点基因型频率,进行多态性与胃癌易感性的关系分析并进行分层分析.结果 CTLA-4基因外显子1区+49位点A/G、G/G基因型在胃癌组患者中的分布频率明显高于对照组(P＜0.01,OR=2.146;P＜0.01,OR=3.215);分层分析示:男性患者、年龄在40～55岁之间、不吸烟、不饮酒患者组等组别的胃痛患者携带G/G基因型的频率较正常对照组显著增加.结论 CTLA-4基因外显子1区+49A/G多态性与胃癌易感性有明显相关,携带A/G、G/G基因型的个体胃癌发病风险增加,分层因素也影响这一结果.     

IgA肾病患者C1GALT1C1基因的体细胞突变筛查

目的 探讨IgA肾病（IgAN）患者β1,3半乳糖转移酶的分子伴侣Cosme编码基因C1GALT1C1基因体细胞突变情况。方法 27例IgA肾病患者及19例正常健康对照作为研究对象。提取研究对象外周血基因组DNA,扩增C1GALT1C1基因的编码区,采用PCR产物直接测序的方法进行突变筛查。然后,分离其中15例IgA肾病患者及7例健康男性对照的外周血B淋巴细胞,提取DNA。对C1GALT1C1基因编码区进行扩增,PCR产物进行克隆,各挑选平均8～10个克隆进行体细胞突变筛查。结果 46例个体全血基因组DNA的PCR扩增产物测序发现,2例患者及1例健康对照存在外显子T393A变异,次等位基因频率（MAF）为6．9%[SNP数据库（dbSNP）报告为9．5%]。B淋巴细胞DNA序列分析显示,在22例个体（15例IgA肾病患者,7例健康对照）送检的总共202个克隆中,未发现新的突变和多态性位点。结论 C1GALT1C1基因编码区T393A多态位点在本研究人群中为唯一发现的多态性位点,其次等位基因频率（MAF）较既往报道略低。本研究尚未发现IgA肾病患者B淋巴细胞存在体细胞突变。     

中国人遗传性非息肉病性结直肠癌家系错配修复基因突变的研究

目的探讨中国人遗传性非息肉病性结直肠癌(HNPCC)家系中hMLH1、hMSH2基因遗传性突变情况。方法取14个符合中国人HNPCC标准的HNPCC家系肿瘤先证者外周血DNA样本,聚合酶链反应扩增hMLH1、hMSH2基因共35个外显子,应用变性高效液相色谱技术(DHPLc)结合DNA测序法检测突变。结果14个家系中共发生41个大肠癌和19个肠外恶性肿瘤,其中胃癌是最常见的肠外恶性肿瘤类型。14个患者中检测到分属于9个家系的12个遗传性单个碱基改变,其中8％为无义突变,25％为错义突变,其余42％为单核苷酸多态,17％为内含子区的单碱基改变,8％为同义突变。结论(1)应用DHPLc成功检测到hMLH1、hMSH2基因杂合性突变。(2)符合中国人HNPCC标准家系约有1／3可检出hMLH1、hMSH2基因遗传杂合性突变,其中错义突变较多见。     

胃癌与细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4基因启动子区域多态性的相关性研究

目的探讨细胞毒性T淋巴细胞相关抗原（CTLA）-4基因启动子区-1722位点（T／C）多态性和-1661位点（A／G）多态性与中国汉族人群中胃癌的相关性。方法采用聚合酶链反应（PCR）-限制性片段长度多态性（RFLP）方法，对183例胃癌患者和116例中国汉族正常对照者进行CTLA-4基因-1722位点和-1661位点多态性检测。结果与正常对照组比较，胃癌患者CTLA-4基因-1661位点AA基因型频率，-1661位点A等位基因频率显著降低（65．6％vs84．5％；P〈0．01；odds ratio=0．3499；95％CI=0．1943—0．6299；81．1％vs91．8％；P〈0．01；odds ratio=2．6040；95％CI=1．521—4．458）。结论CTLA-4基因启动子区-1661位点A等位基因与中国汉族胃癌显著相关。     

错配修复基因hMLH1和hMSH2在胃癌中的表达及其临床病理学意义

目的探讨错配修复基因在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理学行为的关系。方法采用免疫组织化学法,半定量检测胃癌组织中hMLH1、hMSH2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况,并与临床病理参数作相关分析。结果56例胃癌中,hMLH1蛋白的阳性表达率为75%,hMSH2蛋白为100%;在Ⅰ、Ⅱ期胃癌、胃窦部胃癌、淋巴结转移阴性胃癌中,hMLH1蛋白的表达明显降低(P<0.05),并且hMLH1蛋白的表达与PCNA的表达在胃癌各期呈明显正相关(r=0.86,P<0.01)。结论hMLH1蛋白可能与早期和(或)胃窦部胃癌的发生有关。     

中国汉族人3个家族性激素耐药型肾病综合征家系WT1和PLCE1基因突变分析

目的 分析中国汉族人家族性激素耐药型肾病综合征（SRNS）家系WT1和PLCE1基因突变及其特点。 方法 研究对象为A、B、C 3个汉族人SRNS家系的先证者（已除外NPHS2基因突变）及其父母,A、B 2个家系先证者的姐姐,50例尿检正常的汉族成年人作为对照人群。取所有研究对象外周静脉血3 ml,提取基因组DNA,PCR扩增WT1基因全部10个外显子和PLCE1基因全部31个编码外显子及其周围的部分内含子,应用直接DNA序列测定法和限制性片段长度多态性PCR（RFLP-PCR）分析法检测WT1和PLCE1基因变异。 结果 未发现WT1和PLCE1基因的致病突变。但是,在3个SRNS家系的先证者检测到3个WT1基因多态性：126C>T（P42P）、IVS5－64A>G和903A>G（R300R）,其中IVS5－64A>G为新发现的WT1基因多态性,126C>T和903A>G已见文献报道;还检测到13个PLCE1基因多态性 －134A>G、810T>C（C270C）、960G>A（E320E）、IVS11－28C>G、IVS15+26A>C、4724G>C（R1575P）、IVS20+40C>T、IVS21+64G>A、IVS22－26T>A、5320C>T（T1777I）、5780A>G（H1927R）、IVS27+24A>G和IVS31+48_49insT,其中IVS22－26T>A为新发现的PLCE1基因多态性,其余12个PLCE1基因多态性已见公布。 结论 WT1和PLCE1基因突变不是本研究3个中国汉族人家族性SRNS家系的主要致病原因。     

大肠腺瘤及其癌变组织hMLH1和hMSH2表达及其临床意义

目的　探讨错配修复基因hMLH1和hMSH2在大肠腺瘤癌变中的意义。方法　采用免疫组化方法对 6 3例大肠腺瘤、2 0腺瘤癌变、2 0例大肠癌的hMLH1和hMSH2表达进行了检测。结果　显示错配修复基因hMLH1、hMSH2在大肠腺瘤、腺瘤癌变和大肠癌表达率逐渐降低 ,且随腺瘤不典型增生加重表达率也逐渐降低 ,hMLH1、hMSH2表达缺失率与肿瘤发生部位相关 ,右半结肠明显高于左半结肠。结论　DNA错配修复基因功能缺失与大肠癌的发生有关 ,可能系大肠癌发生过程中的早期事件 ,且左、右半结肠大肠癌的发生机制可能有所不同。     

白细胞介素10基因多态性与系统性红斑狼疮和狼疮肾炎的关系

目的 研究白细胞介素10（IL-10）基因启动子区－3575和－2763位点多态性在中国南方地区汉族人群中的分布及其与系统性红斑狼疮（SLE）和狼疮肾炎（LN）的关系。 方法 符合1982年美国风湿病学会SLE诊断标准的SLE患者103例，包括男13例，女90例，其中62例为LN。健康对照组110例，其中男21例，女89例。全部对象均为无血缘关系的中国南方地区汉族人群。应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性 (PCR-RFLP)方法，对上述对象进行IL-10基因启动子区－3575和－2763位点多态性检测。 结果 IL-10基因启动子区 －3575位点多态性在中国南方地区汉族人群中普遍存在。与健康对照组比较，SLE患者IL-10基因启动子区－3575位点TT基因型频率和T等位基因频率均明显降低（P < 0.05）。与同性别健康对照者比较，女性SLE患者IL-10基因启动子区－3575位点TT基因型频率、T等位基因频率和携带者频率分布均明显降低（P < 0.05）。LN患者和健康对照组IL-10基因启动子区－3575位点各基因型频率、等位基因频率和携带者频率分布等差异均无统计学意义。在SLE患者和健康对照者均未发现IL-10基因启动子区－2763位点多态现象，均为AA基因型。 结论 IL-10基因启动子区－3575位点多态性与SLE有关，而与LN无关。IL-10基因可能是中国南方汉族人SLE的易感基因     

hMLH1 and hMSH2 gene mutation in Brazilian families with suspected hereditary nonpolyposis colorectal cancer

Background The aim of this study was to search for mutations in the humanmutS homolog 2 (hMSH2) and humanmutL homolog 1 (hMLH1) genes in 25 unrelated Brazilian kindreds with suspected hereditary nonpolyposis colorectal cancer (HNPCC). Methods The families were grouped according to the following clinical criteria: Amsterdam I or II; familial colorectal cancer (CRC); an early age of onset of CRC in the proband only; or with at least one or two relatives who had HNPCC-related cancers; CRC in the proband only. All patients were studied with direct sequencing. Results Ten mutations were detected (10 of 25 [40%]); of nine different mutations, seven were novel. ThehMLH1 gene had a higher mutation detection rate thanhMSH2 (8 of 25 [32%] vs. 2 of 25 [8%]). Only 3 of these 10 families fulfilled the Amsterdam criteria. Two different polymorphisms were detected in thehMLH1 gene and four in thehMSH2 gene. Conclusions ThehMLH1 gene had a higher mutation detection rate thanhMSH2. The physician who deals with CRC must take into consideration the heredity issue with patients who present with an early age of onset or a familial history of CRC- or HNPCC-related cancers, including gastric cancer, even if they do not fulfill the former Amsterdam criteria.     

白介素-18基因多态性与结直肠癌易感性的关系

目的探讨白介素-18（m-18）基因单核苷酸多态性及其单倍型与结直肠癌易感性之间的关系。方法以170例结直肠癌患者和160名健康对照者为研究对象,应用聚合酶链反应一限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）的方法对IL．18基因-137G／C、-607C／A单核苷酸多态性进行基因分型,同时用SHEsis软件分析IL-18基因的连锁不平衡及单倍型频率。结果IL-18基因-607C／A多态性在结直肠癌患者和健康人群中的分布差异无统计学意义（P〉0．05）．而IL-18基因-137G／C多态性在两组人群中的分布差异有统计学意义（P〈0．05）。等位基因频率的相对风险分析显示．C等位基因携带者患结直肠癌的风险是G等位基因的1．814倍（OR=1．814,95％CI：1．246～2．642）。联合基因型分析显示,IL-18基因-137G／C、-607C／A单核苷酸多态性存在着强烈的连锁不平衡（ID＇｜=0．945）,-137C／-607A单倍型频率在结直肠癌患者中显著高于健康人群（P〈0．05）。-137C／-607A单倍型携带者显著增加了结直肠癌的发病风险（OR=1．637,95％CI：1．100～2．437）。结论IL—18基因-137G／C多态性和-137C／-607A单倍型与结直肠癌的发病具有相关性．其中-137C等位基因可能是结直肠癌的遗传易感基因。     

The growth differentiation factor 5 (GDF5) core promoter polymorphism is not associated with knee osteoarthritis in the greek population

Genetic factors have been shown to play an important role in the etiology of osteoarthritis (OA). A functional single nucleotide polymorphism (SNP) +104T/C; rs143383 in the 5′ UTR of the GDF5 gene was recently associated with susceptibility to osteoarthritis in the Japanese and Chinese population. Our objective was to assess whether this SNP was also associated with knee OA in a Greek Caucasian population sample. The +104T/C SNP was genotyped in a total of 519 case–control cohort; 251 patients with idiopathic knee OA and 268 controls were used. No significant differences were found in genotype or allele frequencies of the +104T/C SNP of GDF5 gene between cases and controls (p < 0.05). Also, no significant differences in allelic and genotypic frequencies were found when the individuals were stratified by sex. Our data implied that the +104T/C; rs143383 GDF5 core promoter polymorphism is not a risk factor for OA etiology in Greek Caucasians. Our study highlights the heterogeneous nature of OA genetic susceptibility. © 2007 Orthopaedic Research Society. Published by Wiley Periodicals, Inc. J. Orthop Res 26:136–140, 2008     

diMCC基因511 T/C单核苷酸多态性对结直肠癌的淋巴结转移的影响

目的 检测结直肠癌突变基因(MCC)单核苷酸多态性(SNP)位点511在散发性结直肠癌患者和非癌对照组中的分布情况,并分析其与散发性结直肠癌发病及病理特征的相关性.方法 从172例肿瘤组织和180例非癌对照组血样中提取DNA,采用Taqman探针技术检测MCC基因511T/C多态性表型,并用统计软件计算和比较各基因型的分布.结果 肿瘤组与对照组就MCC基因511T/C多态性的基因表型分布差异无统计学意义(χ2=2.21,P＞0.05).MCC基因511T/C多态性与患者的淋巴结转移情况相关(χ2=6.39,P＜0.05),但与患者性别、年龄、浸润深度、组织类型以及远处转移的发生均无明显相关(P均＞0.05).结论 MCC基因511T/C多态性可能通过引起其邻近的APC基因的缺失或失活参与散发性结直肠癌的淋巴结转移.     

多聚ADP核糖聚合酶1Val762Ala基因多态性与胃癌易感性的关系

目的 研究多聚ADP核糖聚合酶1(PARP-1)的Val762Ala(T2444C)在中国西北甘肃地区汉族人群胃癌患者和健康对照者中的基因型分布频率,并探讨其与胃癌发病风险的关系.方法 采用PCR-限制性片段长度多态性方法,对138例胃癌患者和110例健康体检者(排除肿瘤和消化系统疾病)进行病例-对照的基因分型研究.以logistic回归和X2检验计算比值比(OR)及其95%可信区间(CJ).结果 Val762Ala(T2444C)的Ala等位基因的分布频率在胃癌组(11.5%)明显高于对照组(4.5%),OR值为3.012(95% CI:1.054～8.603,P=0.033).结论 PARP-1 Val762Ala(T2444C)遗传变异与胃癌易感性相关,PARP-1762Ala等位基因型(2444CC)是胃癌的一个易感性标志.     

The CALM1 core promoter polymorphism is not associated with hip osteoarthritis in a United Kingdom Caucasian population

OBJECTIVE: A convincing genetic association with hip osteoarthritis (OA) of a functional single nucleotide polymorphism (SNP) in the core promoter of the calmodulin 1 gene CALM1 was recently reported in a Japanese population. The T-allele of the SNP encoded OA susceptibility and this was mediated by a reduced expression of CALM1. Our objective was to assess whether the SNP was also associated with hip OA in UK Caucasians. METHODS: The SNP was genotyped in 920 cases that had undergone elective joint replacement of the hip due to end-stage primary OA and in 752 age-matched controls. RESULTS: Our study had greater than 97% power to observe an effect comparable to that seen in the Japanese study. However, there was no significant difference (P< or =0.05) in genotype or allele frequencies between our cases and our controls. There was also no significant difference when the cases were stratified by sex. CONCLUSION: Our data on a cohort of 1672 individuals implies that the CALM1 core promoter polymorphism is not a risk factor for OA etiology in Caucasians. Our study does not call in to question the veracity of the Japanese report. Instead it highlights the heterogeneous nature of OA genetic susceptibility.     

DNA损伤修复基因XRCC1 Arg194Trp基因多态性与中国人群结直肠癌易感性的Meta分析

【摘要】 目的 探讨DNA损伤修复基因XRCC1 Arg194Trp基因多态性与中国人群结直肠癌易感性的关系。方法 按照制定的检索策略,通过计算机和手工检索相关数据库,收集有关XRCC1 Arg194Trp基因多态性与中国人群结直肠癌易感性的病例对照研究,按照纳入标准筛选文献、并从纳入文献中提取相关数据,以病例组和对照组基因型分布的比值比(OR)为效应指标,应用Stata12.0软件进行异质性检验,对各研究原始数据进行Meta合并,并行敏感性分析和发表偏倚的评估。结果〓本Meta分析共纳入11项病例对照研究,累积病例2710例,对照3567例。根据各研究间的异质性,采用不同的模型进行合并效应量。在等位基因比较(T vs C) [OR(95%CI)=1.18(1.01-1.39),P=0.036],纯合子比较模型(TT vs CC) [OR (95%CI)=1.39(1.02-1.90),P=0.038],显性模型(CT/TT vs CC) [OR(95%CI)=2.24(1.78-2.82),P<0.001] 以及隐性模型 (TT vs CT/CC) [OR(95%CI)=1.23(1.02-1.49),P=0.030]均存在显著的统计学差异。发表偏倚评估均未见明显偏倚。结论〓在中国人群中,携带突变等位基因T或突变纯合子TT的人群罹患CRC的风险有所升高,而在显性遗传模型中,携带有CT/TT基因型的人群其CRC的易感性明显升高。