PTEN与肿瘤的研究及基因治疗进展

 PTEN是迄今为止人类发现的第一个具有磷酸化酶功能的抑癌基因,PTEN功能的缺失与肿瘤的发生密切相关,该基因异常将导致蛋白表达下降从而失去抑癌作用。目前,有关PTEN 基因的研究已经涉及到了其治疗研究,主要是通过转基因技术将野生型PTEN 基因导入恶性肿瘤基因组中,替换肿瘤细胞中突变的 PTEN 基因,发挥正常 PTEN 基因的抑癌功能。文章就当前PTEN的发现、结构、作用机制与肿瘤的关系及其基因治疗的研究进行综述。     

抑癌基因PTEN与肺癌关系研究的最新进展

PTEN是1997年发现的一种新的抑癌基因,具有双重特异性磷酸酶活性。研究发现该基因的突变与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。PTEN基因在细胞的生长发育、信号转导和细胞凋亡过程中起重要作用。成为继p16、p27后又一有重要意义的抑癌基因。本文重点阐述PTEN与肺癌的关系。1 PTEN     

PTEN及其与前列腺癌关系的研究进展

抑癌基因PTEN是迄今为止人们发现的唯一具有双重特异性磷酸酶活性的基因,即脂质磷酸酶活性和蛋白磷酸酶活性。该基因的变异与人类多种肿瘤的发生发展及预后有关。本文就PTEN的研究进展及其与前列腺癌的关系进行了综述。1PTEN基因的概述1.1PTEN的发现1997年,Li等[1]采用代表性差     

抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖的抑制及作用机制

目的探讨抑癌基因PTEN对肝癌细胞增殖和细胞周期的调控作用。方法构建野生型PTEN基因和突变型PTEN基因的真核表达载体pEGFP—WT—PTEN和pEGFP—PTEN;G129R。采用脂质体介导的基因转染法,分别将上述载体转染不表达PTEN蛋白的人肝细胞肝癌细胞系HHCC,经G418筛选,获得稳定表达PTEN蛋白的细胞克隆。以流式细胞仪测定细胞周期,以Western blot法分析稳定表达PTEN蛋白的肝癌细胞内源性的磷酸化AKT表达水平,同时与未进行基因转染和转染空载体pEGFP-C1的HHCC细胞进行对照。结果稳定表达野生型PTEN蛋白的肝癌细胞,细胞生长受到明显抑制,与转染空载体的HHCC细胞比较,G1期细胞比例显著增高,G2期和S期细胞比例显著降低,且差异有统计学意义（P〈0．05）;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,与转染空载体的HHCC细胞比较,差异无统计学意义（P〉0.05）。与转染空载体的HHCC细胞比较,稳定表达野生型PTEN蛋白的HHCC细胞,其内源性磷酸化AKT水平明显减低;而转染突变型PTEN基因的HHCC细胞,其AKT水平无明显变化。结论野生型PTEN基因对肝癌细胞周期具有调控作用,而突变型PTEN基因丧失对肝癌细胞周期的调控作用;野生型PTEN基因可能通过降低AKT的活化而实现对肝癌细胞周期的调控。     

抑癌基因PTEN的突变缺失与乳腺癌

PTEN基因是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因，大量研究表明，乳腺癌的发生常伴有PTEN蛋白表达的缺失或减弱，提示该基因的突变失活与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关。现简要综述PTEN与乳腺癌关系的研究进展。     

抑癌基因PTEN与食管癌关系的研究进展

目的:总结抑癌基因PTEN在食管癌组织中遗传学及表观遗传学研究的历史、现状及面临的问题.方法:应用PubMed及CNKI期刊全文数据库检索系统,以“PTEN基因、食管癌、遗传学和表现遗传学”等为关键词,检索2000-01-2012-06的相关文献.纳入标准:1)PTEN基因在食管癌组织的表达;2)PTEN基因在食管癌中遗传学及表观遗传学改变;3)PTEN基因在食管癌发生和发展的机制;4)PTEN基因表达对食管癌的治疗及预后分析的意义.根据纳入标准符合分析文献36篇.结果:抑癌基因PTEN在食管癌中表达水平显著下调,并与食管癌TNM分期及预后存在相关性.PTEN基因点突变与食管癌的临床进展关系不明确.食管癌存在PTEN基因杂合性缺失及微卫星不稳定,但与食管癌的临床病理特征无关.PTEN基因多态性与PTEN蛋白质表达水平及食管癌危险因素的关系尚无定论.PTEN基因表观遗传学改变研究较少,对PTEN蛋白功能的影响及在食管癌的进展过程中的意义尚不明确.PTEN基因在食管癌低表达的确切机制有待进一步研究.结论:PTEN基因参与食管癌细胞生长、分化、凋亡及细胞信号传导,与食管癌的发生、发展、治疗及预后密切相关.     

乳腺癌细胞转染野生型PTEN质粒后转移能力的变化

 目的 研究抑癌基因PTEN对乳腺癌细胞转移的影响。方法 脂质体介导法将外源野生型抑癌基因PTEN转染入该基因缺陷的ZR-75-1乳腺癌细胞中，用嘌呤霉素筛选阳性克隆,Western- blot法检测PTEN蛋白表达；重组人工基底膜上检测黏附与侵袭能力。结果 转染后ZR-75-1乳腺癌细胞PTEN蛋白有明显表达；转染后ZR-75-1乳腺癌细胞侵袭抑制率与黏附抑制率分别达70.4 %和60.0 %。结论 PTEN基因对乳腺癌细胞转移具有一定的抑制作用；PTEN基因的缺失与否在一定程度上可以评价乳腺癌患者发生转移的危险程度。     

PTEN 基因与肺癌相关性研究进展

PTEN是第一个被发现的具有双重特异性磷酸酶活性的抑癌基因，它的突变、失活和表达下调与肺癌的发生、发展和预后密切相关，并且在肿瘤化疗耐药中发挥重要作用。因此，针对PTEN基因的研究有助于对肺癌的预防和治疗。本文结合国内外最新报道，对PTEN基因与肺癌相关性研究进展作一综述。     

抑癌基因PTEN的突变缺失与乳腺癌

PTEN基因是具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,大量研究表明,乳腺癌的发生常伴有PTEN蛋白表达的缺失或减弱,提示该基因的突变失活与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关.现简要综述PTEN与乳腺癌关系的研究进展.     

子宫内膜癌PTEN基因突变、mRNA和蛋白表达的探讨

PTEN基因是1997年由Steck等三个研究小组分别发现并命名的第一个具有磷酸酯酶活性的抑癌基因,又称MMAC1/TEP1[1],现已在多种肿瘤中发现该基因不同形式的异常,但关于子宫内膜癌组织中PTEN基因的改变缺乏系统研究.本研究从DNA、mRNA和蛋白水平对50例子宫内膜癌和15例正常子宫内膜组织同一标本中PTEN基因的改变进行检测,以探讨PTEN基因与子宫内膜癌发生发展的关系.     

pcDNA3.0/PNP-CD和pcDNA3.0/PNP表达载体的克隆和表达

目的 :构建新型PNP/Mep dR自杀基因系统的融合和单基因表达载体。方法 :利用DNA重组技术制备融合自杀基因PNP CD ,将其和PNP单基因分别插入真核表达载体pcDNA 3 0中 ,构建融合与单自杀基因表达载体pcDNA 3 0 /PNP CD和pcD NA 3 0 /PNP ;酶切、PCR及测序鉴定两重组体。结果 :成功构建了两个新型自杀基因载体并实现在HepG2肝癌细胞株中的表达。结论 :两个新型自杀基因表达载体 ,尤其是PNP CD融合自杀基因载体 ,是肿瘤基因治疗中广谱、高效的治疗载体。     

PNP 表达质粒的构建及鉴定

 目的 构建并鉴定一种新型的PNP自杀基因表达载体。方法 将PNP基因插入到pcDNA3．0中，构建PNP基因表达载体pcDNA3．0／PNP；通过酶切、PCR及测序鉴定重组体。采用脂质体介导法将pcDNA3．0／PNP转染三种肿瘤细胞株，RT—PCR检测PNP基因在各细胞株中的表达。结果 目的片段均成功插入相应的载体中，CMV启动子调控下的PNP基因在不同的肿瘤细胞株中实现了表达。结论 CMV启动子调控的PNP基因表达载体是肿瘤基因治疗中一种新型、高效的治疗栽体。     

bcl-2、bax和mdrl基因表达与急性白血病的治疗及预后

目的 :研究探讨 bcl- 2基因、bax基因和 m drl基因表达与急性白血病的治疗及预后的关系。方法 :用链亲和素—胶体金原位杂交检测了 5 6例 AL 患者的 bcl- 2、bax和 mdrl基因表达。结果 :bcl- 2和 mdrl基因低表达及 bax基因高表达患者的完全缓解率 (CR)高 ,bcl- 2 /bax比值 <0 .6患者的 CR率更明显高于 >1.2者 (P<0 .0 0 1)。结论 :bcl- 2、m dr1及 bax基因表达是 AL 相对预后不良因素 ,bcl/bax比值更是决定 AL 预后好坏的关键指标。     

非小细胞肺癌中c-Met、EGFR、K-Ras和EML4-ALK基因的检测分析

的 探讨非小细胞肺癌（NSCLC）中肝细胞生长因子受体（c-Met）基因扩增与临床病理特征的关系以及分析c-Met与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的相关性。方法 采用荧光原位杂交技术（FISH）检测108例NSCLC患者的c Met基因扩增情况,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测EML4-ALK融合基因及c-Met基因表达量,聚合酶链扩增反应（PCR）及直接测序法检测EGFR和K-Ras基因突变情况,并分析c-Met基因与临床病理特征的关系及其与EGFR、K-Ras和EML4-ALK驱动基因的关系。结果 NSCLC中c-Met基因扩增率为1.85％,其在吸烟和非吸烟患者中扩增率分别为2.94％和1.35％;腺癌c-Met基因扩增率为1.23％,鳞癌未发现c-Met基因扩增;仅Ⅰ期和Ⅲ期中分别有1例c-Met基因扩增。NSCLC中EGFR、K-Ras基因突变及EML4-ALK融合基因的阳性率分别为42.59％、5.56％和12.04％。结论 FISH法对c-Met基因扩增检出率与qRT-PCR检测的c-Met基因表达水平基本一致;c-Met基因扩增与EGFR、K-Ras突变及EML4-ALK融合基因之间几乎是不共存的,c-Met扩增与NSCLC患者年龄、性别、吸烟状态、肿瘤组织类型及临床分期无关。     

间变性大细胞淋巴瘤的ALK和c-myc基因研究

 目的　探讨间变性大细胞淋巴瘤（ALCL）中间变性淋巴瘤激酶（ALK）基因与c-myc基因的分子遗传学改变。方法　收集原发系统性ALCL石蜡包埋组织标本72例,利用间期荧光原位杂交（FISH）技术检测ALCL肿瘤组织中ALK和c-myc基因结构与数目的变化。结果　72例ALCL中,ALK阳性者42例,40例存在涉及ALK基因的染色体易位,其中17例同时伴有ALK基因的多拷贝;ALK阴性的30例均未发现ALK基因的易位,但其中14例存在ALK基因的多拷贝。ALK基因多拷贝的发生率在ALK阳性与 阴性组中的差异无统计学意义（P＞0.05）。72例病例中,均未发现涉及c-myc基因的染色体易位,但其中24例存在c-myc基因的多拷贝。结论　大部分ALCL伴有ALK基因的异常（75.0 %）。以涉及ALK基因的染色体易位最为多见（55.6 %）,ALK基因多拷贝也是ALCL较为常见的遗传学改变（43.1 %）。前者只出现于ALK阳性ALCL中,后者既可出现在ALK阳性也可出现在ALK阴性的ALCL中。ALCL中不见或罕见涉及c-myc基因的染色体易位,但c-myc基因多拷贝的现象较为常见（33.3 %）。     

Fas/APO-1基因转染食管癌Eca-109细胞及其表达

 目的　通过将Fas/APO 1基因转染食管癌细胞 ,比较转导前后基因及蛋白的表达水平。方法　运用已构建的Fas/APO 1真核表达质粒 ,用脂质体介导法将目的基因导入Eca 10 9细胞 ,筛选克隆细胞以Southernblot ,Northernblot ,Westernblot法检测Fas/APO 1基因的表达。结果　转导株与非转导株均有Fas/APO 1cDNA的表达 ,但转导株在基因及蛋白水平的表达均明显高于非转导株。结论　Fas/APO 1基因在食管癌细胞中处于低表达状态 ;通过基因转导能有效增强其表达。     

肿瘤双自杀基因治疗系统pTRKH2-PsT/CD,pTRKH2-PsT/UPRT在厌氧婴儿双歧杆菌中的构建

Objective: We recombine the suicide gene CD, UPRT into plasmid pTRKH2 and clone the recombinant dual suicide gene therapy system into tumor-hypoxia-targeting vector Bifidobacterium infantis and characterize its function. Methods: CD gene, UPRT gene and lactic acid bacteria expression plasmid pTRKH2 were digested by restriction endonuclease BamH I and Sal I, and constructed recombinant plasmids pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT in E. coll. The recombinant plasmids were then transfected into Bifidobacterium Infantis by electroporation. Identification of pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT was processed by dual restriction endonuclease digesting and sequencing. RT-PCR and SDS-PAGE were used to examine the expression of CD and UPRT genes at RNA and protein levels. The killing effects on Melanoma B16-F10 cells by pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT suicide gene therapy system with 5-FC were examined by MTT assay. Results: The CD gene and UPRT gene was successfully recombined into lactic acid bacteria expression plasmid pTRKH2. After dual endonuclease digestion of plasmid purified from the positively transfected E. co/i, two fragments of 6.9 Kb and 1.3 Kb were found for CD gene and two fragments of 6.9 Kb and 620 bp were found for UPRT gene. The sequencing of CD gene and UPRT gene proved consistent sequences with Genebank published data. A fragment of 1.3 Kb for CD gene and fragment of 620 bp for UPRT gene was found in recombinant Bifidobac- terium by RT-PCR. A 52 KDa protein for CD gene was identified in whole-cell protein of recombinant Bifidobacterium and a 26 KDa protein for UPRT gene was identified in supernatant fluid of recombinant Bifidobacterium. The survival rate of tumor cells treated by extracts from culture of recombinant Bifidobacterium with 5-FC showed a strong killing effects of pTRKH2/CD and pTRKH2/UPRT dual suicide gene therapy system on Melanoma B16-F10 cells. Conclusion: CD gene and UPRT gene are suc- cessfully inserted into pTRKH2 and transfected into tumor-hypoxia-targeting vector Bifldobacterium Infantis. This dual suicide gene therapy system shows a high efficiency for tumor cells killing.     

小鼠Doc-1R基因的克隆及其表达

背景与目的：Doc-1R基因是1999年克隆的一种新的基因,已有的研究表明Doc-1R基因可能是一种潜在的抑癌基因。为了进一步研究此基因的功能,我们首先克隆了小鼠的Doc-1R基因,并对此基因的表达进行了初步的研究。方法;根据小鼠的Doc-1R基因cDNA序列,设计合成了基因组特异引物,应用巢式PCR对小鼠基因组步移文库进行扩增。对测序结果进行序列分析及剪接位点的鉴定。另外应用RT－PCR的方法研究了Doc-1R基因在小鼠肝,脾,胰,肾,肺,肠,心,脑,骨,肌肉,膀胱,卵巢,睾丸等13种组织的表达。结果：经二次基因组步移获得了小鼠Doc-1R基因组全长序列。基因组全长2787bp,含4个外显子和3个内含子,外显子与内含子接头符合GT／AG法则。RT－PCR结果表明,Doc-1R基因在小鼠13种组织和器官中均有表达。结论：成功克隆了小鼠Doc-1R基因,为进一步研究此基因的功能奠定了基础。RT－PCR表达结果提示此基因可能是对维持组织器官的功能具有重要的作用的管家基因。     

人bax基因逆转录病毒表达载体的构建及其在Hela细胞中的表达

[目的] 构建带有报告基因EGFP的bax基因逆转录病毒表达载体，建立高表达bax基因的Hela细胞。[方法] 通过RT-PCR方法从Hela细胞克隆bax基因，根据基因工程原理，经PCR、酶切等方法构建bax基因和报告基因EGFP双基因逆转录病毒表达载体pLBax SN-IRES2-EGFP．转染Hela细胞后，荧光显微镜和Western Blotting检测bax基因的表达情况。[结果] 成功构建了带有EGFP的bax基因的逆转录病毒表达载体，并将其转入Hela细胞。[结论] 成功建立的高表达bax基因的Hela细胞株，为探讨bax基因与放射敏感件之间的关系奠定了基础。     

自杀基因治疗恶性肿瘤的研究现状及展望

肿瘤的自杀基因疗法是近年来肿瘤基因治疗的研究热点,是一种具有潜在临床应用前景的新的肿瘤基因治疗策略。本文就近年来自杀基因疗法在肿瘤治疗中取得的研究进展,分别从作用机制、自杀基因系统、旁观者效应、自杀基因的转导以及联合基因治疗等几个方面进行综述。