5-LOX siRNA对人肝癌HepG2细胞裸鼠瘤生长的作用和ERK的影响

目的研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响。方法将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制。再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型。裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2)。接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积。Westernblot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达。结果转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖。     

Effects of 5-LOX siRNA on growth and ERK signal transduction pathway of HepG2 cell xenografts in nude mice

目的 研究5-脂氧合酶(5-LOX)siRNA转染人肝癌HepG2细胞后对裸鼠移植瘤生长的作用及对细胞外信号调节激酶(ERK)1/2信号通路的影响.方法 将5-LOX siRNA转染人肝癌HepG2细胞,验证在细胞水平5-LOX表达受抑制.再用转染后的细胞建立裸鼠移植瘤模型.裸鼠分3组:转染组(接种5-LOX siRNA转染的HepG2)、转染空载体组(接种空白质粒转染的细胞)、未转染组(接种未转染的HepG2).接种21 d后处死裸鼠,测量移植瘤体积.Western blot和RT-PCR检测瘤体5-LOX、ERK1/2的蛋白和mRNA表达.结果 转染组肿瘤平均体积与转染空载体组、未转染组比较明显减小(P<0.01),检测瘤体5-LOX、ERK1/2蛋白水平及mRNA表达量明显下降(P<0.05,P<0.01).结论 抑制5-LOX表达可显著抑制肝肿瘤生长,测得ERK1/2表达下降,提示其作用机制可能通过抑制ERK信号转导途径抑制肿瘤增殖.     

靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的探讨靶向PEG10的siRNA真核表达载体(psiRNA-PEG10)对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响。方法建立人肝癌细胞HepG2的荷瘤裸鼠模型,在接种后第14天分别将psiRNA空载体和psiR-NA-PEG10瘤内多点注射进行治疗,观察肿瘤大小变化、组织形态学及超微病理改变。结果psiRNA-PEG10治疗组肿瘤生长受到明显抑制,与生理盐水组和psiRNA组比较差异有显著性(P<0.001),抑瘤率明显高于其他两组,电镜下可见明显的细胞凋亡。结论靶向PEG10的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长有抑制作用。     

减毒沙门菌携带survivin特异性siRNA对肝细胞癌的生长抑制作用及其相关机制

目的：探讨survivin特异性siRNA对肝细胞癌HepG2细胞的生长抑制作用及减毒沙门菌携带survivin siRNA对裸鼠肝癌皮下移植瘤生长抑制作用及其相关机制。方法：针对survivin的siRNA表达载体,脂质体和空质粒2个对照组分别转染肝细胞癌HepG2细胞后,应用RT-PCR和Western blott...     

靶向PEGl0的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长的影响

目的探讨靶向PEGl0的siRNA真核表达载体（psiRNA—PEGl0）对裸鼠人肝癌移植瘤生长的影响。方法建立人肝癌细胞HepG2的荷瘤裸鼠模型，在接种后第14天分别将psiRNA空载体和psilk—NA-PEGl0瘤内多点注射进行治疗，观察肿瘤大小变化、组织形态学及超微病理改变。结果psiRNA—PEGl0治疗组肿瘤生长受到明显抑制，与生理盐水组和psiRNA组比较差异有显著性（P〈0．001），抑瘤率明显高于其他两组．电镜下可见明显的细胞凋亡。结论靶向PEGl0的siRNA真核表达载体对裸鼠肝癌移植瘤生长有抑制作用。     

慢病毒载体介导siRNA沉默Id-1通过ERK1/2信号通路抑制裸鼠人肝癌移植瘤生长

目的 构建慢病毒表达载体介导siRNA沉默Id-1,观察其对人肝癌HepG2细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用及其对ERK1/2信号通路的影响。 方法 构建合成特异性针对Id-1基因的siRNA慢病毒载体,转染肝癌HepG2细胞系,经半定量RT-PCR鉴定筛选沉默效果最佳的细胞系,于倒置荧光显微镜(×400)下观察转染前后细胞的形态学变化。取细胞浓度为5×10⁶ mL^-1的干扰效率最佳的稳定转染细胞系、稳定转染空载体病毒细胞系及正常HepG2细胞系悬液各0.2 mL,分别注射到转染实验组、阴性对照组及空白对照组的裸鼠右腋皮下,每周测量肿瘤体积及裸鼠体质量,绘制肿瘤生长曲线,28 d后处死裸鼠,制作肿瘤组织标本,行常规病理检查,采用半定量RT-PCR及Western-blot方法检测肿瘤组织Id-1,ERK1/2的mRNA和蛋白的表达水平及p-ERK1/2的蛋白表达水平。 结果 倒置荧光显微镜显示,转染前后细胞形态学变化不明显。经半定量RT-PCR筛选出Id-1基因的siRNA慢病毒载体的最佳细胞系为sh31,与稳定转染空载体病毒细胞系相比,目的基因Id-1的表达降低了80%以上,与未干扰的HepG2细胞相比降低了60%; 转染细胞皮下接种后,转染组最终瘤体大小明显小于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。半定量RT-PCR显示,转染组肿瘤组织的Id-1及ERK1/2 mRNA分别为(0.389±0.058)及(0.475±0.079),均明显低于阴性对照组[(0.845±0.113),(0.977±0.082)]和空白对照组[(0.917±0.083),(0.978±0.056)](均为P<0.05)。Western-blot检测显示,转染组的Id-1及p-ERK1/2蛋白均明显低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05)。 结论 Id-1基因特异性siRNA的慢病毒表达载体通过靶向抑制Id-1的表达,明显抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠皮下移植瘤的生长,推测Id-1可能通过调节ERK1/2 MAPK信号通路参与肝癌的发生发展。     

靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因siRNA表达载体裸鼠成瘤抑制作用

目的 探讨靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因siRNA表达载体对人肝癌细胞株裸鼠成瘤的抑制作用.方法 将设计并合成构建好的靶向肝癌HepG2细胞VEGF基因的psuper.retro.neo-VEGF-siRNA表达载体转入HepG2细胞,通过G418抗性筛选出稳定株(HepG2/psuper.retro.neo-VEGF-siRNA,实验组),同时设对照组(HepG2/psuper.retro.neo组)和空白组(HepG2组).分别移植BALA/c裸鼠成瘤,计算各组鼠成瘤潜伏期和接种20 d后瘤重,Western-blotting检测肿瘤组织中VEGF的表达变化,免疫组织化学SP法检测瘤组织内微血管密度(MVD).结果 实验组、对照组和空白组裸鼠成瘤潜伏期分别为(9.2±1.2)、(3.9±0.7)和(3.8±0.9)d;接种20 d后3组平均瘤重分别为(194±57)、(566±86)和(626±96)g;瘤组织VEGF蛋白表达水平分别为(0.075±0.012)、(0.198±0.009)和(0.205±0.008);MVD分别为(13.6±2.8)、(34.3±2.9)和(35.3±3.5),实验组与对照组和空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 合成和构建的靶向人肝癌HepG2VEGF基因干扰质粒具有抑制人肝癌细胞裸鼠成瘤和血管生成的作用.     

靶向重组腺病毒载体逆转肝癌细胞多药耐药的实验研究

目的 探讨携带多药耐药基因1(multidrug resistance gene 1,mdr1)反义RNA重组腺病毒载体靶向逆转甲胎蛋白阳性(AFP+)的肝癌多药耐药细胞HepG2R的疗效及作用机制.方法 将携带AFP启动子和EGFP基因的重组腺病毒载体Adeno-EGFP转染人正常肝细胞LO2(AFP-)、人宫颈癌细胞HeLa(AFP-)及HepG2(AFP+)细胞,检测EGFP基因在各细胞的转录水平,证实重组腺病毒载体的靶向性;将携带AFP启动子和mdr1基因反义核苷酸片段的重组腺病毒载体Adeno-asmdr转染HepG2R细胞和HepG2R裸鼠皮下移植瘤模型,检测Adeno-asmdr在体外和体内逆转HepG2R的活性.结果 EGFP基因在AFP阳性的HepG2细胞可得到显著的转录,而在LO2细胞和HeLa细胞,其转录和表达量极少,显示了该载体的良好转录活性以及靶向特异性;Adeno-asmdr转染HepG2R细胞后,mdr1转录水平下降;Rhodamine 123在细胞内聚集量有所下降;在裸鼠皮下移植瘤实验中,经Adeno-asmdr+ADM处理组,移植瘤体积无增大,TUNEL法检测移植瘤内凋亡细胞增加,而经PBS和ADM处理组移植瘤体积明显增大(P<0.05),ADM处理组移植瘤中出现少量的凋亡细胞,而PBS处理组移植瘤未见凋亡细胞.结论 实验构建的Adneo-asmdr重组腺病毒载体可在AFP阳性HepG2R细胞内特异靶向性表达目的 基因,有效降低mdr1基因产物P-gp170的表达,从而达到对HepG2R细胞MDR的逆转作用;结合化疗药物的作用,可以导致裸鼠皮下移植瘤细胞凋亡增加,阻止瘤体生长.     

survivin和bcl-2双基因敲减对人舌癌裸鼠移植瘤的抑制作用

目的:探讨survivin和bcl-2单基因与双基因敲减后对舌癌裸鼠移植瘤成瘤性的影响。方法:将筛选含有转染survivin siRNA-Tca8113;bcl-2siRNA-Tca8113;survivin/bcl-2siRNATca8113;Negative-siRNA-Tca8113细胞及未转染的Tca8113细胞分组进行培养,细胞数调成1×10~7细胞/ml接种于裸鼠左后肢股部,以无菌生理盐水做阴性对照,隔日观察裸鼠肿瘤发生情况,并测量肿瘤大小、体积。接种5周后处死并测量肿瘤体积大小、比较抑制结果及肿瘤组织切片HE染色病理分析。结果:肿瘤形成率显示空白对照、Lipofectamine和Negative-siRNA三组的裸鼠成瘤率100%,生长速度快、瘤体大;单基因敲减组(bcl-2siRNA、survivin siRNA)和双基因敲减组(survivin/bcl-2siRNA)瘤体较空白对照组小,生长速度慢;双基因敲减组成瘤率低(66.6%),注射生理盐水的阴性对照组接种后未出现肿瘤。肿瘤生长曲线显示空白对照、Lipofectamine、Negative-siRNA三组肿瘤生长速度明显快于单基因敲减和双基因敲减组,而双基因敲减组不仅成瘤延长,而且生长速度明显慢于单基因敲减组。肿瘤抑制率显示双基因敲减(84.5%)明显高于单基因敲减(67.6%和69.8%,P<0.05);肿瘤组织HE染色镜下可见:空白对照、Lipofectamine、Negative-siRNA组肿瘤呈浸润性生长,有大片坏死区,survivin和bcl-2基因敲减后的肿瘤组织与周围组织分界较清,未见明显浸润现象,肿瘤组织坏死区较少。结论:survivin和bcl-2基因敲减能有效抑制裸鼠移植瘤成瘤性,双基因敲减对裸鼠移植瘤抑制作用强于单基因敲减。     

DNA甲基转移酶1基因沉默对HT-29细胞凋亡的影响

目的:观察DNA甲基转移酶1(DNMT1)基因沉默对结肠癌HT-29细胞凋亡的影响.方法:HT-29细胞分为3组:未处理组、对照siRNA组及DNMT1 siRNA组,后2细胞转染对照siRNA和DNMT1 siRNA,24 h后,通过RT-PCR和Western blot观察3组细胞DNMT1、Caspase-3/9、bcl-2及Bax mRNA和蛋白表达的变化,通过流式细胞术分析HT-29细胞凋亡,并测定Caspase-3/9的活性.结果:DNMT1 siRNA组中DNMT1 mRNA和蛋白的相对表达量为(0.273±0.016)和(1.127±0.019),低于未处理组[分别为(1.729±0.023)和(2.741±0.031)]和对照siRNA组[分别为(1.751±0.018)和(2.673±0.027)](F分别为5822.683和3656.560,P均<0.001).DNMT1 siRNA组细胞凋亡率为(22.65%±1.67%),高于未处理组(7.92%±1.29%)和对照siRNA组(8.13%±1.21%)(F=108.460,P<0.001).DNMT1 siRNA组细胞的Caspase-3/9活性[分别为(2671.83±57.63)和(2187.71±68.35)]高于未处理组[(196.47±16.73)和(511.35±34.90)]和对照siRNA组[(215.29±14.38)和(534.78±41.70)](F分别为4790.975和1089.891,P均<0.001).与未处理组和对照组相比DNMT1 siRNA组Bcl-2 mR-NA和蛋白的表达降低,但Caspase-3/9和Bax mRNA和蛋白的表达升高(P<0.05).结论:DNMT1的下调能诱导HT-29细胞凋亡,其可能的作用机制与caspase-3/9、bcl-2和bax表达的变化密切相关.     

电离辐射促羟基磷灰石纳米载体介导的hGM-CSF基因在人肝癌HepG2细胞中的转移及表达

目的观察电离辐射对羟基磷灰石(HA)纳米载体介导的质粒pOR F-hGM-CSF基因转染的影响,并探索能提高HA转染效率的方法。方法转染细胞前,依据不同辐射剂量下的HepG2细胞剂量-存活曲线选出2、4和6 Gy3种不同剂量进行分组照射。48 h后R T-PCR检测HepG2细胞内hGM-CSF的mR NA表达水平以比较转染效率。结果电离辐射可以促进HA纳米载体介导的基因在HepG2细胞中的转移和表达,在辐射剂量为6和4 Gy时,hGM-CSF基因mRNA相对表达量可达(0.9941±0.0703)和(0.9501±0.5619),与剂量为0 Gy的表达量差异有显著性(P<0.05),但与Lipofectamin 2000组比较差异无显著性(P>0.05),故当辐射剂量为6和4 Gy时,HA纳米载体的转染效率可接近Lipofectamin 2000的转染效率。辐射剂量为6、4、2和0 Gy时,培养基中hGM-CSF的分泌量分别为(499.20±5.76)、(497.06±4.54)、(472.53±3.91)和(428.65±7.16)ng/106cell。结论电离辐射可以提高HA纳米载体的转染效率,并且HA纳米载体转hGM-CSF基因的自体肿瘤疫苗联合放疗治疗人类肝细胞癌有望成为可能。     

Cdx2逆转录病毒感染对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响

目的 观察Cdx2基因过表达的重组逆转录病毒载体(pLXSN-Cdx2)对裸鼠人胃癌皮下瘤生长的影响.方法 构建重组逆转录病毒载体pLXSN-Cdx2,建立裸鼠人胃癌皮下瘤模型,将30只裸鼠随机分为pLXSN-Cdx2组、空载体逆转录病毒颗粒pLXSN组和对照组,每组10只.向3组动物肿瘤内分别注射pLXSN-Cdx2、pLXSN或生理盐水0.2 mL,共7次,测量各组肿瘤体积的大小;15 d后处死裸鼠,显微镜下观察移植瘤组织形态变化,应用RT-PCR检测肿瘤中Cdx2基因mRNA的表达,TUNEL检测细胞凋亡指数.结果 pLXSN-Cdx2构建成功;与对照组和pLXSN组比较,pLXSN-Cdx2组的肿瘤生长速度明显减慢(P＜0.05);pLXSN-Cdx2组肿瘤体积为(14.15±2.17)mm3,明显低于pLXSN组和对照组的肿瘤体积(P＜0.05);pLXSN-Cdx2组Cdx2 mRNA的表达量为(2.71±0.65),高于pLXSN组和对照组(P＜0.05).pLXSN-Cdx2组的凋亡指数(14.4±5.3)％显著高于pLXSN组(7.6±2.2)％和生理盐水组(7.7±2.3)％(P＜0.05).结论 重组逆转录病毒载体pLXSN-Cdx2瘤内注射可抑制裸鼠人胃癌皮下瘤的生长.     

RNA干扰环氧合酶2对人腰椎退变终板软骨细胞生长增殖及凋亡的影响

目的 观察沉默环氧合酶2(COX-2)基因对人腰椎退变软骨终板细胞增殖、凋亡的影响.方法 根据COX-2mRNA的序列,分别设计合成4对不同的且能干扰COX-2基因表达的siRNA并筛选出最高效抑制序列,构建以COX-2基因为靶点的RNA干扰质粒并将其转染腰椎退变软骨终板细胞.分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(30 nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(15 nmol/L COX-2 siRNA)和siRNA2组(30 nmol/L COX-2 siRNA).siRNA转染48 h后,采用荧光定量PCR法检测COX-2基因表达;WST-8检测细胞增殖情况;实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)法检测细胞凋亡相关基因survivin、bcl-x1、bax基因表达的情况.结果 构建的4组重组体插入片段的碱基序列完全正确.转染COX-2siRNA 48 h后人腰椎退变软骨细胞中COX-2mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为(1.3±7.2)%和(35.4±3.6)%,均显著低于空白对照组(100±5.7)%和阴性对照组siRNA(83.4±2.8)%,P＜0.05.免疫印迹实验显示COX-2蛋白表达量明显下降,以siRNA2组表达量最低(P＜0.05＝.WST-8法检测显示4组细胞存活率分别为(100.0±8.3)%、(84.9±4.2)%、(52.5±6.7)%、(48.9±5.4)%,siRNA1组和siRNA2组与其他各组相比,差异有统计学意义(P＜0.05＝.实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测显示,随着转染浓度的递增,退变软骨细胞中survivin、bcl-2基因表达较对照组显著降低,bax基因表达则较对照组逐渐升高.结论 RNA干扰COX-2基因能明显抑制人腰椎终板软骨细胞COX-2的表达,抑制细胞生长增殖,并可通过下调抗凋亡基因survivin和bcl-2的表达,上调促凋亡基因bax的表达,从而诱导退变软骨终板细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the influence of siRNA-COX-2 gene upon the growth inhibition and apoptosis of cartilage endplate chondrocytes and provide new methods and evidence for siRNA in gene therapy of cartilage endplate chondrocytes. Methods According to the sequence of COX-2 mRNA,COX-2 siRNA was designed, synthesized, cloned into the GFP reporter pcDNA6. 2GW/EmGFPmiR vector and transfected into Hep cell line. The integrity of inset fragment was detected by colony PCR ( polymerase chain reaction) and sequencing analysis. The cultured cartilage endplate chondrocytes were divided into 4 groups: control group (untreated), negative siRNA group (treatment with 30 nmol/L negative control siRNA), siRNA1 group (treatment with 15 nmol/L COX-2 siRNA) and siRNA2 group (treatment with 30 nmol/L COX-2 siRNA). The biological activity of recombinants was identified with the interference efficiency of COX-2 siRNA recombinant by real-time PCR and Western blot. And the effects of COX-2 inhibitor on the growth of chondrocytes were detected by WST-8 and the mRNA expressions of survivin, bcl-2 and bax genes measured by real-time PCR. Results The sequences of inset fragment in 4 siRNA expressing recombinants were correct After COX-2 transfection, the expression of COX-2 mRNA in chondrocytes was 51.3% ±7. 2%in the siRNA1 group and 35.4% ±3.6% in the siRNA2 group. Western blot showed that the expression of COX-2 protein decreased, especially in siRNA2 group (P ＜ 0.05 ). And the cell survival rate was 100.0% ±8.3% in the control group, 84.9% ±4.2% in the negative control siRNA group, 52.5% ±6. 7% in the siRNA1 group and 48.9% ± 5.4% in the siRNA2 group ( P ＜ 0. 05 ). Meanwhile, the expressions of mRNA of survivin and bcl-2 decreased while the expression of bax mRNA increased in degenerative cartilage endplate chondrocytes transfected with COX-2 siRNA ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion COX-2-targeting siRNA inhibits the expression of COX-2, suppresses the proliferation of chondrocytes and induces the cell apoptosis. These effects may be attributable to the up-regulation of survivin and bcl-2 and the downregulation of bax.     

黏着斑激酶基因对白血病细胞生物学特性的影响

 【目的】本实验研究黏着斑激酶（FAK）基因对白血病细胞生物学特性的影响。【方法】构建FAK shRNA慢病毒载体,转染至REH白血病细胞株,同时建立空白载体对照细胞株。通过蛋白质印迹方法检测FAK蛋白表达情况,予荧光染料Annexin V标记细胞观察细胞凋亡情况。体外应用Transwell培养体系,观察白血病细胞在细胞因子SDF-1作用下的迁移能力。将REH细胞予绿色荧光CFSE进行标记,经尾静脉注射到SCID小鼠,观察白血病细胞在动物体内归巢及白血病生成情况。【结果】FAK shRNA慢病毒载体在REH白血病细胞蛋白水平的抑制率为75%。凋亡实验中,空白对照组和FAK基因沉默组Annexin V⁺ 细胞百分比分别为（2.19 ± 0.36）％ 和（6.48 ± 0.58)）％。体外迁移实验发现空白对照组与FAK基因沉默组的细胞迁移百分比分别为（50.3±7.22）％和（7.6±3.15）％;动物体内归巢实验发现FAK基因沉默的细胞归巢于骨髓能力明显降低。白血病动物实验发现空白载体对照组小鼠生存时间是40～47 d,而FAK基因沉默组小鼠生存时间是72～80d。白血病细胞输注后第45天,空白载体对照组与FAK基因沉默组小鼠骨髓中白血病细胞所占百分比分别为（65.5 ± 8.20）％和（9.60 ± 3.65）％。【结论】FAK 基因沉默能诱导白血病细胞凋亡,并降低白血病细胞迁移及归巢能力,并抑制白血病生成,提示分子靶向FAK基因有望成为白血病治疗的新策略。     

Delta样分子4/Notch信号途径对人脐静脉内皮细胞生物学行为的影响

目的 特异性阻断Delta样分子4(Dll)4/Notch信号途径,观察其对细胞生物学行为的影响.方法 将自行构建的含短发夹样结构介导RNA干扰(RNAi)抑制Dll4基因表达的重组腺相关病毒(rAAV)载体(rAAV-Dll4-shRNA)感染人脐静脉内皮细胞(HUVEC),以空病毒载体rAAV感染[HUVEC(-)组]及未转染细胞HUVEC(HUVEC组)为对照.半定量逆转录(RT)-PCR,Western印迹分别检测HUVEC细胞Dll4 mRNA和蛋白的改变;流式细胞技术分析细胞周期分布,MTT比色法检测细胞的生长抑制率,采用基质胶三维培养系统观测HUVEC体外血管形成能力的变化.结果 HUVEC(+)组和对照组[HUVEC组、HUVEC(-)组]Dll4 mRNA表达与内对照GAPDH的比值分别为0.636±0.082、0.972±0.022和0.948±0.046(P=0.024),Dll4蛋白表达与内对照B-肌动蛋白的比值分别为0.632±0.052、2.016±0.048和1.946±0.066(P=0.033).rAAV-Dll4-shRNA转染HUVEC后,HUVEC(+)组及HUVEC组增殖指数分别为(39.9±2.2)%、(25.7±4.5)%(P=0.036).HUVEC在基质胶中形成小管样结构72 h时HUVEC(+)组与对照组[HUVEC组、HUVEC(-)组]细胞长度分别为(12.5±0.5,8.7±7.7,8.5±3.0,P=0.028).结论 Dll4/Notch信号途径对HUVEC生长、增殖、小管样结构形成能力发挥负性调控作用,特异性阻断Dll4/Notch信号途径将为进一步深入研究肿瘤新生血管生成、分化、成熟过程中提供新的思路和方法.     

纳米金-表阿霉素复合体的体外抗肿瘤作用

 摘 要：【目的】 观察纳米金-表阿霉素复合体(epirubicin-nanogold compounds, EPI- AuNP)能否抑制人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)、人肝癌细胞(HepG2)的增殖。【方法】 采用化学合成法制备EPI-AuNP,通过紫外-可见吸收光谱、荧光淬灭实验、动态光散射及Zeta电位变化对其进行鉴定。体外实验分为AuNP处理组、EPI处理组、EPI- AuNP处理组和空白对照组。将HUVECs、HepG2细胞分别接种于96孔板,培养24h后各组分别加入AuNP溶液、EPI溶液、EPI-AuNP溶液和无血清培养液200?l,继续培养24h后：MTT比色法检测HUVECs、HepG2细胞生存率;紫外-可见分光光度法检测各细胞内EPI的积聚量。【结果】 紫外-可见吸收光谱显示：AuNP的最大吸收峰在520nm处,而EPI-AuNP在525nm处。EPI (100mg/L)荧光强度为195.2±7.5;EPI-AuNP为16.4±5.0,P=0.000。AuNP的平均粒径及Zeta电位分别为：(14.34?0.75) nm、(-21.19?0.64)mV;EPI-AuNP为：(18.54?1.84)nm、(-15.34?0.72)mV,P<0.01。体外实验：MTT比色法结果显示EPI处理组HUVECs、HepG2细胞的生存率分别为(29.25? 1.59)%、(71.10?4.16)%;EPI-AuNP处理组：(21.29?1.51)%、(43.82?2.21)%,P=0.000。【结论】 成功合成EPI-AuNP复合体,体外实验证实其对HUVECs、HepG2细胞均具有增殖抑制作用。     

光动力作用对人肝癌细胞HepG2的影响及其机制探讨

目的 研究血卟啉衍生物光动力作用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡及其机制.方法 应用流式细胞仪分析光动力作用后细胞凋亡及免疫组化染色检测凋亡相关蛋白bcl-2蛋白、bax蛋白表达水平.结果 血卟啉衍生物光动力组人肝癌细胞HepG2凋亡率达(25.28±1.52)%,与对照组相比,差异有极显著意义(P＜0.01);并且光动力作用后凋亡相关蛋白bcl-2表达显著高于对照组(P＜0.05).结论 血卟啉衍生物光动力作用具有诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的生物学效应,而凋亡调控蛋白bcl-2表达水平的降低可能是血卟啉衍生物光动力作用诱导人肝癌细胞HepG2凋亡的一个重要机制.     

儿茶素抑制肝癌细胞增殖、诱导凋亡作用研究

目的观察表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对肝癌HepG2细胞Cyclin D1,Bcl-2表达的影响,探讨EGCG抗肿瘤的作用机制。方法采用MTT法观察EGCG对肝癌细胞HepG2增殖的影响,免疫细胞化学法、Western blot法分别检测EGCG作用后Cyclin D1,Bcl-2的表达。结果 EGCG呈浓度依赖性抑制肝癌HepG2细胞增殖(P<0.05),免疫细胞化学和Western blot的结果均显示EGCG作用后Cyclin D1和Bcl-2的表达下调。结论 EGCG可能通过下调Cyclin D1,Bcl-2的表达,抑制HepG2细胞增殖的同时诱导细胞凋亡,从而发挥抗肿瘤的作用。     

RNAi干扰Notch-1对人肝癌细胞BEL-7402 AFP表达及细胞增殖的影响

目的采用RNAi干扰细胞通讯因子Notch-1对肝癌细胞BEL-7402中AFP表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制BEL-7402细胞中Notch-1的表达,采用qRT-PCR和Western blotting法,检测其对AFP表达的影响,采用MTI法测定细胞增殖情况。结果 siRNA抑制Notch-1达后,AFP mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较BEL-7402细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论 Notch-1 siRNA可以下调肝癌细胞BEL-7402中AFP mRNA及其蛋白的表达水平,抑制BEL-7402细胞的生长,提示Notch-1基因在肝癌细胞的发生、发展中具有重要作用,Notch-1可能是AFP过量表达肝癌的治疗靶点。