福建地区乙型肝炎病毒基因型分布及特征

目的明确福建地区乙肝病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型的分布情况及其特征。方法通过巢式PCR法分片段扩增慢性乙肝患者HBV全基因组序列,构建系统发育树确定福建地区乙型肝炎病毒主要基因型、血清型;同时结合HBV-DNA载量、血清标志物等检测结果分析福建地区乙肝基因型分布特征。结果从147例血清样本中成功扩增126例HBV完整基因序列;系统进化树分析表明,126例血清样本中B基因型78例(61.90%),C基因型42例(33.33%),B/C混合型6例(4.76%),未检测到其他基因型。血清型以adw2和adrq+为主,分别占63.49%和36.51%;不同基因型的分布与患者年龄、性别、HBV-DNA载量、所在地区均无相关性(P0.05),而与患者血清标志物HBe Ag的阳性率、HBV血清型具有一定的相关性(P0.05)。结论福建地区乙肝基因型主要以B型和C型为主,另见少量B/C混合型。B、C不同基因型的分布与患者血清标志物HBe Ag的阳性率及HBV的血清型具有一定相关性。     

重庆地区C/adrq+亚型 HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列的初步建立

目的：建立重庆地区基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列，为HBV变异的研究奠定基础。方法：测定18例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列，应用同源性分析和对齐比较等方法确定HBV亚型，并拟定基因型C／血清型adrq HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreCC标准参照序列。结果：9株基因型B／血清型adw2、6株基因型C／血清型adrq ，3株基因型B／血清型aywl；建立的重庆地区HBV基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列与东北华南地区同亚型的标准序列比较分别用13个、2个核苷酸差异，可引起4个、1个氨基酸差异。结论：初步建立了重庆地区基因型C／血清型adrq HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准照参照序列。     

阿德福韦酯耐药株感染者乙型肝炎病毒基因型和多聚酶区基因变异分析

目的了解阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型、多聚酶区基因变异位点和变异类型,并分析HBV基因型和多聚酶区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测73例阿德福韦酯耐药患者HBV基因型、多聚酶基因区变异位点、病毒载量。结果 73例阿德福韦酯耐药株感染者中,HBV B基因型占35.6%,C型占64.4%;HBV多聚酶基因区基因突变位点主要以rtA181V/T(39.8%)、rtN236T(31.5%)为多见,rtA181V/T+rtN236T(20.5%),其他(8.2%);其中rtA181V/T位点变异中B型占10.3%,C型占89.7%;rtN236T位点变异中B型占78.3%,C型占21.7%。rtA181V/T+rtN236T位点变异B型占26.7%,C型占73.3%;基因型B和C的病毒载量分别为(6.38±1.24)lg和(6.27±1.10)lg拷贝/毫升。结论阿德福韦酯耐药株感染者HBV基因型主要为B型和C型;HBV多聚酶区基因突变位点主要为rtA181V/T和rtN236T,基因型与多聚酶区基因突变位点之间有一定相关性。C基因型易发生rtA181V/T变异,B基因型多出现rtN236T变异。C基因型比B基因型更易出现rtA181V/T+rtN236T双突变,可能与C基因型容易导致的严重的肝脏疾病有关,基因型与病毒载量之间无相关性。     

重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC 基因标准参照序列的初步建立

目的：建立重庆地区HBV流行株PreS／S、EnhⅡ/CP／PreC基因标准参照序列，为HBV变异的研究莫定基础：方法：测定15例无症状携带HBV的PreS／S、EnhⅡ/CP／PreC序列，应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型／血清型，并拟定标准参照序列。结果：9株基因型B／血清型adw2、3株基因型B／血清型aywl、3株基因型C／血清型adrq ；建立的重庆地区HBV流行株(基因型B／血清型adw2)PreS／S、EnhⅡ/CP／PreC标准参照序列与华东华南地区同亚型的标准参照序列比较分别有6个、1个核苷酸差异。结论：初步建立了重庆地区HBV流行株PreS／S、EnhⅡCP／PreC基因标准参照序列。     

浙江省农村自然人群隐匿性乙型肝炎病毒感染（OBI）情况及进化特征分析

 【摘要】目的 了解浙江省德清县农村一般人群隐匿性及实际乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染情况及病毒株S基因的分子特征。方法 采用多级抽样方法进行横断面调查,在取得调查对象知情同意的基础上采集调查表信息并采血。采用Epidata 3.2软件录入调查表信息,双录入并核对;采用SPSS 18.0软件进行数据分析;对所有样品进行乙型肝炎表面抗原（hepatitis B surface antigen,HBsAg) ELISA检测及病毒载量real time PCR测定,并对HBsAg检测阳性或病毒载量测定阳性的标本进行后续HBV S基因PCR扩增和测序;采用MEGA 5.0软件对测得序列进行进化分析。结果 共调查对象1 720例,调查人群中HBsAg阳性者共162例,隐匿性乙型肝炎病毒感染(occult hepatitis B virus infection,OBI)者共4例,实际HBV感染率为9.65% (166/1 720),OBI感染率为2.57‰ (4/1 558)。显性和隐匿性病毒株病毒载量中位数及四分位数范围分别为866 (425,12 500)IU/mL和314 (216,677.5)IU/mL,前者显著高于后者。HBsAg阳性血清样本扩增得到71株显性病毒株S基因序列,HBsAg阴性血清样本扩增得到4株OBI病毒株S基因序列。OBI病毒株均为C基因型,adrq+血清型。显性HBV病毒株54株为B基因型,其中有2例标本为adw3血清型,其余52例均为adw2血清型;余17株为C基因型,adrq+血清型。OBI病毒株中C基因型的比例显著高于显性HBV病毒株中C基因型的比例。B基因型显性病毒株发生I104F、L109V、I110L、S113T、T126I、P127T、Q129R、M133L、F134L、P135A、T140A、K141I、T143M/S、V159A、Y161F、A166G和R169P突变,C基因型显性病毒株发生I126S、I126T及F158S突变。OBI病毒株发生Q129R、I126T、 M133T及F161Y突变。结论 浙江省德清县一般人群存在一定比例的OBI感染,OBI感染病毒载量较低,OBI病毒株存在氨基酸突变,C基因型为其可能的优势基因型,需重视OBI预防问题。     

广东地区乙肝病毒基因型B及血清型adw2流行株参照序列的建立

目的建立广东地区乙型肝炎病毒流行株全基因参照序列。方法测定16例慢性无症状HBV携带者HBV基因组全序列，应用同源性分析及对齐比较等方法确定基因型和血清型，并选相同基因型和血清型的HBV全基因建立参照序列。结果10例基因型B／血清型adw2、4例基因型C／血清型adrq＋、2例基因型C／血清型adw2；相同基因型和血清型HBV各序列间X基因差异最大，不同亚型间C基因差异最小；建立的广东地区基因型B／血清型adw2乙型肝炎病毒流行株参照序列与根据GenBank中我国不同地区相同亚型HBV全序列建立的标准参照序列相比仅有两个核苷酸的差异，引起X基因一个氨基酸不同。结论初步建立了广东地区乙型肝炎病毒基因型B／血清型adw2流行株全基因参照序列，为研究本地区乙肝病毒基因变异奠定基础。     

长春地区乙型肝炎病毒基因分型

目的：探讨长春地区慢性乙型肝病患者中乙型肝炎病毒（HBV）基因型特点。方法：慢性乙型肝病患者血清中提取HBV DNA,经巢式聚合酶链法(nested-PCR )扩增HBV S基因区片断,利用双脱氧链末端终止法检测HBV S区核苷酸序列并进行基因型分析。结果：39株HBV中C基因型23株,其中16株为C基因型adr亚型,7株为C基因型adw亚型;16株为B基因型adw亚型; 未发现ayr及ayw型;有2株存在“a”决定簇变异;与参照序列比较,S基因存在多处点突变,部分 点突变导致所编码的氨基酸变异;同以往研究的结果类似,未发现癌特异性的HBV S基因变异。结论：研究对象中HBV存在C基因型和B基因型, C基因型为主要基因型;HBV相关性慢性肝病患者中HBV S基因存在序列多态性。     

慢性乙肝病毒B亚型感染儿童不同HBeAg状态下 CP基因变异测定

目的:了解HBV基因型B/adw2型的慢性HBV感染儿童不同血清HBeAg状态下HBV C区启动子基因的变异.方法:选择HBV基因型为B型/血清型adw2的慢性HBV感染儿童64例,按血清HBeAg不同状态分为血清e抗体阳性组(n=34)和e抗原阳性组(n=30)2组,以HBV DNA为模板行PCR反应扩增S区序列(确定HBV基因型)及C区启动子(CP)基因片断,CP基因片断经胶回收纯化后,应用T-A克隆技术构建重组质粒pGEM-CP,经蓝白斑筛选,阳性克隆以凝胶电泳、双酶切及PCR验证后将鉴定正确的克隆测序,将测序结果与Entrez database中血清亚型及基因型相同的HBV序列相比较并进行分析.结果:S区基因测序结果证实64例儿童感染的HBV基因型均为B型/血清型adw2.CP基因测序结果证实2组均有CP基因变异,血清e抗体阳性组CP变异率(29.41%)高于e抗原阳性组(6.67%)(P＜0.05).e抗体阳性组有4个变异热点,而e抗原阳性组无变异热点.结论:慢性乙肝病毒B亚型感染儿童存在CP基因变异,且可能与e抗原血清转换有关.     

HBeAg阳性的慢性乙型肝炎患者应用阿德福韦治疗过程中HBV P区变异情况分析

目的 研究HBeAg阳性的慢性乙型肝炎(CHB)患者应用阿德福韦治疗过程中P区变异情况.方法 选取4例服用阿德福韦患者的系列血清,包括用药前的基线血清(Baseline,简称BL)、用药后半年(28周)、一年(52周)、二年(92周)的血清,将4份系列血清用一片段PCR法进行HBV全基因组克隆、测序,并将测序结果进行基因型及血清型分型、P区变异分析.结果 4例系列血清的基因型及血清型分型:1号为C基因型/adrq 血清型;2号为B、C混合基因型/adw2、adrq 混合血清型;3号、4号为B基因型/adw2血清型.在P基因的反转录酶区,有几处非常有意义的有义突变,其中有2例病人在P-ORF与S-ORF重叠区,即反转录酶区存在1处完全相同的热点变异,很可能会影响反转录酶的活性,而使HBV对ADV产生耐药逃逸.结论 HBeAg阳性的CHB患者应用阿德福韦治疗过程中,P区有几处非常有意义的氨基酸变异,很可能与HBV对阿德福韦的耐药逃逸有关.     

慢性乙型肝炎患者乙肝病毒B、C基因型和阿德福韦酯耐药基因的相关性

目的:研究本地区HBV基因型分布;探讨阿德福韦酯长期治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型和阿德福韦酯耐药基因突变的关系。方法:选取320例阿德福韦酯治疗>3年,治疗前乙肝病毒载量>105拷贝/ml、无相关耐药基因的自然变异并符合其他入选标准慢性乙型肝炎患者进入此研究。PCR法检测HBV基因分型,305例单一B型或C型的患者中,36例可疑耐药的患者用基因芯片法检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯相关耐药突变位点。结果:①慢性乙型肝炎患者中HBV基因型包括B型53.1%(170/320)、C型42.2%(135/320)、B和C混合型4.7%(15/320)、未检出其他型。②305例基因型为B型或C型的患者中36例发生病毒学突破,病毒学突破率为11.8%。③36例出现病毒学突破的患者中有35例检测出阿德福韦耐药突变基因型。B基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占54%(19/35),C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占46%(16/35),B、C两种基因型耐药基因突变率无差别(P=0.854)。④C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变主要为N236T及其混合突变型69%(11/16)。结论:皖南地区HBV基因型以B型为主;HBV基因型与阿德福韦酯耐药突变无关,但C基因型患者以N236T及其混合突变型为主;检测HBV基因型和相关耐药突变是评价慢性乙型肝炎临床治疗疗效的重要指标。     

HBV-DNA高水平孕妇的HBV 前S和S区基因突变及基因分型

 【目的】 研究HBV-DNA高水平孕妇的HBV前S(前S1和前S2)及S区的基因突变模式和基因分型,为从病毒因素探讨HBV母婴传播免疫阻断失败提供实验基础。【方法】 选取血清HBsAg阳性且HBV-DNA≥105 IU/ mL的孕妇41 例,提取血清HBV-DNA,靶向设计HBV各基因型的前S及S区通用引物, 经PCR 扩增测序进行序列分析, 检测和分析前S及S区基因的突变情况,并进行基因分型。【结果】 ①在 41 例样本中, 共有29例( 70.73%)样本存在前S1、前S2及S区基因突变,突变方式以碱基置换为主;前S1、前S2及S区基因的突变频率分别为8.96%、9.88%和3.24%,前S1和前S2区的突变频率显著高于S区(P < 0.05)。②对41例样本根据S区点突变的特点进行基因分型及同源树簇集分析,结果B基因型22例,C基因型19例,两基因型在全S区的基因突变频率相比,差异无统计学意义(P > 0.05);B、C两基因型分别形成独立的簇集,簇集间同源性<90%,但簇集内B、C两个基因型的同源性分别达96%和95%。【结论】 ①HBV-DNA高水平孕妇的HBV 前S及S区的基因突变普遍存在,突变形式以碱基置换为主,突变频率以前S1和前S2区常见,S区则相对稳定;②不同HBV基因型间同源性差异较大,按HBV不同基因型分别进行前S和S区基因突变模式的分析将更有意义。     

乙型肝炎病毒P区耐药突变与基因型及临床相关性分析

目的探讨HBV的P基因耐药突变的分布特征以及与基因型、临床的相关性。方法对慢性乙肝患者的血液样本进行P基因核苷类似物作用靶区进行聚合酶链反应,扩增产物进行测序,比较序列差异性,同时对其进行基因分型检测。结果 79例乙型肝炎患者共检测出B基因型61例（79.2%）,C基因型18例（20.8%）。通过对HBV-DNA进行P区测序表明耐药突变以拉米夫定耐药为主,为27例（51.9%）;其中B基因型对拉米夫定和阿德福韦的耐药率分别为31.1%（19/61）和9.8%（7/61）,二者交叉耐药率为6.6%（4/61）;而C基因型对拉米夫定和阿德福韦的耐药率分别为44.4%（8/18）和22.2%（4/18）,二者交叉耐药率为16.7%（3/18）,明显高于B型基因（P〈0.05）。慢性肝炎患者中,B型显著多于C型,为89.4%（59/66）;肝癌、肝硬化等重症中,B型感染者则明显少于C型感染者,为15.4%（2/13）（P〈0.05）。结论 79例患者HBV基因型以B型为主,C型次之,耐药突变主要以拉米夫定耐药为主,临床与基因型及耐药突变有显著性关联。     

HBV相关肝细胞癌患者HBV前S/S基因变异的分析

目的:研究肝细胞癌(Hepatocellular carcinoma,HCC)患者体内乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)前S/S基因变异特点.方法:分别对9例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性肝癌患者及其家族中11例HBsAg阳性者血清乙肝病毒前S/S基因PCR扩增克隆.测序并进行结构分析.找出基因变异活跃位点,再对两组资料作统计学分析.结果:除对照组中1例未能扩增出前S/S基因,仅能扩增出S基因,其它样本均扩增出前S/S基因片段.所有HBV株均为B或C基因型和adrq 或adw2血清型.肝癌患者来源的HBV在包膜蛋白抗体结合区点突变发生率较高,但与对照组相比,没有统计学差异(P＞0.05).肝癌组4例发生HBV前S区删除变异,具有特异性.与对照组(0/10)相比,有统计学差异(P＜0.05).结论:HBV前S/S区点突变可能与肝癌发生没有相关性,而前S区删除变异可能与肝癌发生有密切联系,应当对HBV感染者进行前S区基因变异监测.     

韶关地区乙型肝炎患者HBV亚基因型的分布

目的 探讨韶关地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况. 方法 应用PCR法结合琼脂糖电泳方法对378例乙型肝炎患者进行基因分型和检测,根据PCR产物大小直接判定HBV基因型,应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样品的亚基因型,并探讨前S区编码情况. 结果 在378例乙型肝炎患者中B基因型263例占69.6％,C基因型113例占29.9％,BC混合型2例占0.5％.B基因型中HBeAg阳性患者占66.5％,抗-HBe阳性占33.5％. 结论 广东韶关地区乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,C型次之,少量BC混合型,HBV复制强弱与病毒基因型无关.     

拉米夫定耐药株感染者基因型、HBV DNA及多聚酶P区基因变异的关系

目的分析拉米夫定耐药株感染者的基因型、HBVDNA及多聚酶P区基因变异的关系。方法应用PCR扩增和直接测序法检测83例拉米夫定耐药患者HBV基因型、HBVDNA及多聚酶P区的基因变异。结果83例拉米夫定耐药患者B基因型26例,C基因型57例,B型YIDD变异率69．2％（18／26）、YVDD变异率30．8％（8／26）,C型YIDD变异率63．2％（36／57）、YVDD变异率33．3％（19／57）,B、c基因型发生YMDD变异模式无统计学差异（P〉0．05）;B型rtM204I突变率53．8％（14／26）,综合变异率46．2％（12／26）,C型rtM2041变异率26．7％（15／57）,综合变异率73．7％（42／57）,B、C基因型变异位点类型有统计学差异（P〈0．05）;耐药变异时c型HBVDNA水平（6．60±1．42）lg拷贝／毫升高于B型（5．88±1．46）1g拷贝／毫升,YIDD变异时c型（6．40±1．48）lg拷贝／毫升、B型（5．68±1．32）1g拷贝／毫升,YVDD变异时C型（6．18±1．87）1g拷贝／毫升、B型（6．82±1．45）lg拷贝／毫升;rtM204I变异时B型（6．12±1．45）lg拷贝／毫升、C型（5．57±1．45）lg拷贝／毫升（P〉0．05）;综合变异时c型（6．68±1．51）lg拷贝／毫升,B型（5．76±1．57）lg拷贝／毫升（P〈0．05）。结论c基因型拉米夫定耐药发生率高于B型;基因型与变异位点类型有关,与YMDD变异模式无关;耐药变异时HBVDNA水平c型高于B型,与综合变异有关,与YMDD变异模式无关。     

乙型肝炎病毒家族聚集性感染者基因型分布及基础核心启动子和C区变异的研究

目的 探讨家族聚集性乙肝感染者HBV基因型和基础核心启动子（BCP）、前C/C区变异的特征,及其临床意义。方法 选择家族聚集性慢性乙型肝炎（CHB）98例（来自38个家族）作研究组和非家族聚集性CHB 110例作对照组;应用型特异性引物巢式PCR法检测HBV感染者的HBV基因型,PCR测定BCP、前C/C区核苷酸序列,并且检测患者血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TBIL）、白蛋白（ALB）、乙型肝炎两对半和HBV-DNA载量等临床指标。结果 家族性乙肝母亲和（或）父亲与子女感染组以C基因型为主（52.9%）,家族水平成员感染组和对照组以B基因型为主（分别为73.3%、67.3%）,仅检测到少数B/C和B/D混合型（共8.7%）,并且乙肝家族中母亲和（或）父亲与子女感染组C基因型所占百分比高于家族水平成员感染组及非乙肝家族（P＜0.05）。家族内HBV聚集感染的基因型基本相同,不一致者为混合型。HBV C基因型的家族CHB患者比非乙肝家族具有更高的HBV-DNA载量,更高的BCP区A1762T/G1764A双突变率（P＜0.05）。结论 家族聚集性CHB患者HBV基因型可能与传播途径有关,C基因型更易发生垂直传播。家族聚集性HBV C基因型感染的患者更易发生BCP区A1762T/G1764A双突变,HBV C基因型感染并且BCP区A1762T/G1764A双突变可能是家族聚集感染者病情进展的危险因素。