桂林地区乙肝患者HBV B基因亚型分布研究

目的:研究桂林地区乙肝患者HBV B基因亚型分布特点,为本地区乙型肝炎的防治提供依据.方法:采用巢式PCR技术扩增乙肝患者HBV的S基因,经测序后与标准序列比对,采用Mega 5.0构建系统树进行基因亚型分型.结果:从120例乙肝病毒患者中鉴定出3个以前报告的乙肝病毒亚型,序列分型B2 104例,占86.7％;B4 1例,占0.8％;B5 1例,占0.8％,其中14例未分出亚型,占11.7％.结论:桂林地区HBV B基因亚型主要以B2为主,其次为B4、B5,未发现B1、B3、B6亚型.     

泰安地区HBV基因型分布及临床意义

目的了解泰安地区乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型分布情况,探讨HBV基因型与临床的相关性。方法随机选择泰安地区HBV患者,其中无症状HBV携带者37例,慢性乙型肝炎68例,乙型肝炎肝硬化35例,原发性肝癌26例。应用PCR微板核酸杂交EL IS A技术,进行血清HBV基因分型测定。结果166例标本中,160例(96.39%)可检出基因型,其中B基因型47例(28.31%),C基因型109例(65.66%),B+C混合基因型4例(2.4%);未检出A、D、E、F基因型。结论泰安地区HBV感染者中,HBV基因主要存在B、C、B+C型,不同基因型与慢性乙型肝炎、肝硬化、原发性肝癌有相关性,C基因型HBV感染者较B基因型更易发展成肝硬化、原发性肝癌。     

莱芜地区HBV基因型分布及临床意义

目的了解莱芜地区乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）基因型分布情况,探讨HBV基因型与临床的相关性。方法随机选择莱芜地区HBV感染患者231例,其中无症状HBV携带者45例,慢性乙型肝炎68例,乙型肝炎肝硬化65例,原发性肝癌53例。应用双波长实时荧光定量PCR技术,进行血清HBV基因分型测定。结果 231例标本中,216例（91.14%）可检出基因型,在阳性结果中B基因型39例（18.06%）,C基因型179例（82.87%）,B＋C混合基因型5例（2.31%）,未检出非B非C基因型。结论莱芜地区HBV感染者中,HBV基因主要存在C型,不同基因型与慢性乙型肝炎、肝硬化、原发性肝癌有相关性,C基因型HBV感染者较B基因型更易发展成肝硬化、原发性肝癌。     

成都市HBV基因型分布特点及其临床意义

目的 了解成都市乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布特点,探讨HBV基因型与疾病临床表现的相关性.方法 随机选择成都市HBV感染者422例,采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法(PCR-RFLP)鉴定HBV基因型.结果 HBV/B基因型366例占86.7%(366/422),HBV/C基因型53例占12.6%(53/422),HBV/D基因型3例占0.7%(3/422).B、C基因型感染者相比,HBeAg、抗-HBeAg阳性率及HBV DNA水平的差异均无统计学意义(P＞0.05),C基因型感染者更易发生肝硬化(P=0.004)及肝细胞癌(P=0.029).结论 成都市HBV感染者所携带的HBV存在B、C、D 3种基因型,以B型为主,其次c型,D型最少;C基因型感染者更易发生较严重的肝脏疾病,如肝硬化及肝细胞癌.     

四川地区乙型肝炎患者HBV基因型分布特点研究

目的了解四川地区乙肝患者乙型肝炎病毒基因型分布特点。方法采用PCR条带分析法与基因测序分析相结合的方法,对四川地区500例乙型肝炎患者血清中HBV—DNA进行基因分型。结果500例HBV感染患者HBV-DNA基因型分布情况为：A型3例（0．6％）,B型284例（56．8％）,C型186例（37．2％）,D型7例（0．8％）,B＋C型12例（2．4％）,C＋D型6例（1．2％）,未能分型2例,未发现E、F、G、H型。结论四川地区HBV基因型以B型为主,C型次之,A、D型较少,与我国其余地区HBV基因型分布特征基本吻合。     

成都地区HBV基因型分布及临床意义

目的了解成都地区HBV基因型分布情况及其临床相关性。方法选择成都地区HBV感染者207例,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析（PCR—RFLP）及S基因直接测序法检测HBV基因型。结果B基因型182例,C基因型24例,D基因型1例;慢性乙型肝炎患者中,男、女组均以B型占优势,性别间差异无统计学意义;B型在年龄〈30岁组所占的比例（91．8％）高于年龄≥30岁组（80．9％）（P〈0．05）,C型在年龄≥30岁组所占的比例（19．1％）高于年龄〈30岁组（7．2％）（P〈0．05）;B、C型HBeAg和抗-HBe阳性率比较差异无统计学意义,C型HBVDNA水平高于B型患者（P〈0．05）;C型肝硬化组＋原发性肝癌组发病率高于B型（P〈0．05）。结论成都地区存在B、C、D3种HBV基因型,B基因型为优势毒株,C基因型患者HBV DNA水平较高,且与较严重肝病有关。     

168例HBsAg阳性患者HBV基因型分布及临床表现分析

目的研究乙型肝炎表面抗原(HBsAg)阳性患者乙型肝炎病毒(HBV)基因型分布及临床表现。方法选择上海市杨浦安图医院2010年1月至2013年8月收治的168例HBsAg阳性患者为研究对象,采用实时荧光定量聚合酶链反应方式进行HBV基因型的筛选,并比较不同基因型患者的肝炎严重程度、肝功能指标及肝纤维化指标。结果 HBV-B型占78.57%,C型占11.43%;HBV-B型患者的炎症活动程度、肝纤维化程度均弱于HBV-C型患者,HBV-B型患者与HBV-C型患者比较,谷草转氨酶[(34.8±6.8)U/L vs(58.2±9.3)U/L]、谷丙转氨酶[(32.9±5.7)U/L vs(54.7±8.9)U/L]、碱性磷酸酶[(83.8±11.4)U/L vs(153.9±18.2)U/L]、γ-谷氨酰转肽酶[(32.7±7.4)U/L vs(78.2±11.3)U/L]、总胆红素[(21.3±4.4)μmol/L vs(35.2±8.5)μmol/L]、HBV-DNA拷贝数[(11.5±3.2)×106vs(32.8±6.2)×106]、血清透明质酸[(60.8±10.3)μg/L vs(114.2±17.4)μg/L]、层粘连蛋白[(109.3±14.6)μg/L vs(188.3±20.4)μg/L]、Ⅳ型胶原[(72.4±11.8)μg/L vs(145.4±18.9)μg/L]、Ⅲ型胶原N端肽[(10.2±2.6)μg/L vs(17.9±4.1)μg/L]均低于HBV-C型患者。结论入组的HBsAg阳性患者中HBV基因型主要为B型和C型,且B型感染后的炎症活动程度、肝纤维化程度均较弱。     

韶关地区乙型肝炎患者HBV亚基因型的分布

目的 探讨韶关地区乙型肝炎患者血清乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况. 方法 应用PCR法结合琼脂糖电泳方法对378例乙型肝炎患者进行基因分型和检测,根据PCR产物大小直接判定HBV基因型,应用PCR扩增全S基因序列-DNA测序-生物信息学分析方法确定部分样品的亚基因型,并探讨前S区编码情况. 结果 在378例乙型肝炎患者中B基因型263例占69.6％,C基因型113例占29.9％,BC混合型2例占0.5％.B基因型中HBeAg阳性患者占66.5％,抗-HBe阳性占33.5％. 结论 广东韶关地区乙型肝炎患者HBV基因型以B型为主,C型次之,少量BC混合型,HBV复制强弱与病毒基因型无关.     

HBV-DNA高水平孕妇的HBV 前S和S区基因突变及基因分型

 【目的】 研究HBV-DNA高水平孕妇的HBV前S(前S1和前S2)及S区的基因突变模式和基因分型,为从病毒因素探讨HBV母婴传播免疫阻断失败提供实验基础。【方法】 选取血清HBsAg阳性且HBV-DNA≥105 IU/ mL的孕妇41 例,提取血清HBV-DNA,靶向设计HBV各基因型的前S及S区通用引物, 经PCR 扩增测序进行序列分析, 检测和分析前S及S区基因的突变情况,并进行基因分型。【结果】 ①在 41 例样本中, 共有29例( 70.73%)样本存在前S1、前S2及S区基因突变,突变方式以碱基置换为主;前S1、前S2及S区基因的突变频率分别为8.96%、9.88%和3.24%,前S1和前S2区的突变频率显著高于S区(P < 0.05)。②对41例样本根据S区点突变的特点进行基因分型及同源树簇集分析,结果B基因型22例,C基因型19例,两基因型在全S区的基因突变频率相比,差异无统计学意义(P > 0.05);B、C两基因型分别形成独立的簇集,簇集间同源性<90%,但簇集内B、C两个基因型的同源性分别达96%和95%。【结论】 ①HBV-DNA高水平孕妇的HBV 前S及S区的基因突变普遍存在,突变形式以碱基置换为主,突变频率以前S1和前S2区常见,S区则相对稳定;②不同HBV基因型间同源性差异较大,按HBV不同基因型分别进行前S和S区基因突变模式的分析将更有意义。     

慢性乙型肝炎病毒感染者基因型分布及与HBV M关系的初步探讨

目的探讨慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染者基因型分布及与乙型肝炎病毒血清标志物(HBV M)的相互关系。方法采用特异性引物聚合酶链反应PCR(FQ-PCR)法,检测3 400例乙型肝炎患者HBV-DNA,并对1 380例病毒复制大于103copies/ul者,进行ALT、AST、HBV M、HBV基因型检测。结果 1 380份血清中共检出C型1 108例(80.3%),主要分布于乙型肝炎后肝硬化(LC)和原发性肝癌(HCC)患者中;B型247例(17.9%),主要分布于乙型肝炎病毒携带者(ASC)中;B+C混合型25例(1.8%)。不同HBV基因型在HBV-DNA载量、HBe Ag、HBe Ab上存在显著性差异,ALT、AST比较无显著性差异。结论武威地区HBV基因型主要以C型为主,C型HBV-DNA、HBe Ag阳性率显著高于B型,且与较严重的肝脏损伤有关,是影响疾病进程的重要因素。     

乙型肝炎病毒感染相关疾病中病毒基因型和亚型的分布及其与临床指标的关系

目的:明确乙型肝炎病毒(HBV)基因型及亚型在上海及周边地区HBV感染相关的肝细胞癌、慢性乙型肝炎和HBV携带者中的分布,探讨不同基因型及亚型在HBV相关疾病发展进程中的作用.方法:通过多重PCR对462例肝细胞癌患者(HCC组)、234例慢性乙型肝炎患者(CHB组)和110例HBV病毒携带者(ASC组)进行HBV基因型及亚型的鉴定.结果:与CHB组相比,HCC组C型比例增高(P=0.009),B型比例下降(P=0.045),可见少量A、D型;基因型B均为B2亚型;基因型C以C2亚型为主(98.5%),可见少量C1亚型(1.5%).B2和C2型患者中,HCC组比CHB组HBeAg阳性率低(P=0.005,P=0.008),而抗HBe阳性率高(P=0.003,P=0.001).HCC组内混合型HBeAg阳性率最高,明显高于B2型(P=0.016).在40～60岁的HCC患者中,HBV DNA载量B2型＜C2型＜混合型(B2型vs C2型,P=0.029;B2型vs混合型,P=0.021;C2型vs混合型,P=0.041).结论:上海及周边地区HBV基因亚型以C2型为主,B2型次之,HCC、CHB及ASC人群中的基因型构成不同;混合型感染比单一基因型引起的病毒载量和HBeAg阳性率高,更容易导致HCC的形成.     

Hepatitis B virus S gene mutants in infants infected despite immunoprophylaxis

Objective　To assess the correlation between hepatitis B virus (HBV) surface gene mutant infection and hepatitis B (HB) vaccination failure. Methods　Using sera from 106 infants who were born to HBV carrier mothers and failed in HB immunoprophylaxis, HBV S gene was amplified by PCR, transferred to nylon membranes for Southern blots, and then hybridized with oligonucleotide probes. Eleven of non-hybridizing samples were used for DNA sequencing. Results　93.4% (99/106) of the samples were HBV DNA positive, and 30.3% (30/99) failed to hybridize with at least one of the four probes. DNA sequencing confirmed that 10 of the 11 samples had an S gene mutation with amino acid (aa) change. The identified mutants included nucleotide (nt) 546T→A(aa131N→T), nt531T→C (aa126I→T), nt491A→C (aa113T→P), nt491T→A (aa113S→T), nt533C→A (aa127P→T), nt581T→A (aa143S→T), nt636A→T (aa161Y→F), and nt679A→C (aa175L→F). The sequence in one mother-infant pair was completely the same, with mutations at aa131 and aa161. Conclusions　The prevalence of HBV surface mutants is about 30% in the children failing in HB vaccination. HBV mutants can infect infants by maternal-infant transmission.     

乙型肝炎病毒B和C基因型S蛋白特异性CTL表位保守性分析

目的：分析国内流行乙型肝炎病毒（HBV）基因型S区基因编码蛋白的特异性CTL表位保守性,发现稳定且特异性的CTL表位。方法：设计HBV S基因特异性引物,克隆S基因并构建到pIRES载体;利用3种表位分析方法对HBV B和C基因型S区基因编码蛋白特异性CTL表位进行分析筛选,对候选CTL表位用BLAST搜索HBV蛋白库,分析候选CTL表位在HBV B和C基因型中的保守性。结果：成功克隆HBV S基因并构建真核表达载体;根据设定条件,利用生物信息学分析方法对S区基因编码蛋白进行分析共筛选到17个CTL表位,其中已经鉴定6个,未鉴定表位11个;保守性分析发现,在B和C基因型中具有较高保守性的有6个（＞80%）,均是未鉴定的表位,其余表位（包括6个已鉴定）的保守性较低。结论：国内流行HBV基因型间S区基因编码蛋白的特异性CTL表位存在较大差异性,共筛选到6个保守性较高的特异性CTL表位可用于进一步的免疫学研究。     

Relationship between heterogeneity of HBV preS/S gene and intrauterine transmission

Objective: To study the relationship of the mutation of HBV preS/S gene in HBsAg carrying pregnant women and intrauterine transmission. Methods: Polymerase chain reaction (PCR) was used to amplify HBV preS/S gene from sera of 8 HBsAg carrying pregnant women, 4 women's neonates infected with HBV, and the other's neonates non-infected with. The PCR products were cloned and 5 clones were chosen from every woman for DNA sequencing. Results: Heterogeneity of HBV preS/S gene in HBsAg carrying pregnant women having intrauterine transmission was much higher than that from having not intrauterine transmission, and the divergence rate of nucleotide sequences also higher strikingly. Conclusion: High heterogeneity of HBV preS/S gene of HBsAg positive pregnant women may be relative to high rate of intrauterine transmis-     

HBsAg阳性孕妇血清中乙肝病毒前S/S基因的相似株现象

目的：探讨HBsAg阳性孕妇体内HBV病毒前S/S基因变异的状况。方法：应用全长PCR技术从4例表面抗原阳性孕妇血清中扩增出HBV全长基因,将其克隆于pUC19载体,每例随机筛选5个阳性克隆,对其前S/S区进行序列分析。结果：4例患各克隆间均存在碱基的差异,此类患体内HBV株同源性较差。结论：HBsAg阳性孕妇体内HBV株呈“相似株”分布。     

慢性乙型肝炎患者血清自身抗体与HBV基因型关系的研究

目的总结慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血清自身抗体特征和乙型肝炎病毒(HBV)基因型的分布情况,探讨HBV基因型与自身抗体的相互关系。方法对196例CHB患者进行HBV基因分型和血清自身抗体检测,对30例健康体检者进行自身抗体检测。分析HBV基因型、HBV-DNA载量、生化指标、年龄、性别与自身抗体的关系。结果 196例CHB患者中67例(34.2%)自身抗体阳性,阳性率明显高于正常对照组(P0.05);196例CHB患者中基因B型41例,C型134例,B+C型21例,其自身抗体阳性者分别为12例(29.3%)、46例(34.3%)、9例(42.9%),自身抗体阳性率在不同基因型之间差异无统计学意义;自身抗体阳性组和阴性组、高滴度组和低滴度组患者比较,其性别比例、年龄分布、HBV-DNA、生化指标的差异均无统计学意义。结论 HBV慢性感染可以诱导机体产生低滴度非器官特异性自身抗体,且不同HBV基因型诱发自身免疫反应的能力无明显差异。     

128例经血感染HIV患者合并HCV和HBV感染状况

目的了解经血感染人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)患者合并感染乙型肝炎病毒(HBV)及丙型肝炎病毒(HCV)的情况及发病特点。方法回顾性分析128例经血感染HIV患者合并感染HBV和HCV的感染率、肝脏表现及部分免疫学特征。结果128例患者中,单纯合并HCV感染者107例(83.6%),其中40例(31.3%)出现肝功能异常或肝损害,15例(11.7%)合并肝炎症状;单纯合并HBV感染3例(2.3%),均出现肝功能异常和肝炎症状;HIV、HBV、HCV三重感染7例(5.5%),无1例存在肝功能异常和肝炎症状;11例(8.6%)患者未合并HBV或HCV。结论经血感染HIV的患者与HCV的合并感染率高于与HBV的合并感染率,HIV合并HCV感染与HBV感染的临床转归也存在差异。     

慢性乙型肝炎患者乙肝病毒B、C基因型和阿德福韦酯耐药基因的相关性

目的:研究本地区HBV基因型分布;探讨阿德福韦酯长期治疗的慢性乙型肝炎患者HBV基因型和阿德福韦酯耐药基因突变的关系。方法:选取320例阿德福韦酯治疗>3年,治疗前乙肝病毒载量>105拷贝/ml、无相关耐药基因的自然变异并符合其他入选标准慢性乙型肝炎患者进入此研究。PCR法检测HBV基因分型,305例单一B型或C型的患者中,36例可疑耐药的患者用基因芯片法检测乙型肝炎病毒阿德福韦酯相关耐药突变位点。结果:①慢性乙型肝炎患者中HBV基因型包括B型53.1%(170/320)、C型42.2%(135/320)、B和C混合型4.7%(15/320)、未检出其他型。②305例基因型为B型或C型的患者中36例发生病毒学突破,病毒学突破率为11.8%。③36例出现病毒学突破的患者中有35例检测出阿德福韦耐药突变基因型。B基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占54%(19/35),C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变占46%(16/35),B、C两种基因型耐药基因突变率无差别(P=0.854)。④C基因型患者阿德福韦酯相关基因突变主要为N236T及其混合突变型69%(11/16)。结论:皖南地区HBV基因型以B型为主;HBV基因型与阿德福韦酯耐药突变无关,但C基因型患者以N236T及其混合突变型为主;检测HBV基因型和相关耐药突变是评价慢性乙型肝炎临床治疗疗效的重要指标。     

10-23型脱氧核酶对HBV S、C基因体外切割作用研究

目的:探讨10-23脱氧核酶(10-23 DRz)对HBV S基因及C基因体外转录产物的特异性切割作用.方法:分别构建含有HBV S基因或C基因的重组质粒,以线性化的重组质粒为模板,体外转录获得相应HBV S基因RNA及C基因RNA.设计并合成针对HBV S基因的DRz-hbvs-1和针对C基因的DRz-hbvc-1,观察其对靶RNA的体外切割作用.结果:DRz-hbvs-1及DRz-hbvc-1能对各自相应的靶RNA进行有效的特异性切割;无DRz对照组及反义寡核苷酸对照组均未见特异性切割.结论:10-23 DRz能特异性切割HBV S基因及C基因体外转录产物.