二硫代氨基甲酸吡咯烷对兔肺动脉平滑肌细胞增殖的影响

目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对体外培养的兔肺动脉平滑肌细胞(RPASMCs)增殖的影响及其作用机制.方法 体外培养RPASMCs,经不同浓度的PDTC作用不同时间后,应用MTT法观察细胞增殖情况;流式细胞仪分析细胞周期;RT-PCR法检测RPASMCs细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)mRNA表达水平.结果 PDTC能显著抑制10%FBS刺激下的RPASMCs生长.呈浓度、时间依赖性;细胞周期分析显示,PDTC作用24 h后,RPASMCs生长周期受到明显阻滞;RT-PCR检测显示,PDTC可呈浓度依赖性地抑制RPASMCs Cyclin D1 mRNA的表达.结论 PDTC能明显抑制血清诱导的RPASMCs增殖以及阻滞细胞周期进程,而下调细胞周期蛋白Cyclin D1 mRNA表达可能是其机制之一.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷预防腹腔粘连及其机制探讨

目的:探讨腹腔内注射核因子κB(NF-κB)抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对腹腔粘连的预防作用及其作用机制.方法:健康成年SD雄性大鼠96只,随机分成对照组、盲肠型肠粘连模型组(模型组)及PDTC 组(术前1 h腹腔注射PDTC)(n=32).各组大鼠随机分成4个亚组,每组8只,分别于术后第1、3、5、7天开腹观察腹腔粘连情况,进行粘连程度分级评定;同期抽取大鼠下腔静脉血,测定血清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)的含量.结果:腹腔粘连程度分级评定,PDTC组和模型组分别为(1.94±1.16)、 (2.63±1.16),明显高于对照组(0.22±0.42,P<0.01);与模型组相比,PDTC组腹腔粘连程度显著减轻(P<0.05).与模型组相比,PDTC组血清IL-6、TNF-α含量显著降低(P<0.05, P<0.01);对照组与PDTC组无显著差异.结论:腹腔粘连早期,细胞因子TNF-α、IL-6明显升高;PDTC可通过降低血清TNF-α、IL-6的含量来预防腹腔粘连.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷在重症胰腺炎肺损伤中的作用

目的:观察二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)对重症胰腺炎(SAP)大鼠肺损伤的作用并探讨其机制.方法:Wistar大鼠40只,逆行胆胰管注射5%牛磺胆酸钠制备SAP模型.观察血清淀粉酶、动脉血氧分压(PaO2)、肺组织髓过氧化物酶(MPO)活性、支气管肺泡灌洗液(BALF)白蛋白含量;胰腺和肺组织病理变化及核因子-κB(NF-κB)和诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在肺组织中的表达.结果:PDTC组较SAP组血清淀粉酶显著下降,PaO2明显升高,胰腺、肺组织病理损伤减轻,BALF白蛋白含量[PDTC组(17.28±2.55)mg/ml,(16.53±3.08)mg/ml;SAP组(23.56±0.94)mg/ml]和MPO活性[PDTC组(9.18±1.70)U/g,(8.69±2.06)U/g;SAP组(13.29±3.36)U/g]明显下降,同时肺组织NF-κB和iNOS表达下调,P均＜0.05.结论:PDTC对SAP大鼠肺损伤有一定的治疗作用,其机制与其抑制NF-κB活化、抑制中性粒细胞等多种炎性细胞的活化和调控iNOS基因的表达进而抑制一氧化氮的过量生成有关.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸对食管癌细胞系EC1增殖、凋亡及细胞周期的影响

目的:观察吡咯烷二硫代氨基甲酸(PDTC)对食管癌细胞系EC1增殖、凋亡和细胞周期的影响.方法:用不同剂量PDTC(1、5、10、50、100 μmol/L)处理EC1细胞24、48和72 h后,MTT法观察细胞增殖情况,计算细胞增殖抑制率.用不同剂量PDTC(0、5、10、50、100 μmol/L)处理EC1细胞48 h后,测定细胞凋亡率和细胞周期.结果:PDTC可剂量依赖性和时间依赖性地抑制EC1细胞的增殖(F剂量=8.950,P=0.005;F时间=30.718,P<0.001;F交互=60.504,P<0.001).不同剂量PDTC作用48 h后,随着PDTC剂量的增加,EC1细胞凋亡率增加(F=7.020,P=0.001),G0/G1期细胞比例降低(F=771.064,P<0.001),G2/M和S期细胞比例增加(F=963.002、309.332,P均<0.001).结论:PDTC可以抑制食管癌细胞系EC1的增殖,诱导其发生凋亡,并将其阻滞在S期.     

NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐提高胃癌细胞对多西他赛化疗的敏感性

目的探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐（pyrrolidine dithiocarbamate,PDTC）提高胃癌SGC-7901细胞对多西他赛化疗敏感性的作用及其可能的机制。方法体外培养SGC-7901细胞,药物作用分为空白组、PDTC组、多西他赛组和PDTC＋多西他赛联合组。各组药物处理后,MTT法检测细胞生长抑制率,FCM法检测细胞凋亡率情况,免疫细胞化学方法观察核转录因子KB（nuclearfactor-kappa B,NF-κB）p65在细胞质和细胞核中表达水平的变化。结果 MTT法检测结果显示,PDTC能够有效地抑制胃癌SGC-7901细胞的增殖,呈剂量依赖关系;小剂量（10μmol/L）PDTC和多西他赛联合应用较单用多西他赛,能明显提高细胞生长抑制率（P〈0.05）。FCM法检测结果显示,各用药组较对照组以及PDTC＋多西他赛联用组与单用多西他赛组比较,胃癌SGC-7901细胞的凋亡率差异有统计学意义（P〈0.05）。免疫细胞化学法检测结果显示,NF-KBp65在胃癌SGC-7901细胞中主要表达于细胞质,多西他赛诱导24h后细胞质中NF-κBp65转移至细胞核,其活性增强,而联合使用PDTC后可抑制此现象。结论低剂量PDTC可增强胃癌SGC-7901细胞对多西他赛的敏感性,这一作用可能与PDTC降低了NF-κB表达,从而抑制其进入核内有关。     

吡咯烷二硫氨基甲酸对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用

目的:探讨NF-κB抑制剂吡咯烷二硫氨基甲酸(PDTC)对人肺腺癌A549细胞的生长抑制作用及可能机制。方法:不同浓度PDTC(25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L)干预A549细胞24h、48h、72h后,MTT法检测细胞生长抑制率,Westernblot和免疫细胞化学法分别检测PDTC干预48h后A549细胞凋亡抑制基因bcl-2和增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果:随着PDTC干预浓度的增大和时间延长,A549细胞生长抑制率增加(P<0.05、0.01);PDTC干预后Bcl-2及PCNA蛋白表达均下降,呈剂量依赖性(r=-0.980,P<0.01;r=-0.977,P<0.01)。结论:PDTC可抑制人肺腺癌A549细胞生长,其机制可能与Bcl-2表达下调及抑制细胞增殖有关。     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对脓毒症大鼠急性肺损伤的保护作用及机制

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)所致急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的病理过程,探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(pyrrolidine dithiocarbamates,PDTC)对LPS所致Au的保护作用及机制.方法 96只SD雄性大鼠分为对照组、模型组,PDTC预防组.静脉注射LPS(6 mg/kg)复制ALI动物模型,分别于注射后2、4、8、12 h活杀.PDTC预防组在注射LPS前30 min予以PDTC(120 mg/kg)腹腔注射.测定肺湿/干质量比(W/D),石蜡包埋切片经HE染色行肺组织病理评分,TUNEL法测肺泡巨噬细胞(alveolar macrophages,AM)凋亡率,免疫组化法检测核因子-κBp65(nuclear factor-κBpp65,NF-κBp65)表达,RT-PCR法检测AM的sPLA_2ⅡA、Bcl-2、Bax基因的表达.结果 与对照组比较,模型组肺W/D、肺组织病理评分、AM的NF-κBp65表达及凋亡、AM的sPLA_2 IIA基阙表达增加(P<0.05),AM Bcl-2、Bax基因的表达下降(P<0.05).与模型组比较,PDTC预防组上述改变得以逆转,肺损伤程度明显减轻(P<0.05).结论 预防性予以PDTC可抑制AM NF-κB活化,抑制sPLA_2ⅡA基因表达,促进Bcl-2基因表达,抑制AM凋亡,对LPS所致的ALI有一定的保护作用.     

吡咯烷二硫代氨基甲酸盐对癫痫大鼠海马NF-κB及相关炎症因子表达的影响

目的 探讨癫痫大鼠海马组织核转录因子κB(NF-κB)随给药时间的变化规律及NF-κB信号传导通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对NF-κB、肿瘤坏死因子-α(TNF-a)和白细胞介素1β(IL-1β)的影响.方法 应用Western blotting检测戊四氮(PTZ)致痫大鼠海马核蛋白中NF-κB p65在不同时点( 14d、21d、28d、35d)及PDTC干预癫痫大鼠后的表达;应用实时定量PCR及ELISA检测TNF-α、IL-1βmRNA和蛋白水平在PDTC干预前后的变化.结果 NF-κB p65在癫痫大鼠海马核蛋白中含量于14d开始增高,持续至28d,35d后恢复至14d水平;PDTC干预后,NF-κB 165在干预组不同时间点的含量分别为[(0.54±0.07)、(0.65±0.08)、(0.78±0.10)、(0.78±0.10)],低于模型组[(1.20±0.11)、(1.42±0.14)、(1.88 ±-0.16)、(1.25 ±0.10)],差异具有统计学意义(P＜0.01).癫痫发作后海马组织内TNF-α、IL-1β mRNA分别为[(1.34±0.13,0.81±0.17)、(1.64 ±0.17,1.56 ±0.20)、(2.03±0.16,1.65±0.18)、(1.40±0.10,1.30±0.13)],明显高于对照组(P＜0.01),PDTC干预后显著降低TNF-α、IL-1β mRNA的表达[分别为(0.96±0.1,0.57±0.07)、(1.36±0.15,1.09±0.18)、(1.47±0.14,1.25±0.16)、(1.12±0.12,0.85 ±0.12)],与模型组相比差异具有统计学意义(P＜0.01).ELISA检测海马组织内TNF-α、IL-1β蛋白含量与上述结果相似.结论 癫痫发作可诱发海马组织NF-κB的核转位及TNF-α、IL-1β的表达,PDTC能明显抑制癫痫诱发的NF-κB核转位及TNF-α、IL-1β的表达.     

二硫代氨基甲酸吡咯烷增敏多西他赛对卵巢癌细胞毒性作用的机制研究

目的:探讨核因子κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)活化抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(Pyrrolidine Dithiocarbamate,PDTC)对多西他赛(Docetaxel)致卵巢癌SKOV-3细胞毒性作用的影响。方法:用不同浓度PDTC、Docetaxel以不同时间间隔作用于卵巢癌SKOV-3细胞,MTT法观察细胞生长抑制,West-ern Blot法分析胞浆内NF-κB抑制蛋白α(inhibitor of NF-κB,I-κB-α)、胞核P65蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡。结果:Docetaxel(≥1 mg/L)或PDTC(≥10μmol/L)均明显抑制SKOV-3细胞的生长,引起细胞凋亡;小剂量PDTC(2.5、5μmol/L)和Docetaxel(0.01 mg/L)联合应用与单用Docetaxel比较,可明显抑制细胞生长,增加细胞凋亡率;单用Docetaxel组与对照组比较,胞浆I-κB-α蛋白减少而胞核P65蛋白增多,加用PDTC可逆转此现象。结论:小剂量PDTC可增强卵巢癌细胞对Docetaxel的敏感性,这一作用与PDTC抑制P65蛋白进入核内有关。     

二硫代氨基甲酸吡咯烷联合卡铂对U251神经胶质瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)联合卡铂(CBP)对U251神经胶质瘤细胞增殖与凋亡的影响.方法 将传代生长状态良好的U251神经胶质瘤细胞随机分为4组:对照组加常规培养液,实验A组加PDTC(0.1 mg/mL)0.01mL,实验B组加CBP(1 mg/mL)0.01 mL,实验C组加PDTC(0.1 mg/mL)0.01 mL+CBP(1 mg/mL)0.01 mL.比较4组U251神经胶质瘤细胞的增殖和凋亡的细胞形态.结果培养12、24、36 h,对照组U251神经胶质瘤细胞的抑制率[(4.28±0.021)%、(9.34±0.023)%、(13.86±0.025)%]、实验A组[(10.63±0.019)%、(15.06±0.041)%、(28.34±0.032)%]、实验B组[(24.16±0.025)%、(33.71±0.053)%、(39.42±0.041)%]和实验C组[(32.15±0.016)%、(40.82±0.046)%、(45.27±0.031)%]比较差异有统计学意义(P＜0.05);对照组细胞凋亡率(0.8±0.3)%、实验A组(29.1±1.5)%、实验B组(38.7±3.2)%、和实验C组(61.3±2.7)%比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 PDTC联合CBP可抑制U251神经胶质瘤细胞增殖,并诱导其凋亡.     

苦参碱对肝癌细胞HepG2端粒酶活性调控的体外研究

目的 观察苦参碱对人肝癌细胞株HepG2体外增殖和端粒酶活性的影响,进一步探讨苦参碱的可能作用机制.方法 采用人肝癌细胞株HepG2作为研究对象,MTT法检测不同浓度和作用时间的药物对细胞增殖的抑制作用;流式细胞仪分析细胞周期的分布及凋亡;PCR-ELISA法检测端粒酶活性的变化.结果 苦参碱具有抗HepG2细胞增殖、阻滞细胞周期、诱导凋亡及抑制端粒酶活性的作用.结论 对端粒酶活性的抑制可能是苦参碱发挥抗肿瘤作用的机制之一.     

上调XB130表达对人肝癌HepG2细胞凋亡和增殖的影响

目的观察XB130 表达上调后人肝癌细胞HepG2 增殖和凋亡的变化,并探讨其作用机制。方法Western blot及实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测肝癌细胞株中XB130表达;构建过表达质粒pCMVEGFP-XB130 转染HepG2 细胞,实验分为pCMV-EGFP-XB130 组（pCMV-EGFP-XB130 转染）,空白对照组（EGFP 转染）。以免疫荧光、Western blot法及qRT-PCR 法检测上调效率。Western blot 法检测PI3K/Akt通路相关基因表达;采用MTT法检测转染后细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。结果XB130 蛋白及其mRNA在肝癌细胞株Hep3B、Huh7、HepG2 和MHCC97H 中均有表达,在HepG2 细胞株中表达量最低（ F=6.342 和5.424,均P=0.001）。与EGFP 组比较,pCMV-EGFP-XB130 组中p-p21、p-p27、p-FOXO3a 及Pro Capase-9蛋白表达上调（t =4.652,3.558,6.743 和3.021,均P<0.05）;XB130 表达上调后在72 及96 h HepG2 细胞增殖能力增强（ t=4.752 和8.542,均P=0.001）;XB130 表达上调后HepG2 细胞凋亡率降低（t =7.467,P =0.001）。结论XB130 表达上调通过PI3K/Akt信号通路促进肝细胞癌细胞增殖,抑制凋亡。     

骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其机制?方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定其分子表面标志,体外扩增培养并收集培养上清?MTT法?平板克隆实验及软琼脂克隆实验检测大鼠间充质干细胞对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响,流式细胞术检测肝癌细胞周期的改变,Western blot法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达情况?结果:骨髓间充质干细胞CD105和CD90表达阳性,CD34和CD45表达阴性?在骨髓间充质干细胞培养上清作用下,MTT法显示实验组肝癌细胞光密度值增加(P < 0.05),平板克隆法显示实验组肝癌细胞克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),软琼脂克隆法显示实验组肝癌细胞空间克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),流式细胞术显示实验组细胞周期G1期比例降低,S期?G2期比例增加?Western blot显示实验组细胞Cyclin D1表达量增加(P < 0.05)?结论:骨髓间充质干细胞可促进HepG2肝癌细胞的增殖及空间克隆形成能力,其促进肝癌细胞体外增殖可能与Cyclin D1表达上调有关?     

ZD6474对肝癌HepG2细胞的抑制作用

目的探讨ZD6474对肝癌细胞HepG2的杀伤作用及作用机制。方法甲基噻唑基四唑实验(MTT法)测定ZD6474对HepG2细胞的增殖抑制;通过流式细胞仪检测细胞周期变化。结果 ZD6474对HepG2细胞有明显的增殖抑制作用(P<0.001)。ZD6474导致肝癌细胞发生G_0/G_1期阻滞。结论 ZD6474能显著抑制肝癌HepG2细胞的体外增殖,可能与导致肝癌细胞G_0/G_1期阻滞相关。     

Effects of over-expression of ANXA10 gene on proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma cell line HepG2

The effects of over-expression of ANXA10 gene on proliferation and apoptosis of hepatocellular carcinoma cell line HepG2 were elucidated.The human ANXA10 gene was subcloned into the lentiviral vector,PGC-FU,to generate the lentiviral expression vector,PGC-FU-ANXA10.The corrected ANXA10 was confirmed by endoenzyme digestion,and sequencing.Recombinant lentiviruses were produced by 293T cells following the co-transfection of PGC-FU-ANXA10 with the packaging plasmids pHelper1.0 and pHelper2.0.The resulting recombinant lentiviruses carrying ANXA10 were then used to infect human embryonic kidney epithelial cells,and lentiviral particles were produced.The ANXA10 expression in 293T cells was detected by using fluorescent microscope and Western blotting.HepG2 cells were infected,and divided into PGC-Fu-ANXA10 group,PGC-Fu group and HepG2 cell group.The changes of ANXA10 mRNA and protein expression were detected by using RT-PCR and Western blotting respectively.Flow cytometry and MTT assay were performed to examine the changes in cell apoptosis and proliferation respectively.The recombinant PGC-FU-ANXA10 vector was successfully constructed,the ANXA10 protein was detected by using Western blotting,and virus titer was 2×108 TU/mL.The recombinant lentiviruses were effectively infected into HepG2 cells in vitro and the infection efficiency was 70%.At 72 h after infection,the ANXA10 mRNA and protein expression levels in PGC-Fu-ANXA10 group were significantly higher than in PGC-Fu group and HepG2 cell group (P<0.05);the in vitro growth inhibition rate of HepG2 cells in PGC-Fu-ANXA10 group was 24.65%,significantly higher than that in PGC-Fu group and HepG2 cell group (P<0.05),but there was no significant difference between PGC-Fu group and HepG2 cell group;the apoptosis rate in PGC-Fu-ANXA10 group,PGC-Fu group and HepG2 cell group was (51.92±1.41)%,(19.00±1.12)% and (3.59±0.89)% respectively.The apoptosis rate in PGC-Fu-ANXA10 group was significantly higher than in PGC-Fu group and HepG2 cell group (P<0.05).The reco     

Effect of TSLC1 Gene on Proliferation, Invasion and Apoptosis of Human Hepatocellular Carcinoma Cell Line HepG2

The recombinant plasmid pCI-TSLC1 carrying TSLC1 gene was stably transfected into human hepatocellular carcinoma cell line HepG2. Cell proliferation was analyzed by MTT assay. The ability of migration was determined by transwell and FACSort flow cytometry was used to detect the cell cycle distribution and apoptosis. Western blotting revealed that H4 expressed higher amounts of TSLC1 protein than H15 and H0 did. The growth of TSLCl-transfected cells was significantly suppressed in vitro, and the ability of migration was reduced as well. The re-expression of TSLC1 could induce cell apoptosis. It was concluded that TSLC1 strongly inhibited the growth and ability of migration of HepG2 cell line in vitro and also induced apoptosis, suggesting that TSLC 1 could reduce the tumorigenicity of human hepatocellular carcinoma cell line HepG2 in vitro, which provided a basis for further exploring the roles of TSLC1 in hepatocellular cellular carcinoma.     

NF-κB特异性抑制剂PDTC对鼠黑素瘤B16细胞增殖及VEGF表达的影响

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸盐(PDTC)对鼠黑素瘤B16细胞增殖及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法:不同浓度的PDTC作用于B16细胞不同时间后,MTT法测定其对B16细胞增殖的抑制率,ELISA检测PDTC作用下B16细胞VEGF的表达情况。结果:经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P0.01);与对照组相比,PDTC作用后B16细胞VEGF表达降低(P0.01)。结论:PDTC具有显著抑制鼠黑素瘤B16细胞生长及VEGF表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。     

Exendin-4对人肝癌细胞HepG2增殖的影响

目的:探讨Exendin-4对人肝癌细胞HepG2增殖的影响。方法:给予不同浓度(0.1、1.0、10.0、100.0nmol/L)的Exendin-4刺激HepG2,使用cell counting kit-8(CCK-8)试剂检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期分布。结果:Exendin-4在0.1、1.0nmol/L水平对人肝癌细胞HepG2无明显促进增殖作用,在10.0、100.0nmol/L水平有明显促进增殖作用,差异具有统计学意义(P<0.05),呈现出浓度、时间依赖性地促进HepG2的增殖,并且随着Exendin-4水平的增加,HepG2G0/G1期细胞比例逐渐下降(P<0.05),S期及G2/M期细胞比例逐渐上升(P<0.05)。结论:Exendin-4在低浓度时对人肝癌细胞HepG2无明显促进增殖作用,但浓度增加到一定水平时具有促进增殖作用,且呈现时间依赖性促进H epG2的增殖效应。     

NF-κB抑制剂PDTC对人黑素瘤A375细胞增殖的影响

目的研究核转录因子-κB(NF-κB)特异性抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲盐酸(PDTC)对人黑素瘤A375细胞的生长抑制作用。方法不同浓度的PDTC作用于A375细胞不同时间后,MTT法测定其对A375细胞增殖的抑制率,免疫细胞化学方法检测PDTC作用下A375细胞增生细胞核抗原(PCNA)的表达情况。结果经PDTC处理的实验组,肿瘤细胞增殖活性明显受到抑制(P<0.05,P<0.01),呈时间和剂量依赖性;与对照组相比,PDTC作用后A375细胞PCNA表达降低(P<0.01),且呈明显的剂量依赖关系。结论 PDTC具有显著抑制人黑素瘤A375细胞生长及PCNA表达的作用,是一种有潜力的抑制黑素瘤增殖的药物。