金黄色葡萄球菌生物膜形成与ica操纵子关系探讨

目的 了解不同部位分离金黄色葡萄球菌在不同时间生物膜形成与ica操纵子关系.方法采用结晶紫法测定不同部位在不同时间形成生物膜的含量;采用PCR法测定菌株是否含有ica基因.结果生物膜形成能力强的菌株则ica基因大部分为阳性.结论含有ica基因的金黄色葡萄球菌则生物膜形成的能力较强.     

亚抑菌浓度头孢洛林对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜形成的影响

目的探讨亚抑菌浓度头孢洛林对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌生物膜形成能力的影响,为抗菌药物的临床使用提供理论依据。方法金黄色葡萄球菌抑菌浓度(MIC)检测采用微量肉汤稀释法,亚-MIC头孢洛林对细菌生物膜形成能力的影响采用96孔板结晶紫染色法,胞外多糖的检测采用苯酚-硫酸法,ica A基因的表达采用荧光定量PCR扩增。结果 10株MRSA菌株对大部分抗菌药物具有较高耐药性,而对呋喃妥因、万古霉素和头孢洛林完全敏感。亚-MIC头孢洛林对7株MRSA菌株的生物膜形成具有显著诱导作用。此外,亚-MIC头孢洛林能增加MRSA菌株胞外多糖的产生和ica A基因的表达。结论亚-MIC头孢洛林可能通过诱导ica A基因表达而增加胞外多糖的产生,从而导致细菌生物膜形成能力增强。     

不同时间段临床分离MRSA生物膜形成能力的探讨

目的 探讨不同部位分离MRSA在不同时间段形成生物膜的能力,为防止治疗中生物膜形成对细菌耐药的影响.方法 收集临床各部位分离的MRSA,采用结晶紫法测定MRSA在不同时间段形成生物膜的能力.结果 所有菌株随培养时间延长形成生物膜的能力增强,其中尿液分离菌株生物膜形成强度更加明显.结论 为了减少生物膜的形成,在治疗过程中...     

组氨酸激酶AgrC在亚抑菌浓度环丙沙星促进金黄色葡萄球菌生物膜形成中的作用机制

目的:探讨组氨酸激酶AgrC在亚抑菌浓度环丙沙星促进金黄色葡萄球菌生物膜形成中的作用机制,为金黄色葡萄球菌生物膜相关感染的治疗提供新的思路。方法:于2021年中南大学湘雅三医院检验科收集皮肤组织和体液标本,采用微量肉汤稀释法测定环丙沙星对实验菌株的最低抑菌浓度;采用结晶紫染色法观察不同亚抑菌浓度环丙沙星处理金黄色葡萄球...     

血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查

目的 探讨血液来源金黄色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr分型、生物膜形成能力，并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法 收集2019年1月—2020年12月102株血液分离非重复金黄色葡萄球菌菌株，采用全自动微生物鉴定药敏分析系统进行药物敏感性检测；采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性；采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr分型及生物膜形成能力的差异。结果 102株金黄色葡萄球菌中，43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黄质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97.1%、hlb 98.0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst(21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agrⅠ型占56.9%,agrⅡ型占36...     

金黄色葡萄球菌生物膜形成能力及其耐甲氧西林相关性

目的研究金黄色葡萄球菌临床分离菌株耐药性及其生物膜形成能力。方法采用药敏试验和人工生物膜培养方法,观察金黄色葡萄球菌耐药性及其生物膜形成能力。结果共检测201株临床分离的金黄色葡萄球菌,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)为138株,占68.66%;甲氧西林敏感型金葡菌(MSSA)为52株,占25.87%。临床分离的金黄色葡萄球菌培养48 h后生物膜经结晶紫染色后的吸光度值MRSA与MSSA在生物膜形成能力方面无统计学差异。结论该医院临床分离的金黄色葡萄球菌中MRSA比例较高;可用结晶紫染色检测吸光度值的方法来测定生物膜形成能力。需进一步通过生物膜筛选法研究耐药性与生物膜形成能力之间的关系。     

金黄色葡萄球菌生物膜产生及相关毒力因子研究

目的 金黄色葡萄球菌引起的感染遍及临床各科,人体各部位。对临床分离的金黄色葡萄球菌进行生物膜、生物膜相关因子及毒力因子检测；方法 刚果红培养基法进行生物膜筛选；用电子显微镜观察生物膜的形成；用PCR方法检测生物膜相关基因及毒力因子。结果 100株金黄色葡萄球菌中,63株产生生物膜,产生物膜率达63.0％,均产生与生物膜高度相关的icaA基因、icaD基因；还可产生ebh、sea、seb、pvl、hla、fnbA 等毒力因子；产生物膜的菌中MRSA菌株占51.2%,MSSA占48.8%；结论 产生物膜的金黄色葡萄球菌已经成为医院感染的致病因素之一,常产生各种毒力因子。     

金黄色葡萄球菌生物膜形成及相关基因分析

目的探讨金黄色葡萄球菌生物膜表型与相关基因的关系。方法收集100株临床分离的金黄色葡萄球菌,用刚果红培养基法进行生物膜筛选;用电子显微镜观察生物膜的形成;用PCR方法检测生物膜相关基因。结果 100株金黄色葡萄球菌中,79株产生生物膜,阳性率为79.0%。ebh、icaA、icaD、fnbA的检出率分别为53.2%、94.9%、94.9%、81%。金黄色葡萄球菌生物膜阳性菌株和生物膜阴性菌株之间生物膜相关基因ebh、icaA、icaD、fnbA的阳性率差异有统计学意义(P0.01)。结论ebh、icaA、icaD、fnbA 4种基因与金黄色葡萄球菌生物膜形成密切相关。     

血流感染金黄色葡萄球菌毒力基因、agr分型及生物膜形成能力调查*

摘要:目的探讨血液 来源金黃色葡萄球菌耐药性、毒力基因、agr 分型、生物膜形成能力,并比较甲氧西林敏感株与耐药株间的差异。方法收集2019年1月一2020年12月102株血液分离非重复金黃色葡萄球菌茵株,采用全自动微生物鉴定药敏分 析系统进行药物敏感性检测;采用PCR及多重PCR分析菌株毒力基因携带情况及agr基因多态性;采用96孔板结晶紫染色法检测生物膜形成能力。采用卡方检验和Fisher 精确概率法比较分析甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(MRSA)和甲氧西林敏 感金黃色葡萄球菌(MSSA)菌株间耐药性、毒力基因、agr 分型及生物膜形成能力的差异。结果102 株金黄色葡萄球菌中,43株为MRSA,59株为MSSA。毒力基因普遍表达葡萄黃质蛋白基因crtN(99.0%)、溶血素基因(hla 97. 1%、hlb 98. 0%、hld 96.1%),其次为表面因子CP8合成酶基因cap8H(34.3%)、中毒性休克综合征毒素-1基因tst( 21.6%),其中携带crtN/hla/hlb/hld 4种毒力基因组合的菌株最多(48株)。agr分型阳性率为97.1%,其中agr I型占56.9% ,agr I型占36.3%,agr I型占 4.9%,未检测出agt IV型,agr 未获分型3株。生物膜形成阳性共28株,其中12株可形成强生物膜。MRSA菌株对环丙沙星、四环素、红霉素、克林霉素、左氧氟沙星、莫西沙星的耐药率高于MSSA菌株(P<0.05) ;MRSA菌株tst基因携带率高于MSSA (P<0.01) ,cap8H基因携带率低于MSSA(P<0.05),差异有统计学意义;MRSA菌株中agr I和agr I型各占46.51 %和48.84% ;MRSA菌株更倾向形成中等或弱生物膜,与MSSA菌株相比在生物膜形成能力上差异无统计学意义。结论临床分 离血流感 染金黄色葡萄球菌存在多种毒力基因、agr分型、生物膜形成能力,需加强监测。     

引起压疮感染的金黄色葡萄球菌生物膜形成情况及耐药性分析

目的 了解该院压疮感染患者标本中分离的金黄色葡萄球菌的人群分布、生物膜形成情况及耐药情况等流行病学特征,为临床提供重要依据。方法 2019年5月至2022年5月该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,采用Vitek MS质谱仪进行细菌鉴定,药敏试验采用纸片扩散法(K-B法),按美国临床实验室标准化协会2016-M100的标准进行药敏结果分析,用结晶紫染色法检测金黄色葡萄球菌生物膜并对生物膜形成能力进行判定,生物膜中分别加入葡萄糖和银离子粉末,观察其对生物膜形成的影响。结果 该院共收集到与压疮感染相关的金黄色葡萄球菌126株,各年龄段及各级压疮均有检出。形成生物膜的菌株占73.00%,其中Ⅳ期压疮分离的菌株形成生物膜的菌株比例(81.81%)高于其他分期(Ⅱ、Ⅲ期)分离的菌株(63.33%),差异有统计学意义(P<0.05);不同生物膜形成能力的菌株对青霉素G、四环素、环丙沙星、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率较高,对替考拉宁、左氧氟沙星的耐药率较低,未检出对万古霉素耐药的革兰阳性菌,不同生物膜级别金黄色葡萄球菌的耐药性比较,差异无统计学意义(P>0.05);11.1...     

Expression of biofilm-associated genes in Staphylococcus aureus during storage of platelet concentrates

Background and objectivesIn transfusion medicine, the safety of platelet concentrates (PCs) is a major concern on account of contamination, mostly with Staphylococcus species. One of the most common contaminants is Staphylococcus aureus, which forms bacterial biofilms in PCs, posing a safety risk for transfusion patients. In this study, we investigate the contributions to biofilm formation of eno, ebps, and fib genes encoding surface proteins and of genes from the ica operon (icaA and icaD) encoding polysaccharide intercellular adhesin (PIA), along with their expression in bacteria grown in glucose-supplemented trypticase soy broth (TSBg) and PCs.Materials and methodsTwo strains of S. aureus (2039 and 2110) captured during routine PC screening were tested for biofilm formation in TSBg and under PC storage conditions, with mRNA collected at five time points and analyzed to determine expression of eno, ebps, fib, icaA, and icaD and their contributions to biofilm formation in both media.ResultsIn TSBg, S. aureus strain 2039 formed weak biofilms while 2110 formed strong. biofilms; however, in PCs, both strains formed strong biofilms. During biofilm formation, expression levels of icaA and icaD in both strains were generally significantly higher in TSBg than PCs. In contrast, expression of eno, ebps, and fib genes tended to be significantly higher under PC storage conditions.ConclusionThis study demonstrated that expression of genes involved in biofilm formation can be affected by growth media. Further investigation is needed to understand biofilm formation in the PC milieu and enhance transfusion safety.     

冷处理对单增李斯特菌生物膜形成能力的影响

目的研究冷处理对不同食品来源及不同血清型的单增李斯特菌生物膜形成能力的影响,为食品中单增李斯特菌的防治提供基础信息。方法使用结晶紫染色法对单增李斯特菌食品分离株在37 ℃、4 ℃冷胁迫及4 ℃冷适应条件下生物膜形成能力进行测定,并对代表菌株的生物膜相关基因hpt、luxS及sigB进行基因序列分析及表达量差异分析。结果37 ℃条件下,1/2c血清型单增李斯特菌生物膜形成能力较强,不存在生物膜形成能力弱株。 37 ℃条件下的生物膜形成能力强组（3株）以及中组（10株）菌株中,9株菌的hpt基因发生非同义突变。 冷处理条件下4株中组菌株中,1株菌的sigB基因表达量增多,3株菌的hpt基因表达量增多。结论单增李斯特菌生物膜形成能力与血清型相关,1/2c血清型菌株在37 ℃条件下具有较强生物膜形成能力。 hpt基因突变株在37 ℃下具有较强生物膜形成能力,冷处理使得病原菌生物膜形成能力降低,但hpt及sigB基因的过量表达会增强4 ℃条件下单增李斯特菌生物膜形成能力。     

Detection of biofilm-producing and methicillin resistance genes in Staphylococcus epidermidis isolated from healthy humans and in blood culture tests

The detection of biofilm-producing (ica AB) and methicillin resistance genes (mec A) was investigated in 70 blood culture isolates of Staphylococcus epidermidis and in 66 and 51 isolates from human hands and the vestibules of the nose, respectively, of 77 healthy subjects who gave consent. Of the 70 strains isolated from blood culture testing, both ica AB and mec A were detected in 36 (51.4%), and neither was detected in 4 (5.7%). The mec A gene only was detected in 30 (42.9%), but no isolate from blood culture testing possessed the ica AB gene alone. In contrast, of the 66 isolates from healthy hands, only one isolate (1.5%) possessed both genes, whereas neither was detected in 56 (84.8%), but the mec A gene was detected in 9 (13.6%). Of the 51 isolates from the nasal vestibules, both genes were detected in 12 (23.5%), and neither in 15 (29.4%). Moreover, the mec A gene was detected in 17 (33.3%). Thus, S. epidermidis strains that normally inhabit the nasal vestibule were found to carry the ica AB and mec A genes more frequently than those that inhabit the fingers. The ica AB and mec A genes were detected in S. epidermidis isolated in blood culture tests from patients diagnosed with sepsis associated with catheter-related bloodstream infection (CR-BSI). Both genes were detected in 7 (70.0%) of 10 isolates, and the mec A gene alone was detected in 3 (30.0%). In fact, we could not detect any strain carrying only the ica AB gene from S. epidermidis, an infecting organism of CR-BSI. This suggests that surviving strains carrying the mec A gene cause severe infection on empirical administration of an antibacterial drug, although biofilm formation by the ica AB gene is also important for CR-BSI. Based on these findings, most strains of S. epidermidis causing CR-BSI are biofilm-producing β-lactam-resistant (methicillin-resistant) bacteria. When S. epidermidis is isolated from blood culture testing, the identification of both ica AB and mec A genes may be significant with regard to judging whether the detected strain is the etiologic agent of CR-BSI.     

香港海鸥型菌耐喹诺酮类抗菌药物机制的研究

目的建立香港海鸥型菌生物被膜体外模型,对香港海鸥型菌携带的Ⅰ类整合子相关基因进行分析,探讨香港海鸥型菌耐喹诺酮类抗菌药物的机制。方法吉姆萨染色法形态学角度分析及生结晶紫染色法半定量检测香港海鸥型菌临床分离株生物被膜的形成能力;微量肉汤稀释法测定香港海鸥型菌临床分离株在浮游生长状态与生物被膜状态下对诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、洛美沙星的敏感性;PCR法检测耐喹诺酮类香港海鸥型菌菌株携带的Ⅰ类整合子相关基因。结果吉姆萨染色法定性结果显示,在55株香港海鸥型菌临床分离株中,有36株形成生物被膜,生物被膜形成率为65.4%(36/55);结晶紫染色法半定量检测香港海鸥型菌生物被膜的形成能力,其中8株香港海鸥型菌的吸光度OD560≤0.15,16株香港海鸥型菌的吸光值0.15OD560≤0.20,7株香港海鸥型菌的OD5600.20;诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、洛美沙星对香港海鸥型菌的最小生物被膜抑菌浓度均高于相应浮游菌的最小抑菌浓度(P0.05);55株香港海鸥菌中共有18株耐喹诺酮类药物,耐药率32.7%,且18株香港海鸥型菌菌Ⅰ类整合子均含有耐药基因,该耐药基因在相应菌株中发挥耐药作用。结论香港海鸥型菌耐喹诺酮类基因的形成和耐药基因的播散可能与Ⅰ类整合子有关。     

单增李斯特菌1/2c血清型菌株生物膜相关基因分析及耐药性研究

目的 了解单增李斯特菌1/2c血清型菌株与其他血清型菌株的生物膜相关基因和抗生素耐药性是否有差异。方法 采用聚合酶链反应技术对19个生物膜相关基因全长扩增测序分析,并与参考菌株EGD-e序列进行比对确定基因变异情况;根据K-B纸片法对选取的实验菌株进行药敏实验。结果 氨基酸序列比对发现1/2c血清型菌株的flaA基因编码的氨基酸在141位点发生突变,其他血清型菌株则没有,1/2c血清型菌株在prfA基因编码的89氨基酸位点、luxS基因编码的112和140氨基酸位点都不发生突变,其他血清型菌株则发生突变。78.43%的1/2c血清型菌株对头孢西丁中度敏感,对氨苄西林、米诺环素、利福平和呋喃妥因有不同程度的耐药。结论 不同血清型单增李斯特菌的flaA、luxS、prfA 3个基因编码的氨基酸在某些位点突变有一定的规律性;1/2c血清型单增李斯特菌对某些抗生素呈现不同程度的耐药。     

肠球菌属生物膜表型和基因型相关性分析

目的了解肠球菌属生物膜形成能力及其毒力基因携带率,分析生物膜的形成能力与毒力基因间的相关性。方法收集复旦大学附属华山医院2015-2017年临床分离自无菌体液的肠球菌属细菌,使用结晶紫染色法测定肠球菌的生物膜形成能力并进行形成能力的强弱分级,采用PCR方法筛查7种常见的肠球菌毒力基因以及Fsr群体感应系统基因(fsrA、fsrB、fsrC)。结果共收集了112株肠球菌菌株,其中粪肠球菌52株,屎肠球菌60株;两者生物膜形成的阳性率分别为63.46%和13.33%,差异具有统计学意义(P<0.001)。52株粪肠球菌毒力基因携带率分别为:esp 40.38%、gelE 69.23%、sprE 73.08%、asa157.69%、cylA 46.15%、cylB 48.08%、cylM 50.00%、fsrA 40.38%、fsrB 42.31%、fsrC 80.77%,携带esp、asa1、cylA、cylB、cylM和fsrB基因的菌株更易形成生物膜。60株屎肠球菌毒力基因携带率分别为:esp 65.00%、gelE 10.00%。结论粪肠球菌比屎肠球菌更容易形成生物膜;多种毒力基因与生物膜形成相关,提示生物膜的形成并不是由单一基因调控,而是由多个基因多系统调控。     

Epigallocatechin gallate inhibits biofilm formation by ocular staphylococcal isolates

Epigallocatechin gallate (EGCg), the main polyphenol component of green tea, has several antibacterial properties. Here we show that sub-MICs of EGCg appear to decrease slime production, therefore inhibiting biofilm formation by ocular staphylococcal isolates previously characterized for the presence of ica genes by the Congo red agar plate assay and for adhesion to microtiter plates.     

1,2-二羟基蒽醌降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的作用研究

目的分析1,2-二羟基蒽醌降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜的作用及其机制。方法收集2018年临床分离鉴定的2株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)以及2株甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA);利用分光光度计法检测1,2-二羟基蒽醌作用后金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合菌群生长能力变化,并进一步采用96孔板结晶紫染色法测定1,2-二羟基蒽醌作用前后金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185单独生长时以及混合生物膜形成能力差异。结果1,2-二羟基蒽醌可以明显降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合菌群的生长能力;静态生物膜实验显示1,2-二羟基蒽醌可以明显降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌DAY185混合生物膜的形成能力,其作用主要是通过降低白念珠菌DAY185的生物膜形成能力。结论1,2-二羟基蒽醌可以降低金黄色葡萄球菌与白念珠菌混合生物膜形成的能力,其机制主要通过降低白念珠菌菌丝形成的相关基因ALS3和RBT1的表达。